المستخلص: تم عزل وتشخيص 20 عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa من اصل 87 مسحة من المرضى الراقدين في مستشفى الحلة التعليمي نتيجة لاصابتهم باخماج الحروق والجـروح حيث كانت نسبة عزل هذه البكتريا مـن الحروق %45.5وهي اعلـى مـن الـجروح والبالغة % 9.25 . تم التاكد من التشخيص باستخدام نظامAPI - 20E فضلا عن اجراء الاختبارات الزرعية والمجهرية والكيموحياتية.درست بعض عوامل الضراوة التي تمتلكها هذه البكتريا فقد اظهرت النتائج ان جميع العزلات البكترية حاوية على المحفظة (Capsule) واظهرت مستعمرات العزلتين61 و62 عند تنميتها على وسط Tryptic soy agar اللزوجة العالية بسبب الانتاج المفرط لمادة الالجنيت المكونة للمحفظة.اظهرت بعض العزلات قابلية في انتاج السايدروفور(Siderophore) والبعض الاخر انتاج الهيمولايسين, في حين كانت العزلات كافة منتجة لانزيمات البروتيز مما يشير الى ان عزلات البكتريا تمتلك احد الانظمة لتزويدها بالحديد اما السايدروفور او انتاجها للهيمولايسين.درس تاثير بعض المضادات الحيوية اذ اظهرت نتائج الدراسة ان جميع العزلات كانت مقاومة لكل من الامبيكلوكس والسيفوتاكسيم والكاربنسلين والاموكسسلين والكولستين والتتراسايكلين والسيفالكسين والجنتامايسين والامبسلين والكلورمفنيكول والترايمثبريم بنسبة % 100 والستربتومايسين بنسبة % 85 والاميكاسين % 70والسبروفلوكساسين % 65, في حين كانت جميع العزلات حساسة لكل من الامبينيم والريفامبسين بنسبة % 100 .اظهرت عزلات بكتريا P.aeruginosa المعزولة من اخماج الحروق والجروح اربعة انماط للنسق البلازميدي وبعضها كان خالي مــن البلازميدات اذ اظهـرت العزلتين 22 و24 احتوائها على بلازميد كبير مفرد فضلا عن وجود ثلاث حزم بلازميدية صغيرة, اما النمط الثاني فقد اشتركت العزلتين61 و62 باحتوائها على بلازميد كبير مفرد وحزمتين بلازميديتين صغيرتين, والنمط الثالث اظهرت العزلة 25 احتوائها على حزمة بلازميدية كبيرة, اما النمط الرابع فقد اشتركت العزلات27 و32و34و87و93 باحتوائها على حزمتين بلازميديتين صغيرتين في حين كانت العزلات 48و49و71و78 خالية من البلازميدات على الرغم من مقاومتها المتعددة للمضادات الحيوية ويعتقد بان الجينات المشفرة لصفة المقاومة للمضادات الحيوية قد تكون كروموسومية.اجريت عملية الاقتران البكتري للعزلات 24و25و62 كعزلات واهبة مع السلالة المستلمة E.coli MM294 واظهرت النتائج انتقال البلازميدات ونقل صفة المقاومة لعدد من المضادات الحيوية وهي الامبسلين والتتراسايكلين والستربتومايسين والكلورمفينكول اضافة الى نقل صفة اللزوجة. كما بينت نتائج عملية التحول الوراثي للعزلات 22و24و25و61و 62انتقال البلازميدات الى جميع العزلات المتحولة واكتسبت الخلايا المتحولة المقاومة للمضادات الحيوية, واوضحت نتائج هذه الدراسة اشتراك هذه العزلات في بعض البلازميدات المتحولة اذ انها تشابهت في انتقال صفة المقاومة للمضادات الحيوية فيما بينها, كما في حالة تشابه المجموعة 22 - A مع 62 - B في اكتساب صفة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والتتراسايكلين والامبسلين والترايمثبريم والكلورمفينكول, والمجموعة 22 - B مع 61 - A في صفـة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والامبسلين والسيفاتكسيم والترايمثبريم والكلورمفينكول,وتشابهت المجموعة 24 - B مع 61 - E في اكتساب صفة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والامبسلين والترايمثبريم, اما مجموعة 24 - A فقد تشابهت مع المجموعة 25 في نقل صفة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والامبسلين والترايمثبريم والكلورمفينكول, وتشابهت المجموعـة 61 - C مع المجموعة 62 - A في نقل صفة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والتتراسايكلين والامبسلين والسيفاتكسيم والترايمثبريم والكلورمفينكول, اضافة الى اكتساب الخلايا المتحولة في العزلتين 61و 62الصفة المخاطية. | Twenty strains of P.aeruginosa were isolated from 87 swab samples of patients suffering from burn and wound infections in Al - Hilla Teaching Hospital of Babil Governorate. The results appeared that the isolation of P.aeruginosa from the burn was more (45.5%) than from wound (9.25%). All bacterial isolates were identified by the biochemical, cultural and microbial characteristics and confirmed by api - 20 E system. Some of the bacterial virulence factors, were studied. The results showed that all bacterial isolates were capsulated and the colonies of P.aeruginosa no. 61 & 62 showed mucoid phenotype on tryptic soy agar plates due to overproduction of alginate of the capsule. Some of the isolates showed the ability to produce siderophore, while others (50,53,61,62,65,71,87 and 93) produce haemolysin indicating that these isolates had one Iron providing system either siderophore or haemolysin production; All the isolates produced protease. Also, all isolated showed multiple resistance to antibiotics, they were resistant (100%) to Cefotaxime, Carbencillin, Amoxycillin, Colistin, Tetracyclen, Cephalexin, Gentamicin, Ampcillin, Chloramphenicol and Trimethoprim. The others showed variable resistance to Streptomycin (85%), Amikacin (70%), Ciprofloxacin (65%). All of the isolates were sensitive (100%) to Impenium and Rifampicin. The DNA content of these isolates revealed the presence of four types of plasmid profiles and some of them are plasmidless (48,49,71 and 78) on agarose gel electrophoresis. The DNA content of the isolates No. 22& 24 showed single large plasmid band and three small plasmid bands.The second type 61 and 62 showed the presence of single large plasmid and two small plasmid band, third type isolate no.25 showed a large plasmid band only. The fourth type (the isolates 27, 32,34, 87 and 93) revealed the presence of two small plasmid bands on gel electrophoresis. The plasmids, of the isolates 24, 25 and 62 was transferred by conjugation into the recipient plasmidless cells of E.coli MM294, the results showed that these plasmids encoded for Ampcillin, Tetracyclin, Streptomycin and Chloramphenicol resistance and mucoid phenotype. The plasmids of the isolates 22, 24, 25, 61 and 62 were transformed into the plasmidless competent cells of E.coli MM294. The results showed that all transformed plasmids encodes antibiotic resistance and the plasmids of the isolates 61 & 62 encoded mucoid phenotype in transformant colonies in addition to antibiotic resistance. The results also pointed to the plasmids of the group 22 - A was similar to the plasmid of group 62 - B in acquiring the resistance to antibiotics (Amoxcillin, Tetracyclin, Ampcillin, Trimethoprim and Chloramphenicol ).The plasmid of group 22 - B was similar to the plasmid of group 61 - A in acquining the resistance to antibiotics (Amoxcillin, Ampcillin, Cefotaxime, Chloramphenicol and Trimethoprim). The plasmid of group 24 - B was similar to group 61 - E in acquiring the resistance to antibiotics ( Amoxcillin, Ampcillin, Trimethoprim), group 24 - A was similar to group 25 in acquiring the resistance to antibiotic (Amoxcillin, Ampcillin, Trimethoprim and Chloramphenicol) and group 61 - C was similar to group 62 - A in acquiring the resistance to antibiotics (Amoxcillin, Tetracyclin, Ampcillin, Cefotaxime, Trimethoprim and Chloramphenicol) and mucoid phenotype .

دراسة تجريبية على زراعة الخلايا الجذعية الجنينية للبائن في الاوساط الزرعية EXPERIMENTAL STUDY ON CULTURE OF MAMMALIAN EMBRYONIC STEM CELLS

اسم المؤلف: انتصار نعمان وحيد العزاوي

اسم المشرف: محمود حياوي حماش

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2003

الموضوع الدقيق: الحيوان

الدرجة: دكتوراه

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: تم في هذه الدراسة انجاز طريقة ناجحة لزراعة الخلايا الجذعية الجنينية (Embryonic stem cells) بالاعتماد على موارد محدودة ومتوفرة وباستعمال تقنية زرع بسيطة. طريقتنا هذه تجيز باشتقاق الخلايا الجذعية الجنينية من كتلة الخلايا الداخلية (Inner cell mass) لاريمة (Blastocyst ) الفار من سلالة (Balb - C)المزروعة خارج الجسم الحي وذلك بدون الحاجة الى استئصال المبيض، او استخدام الجراحة المناعية لكتلة الخلايا الداخلية ، او استخدام الوسط الزرعي المكيف، او اضافة العامل المثبط للتمايز (العامل المثبط للوكيميا) ، لكن تمت فقط زراعة واستنبات الاريمة بوجود الطبقة المغذية(Feeder layer) المثبطة الانقسام ( الخلايا الجنينية الليفية المعاملة بمادة ميتومايسين (C) (10 مايكروغرام/ امل ( 2 ساعة) لتثبيط انقسام الخلايا المغذية وتوقف توالدها ).و الطبقة المغذية اساسية وضرورية لدعم نمو وديمومة استمرار حالة عدم التمايز في الخلايا الجذعية الجنينية، حيث في حالة نمو هذه الخلايا بدون وجود الطبقة المغذية يحدث التمايز مباشرة في الخلايا الملتصقة بالركيزة. ان وجود هذه الطبقات المغذية مع الدقة في عملية الزرع وبوجود وسط زرعي عالي النقاوة مع مصل يؤثر على ادامة النمط الظاهري الجنيني للخلايا المزروعة، بصورة خاصة في المحافظة على قابلية تمايز عالية.تبقى هذه الخلايا الجذعية الجنينية محافظة على حالة عدم التمايز خلال عمليات الزرع الثانوية المتواصلة ولعدة اشهر ، مع استمرارية اظهارها للمواد السطحية المعلمة للخلية ( الفوسفاتاز القاعدي ). تكون الخلايا الجذعية الجنينية التي لها القدرة على تكوين اي خلية او نسيج من الجسم ، صغيرة الحجم لها نواة كبيرة وسايتوبلازم قليل، والنواة حاوية على واحد او اكثر من التراكيب النوية الغامقة والواضحة، وتتجمع هذه الخلايا خلال المراحل المبكرة من عمليات الزرع الثانوي وتلتصق مع بعضها باحكام مكونة مجاميع صغيرة ، حيث من الصعوبة تمييز المكونات المفردة للخلايا ، في حين تكون في المراحل المتاخرة من عمليات الزرع الثانوي على شكل مستعمرات منبسطة ومنتشرة ، لكن الخلايا لا تزال ملتصقة مع بعضها البعض ، مما يتعذر رؤية وتميز الخلايا المفردة . هذا النمط من النمو هو صفة مميزة للخلايا الجذعية بالرغم من ان المستعمرات قد تظهر بشكل قليل الانتظام. ان زرع الخلايا الجذعية الجنينية لا بد ان يكون بكثافة عالية نسبيا وذلك لضمان الحصول على معدل نمو عالي ولاجل الحد من حدوث التمايز التلقائي للخلايا. ان ابناء مثل هذه الخلايا المفيدة التي لها صفتان مميزتان اساسيتان ، الاولى : - هي التغلب على الالية الداخلية التي تحد من مضاعفة ( استنساخ) الخلايا. الثانية : - تبقى قابلية هذه الخلايا ولمختلف مراحل عمليات الزرع الثانوية على اظهار النمط الظاهري لمجاميع خلايا الاسلاف التي انحدرت او انشقت منها مستقرة ، هذا يعني امتلاك القدرة التي تسبب التمايز الى انواع الخلايا المنحدرة من الطبقات الجرثومية الاولية للجنين، (الادمة الباطنةendoderm ، الطبقة المتوسطة mesoderm، والادمة الخارجيةectoderm ) كل هذا يجعل الخلايا الجذعية الجنينية فريدة النوع وهذه القابلية تعرف بالامكانية المتعددة ( pluripotency).تكون انواع الخلايا التي تظهر بعد استنبات الاريمة لمدة طويلة بوجود الطبقة المغذية وبدون زرع ثانوي كما ياتي : - - خلايا الارومة الاغتذائية - الخلايا الليفية - خلايا الادمة الباطنة - تراكيب شبيهة بالانبوبية - وخلايا شبيهة بالعصبية. تم استخدام المجهر الاليكتروني الماسح والمجهر المقلوب لدراسة الاحداث المورفوجينية التي تحدث خلال نمو اريمة الفار وتطور نمو المرحلة المبكرة لاسطوانة البيضة خارج الجسم الحي . فبعد تحرر الاريمة من الطبقة الشفافةZona pellucida والتصاقها بالركيزة التي تغطي سطح وعاء الزرع، فان جوف الاريمة يبدا بالانكماش اثناء انتشار وهجرة الارومة الاغتذائية الجدارية الى الخارج. في هذه المرحلة تكون كتلة الخلايا الداخلية مغطاة بخلايا الادمة الباطنة من جهة جوف الاريمة ، وبخلايا الارومة الاغتذائية القطبية من الجانب الوسطي. تكون كتلة الخلايا الداخلية عند نموها خارج الجسم الحي محاطة كليا بخلايا الادمة الباطنة بينما عند نموها داخل الجسم الحي فان خلايا الادمة الباطنة تكون فقط في الجانب المعرض لسائل جوف الاريمة . وبسبب تكاثر خلايا الارومة الباطنة التي تغطي كتلة الخلايا الداخلة، وبوجود الركيزة وقلة الحيز بسبب جوف الاريمة المنكمش فان كتلة الخلايا الداخلية طبيعيا يحد من الامتداد نحو الاسفل ، لذا فهي تهاجر وتبرز الى الاعلى الى الوسط الزرعي من خلال شق يحدث بين الارومة الاغتذائية الجدارية والقطبية. تستمر خلايا الارومة الاغتذائية القطبية المواجهة لقاعدة اسطوانة البيضةegg - cylinder في تكاثرها مكونة المخروط المشيمي الخارجيectoplacental cone . وحتى هذه المرحلة فان اسطوانة البيضة التي ينقصها حاجز الارومة الاغتذائية تقوم بعكس نمط نموها من اتجاه سطح وعاء الزرع الى موقع اعلى وبارز. ان نمو اسطوانة البيضة خارج الجسم الحي من كتلة الخلايا الداخلية وخلايا الارومة الاغتذائية القطبية مطابق كليا لما يحدث عند النمو داخل الجسم الحي . وقد حصل في هذه الدراسة نمو لتوام الزيجة خارج الجسم الحي من اريمة الفار ، قبل الالتصاق بسطح وعاء الزرع . حيث تبدا كتلة الخلايا الداخلية داخل غشاء الطبقة الشفافة بالتكاثر في جزئين وبعدها تنقسم الى قسمين ، وكل قسم من هذه الاقسام يكون حاويا خلايا ذات الفعالية الكامنة . بعد تحرر والتصاق الاريمة على الركيزة ينتج تكون اسطوانتي بيضة يتشاركان بمخروط مشيمي خارجي واحد. بصورة عامة عند تكون اسطوانات البيضة، يجد انها تشتمل على الادمة الخارجية في الداخل والادمة الباطنة في الخارج . ان الادمة الخارجية تلعب دورا مهم في النمو اللاحق للجنين داخل الجسم الحي ، حيث هذه الطبقة، هي سلف للطبقات الجنينية الاولية،( الادمة الباطنة، الطبقة المتوسطة، الادمة الخارجية ) وهذه الطبقات جميعها تكون مصدر لكل انسجة الجسم البالغ . ان زرع الخلايا الجذعية الجنينية التي تم الحصول عليها في هذه الدراسة هو مشتق من كتلة الخلايا الداخلية بعد سبعة ايام من الزرع ، وكذلك من كتلتي الخلايا الداخلية لاريمة تؤام الزيجة . ان قدرة الخلايا الجذعية الجنينية على تحوير نموها وتمايزها لتكوين مختلف خلايا وانسجة الجسم البالغ تتضح من قابليتها على التمايز التلقائي خارج الجسم الحي بواسطة تكتلها او تجمعها، وذلك من خلال 2 - 3 يوم من الزرع المعلق لهذه الخلايا، والتي تكون الاجسام الجنينية والتي تشتمل على الادمة الباطنة والصفيحة القاعدية والادمة الخارجية، ان هذه الاجسام مشابهة للاجنة في مرحلة اسطوانة البيضة. وبعد خمسة ايام من الزرع المعلق يظهر في بعض الاجسام الجنينية الكبيرة وجود الهيموكلوبين الجنيني في مجاميع الخلايا الدموية المحاطة بطبقتين في الادمة الباطنة بما يشبه الكيس المحي الحشوي لجنين ما بعد الغرس. استحوذ موضوع الحصول على خلايا جذعية جنينية متعددة الفعالية وكاملة الامكانية، من المراحل المبكرة لاجنة اللبائن على اهتمام مختلف الاوساط ووسائل الاعلام وذلك للاسباب التالية : - 1) الاستنبات الناجح للخلايا الجذعية الجنينية خارج الجسم الحي، امكانيتها غير محدودة على التكاثر غير المتمايز خارج الجسم الحي. 2) الامكانية الطبية باستخدام هذه الخلايا في معالجة تعويض الانسجة ، وقد تم هنا استخدام الخلايا الجذعية الجنينية المشتقة من الفئران كنموذج حيواني مناسب | A successful method of culturing embryonic stem (ES) cells have been achieved in this study depending on the limited available resources and by a simple culture technique .This method permits ES cells culture to be derived in vitro from the inner cell mass ( ICM) of explanted mouse blastocysts of strain : Balb - C without the use of ovariectomy; immunosurgery of the ICM, conditioned medium and differentiation inhibitory factor (DIF)\Leukaemia inhibitory factor (LIF), but only cultivation of blastocysts in the presence of mitotically inactivated feeder layer [ embryonic fibroblast cells treated with mitomycin - C, 10 g\ ml (2hr) for inactivated feeder cells and arrest their proliferation]. The feeder layer are necessary and essential to support the growth and maintenance of undifferentiated state of ES cells, when these cells are grown without feeder layer, immediate differentiation takes place in the substrate attached cells. These feeder layers together with careful culture in high quality medium and serum acts to prolong the embryonic phenotype of the cell culture, specifically in terms of maintaining a high differentiation ability.These ES cells remains both undifferentiated in continuos passage for several months and expresses the cell surface marker ( Alkaline phosphatase) for different passages . Pluripotential ES cells are typically small, have a large nucleus and minimal cytoplasm, and the nuclei contain one or more prominent dark nucleoli structures. The cells in early passages pack tightly together in small nests in which it is difficult to discren the individual component cells, while in latter passages these ES cells colony are spread and flattened and the constituent cells also adhere tightly to one another, making it difficult to see individual cells. This growth pattern is characteristic of stem cells, although colonies may appear less regularly shaped. The ES cell culture should be maintained a relatively high densities to ensure maximal growth rate in order to minimize spontaneous differentiation. Establishment of such useful cells has two basic characteristics. First, the endogenous machinery that limits cell replication is overcomed. Second, these cells for different passage is stable express the phenotype of the population of progenitors from which it was derived, that’s mean, the ability to give rise to differentiated cell types that are derived from all primary germ layers of the embryo, endoderm , mesoderm, and ectoderm - is what make ES cell unique, and this ability is known as a "pluripotency".Differentiated cell types which appeared after prolonged cultivation of blastocyst on feeder layer without passage are trophoblast cells, fibroblast cells; endodermal cells; tubular - like structures; neuron - like cells.Correlative scanning electron, and inverted microscopy were utilized to study the morphogenic events occurring during mouse blastocyst outgrowth and early –egg - cylinders development in vitro. After hatching from Zona pellucida ( Z.P.) and attachment of blastocysts on the substrate coated plate surface, the blastocoelics cavity collapses as the mural trophoblasts spread and migrate outward . The inner cell mass is covered with a differentiated endoderm on the blastocoelic cavity side and by the polar trophoblasts on the medium side at this stage . The inner cell mass in vitro becomes completely surrounded with endodermal cells while the endoderm develops in vivo only on the side exposed to blastocoelic fluid . As the endoderm covered inner cell mass proliferates , being physically restricted from further downward expansion by the substrate and by the lack of space in the collapsed blastocoelic cavity , it migrates upward and protrudes into the culture medium in a break between the polar and mural trophoblast cells . Polar trophoblast cells apposed to the base of the egg cylinder continue to proliferate forming the ectoplacental cone. Thus , the early egg cylinder lacking a trophoblast barrier beings inverting its growth pattern from towards the culture plate surface to amore upright position. Egg - cylinder development in vitro from the inner cell mass and polar trophoblast cells closely paralleled in vivo. Monozygotic twins developed in vitro from (murine) mouse blastocysts, before attachment to culture plate surface. The inner cell mass became proliferated into two parts and then subdivided in side the Z.P., and each subdivision apparently incorporated totipotent cells. After hatching and attachment of this blastocyst on the substrate, resulting in the formation of two egg - cylinders sharing the same ectoplancental cone. In general, as the egg - cylindars was formed, it was found to compose of ectoderm to the inside and endoderm on the outside. In vivo the primitive ectoderm plays a pivotal role in the further development of the embryo, since that it is the progenital of three primary embryonic layers, the ectoderm, mesoderm and endoderm, which collectively are the source of all tissue of the adult body. Our ES cell culture was derived from the ICM of seven days culture and from the two ICMs of the blastocyst - derived monozygotic twin. The pluripotency of ES cells demonstrate their ability to spontaneously differentiate in vitro via aggregation, that from 2 - 3 day of suspension culture in non - adhesive dish the cells form embryoid bodies (EBs) with endoderm, basal lamina and ectoderm. They are morphologically similar to embryos of the egg - cylinder stage. From 5 days of culture some of EBs expand into large cystic structures containing embryonic haemoglobin’s of blood islend cells surrounded by two endothelial layers, this result suggest the identification of cystic EB as visceral yolk sac, of the postimplantation embryo. Pluripotent ES cells are derived from totipotent cells of early mammalian embryo are currently in the news for three reasons : the successful cultivation of ES cells in vitro; their capability of unlimited, undifferentiated proliferation in vitro and the potential medical use of these cells for tissue replacement therapy, in this work ,mice ES cells were used as suitable animal model.Self - renewing, totipotent - pluripotent ES cells may provide a virtually unlimited donor source for transplantation. A protocol that permits the in vitro generation of neural precursors from ES cells was devised. This study described conditions to induce differentiation of ES cells reliably and at high efficiency into neural pathway. A prerequisite is to treat early developing ES cell derived aggregates and simple EBs with mouse embryonic brain extract for a precise period of time. Embryonic brain extract here circumvent the need of growth factors. In vitro, treatment with brain extract resulted in the subsequent appearance of neural - like cells after subcultured treated cells. In vivo after dissociation of these cells into a single cell suspension they were stereotaxically transplanted into the brain of recipient adult mice. Results show that ES cell derived neural precursors interact with host tissue and migrated for variable distances of different region of the brain after replace damaged cells at the site of transplantation. Thus, brain extract serves here as a crude source of neurotrophic factors for the induction of ES cells to neuronal pathway, in which ES cells can serve as a valuable source of cell type - specific somatic precursors for neural transplantation.HRP - histochemical marker was introduced into culture medium for marking ES cells in vitro and in vivo to allowed for precise determination of the fate of the transplanted ES cells and their proliferation, migration and differentiation in side the brain. Evaluation of long - term experiments showed viable grafts with a stable HRP - marker expression and proved no signs of tumour growth or non - neural tissue in the transplant recipients

تاثير مستخلص نبات السذب (Ruta chalepensis) في التحليلات الوراثية الخلوية والمناعية في الفئران البيض The Effect of Sudab plant (Ruta Chalepensis ) Extract in Cytogenetics and Immunological Analysis in Albino mice

اسم المؤلف: انتخاب محسن عبد علي الاسدي

اسم المشرف: مناهل نجيب بحو

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2009

الموضوع الدقيق: الحيوان

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: العربية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: اجريت الدراسة الحالية لتقييم المستخلص الخام الميثانولي الحار لاوراق نبات السذب Ruta chalepensis اذ جرى تقدير النسبة المئوية للمستخلص بالنسبة للوزن الجاف واجراء الكشف الكيميائي العام ,ومن ثم دراسة مدى سمية النبات،وذلك باجراء اختبار الجرعة الوسطية المميتة LD50 ( 50Lethal Dose ) في الفئران البيض ,ولتحديد التراكيز المثلى تم انتخاب (3 و5 و10) % من قيمة LD50 ،وتم استخدام هذه التراكيز في التجارب اللاحقة وهي (58و88و176) ملغم/كغم فضلا عن اجراء فحص السمية الخلوية لكريات الدم الحمراء للخروف ( SRBCs) Sheep Red Blood Cells باستخدام التراكيز الناتجة من اجراء تجربة LD50. لذلك شملت هذه الدراسة ثلاثة محاور : -  اختبارات التحليلات الوراثية الخلوية Cytogenetics Analysis المتمثلة باختباري دليل الانقسام الخيطي Mitotic Index والتشوهات الكروموسوميةChromosomal Aberrationsفي خلايا نقي عظم الفارBone Marrow, وبعد التاكد من انعدام التاثيرات السمية الوراثية للمستخلص اجري التداخل مابين التراكيز (58و 88و 176) ملغم/كغم وعقار مايتومايسين - C بتركيز (0.5) ملغم/كغم, وبشكل ثلاث معاملات وهي المعاملة بالمستخلص (قبل) و(بعد) و(مع) المطفر (MMC) ,لاختبار فعالية المستخلص في منع اوتحوير او تقليل فعل العقار, ومعرفة الالية التي تعمل بها المركبات التي يحويها المستخلص.  دراسة تاثير المستخلص في بعض الجوانب المناعية وبالتراكيز المستخدمة نفسها في التحليلات الوراثية الخلوية في نظام الفار الابيض من خلال المعايير الاتية : - - فحص الحساسية العاجل Arthus Reaction وفحص الحساسية الاجل Delayed type hypersensitivity test (DTH) . - فحص العيوشية Viability test والتفعيل Activation والبلعمة Phagocytosis للخلايا البلعمية الصفاقية. - فحص تثبيت المتمم (C.F.T) Complement Fixation Test.  تقدير مدى العلاقة بين التحريات المختبرية الوراثية الخلوية والمناعية. وقد توصلت الدراسة الى النتائج الاتية : - 1 - احتواء المستخلص الميثانولي لاوراق نبات السذب على التانينات، والراتنجات، والكومارينات، والفلافونات، والقلويدات، والكلايكوسيدات والزيوت الاساسية وعدم احتواءه على الصابونيات، والتربينات والستيرويدات.2 - عدم وجود تاثير سمي على كريات الدم الحمراء للخروف للتراكيز الناتجة من اجراء تجربة LD50 . اما نتائج الدراسة الوراثية الخلوية فهي : - 1 - عدم وجود تاثير سام اومطفر للمستخلص الكحولي الميثانولي لاوراق نبات السذب بالتراكيز الثلاث عند حقنها في الحيوانات المختبرية.2 - اوضحت نتائج التداخل بين المستخلص الكحولي لنبات السذب والمطفر قدرة التراكيز الثلاث من المستخلص في رفع دليل الانقسام الخيطي وخفض التشوهات الكروموسومية وقد اعتمدت القدرة التثبيطية على نوع المعاملة فقد اظهرت المعاملة بالمستخلص قبل ومع المطفر قدرة اعلى من المعاملة بالمستخلص بعد المطفر. 3 - صنف نبات السذب على انه مضاد للطفرة الوراثية من النوع المباشر بالدرجة الاولى ومضاد حيوي للطفرات بالدرجة الثانية.  اما نتائج الدراسة المناعية فقد توصلت الى مستويات جيدة وغالبا معنوية لاغلب الفحوصات المناعية مقارنة بالسيطرتين السالبة والموجبة, والنتائج كالاتي : - 1 - عدم وجود تاثير سمي على الخلايا البلعمية بدلالة فحص العيوشية وحصول استجابة مناعية لانوعية بدلالة زيادة النسبة المئوية لكل من التفعيل والبلعمة.2 - ظهور استجابة مناعية نوعية خلطية معتمدة على الخلايا اللمفاوية البائية بدلالة زيادة كل من معدلات فحص الحساسية العاجل وفحص تثبيت المتمم.3 - حصول استجابة مناعية نوعية خلوية معتمدة على الخلايا اللمفاوية التائية بدلالة زيادة معدلات فحص الحساسية الاجل بزيادة تركيز المستخلص.  اظهر تقدير معامل الارتباط بان هناك علاقة قوية لمعظم التحريات المختبرية الوراثية الخلوية والمناعية, وهذا يدل على مدى العلاقة بين هذه التحريات من جهة ومدى تاثير المستخلص من جهة اخرى. | This study was designed to evaluated the hot crude methanolic extract for Ruta chalepensis . The percentage of extract was determine in percent to dried weight, and making the chemicals investigation for active compound. In addition to studying plant toxicity by making lethal dose(LD50) test in white mice to detected optimum concentration. Three percentage was selected which (3, 5, 10)% from (LD50) value, and these percentage represented by this concentration which (58,88,176) mg/kg. In addition to the cytotoxicity test was making on Sheep Red Blood ells (SRBCs) to these concentration. So that these study included three sides represented by : - Cytogenetics analysis tests which including mitotic index(MI) and chromosomal aberration(CA) tests in mice bone marrow, after certainly from loosing the genotoxic effects of extract, the interaction between three concentration (58, 88, 176) mg/kg and mitomycin (MMC) drug in concentrate (0.5) mg/kg was making in three forms of treatment of extract (before) (after) (with) mutagen MMC to asses extract activity in prevented or modulated or decreased the drug action , and to know the mechanisms which making it the active compound of the extract. - The study of some Immunological side of extract in same concentrates used in cytogenetics analysis which (58, 88, 176) mg/kg in white mice system represented by : - Measuring the body weight of animal before and after Immunization program, Arthus reaction and delayed type hypersensitivity test , Viability, Activation, Phagocytosis andComplement fixation tests. - Evaluating the relationship scope between cytogenetic, and Immunological laboratories investigations and the results of this study shown : - 1 - The methanolic extract of Ruta plant leaves is contain tannins, resins, comarins, flavonoids, alkaloids, glycosids, and essential oils and discontent of saponins, terpins, and steroids. 2 - No toxicity effects on (SRBCs) for concentrations resulted from LD50 test. 3 - No toxic or mutagenic effect of methanolic extract of Ruta plant leaves in this concentration when administration it in laboratories animal .4 - The MMC have mutagenic and cytotoxic effects in concentration (0.5) mg/kg indicate control positive animals test, these effects included the toxicity and mutagenecity for MMC by decrease the mitotic index and increase the chromosomal aberration for mice bone marrow. 5 - The interaction between methanolic extract and MMC shown the three concentration of plant extract is high efficiency in increase the mitotic index and decrease the chromosomal aberration, and these high efficiency independent on treatment type which shown the extract treatment before and with mutagen is highly efficiency from extract treatment after mutagen.6 - The Ruta chalepensis is classified as antimutagenic in first degree and Bioantimutagens in second degree. The results of Immunological study arrived to highly levels mostly significant in compare of negative (PBS) and positive (MMC) controls for most Immunological tests, The resulted shown 1 - Increasing the body weight means when the treatment by methanolic extract for ruta plant by increasing concentration of extract. 2 - No toxicity effect for phagocytic cells shown by Viability test and non specific immune response in indicate increasing all activation percentage and peritoneal phagocytosis 3 - Shown humeral immune response dependent on B - lymphocyte in indicate increased all of Arthus reaction and Complement fixation test.4 - Shown specific cellular immune response dependent of T - lymphocyte in indicate increased delayed type hypersensitivity Test mean by increasing extract concentration. - The correlation ship shown there are a strongly relationship between cytogenetic and Immunological laboratory investigations, and these indicated the relationship between laboratory investigations from side and the extracts effective scope by these test from other sides.

التغيرات الفسلجية المرضية للجهاز المناعي في مرضى سرطان الثدي عند النساء Physiological changes In immune system in female breast cancer

اسم المؤلف: امين احمد احمد ثابت

اسم المشرف: بدر محمد عباس العزاوي هيثم عزت باقر

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2004

الموضوع الدقيق: الحيوان - الفسلجة

الدرجة: دكتوراه

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: هذه الدراسة تبحث في تغيرات الفسلجة المرضية للجهاز المناعي عند الاناث المصابات بسرطان الثدي الخبيث اللاتي شخص حديثا بهن المرض ولم يتعاطين العلاج بعد اللائي ترددن على مستشفى السرطان والطب النووي في بغداد ومختبرات الصحة العامة المركزي . وقد تضمنت هذه الدراسة عدد (80) امراة , حيث كانت هناك ( 4 ) حالات فقط في المرحلة الاولى من المرضى , (32) حالة في المرحلة الثانية , (31) حالة في المرحلة الثالثة , (13) حالة كانت في المرحلة الرابعة من مرض سرطان الثدي .مستويات الواسمات الورمية المختلفة كانت قد قدرت, الواسم CA15 - 3 كان قد حددت قيمته , واظهر حساسية تقدر بـ ( 5ر27%) وتخصيصية تقدر با (8ر95%) في سرطان الثدي المعرف وكذلك في المراحل المختلفة من المرض , النتائج لهذه الدراسة كشفت عدم وجود اختلافات معنوية في مستوى CA15 - 3 في مصل المصابات بحالات ورم الثدي الحميد مقارنة بالنساء المصابات بسرطان الثدي - المرحلة الاولى ( 0.164 <P ) بينما مستوى CA15 - 3 من مصل المريضات بسرطان الثدي من المرحلتين الثالثة والرابعة كانتا اكثر ارتفاعا , وهناك ظهرت الاختلافات المعنوية القائمة بالمقارنة مع المصابين بسرطان الثدي من الدرجة الاولى والثانية ( 0.001<P) .المستضد الورمي الجنيني CEA كان اقل قدرة ادائية حيث كان ذات حساسية تقدر بـ20% وتخصصية 7ر93% من ناحية ثانية , عبر ضم هذين الواسمين خلق مدى افضل للاداء او الانجاز .مولدات مضادات الورمية اخرى اختبرت وكان لها اجمالي الدقة accuracy over all منخفضة والذي جعل استخدامها محدود في عملية تشخيص سرطان الثدي .مستويات Beta 2 microglobulin اظهرت اختلاف معنوي بين مجموعة السيطرة الاصحاء والمرضى بسرطان الثدي في المراحل المختلفة ( 0.001 >P) فوق ذلك , كانت هناك اختلافات معنوية ( 0.001 >P) بين مجموعة السيطرة الاصحاء واولئك من كانوا في المرحلة الاولى من المرضى , عبر ضم هذه الواسمات قد لوحظ تحسين افضل في الكشف عن سرطان الثدي .مستوى Ceruloplamin هو واحد من Acute phase reactant proteins , اظهر عدم وجود فروقات معنوية بين النساء السليمات وتلك المصابات بسرطان الثدي حتى المرحلة الثالثة ( P=0.269) الاختلاف كان معنوي فقط بعد الاخذ في الاعتبار المرحلة الرابعة من المرضى ( 0.002 >P) وهو المؤشر للزيادة الرئيسية الظاهرة في مستوى Ceruloplasminعند المرضى الذين كانوا في مرحلة متاخرة من الورم الخبيث .كما وقد لاحظنا ان عدد CD+ 4 cells يتناقص مع تقدم المرض ليصل الى اقل قيمة عند المرحلة الرابعة من المرض .من ناحية اخرى , التحليل الاحصائي اظهر اختلافات معنوية بين المراحل المدروسة من المرضى ( P=0.718 - 0.065 ) حيث لم تكن هناك فروقات معنوية حتى الوصول الى المرحلة الرابعة ( P=0.013) مشيرا الى ان اقصى درجة التدمير لهذه الخلايا كانت واضحة في هذه المرحلة . من جانب اخر CD8 cells اتخذت كليا التفاعل العكسي , تبدا الاقل انخفاضا عند المراحل المبكرة من المرض حتى تصل الى اعلى مستوى عند المرحلة الرابعة .مستويات Interleukines المعتمدة, كان متوسط IL - 1α في مصل مجموعة السيطرة الاصحاء اقل من الحد المعرف به في الـ Kit . خلال التحليل الاحصائي ظهرت علامة اختلاف معنوي بين المرضى في المراحل المختلفة من المرض ( P=0.032 ) . معظم القراءات كانت في اطار المستويات غير الحد المعرف به والمستوى المرتفع المفاجيء كان عند عدد قليل من المرضى نتجت في هذه الاختلافات .من جانب اخر , اظهر التحليل الاحصائي زيادة معنوية في مستويات IL - 4 بين النساء السليمات والمصابات بسرطان الثدي عند المراحل المختلفة من المرض ( 0.001>P) .تركيز IL - 6 في المصل كان ذات ارتفاع معنوي عند المصابات بسرطان الثدي مقارنة بالنساء السليمات (0.001>P) . متوسط مستويات IL - 6 المصلي كان يقارب الثلاثة اضعاف ارتفاعا عما هو عند مرضى سرطان الثدي المنتقل metastatic breast cancer ( المرحلة الرابعة ) كما قورن مع اولئك الذين كانوا في المرحلة المبكرة من المرض ( المرحلة الاولى ) , والمقدرة على التوالي بـ ( 24.02 pg/ml versus 8.45pg/ml) .كما وقد كان هناك تقدما في الزيادة المعلمة في متوسط مستوى IL - 8 في اطار المراحل المختلفة من المرض ( P=0.025) , مع ذلك العامل المنكرر في كل نتيجة على حدة متمثلا في ارتفاع مستوى القراءات , بما فيها المرحلة الرابعة من المرض .بالمثل لمستويات Immunoglobulins في المصل , كانت هناك زيادة طفيفة في مستويات المصل عند المصابات بالسرطان , والتي قد ظهرت متجاوزة قليلا عنها مما هي عند السليمات , ولكن في هذه الزيادة لم تكن هناك فروقات معنوية مميزة في كل اختبارات ذات الانماط المتساوية . | This study investigated some physiological changes of the immune system in females with malignant breast cancer that were newly diagnosed and untreated, attending The Oncology and Nuclear Medicine Hospital in Baghdad and the Central Public Health Laboratories. Of the 80 females included, only four were in stage I of the disease, 32 in stage II, 31 in stage III, and 13 in stage IV. Different tumor markers levels were evaluated in those patients. CA 15 - 3 was assessed. It showed a sensitivity of 27.5% and a specificty of 95.8% in detecting breast cancer and at different stages of the disease. The results of the study revealed no statistically significant difference in the level of CA 15 - 3 in serum of patients with benign breast conditions compared with patients with a breast cancer of stage I (p>0.164). However, serum CA 15 - 3 level in patients with a breast cancer of stages III and IV, was considerably higher and there was a significant difference as compared with patients with a breast cancer of grades I and II (p < 0.001). Carcinoembryonic antigen had lesser performance capabilites. It had a sensitivity of 20% and a specificty of 93.7%. However, by combining these two parameters better performance indices were achieved.Other tumor markers tested had low over all accuracy that limited their use in breast cancer diagnosis.Beta 2 microglobulin levels showed significant difference among the healthy control group and patients with breast cancer at different stages (P<0.001). Moreover, there was a significant difference (P<0.001) between healthy control and stage I of the disease. By combing this parameter, further improvement in detecting breast cancer could be noticed.Ceruloplasmin level, one of the acute phase reactant proteins, showed no statistically significant changes among healthy control persons and patients with breast cancer up to stage III (P=0.269). The difference was only significant after considering stage IV of the disease (P<0.002), indicating that the major increase in ceruloplasmin level occurs in patients who are at advanced stage of malignancy.We observed that the number of CD4 cells decreases with the progress of the disease reaching its lowest value at stage IV patients. However, statistical analysis showed that the differences between the studied stages (P=0.718 - 0.065) were of no statistical significance till reaching stage IV (P=0.013) indicating that the maximum reduction was in this stage. On the other hand CD8 cells follow totally opposite reaction, being lowest at early stages of the disease reaching its highest level at stage IV. Concerning interleukines levels, mean serum level of IL - 1alpha in the healthy control group was below the detection limit of the kit. Though statistical analysis showed significant difference between patients in different stages of the disease (P=0.032), most of the readings were within the undetectable levels and the occasional high level in few patients resulted in these differences.On the other hand, Statistical analysis shows significant increase in the levels of IL - 4 in patints with breast cancer at different stages of the disease in compare with healthy control group (p<0.0001).Serum IL - 6 concentration was significantly higher in patients with breast cancer compared with healthy controls (P < 0.0001). Mean IL - 6 serum levels were nearly 3 times higher in patients with metastatic breast cancer (stage IV) as compared with those with early disease (stage I) (24.02 pg/mL versus 8.45 pg/mL, respectively).There is progressive significant increase in the mean of IL - 8 level within the stages of the disease (P=0.025), though the main contributory factor in sucha result is the high level within stage IV.As for serum levels of immunoglobulins, a slight increase in the serum levels in patients with cancer appeared exceeding a little those of the healthy control but this increase was not significant in all isotypes tested.

تاثير المستخلصات الخام لجمار النخيل صنف زهدي Phoenix dactylifera cultivar. Zahdi على الخطوط الخلوية السرطانية Effect of crude extract of Date palm pith Phoenix dactylifera cultivar. Zahdi on cancer cell lines

اسم المؤلف: امنة موفق مصطفى النعيمي

اسم المشرف: بدر محمد عباس العزاوي ناهي يوسف ياسين

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2013

الموضوع الدقيق: الحيوان

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: العربية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: يمثل هذا البحث دراسة اولية لتقييم تاثير المستخلصات الخام لجمار نخيل التمر صنف الزهدي Phoenix dactylifera cultivar. Zahdi في نمو اثنين من الخطوط الخلوية السرطانية هما خط خلايا سرطان العضلة البشري RD وخط خلايا سرطان الخلايا الدبقية البشرية ANG وخط واحد من الخلايا الطبيعية لجنين الجرذ REF والخط المتحول وراثيا VERO فضلا عن دراسة تاثيرها في انقسام الخلايا اللمفاوية البشرية . تم تحضير ثلاثة مستخلصات خام لجمار النخيل وهي مائي(باستعمال الماء المقطر مزدوج التقطير ) وكحولي (باستعمال كحول الايثانول 70% )والعصير الخام (وذلك بعصر الجمار واستعماله مباشرة ). واستعملت اربعة تراكيز مختلفة محضرة بشكل ثنائي من هذه المستخلصات وهي ( 1250، 2500 ، 5000، 10000) مكغم/مل بالنسبة للمستخلص المائي والكحولي ، و(1% ،5% ،10% ، 30% )بالنسبة للعصير ، وتم اختبارها لكل من خطوط الخلايا السرطانية والخط المتحول وراثيا بمعدل ثلاث مكررات لكل تركيز ولمدة معاملة (24، 48 ، 72 )ساعة باستثناء الخلايا الطبيعية التي كانت مدة معاملتها 72 ساعة فقط . وقد اظهرت النتائج وجود تاثير سمي معنوي واضح للمستخلصات الخام في نمو الخلايا السرطانية لثلاث مدد من التعريض ، ووجد ان التاثير التثبيطي للمستخلصات يعتمد على التركيز حيث كانت السمية تزداد بزيادة التركيز وعلى وقت التعريض لبعض التراكيز . لقد اختلفت افضلية المستخلص الاكفا في التاثير السمي على الخطوط الخلوية السرطانية باختلاف نوع المستخلص والتركيز والخط الخلوي السرطاني. اذ كان العصير الخام اكفا المستخلصات الخام تاثيرا في الخط الخلوي السرطاني ANG حيث تراوحت نسب التثبيط لهذا المستخلص من 69.7% للتركيز 1% الى 81.5% للتركيز 30% لمدة التعريض 24 ساعة ، اما في 72 ساعة فقد تراوحت النسب بين (73.8% - 83%) للتراكيز (1% - 30%). اما في الخط الخلوي السرطاني RD والخط المتحول وراثيا VERO فقد كان المستخلص المائي هو الاكفا حيث كانت اعلى نسب للتثبيط عند التركيز 10000مكغم/مل وكانت النسب تنخفض بانخفاض التركيز حيث بلغت النسب (90.7 %، 89%، 88.8% ) (جدول4 - 8) للخط RD و(92.9%، 93.7% ، 91.8% )(جدول 4 - 2) للخط الخلوي VERO لمدد التعريض (24، 48 ، 72 ) ساعة على التوالي اي ان مدد التعريض لم يكن لها تاثير معنوي على نسب التثبيط. عند استعمال المستخلصات الخام بديلا عن المادة المشطرة PHA ، لم يؤد الى تحفيز انقسام الخلايا اللمفية اي انه لايعمل كبديل عن ال PHA . ولكن عند استخدامه كبديل عن الكولجسين لوحظ انه يعمل على ايقاف انقسام الخلايا في مرحلة ال Metaphase مما يدل على ان المستخلصات اظهرت دورا مشابها لعمل الكولجسين ولكن بكفاءة اقل . | This work represented a preliminary study of the effect of crude extracts of date palm pith (Phoenix dactylifera cultivar. Zahdi) on the growing of two cancer cell lines(Human Rabdomyosarcoma - RD) , (Glioblastoma - ANG) and one normal cell line (Rat Embryo fibroblast - REF) and the transformed cell line (VERO). In addition, it involves the study of their effects on the division of the human lymphoid cells.Three crude extracts of date palm pith were prepared which is aquous (using double distilled water), alcohol (using ethanol 70%) and the crude juice(squeezing the pith and use it directly).Four different binary concentrations have been prepared from crude extracts that are concentrations(1250,2500,5000,10000) µg/ml for each aquous and alcoholic, (1%, 5%, 10% 30%)for the crude juice. Each cancerous cell line and the transformed cell line was tested with an average of three repeaters for each concentration and for the treatment periods of (24 ,48 ,72) hours except for the natural cells whose treatment period was only 72 hours . The results show existence of clear significant cytotoxic effect for crude extracts on growth of cancer cells within the three periods of time of exposure .It was found that the cytotoxic effect for crude extracts and depended on concentration and time period of exposure. It is noticed that the cytotoxic effect increased according to concentration .The Effectiveness of more extract in terms of cytotoxicity on cancer cell lines has been varied depending on types of extract , cancer cell line and concentration.the crude juice was found to be the most effective especially on the cell line (ANG) The inhibition rate for this extract were (69.7%) for the concentration 1% to 81.5 for concentration 30% for exposures period 24 hour , while in 72 hour The inhibition rate were (73.8% - 83% ) for concentrations (1% - 3%). While on RD cell line and the transformed cell line (VERO) the aquous extract was more effective , the highest inhibition rate was for the concentration 10000 µg/ml the inhibition rates was increased according to concentration .It was (88.8% , 89% , 90.7%)for RD cell line and (91.8%, 93.7% , 91.8%) for VERO cell line for exposure periods (24, 48, 72) hour respectively. When we use the crude extracts as an alternative for the PHA , it is found that it doesn’t have the ability to motivate the cells division of the lymphoid cells , (i.e. it can't be as alternative for the PHA ). When using it as alternative for colchicin. It is noticed that it works on stopping the division in the tropical phase this is improve that these extracts show the same work like colchicin but less than it.

دراسة مقارنة بين تشظي DNA النطف والموت الخلوي المبرمج لبيوت الطاقة وعلاقتهما بعوامل العقم الذكري A comparative study between sperm DNA fragmentation and mitochondrial apoptosis correlated to male infertility factors

اسم المؤلف: الاء محمد ياسين

اسم المشرف: عبد الامير ناصر غلوب محمد باقر محمد رشاد فخر الدين

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2014

الموضوع الدقيق: الحيوان

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: تعتبر بيوت الطاقة ((mitochondria والحمض النووي الرايبوزي منقوص الاوكسجين (DNA) للنطف عوامل تنبؤ اساسية لحيوية النطفة المسؤولة عن نجاح الحمل سواء كان بالطريقة الطبيعية او عن طريق التقنيات المساعدة للانجابART) ) . لذلك هدفت هذه الدراسة لتقييم الموت الخلوي المبرمج لمايتوكوندريا النطفSperm mitochondrial apoptosis) SMA ) وتشظي المادة النووية للنطف SDF((Sperm DNA fragmentation. ثم تحديد العلاقة بينهما وبين عوامل العقم الذكري للسائل المنوي, وايضا ايجاد العلاقة بين نتائج فحص Acridinie orange (AO) وفحص الموت الخلوي المبرمج لمايتوكوندريا النطف (SMA). اجري تحليل السائل المنوي ل (85) ذكر, وكان عدد الذكور من ذوي نوع العقم الاولي (52) , ومتوسط اعمارهم (1.42± 32.13) سنة , وعدد الذكور من ذوي العقم الثانوي (33) , وبمعدل عمري قدره (1.85± 35.22) سنة , تم تقسيم الذكور الى عدة مجاميع على اساس عوامل العقم الذكري لسائلهم المنوي حسب معايير منظمة الصحة العالمية لعام (2010) عدا شكل النطف تم حسابه اعتمادا عى معايير منظمة الصحة (WHO) لسنة (1999). ايضا تم اجراء فحص الموت الخلوي المبرمج للمايتوكوندريا (SMA) لجميع الذكور بواسطة عدة تصبيغ المايتوكوندريا , وفحص تشظي المادة الوراثية بواسطة فحص (AO) وفحصت خلايا النطف المصبغة بواسطة (Fluorescent Microscope). اظهرت نتائج هذه الدراسة زيادة معنوية في الموت الخلوي المبرمج لمايتوكوندريا النطف (SMA) بطيئة الحركة التقدمية (Asthenozoospermia), وحالات النطف قليلة العدد وبطيئة الحركة التقدمية (Oligozasthenozoospermia), وحالات النطف قليلة العدد بطيئة الحركة التقدمية ومشوهة الشكل (Oligozasthenoteratozoospermia), بينما اظهر الذكور ذوي السائل المنوي طبيعي النطف والذكور ذوي النطف بطيئة الحركة التقدمية مشوهة الشكل (Asthenoteratozoospermia) والذكور ذوي حالات النطف قليلة العدد مشوهة الشكل زيادة غير معنوية (P>0.05) في نسبة (SMA) بالمقارنة مع المجاميع الاخرى. بالاضافة الى ذلك, اظهرت هذه الدراسة علاقة سلبية معنوية (P<0.05; r= - 0.94) بين الحركة التقدمية الكلية وبين نتائج فحص (SMA) في مجموعة الذكور ذوي النطف المشوهة (Teratozoospermia) , بينما كانت العلاقة سلبية غير معنوية(P>0.05) بين الصفات اعلاه مع تشظي المادة النووية (SDF) . اضافة الى ذلك اظهرت الدراسة الحالية ان الموت الخلوي المبرمج وتشظي المادة النووية كان باعلى النسب في حالات العقم الذكري التي يشترك فيها عامل عقم بطئ الحركة التقدمية. ايضا, تم ملاحظة اختلافات غير معنوية (P>0.05) في تشظي المادة النووية بين مجاميع عوامل العقم الذكري. على اية حال, كان التشظي في اعلى مستوياته عند الذكور ذوي قلة عدد النطف مع بطئ الحركة التقدمية لها, يليها نسبة اقل من (SDF) في الذكور ذوي النطف بطيئة الحركة التقدمية, بينما ظهرت اقل نسبة من (SDF) في الذكور ذوي السائل المنوي الطبيعي (Normozoospermia). استنتجنا من هذه الدراسة ان لفحص الموت الخلوي المبرمج لبيوت الطاقة لخلية النطفة دور مهم في بيان العقم الذكري . اضافة الى ذلك, ان لكلا الفحصين (SMA and SDF ) اهمية تنبا للمرضى ذوي عامل عقم بطئ الحركة التقدمية سواء كان لوحده او مرتبطا مع عوامل العقم الذكري الاخرى. | Sperm mitochondria and sperm DNA considered essential factors to prediction of sperm viability, which is responsible for successful pregnancy in natural way or in assisted reproductive techniques. Therefore, this work aimed to evaluate the sperm mitochondrial apoptosis (SMA) and DNA integrity for infertile patients, then to assess correlation between semen parameters with both SMA and sperm DNA fragmentation (SDF), also to assume the correlation between results of SMA test and acridine orange test. Seminal fluid analysis was performed for (85) male, the number of primary infertile men were (52) with average age (32.13 ± 1.42) year, and number of secondary infertile men were (33) with an average age (35.22 ± 1.85) yearAll patients were classified into several groups according to the male infertility factors according to WHO (2010) criteria with exception for the morphology that assessed according to WHO (1999). Also, the other two tests including SMA and SDF were performed for all infertile patients. SMA was assessed by mito - capture kit assay and the SDF assessed by Acridine Orange (AO) by using of fluorescent Microscope. The results of the present study showed a significant difference (P< 0.05) in SMA assay for asthenozoospermia, oligoasthenozoospermia and oligoasthenoteratozoospermia as compared with teratozoospermia, while normozoospermia, asthenoteratozoospermia, and oligoteratozoospermia had non significant differences (P > 0.05) in SMA (%) as compared with the other groups. Moreover, a significant negative correlation (P<0.05; r= - 0.94) assessed between total progressive motility (TPM) and SMA in Teratozoospermia, while it was negative non significant (P< 0.05) correlation with SDF. Also, this study showed that SMA and SDF were in the higher percentages in males who shares asthenozoospermia male infertility factor. Non significant differences (P>0.05) had been observed among groups of male infertility factors for sperm DNA fragmentation. However, SDF was in the maximum value for male with oligoasthenozoospermia, followed by asthenozoospermia. In contrast, minimum value was assessed in group normozoospermia males. A significant increment has been observed for secondary infertility as compared to primary infertility in sperm concentration, sperm progressive motility (%), sperm normal morphology (%), and total sperm motility (%). Additionally, this study showed that SMA and SDF were in higher values in cases that shares asthenozoospermia. From the results of the present study, it was concluded that the sperm mitochondrial apoptosis assay (SMA) has an important role in investigation of male infertility. Furthermore, both SMA and DFI assays have predictive value for patients with asthenozoospermia either alone or combined with other male infertility factors.

دراسة بيئية وامراضية على جرثومة كليبسيلا في عينات سريرية ونهر دجلة في بغداد Environmental and Pathogenic Study on Klebsiella Spp. in Samples Collected from Patients and Tigris River at Baghdad

اسم المؤلف: افراح فهد عبد الكريم

اسم المشرف: كاظم هاشم ياسين الاعرجي كفاح احمد جاسم

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2015

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية

الدرجة: دكتوراه

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: العربية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: تفرعت الدراسه الحاليه خطين رئيسيين.تضمن الخط الاول تقييم نهر دجله ضمن محافظة بغداد من خلال دراسة العوامل الفيزيائيه والكيميائيه والبايولوجيه والتي لها تاثير على نوعية مياه نهر دجله بينما تضمن الخط الثاني دراسه جزيئيه لبعض عوامل الضراوه، المقاومه للمضادات الحيويه وانتاج الغشاء الحيوي لبكتريا K. pneumoniae والمعزوله من مصادر سريريه وبيئيه. محطات الدراسه تضمنت ثلاثة مواقع على نهر دجله ضمن مدينة بغداد، الموقع الاول يقع شمال مدينة بغداد والتي تقع شمال منطقة الكريعات بالقرب من جسر المثنى، والموقع الثاني يقع قرب مدينة بغداد الطبيه قرب جسر باب المعظم بينما يقع الموقع الثالث الى الجنوب بالقرب من جسر الجادريه. جمعت عينات شهريه من المواقع المذكوره انفا والواقعه على نهر دجله ابتداءا من تشرين الثاني/2013 ولغاية تشرين الاول/2014 . فضلا عن ذلك جمعت عينات سريريه من عدة مستشفيات في بغداد وباستخدام حاويات معقمه. اظهرت النتائج ان قيم درجات الحراره لمياه نهر دجله تراوحت بين (9 - 31 م◦) وهذا من صفات جو العراق والذي يتميز بتقلبات موسميه بدرجات الحراره من جهه وبتغيرات يوميه من جهه اخرى، كانت دالة الحامضيه لمياه النهر تميل للقاعديه الخفيفه وتراوحت بين (6.1 - 8.7) مع ظهور حامضيه خفيفه في الموقع الثاني وقد يعود السبب في ذلك الى مخلفات مدينة الطب والتي تدل على وجود تلوث. تراوح تركيز الاوكسجين المذاب بين (6.6 - 9.9 ملغم/لتر) وهذا يظهر ان مياه نهر دجله جيدة التهويه وكذالك اظهرت النتائج ان المتطلب الحيوي للاوكسجين كان ضمن الحدود المسموح بها دوليا ومحليا حيث تراوحت قيمته بين (0.8 - 3.5 ملغم/لتر). العكوره تظهر مدى شفافية المياه وقد تراوحت قيم العكوره لمياه النهر مابين (16 - 102 نفلوميتر) وسجلت الدراسه ارتفاع ملحوظ في قيم التوصيليه الكهربائيه (651 - 1170 ملغم/لتر). كذلك وجد ان قيم المواد الصلبه الذائبه تراوحت بين (406 - 751 ملغم/لتر) وكان لتاثير الفصول عليها اكثر من تاثير المواقع. بينما سجلت الملوحه تركيز (0.72 - 0.39ملغم/لتر). سجلت النتائج لتركيز المعادن الثقيله ما بين (0.001 - 0.6 ملغم/لتر)،(0.00 - 0.25 ملغم/لتر) لكل من الحديد والزنك على التوالي، معدل التراكيز لهذه المعادن اظهر تغايرا شهريا خلال مدة الدراسه حيث كانت معدلات الحديد متجاوزه الحدود المسموح بها دوليا بينما معدلات الزنك ضمن الحدود المسموح بها. تراوحت قيم الفوسفات لنهر دجله مابين (0.11 - 0.37). من جهه اخرى كانت نتائج الدراسه البكتريولوجيه قد سجلت معدلات مرتفعه لكل من العدد الكلي الحي للبكتريا واعداد بكتريا القولون الكليه واعداد بكتريا القولون البرازيه والتي تجاوزت الحدود المسموح بها دوليا ومحليا والتي كانت دليل على وجود تلوث احيائي وقد سجلت القيم ما بين (195 - 8200CFU/ml ) ، (3625 - 160000 cell/100ml ) ، (24000 - 142500 cell/100ml ) على التوالي. جمعت 75 عزله بكتيريه تابعه للجنس Klebsiella spp. وتوزعت مابين 40 عزله بيئيه و35 عزله مرضيه، شخصت العزلات بانها : K. pneumoniae (40), K. oxytoca (8), K. terrigena (7), K. ornitholytica (5) اعتمادا على الخواص الزرعيه، المجهريه والكيموحيويه وقد تم تاكيد التشخيص باستخدام نظام API - 20E وVITEC2 systemقد تم عد البكتريا باستخدام طريقة الترشيح الغشائي وباستخدام وسط انتقائي.تم تحديد حساسية العزلات تجاه (23) مضاد حيوي واظهرت النتائج بصوره عامه مقاومه العزلات لاغلب المضادات المستخدمه كما اظهر التحليل الجزيئي ان عزلات K. pneumoniae كانت حامله لجين CTX - M gene والذي له علاقه بمقاومة مضادات البيتالاكتام حيث اظهر تفاعل تضخيم السلسله PCR حزمه واضحه وبحجم (551 bp) فضلا عن ذلك تم دراسة جين aac(3) - II والذي يتعلق بمقاومة مضادات الامينوكلايكوسايد وباستخدام PCR حيث ظهرت حزمه واضحه بحجم (877 bp) . درست قدرة البكتريا على تكوين الغشاء الحيوي باستخدام ثلاثه طرق مختلفه وقد اظهرت النتائج ايجابيه الفحص وكذلك تم تضخيم جين mrkD والذي يعتبر تحت الوحدة المسؤله عن الاتصاق للنوع الثالث من الاهداب واظهر PCR حزمه بحجم (966 bp). عوامل ضراوه اخرى درست جزيئيا لهذه البكتريا وذلك باستخدام تفاعل تضخيم السلسله تضمنت rmpA , magA وkfu وهي جينات مسؤله عن تكوين الكبسوله وحوامل الحديد وكذلك تم تضخيم جين 16SrRNA وذلك باستخدام conventional and real time PCR وذلك من اجل تشخيصها جزيئيا واظهرت النتائج حزم واضحه بحجم (535 bp) لجين rmpA، (797bp) لجين kfu و(160 bp)عند استخدام برايمر متخصص لجين 16SrRNA بينما لم تظهر اي حزمه عند تضخيم جين magA. | The present work was branched into two line first line aim to study Tigris River within Baghdad City to assess Physical, chemical and biological characteristics of water river that influence water quality of the Tigris River. The second line conducted to study molecular characterization of virulence factor, antibiotic resistance genes and biofilm formation of K. pneumoniae isolated from clinical and environmental sources. The study area included three stations on Tigris River Within Baghdad city, the first was located at North of Baghdad in the northern area of Ghera'att City, and the second at middle part in the area Baghdad medical city, whereas the third station located at South part in the area near Al - Jadiriah Bridge. Monthly samples were collected from three station located on Tigris river, from November 2013 to October 2014. In addition Samples were collected from different Hospital’s Environment and patients by using sterile containers.Results obtained showed that temperature value of Tigris water has ranged between (9 - 31 Cº) the climate of Iraq recognized with seasonal fluctuation from one side and day and night fluctuation from other side. The degree of pH in Tigris River tend to be light alkalinity as it ranged between (6.1 - 8.7) with slightly acidic at station2 and this may be due to the effect of medical city discharge that indicate presences of pollution. The concentration of dissolved oxygen was ranged between (6.6 - 9.9) mg/l and it seems that the water of Tigris is ventilated well. The results showed that values of BOD5 ranged between (0.8 - 3.5 mg/l.) which is within the International allowable levels. The Turbidity reflects the transparency in water, the Turbidity's values ranged between (16 - 102) NTU. The results showed that there is a noticeable raise in value the electrical conductivity that recorded between (651 - 1170) mg/l. It is found that the total dissolved solids values were affected by its seasons more than by its locations, It was recorded higher and lower values of (TDS) (406 - 751) mg/l. whereas the salinity recorded (0.72 - 0.39 ppm) .The results showed that concentrations of heavy metals iron and zinc were varied between 0.001 - 0.6 mg/l and 0.00 - 0.25 mg/l respectively. Mean concentrations of these metals in Tigris River showed monthly variations during the study period and the Fe values exceeded the International allowable levels while Zn within permissible limit for Iraqi and WHO standards for river system maintains. Phosphate values ranged between (0.37 - 0.11). On the other side, The bacteriological studies indicated a high level of total viable bacterial counts in water of the three stations and were between (195 - 8200 C.F.U/ml), While the total coliform and faecal coliform counts exceeding acceptable limits are indicative of pollution that recorded (3625 - 160000 cell/100ml ) and (2400 - 142500 cell/100ml) respectively.A total of 75 klebsiella spp. isolates had been collected and distributed between 40 environmental isolates and 35 clinical isolates. Isolates were identified as K. pneumoniae (40), K. oxytoca (8), K. terrigena (7) and K. ornitholytica (5) depending on cultural, microscopical, biochemical characteristics, API 20E and VITEK 2 system. Enumeration of klebsiella sp from water samples had been made by using membrane filtration technique with selective media. The results of Antibiotic susceptibility of K. pneumoniae isolates against (23) antibiotic declared that, generally, the isolates were resistant to the most antibiotics used and molecular analysis showed that all isolates were carrying CTX - M gene concern β - lactam group with PCR product band of molecular size 551 bp and aac(3) - II gene which concern with aminoglycosids group resulting in PCR product with band of molecular size 877 bp.Biofilm formation assay was determined through three different methods and the results showed the ability of K. pneumoniae isolates to produce biofilm, also mrkD gene which is adhesive subunit of type3 fimbriae that play important role and mediated biofilm formation had been amplified and results PCR product with band of molecular size 966 bp. Another virulence factor of K. pneumoniae isolates was studied molecularly by using (PCR), magA, rmpA, kfu and for further diagnosed molecularly 16S rRNA genes were amplified using conventional and real time PCR, the results showed that the isolates of K. pneumoniae gave a clear band with a molecular size 535bp for rmpA, 797bp for kfu and160 bp when PCR was performed with the primer that target the 16S rRNA.while no bind had been obtained for magA

دراسة بعض المؤشرات البيوكيميائية والدموية لدى العاملين في بيئة معامل طابوق النهروان - بغداد Study of Some Biochemical and Haematological Parameters among Workers of Al - Nahrawan bricks factories Environment - Baghdad

اسم المؤلف: اصال غازي حسين الشمري

اسم المشرف: كاظم عبد الامير محسن الزيدي

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2012

الموضوع الدقيق: علوم الحياة

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: العربية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: اجريت الدراسة على العاملين في معامل طابوق النهروان ( 75 عاملا ومجموعة ضابطة مكونة من20 شخص من الكادر التدريسي والطلاب في كليتنا للمقارنة) لمعرفة بعض التاثيرات الصحية للغازات السامة المنبعثة من استخدام وحرق النفط الاسود وحتى مخلفات الدهون المستخدمة في المكائن والسيارات على العاملين فيها. وقد استخدمت التغيرات لبعض الدلائل الدموية والكيميائية وسيلة لمعرفة مديات التاثير وشملت الدلائل البايوكيميائية في مصل الدم : سكر الكلوكوز(Glucose) واليوريا (Urea) والكرياتنين (Criatenein) والصوديوم (Sodium) والكولسترول (Cholesterol) والكلسيرات الثلاثية (Triglyceride) وعدد كريات الدم البيض (White Blood Cell) وكريات الدم الحمراء (Red Blood Cell) وقيمة الهيموغلوبين (Hemoglobin) والصفائح الدموية (Platelets) وقيمة معدل خلايا الدم المرصوصة (Hematocrit) وحجم خلايا الدم الحمراء (Mean Corpuscular Volume) وقد استخدمت الكواشف Kits)) الخاصة بكل دليل للتحليل ومعرفة نسبته. وقد اظهرت النتائج ارتفاع نسب الكرياتنين واليوريا والصوديوم والكليسيرات الثلاثية من ( 53.03 الى 87.21) mmol/L و(3.37 الى 4.61) mmol/L و( 141.3 الى 143.6) mmol/L و( 1.33 الى 2.33 ) /dl mg على التوالي. اما الكولسترول فقد انخفض بشكل طفيف وغير معنوي لدى العاملين من ( 5.12 الى 4.60 ) mmol/L.بينما اظهرت النتائج ان سكر الكلوكوز قد انخفض بشكل معنوي لدى العاملين من 5.64 الى 3.23 mmol/L.اما بالنسبة للفحوصات الدموية فقد لاحظنا ارتفاع كل من اعداد كريات الدم البيض وقيمة خلايا الدم المرصوصة ومعدل حجم خلايا الدم الحمراء على التوالي من (4.63× ml /103 الى 6.75× ml /103) ومن (48.47% الى 49.21%) ومن (85.84fL الى 94.38fL) مع انخفاض كريات الدم الحمراء وقيمة الهيموغلوبين وعدد الصفائح الدموية من (5.47 µl /106× الى 5.39/106× µl) ومن (15.63 gm /dL الى 13.7 gm /dL) ومن (204.1 106× mmol/ الى 146.5 mmol /106× ) وقد استخدمت قيمة t الجدولية عند احتمالية 0.001> P لمعرفة معنوية الفروقات بين مجموعة العمال والمجموعة الضابطة من غير العاملين فيها, كذلك المعدل الحسابي ( x¯ ) والانحراف المعياري S.D والخطا القياسي S.E . وقد تمت مناقشة النتائج بضوء الابحاث ذات العلاقة ، حيث اظهرت النتائج ان الغازات السامة المنطلقة من معامل طابوق النهروان قد اثرت على جهاز الدوران من خلال التغيرات المعنوية في ارتفاع اعداد كريات الدم البيض (WBC) وحجم خلايا الدم الحمراء(MCV) وانخفاض الهيموغلوبين (Hb) والصفائح الدموية (Plts) وقد سبب ذلك في انخفاض كفاءة الكليتين من خلال ملاحظة ارتفاع الكرياتينين واليوريا والصوديوم والكليسيرات الثلاثية .وهو ما يؤشر سوء الحالة الصحية للعاملين في هذه المعامل ويؤكد الحاجة لتدخل الجهات المختصة الصحية والبيئية لايجاد البدائل المناسبة وتخفيف الاثر البيئيEnvironmental impact. | This research was conducted on the workers in the Nahrawan Bricks Factories (75 workers and control group of 20 persons), The aim was to find out some of the health effects from the exhaust poisoning gases on workers. Those gases were released due to the burning fuel of crude oil and even the lubricate oil wastes of heavy machines and vehicles. Changes in some blood and chemical parameters were used as an indicator of the effect range of those pollutant gases. The chemical parameters in blood serum used were : Creatinine ; Urea; Sodium ; Cholesterol ; Triglycerides and Glucose. special kits were used for the analysis to determine their concentration changes. Results shows that creatinine have increased significantly from (53.03 to 87.21 ) mmol/L. also the Urea ; Sodium and Triglycerides were significantly increased from ( 3.37 to 4.61) ml ; (141.3 to 143.6 ) mmol /L ; ( 1.33 to 2.33 ) gm/dl respectively. The cholesterol concentration shows not significant slight decrease from (5.12 to 4.60) mmol /L.While glucose concentration was decreased significantly from 5.64 to 3.23 mmol / L. The Hematology tests shows increase in (WBC) and (MCV) from (4.63 to 6.75) ×103ml ; (85.84 to 94.38) fl respectively while decrease in (Hb) and (Plts) from; (15.63 to 13.7) gm/dl ; (204.1 to 146.5) mmol respectively. Results shows not significant increase in (Hct) from (48.47 to 49.21)% and not significant decrease in (RBC) from (5.47 to 5.39) ×106µl , Statistical analysis was used with t test under probability < 0.001 for comparison between workers and control group in each parameter. Mean concentrations; S.D. and S.E. were also used. Results were discussed and compared with other related studies. These results show that the released poisoning gases from AL - Nahrawan brick factories have serios effects on the circulation system of the workers.Those effects were clear from : 1 - The significant increase changes in the values of White Blood Cell (WBC) and Mean Corpuscular volume (MCV). 2 - The significant decrease in the Hemoglobin (Hb) and the Platelets (Plts). Those effects were behind the low efficiency of the kidney, This low efficiency from the significant increase of Criatenine , Urea, Sodium and Triglyceride.This is an indication of the bad situation of the Workers 'health.Those facts confirm the need to the interference of the health and Environmental authorities to find out their Alternatives and Mitigation Plan.

تاثير بعض المحفزات الكيمائية والنانوية في انتاجية بعض مركبات الايض الثانوية من المزارع النسيجية لنبات الاقحوان Calendula officinalis L. Effect of some chemical and nanoparticle elicitors on the production of secondary metabolites of Calendula officinalis L. In Vitro

اسم المؤلف: اسيل صالح محمدامين

اسم المشرف: هاشم كاظم محمد

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2014

الموضوع الدقيق: النبات

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: اجري هذا البحث الحالي في مختبر زراعة الانسجة النباتية ، قسم علوم الحياة ، كلية العلوم ، الجامعة المستنصرية ، بهدف زيادة انتاج بعض المركبات الثانوية في نبات الاقحوان Calendula officinalis L. خارج الجسم الحي. قدرت مركبات الايض الثانوي بالتحليل الكمي والنوعي باستعمال جهاز كوماتكرافيا السائل ذو الاداء الفائق HPLC وقورنت مع مايحتويه النبات الام. استحث الكالس من الاوراق بعد زراعتها على وسط MS مزود بالتراكيز 0, 1, 2, 3 او 4 ملغم\لتر من 2,4 - D . بينت النتائج ان الوسط الحاوي على 2ملغم\لتر من 2,4 - D اعطى اعلى نسبة مئوية لااستحثاث الكالس بلغت 90% عند التحضين بالضوء, واعطى اعلى وزن طري وجاف للكالس هذه المعاملة 612, 33.8 ملغم على التوالي. وبهدف زيادة المركبات الثانوية اضيفت بعض المحفزات السالسيلك اسيد بتراكيز 0, 50 , 100 , 150 او 200 ملغم\لتر, الفنل النين بتراكيز 0, 10 , 20 , 30 او 40 ملغم\لتر ونترات الفضة النانوية AgNO3 بتراكيز 0, 0.3 , 0.6 , 0.9 او 1.2 ملغم\لتر. اظهرت النتائج ان التركيز 200 ملغم\لترمن السالسيلك اسيد وتركيز 20 ملغم\لتر من الفنيل النين اعطى زيادة معنوية في اغلب مركبات الزيوت الطيارة لنبات الاقحوان بينما اعطى تركيز 1.2 ملغم\لتر من نترات الفضة النانوية زيادة معنوية في جميع مركبات الزيوت الطيارة لنبات الاقحوان. | The present study was conducted in the laboratory of plant tissue culture, Department of Biology, College of Science, University of Al - Mustansiriyah, in order to increase the production of some secondary metabolic compounds in leave of Calendula officinalis L. in vitro. Secondary metabolites were estimated quantitatively and qualitatively using high performance liquid chromatography HPLC and compared with those in the mother plant. Callus was induced from leaf explants and cultured on MS medium containing different concentrations of growth regulators including 2,4 - Dichlorophenoxy acetic acid 2,4 - D at the concentrations 0, 1, 2, 3 or 4 mg/l. Results showed that the medium containing 2 mg/l of 2, 4 - D gave the highest percentage of callus induction reached 90 % under light conditions, the highest fresh and dry weight were recorded 612, 33.8 mg respectively. In order to increase the production of secondary metabolites, some elicitors were used including Salicylic acid at the concentrations 0, 50, 100, 150 or 200 mg/l, phenyl alanine at the concentrations 0, 10, 20, 30 or 40 mg/l, and silver nanoparticles AgNO3 at the concentrations 0, 0.3, 0.6, 0.9 or 1.2 mg/l. Results showed that 200 mg/l concentration of Salicylic acid and 20 mg/l concentration of phenyl alanine caused highly significant production in most of the secondary metabolites (essential oils) of C. officinalis L. while 1.2 mg/l of silver nitrate nanoparticles AgNO3 caused

التحري عن الافلاتوكسين B1 في الذرة والحنطة والرز في بعض مخازن الحبوب في العراق Detection of Aflatoxin B1 in maize (Zea mays), wheat (Triticum aestivum) and rice (Oryza sativa) collected from some silos in Iraq

اسم المؤلف: اسماء عبد الحميد عبد المجيد

اسم المشرف: حسن محمد بدير عادل حسين طالب

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2016

الموضوع الدقيق: البيئة

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: Aflatoxins are one of the dangerous mycotoxins, especially aflatoxin B1, causing of cancers disease to humans and animals, also lead to a large Perdition. This toxin is produced from Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus.The current study was conducted to investigate the environmental conditions in the local stores and their impact on pollution with aflatoxin B1, Three Models of economic crops which are corn, wheat and rice samples are collected from the Ministry of Trade and Ministry of Agriculture stores(silos) in the provinces of Baghdad and Wast for six consecutive months started from September 2014 until March 2015, in addition to collection of these crop from the local market to study the relationship between the storage and production of the toxin. Sixty type samples of the three grain crops were collected from the stores, twelve samples of corn and twenty four samples each of wheat and rice, total of samples and three replicates were one hundred eighty planted on the (PDA) medium. Sixty five isolates of A. flavus were obtained from all samples of grains; Preliminary tests for the detection of aflatoxin B1 productivity were done on these isolates, using coconut medium test, ammonia vapor test and Yellow pigment test. The results showed that thirty - six of the isolates were capable of producing aflatoxin B1 while twenty - nine were not produced of producing the toxin. Environmental conditions have affected the growth ratio of the A. flavus in each of the three crops, where corn crop recorded the highest rate of fungal contamination ratio in the six months, it was (80.5%), followed by wheat (32%), and finally by rice (18%). Quantitative and qualitative test for estimation of aflatoxin B1 using ELISA technique was done on grain samples that had positive indicators for the growth of A. flavus. The results showed that the concentration of aflatoxin B1 was at its peak in February compared with other months under study, reached to (46.2, 45.2, 40) ppb, respectively, in each of corn, wheat and rice, while the low concentrations of aflatoxin were recorded in September and October, attained to(19.5,2.2,1.8) ppb in each of corn, wheat and rice respectively. These results are attributed to the rise in humidity rates in February and low temperature off set by low humidity and high temperatures rates in September, which provides environmentally appropriate conditions for the fungus growth and production the toxins. The results also show that corn crop was more affected by the pollution compared with other crops, where the concentration of aflatoxin B1 was 46.2ppb in corn, while in rice crops was concentration of toxin reached to1.8 ppb

عزل طفيلي Blastocystis hominis ، تنميط HLA للمصابين والتثبيط بالمعزز Saccharomyces boulardii Isolation of Blastocystis hominis , HLA typing of patients and the inhibition by the probiotic Saccharomyces boulardii

اسم المؤلف: اسراء محمد عبد الخالق الحسن

اسم المشرف: سبا طاهر محمد بتول مطر مهدي

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2015

الموضوع الدقيق: الحيوان

الدرجة: دكتوراه

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: شملت الدراسة الحالية (5892) عينة براز، والتي جمعت من مرضى باعمار مختلفة (1 - 70 سنة) لكلا الجنسين ،كانوا يعانون من الم البطن، مغص حاد ، تطبل البطن واسهال. جمعت العينات خلال الفترة الواقعة من ايلول (2013) ولغاية ايلول (2014)، من اربع مستشفيات في بغداد (مستشفى مدينة الطب التعليمي ،مستشفى الامام علي ،مستشفى الكرامة ومستشفى اليرموك التعليمي ) . للتحري عن نسبة الاصابة بطفيلي hominis Blastocystis ، اظهرت نتائج الدراسة الوبائية ان العدد الكلي المصاب بالطفيلي كان (1420) عينة موجبة وبنسبة (24.10%) ، اما نسب الاصابة بالطفيلي في المستشفيات الاربعة (مستشفى مدينة الطب التعليمي ،مستشفى الامام علي ،مستشفى الكرامة ومستشفى اليرموك التعليمي) كانت (51.41 % ، 18.66%،17.61% و12.32% ) على التوالي . واظهر الذكور اعلى عدد ونسبة للاصابة ، حيث بلغت (750) حالة وبنسبة (52.82%) ، اما الاناث فقد بلغت حالات الاصابة (670) حالة وبنسبة (47.18%) وبدون وجود فروق معنوية . وقد كانت اعلى نسبة للاصابة ضمن الفئة العمرية ( 30 - 21 سنة) بنسبة (29.58%) ، بينما كانت اقل نسبة للاصابة ضمن الفئة العمرية (10 - 1 سنة) بنسبة (3.52%). اظهرت الدراسة ان عينات البرازالتي تحتوي على الطفيلي تمتاز بقوام سائل اوشبه سائل ، وتمت دراسة علاقة الطفيلي مع الاصابة بالطفيليات المعوية الاخرى وجاءت النتائج كالاتي (1110) حالة اصابة مفردة لطفيلي Blastocystis hominis وبنسبة ((78.17%، و(310) 21.83%)) حالة اصابة مشتركة مع (6) اجناس مختلفة من الطفيليات المعوية، حيث كانت اجناس الطفيليات كالاتي ( Entamoeba histolytica ،تليها Giardia lamblia ،تليها Cryptosporidium ،تليها Enterobius vermicularis ،تليها Taenia spp.، واخيرا Ascaris lumbricoides ) وبنسبة ( 18.38% ، 2.68%، 0.35 % ،0.21%، %0.14 ،% 0.07) على التوالي. ان الدراسة الحالية سلطت الضوء على تحديد افضل طريقة تصبيغ لتشخيص الطفيلي بالبراز. واظهرت الدراسة ان افضل طريقة تصبيغ هي صبغة السفرانين تليها صبغة الكمزا والايرون هيماتوكسيلين. اما بالنسبة لزراعة الطفيلي لتشخيصه ، فقد كان وسط جونس المحورهو الوسط المناسب مع اجراء بعض التحوير بطريقة الزرع وهو استبدال مصل الحصان بمصل انسان مثبط ،و حضن الطفيلي هوائيا بدرجة ( 37 مئوية). اظهرت النتائج ان اعلى نسبة نموحصلت بعد (24 ساعة) اذ بلغت اعداد الطفيلي (777.75 خلية/ مل)، و(495.62 خلية / مل) بعد (48 ساعة) ، وقد كان الشكل الفجوي هو الشكل الاكثر تواجدا في الوسط . وقد شملت الدراسة الحالية عمل تنميط مستضدات كرية الدم البيضاء البشرية الى (30) شخص عربي عراقي مسلم مشخصين بوجود متلازمة تهيج القولون العصبي ، جميعهم مصابين بطفيلي Bastocystis hominis ، وقد كان (24) منهم ذكور، و(6) اناث ، وباعمار تراوحت بين (53 - 20 سنة) ،هذا بالاضافة الى (30) شخص سليم عربي عراقي مسلم تم اعتبارهم كمجموعة سيطرة ، تكونت من (25) ذكور، و(5) اناث ، وباعمار تراوحت بين ( 55 - 18 سنة) ، وقد وجد ان هناك ميل واستعداد للاصابة بالطفيلي يتطلب اكتساب الاليل HLA - DR B1*03 ،بالاضافة الى اكتساب الاليل HLA - DRB1*14. تم دراسة تاثيرفعالية خميرة Saccharomyces boulardiiكمعززات حيوية على الطفيلي في الفئران المختبرية ومقارنتها مع دواء mitronidazole الذي يستخدم عادة في علاج الطفيليات المعوية ومن ضمنها طفيلي ال hominis Blastocystis. وقد لوحظ هناك انخفاض تدريجي لاعداد الطفيلي في براز الفئران ومنذ اليوم الاول للمعالجة (حيث اختفى الطفيلي عند اليوم الثاني عشر بعد العلاج بخميرة Saccharomyces ، وعند اليوم الثالث عشر بعد العلاج بدواء metronidazole)، وعند حساب الكفاءة العلاجية للخميرة والميترونيدازول ،وجد بان الخميرة كانت ذات كفاءة علاجية عالية اذ بلغت (87.45%) في حين بلغت الكفاءة العلاجية للميترونيدازول (81.36%) . اظهر الفحص المجهري للمقاطع النسيجية الماخوذة من امعاء الفئران المصابة بالطفيلي لمنطقتي الاعور والقولون قدرة الطفيلي على حدوث تغيرات نسيجية تضمنت وجود ترشح خلوي التهابي شديد وحدوث اضرار للغشاء المخاطي. واظهرت خميرة Saccharomyces boulardii فعالية عالية في اصلاح وشفاء الانسجة المتضررة مقارنة بالميترونيدازول الذي اظهر كفاءة اقل في اصلاح وعودة النسيج الى هيكله الطبيعي. | The present study included (5892) stool sample , which were collected from patients at different ages (1 - 70 year) of both sexes, complained with abdominal pain, cramp, flatulence and diarrhea. Samples were collected during the period from September (2013) till September (2014), included four hospitals in Baghdad (Baghdad Medical City , AL - Imam Ali Hospital, AL - Karaama Hospital and AL - Yarmouk Teaching Hospital ) . To detect of the infection prevalence of Blastocystis hominis , the results of epidemiological study showed that the total number infected with this parasite was (1420) positive sample with percentage of (24.10%) , Percentages of infected cases with parasite in the four hospitals (Baghdad medical city, AL - Imam Ali Hospital , AL - Karaama Hospital and AL - Yarmouk Teaching Hospital), were (51.41%,18.66%,17.61%,and 12.32%) respectively . Males showed higher number and percentage of infection, (750 ) case with percentage of (52.82%), while females were (670) case with percentage of (47.18%) , no statistical significant differences was detected. The highest percentage of infection occurred among age group (21 - 30 year ) with percentage of (29.58%), while the lowest percentage of infection occurred among age group (1 - 10 years) with percentage (3.52%) . This study showed that stool samples which contain the parasite have a liquid or semi liquid . The presence of other intestinal parasites was detected, and the results were (1110) single infection with Blastocystis hominis ,with percentage (78.17%) , and (310) (21.83%) co - infection with (6) different genus of intestinal parasites, which were (Entamoeba histolytica, Giardia lamblia , Cryptosporidium , Enterobius vermicularis , Taenia spp., and Ascaris lumbricoides) with percentage (18.38%, 2.68%, 0.35%, 0.21%,0.14%, and 0.07%) respectively. The current study focused on determining the best way of staining to detect parasite in the stool. This study showed that safranin is the best stain ,then giemsa and iron haematoxylin. According to diagnosis by culture in modified Jones medium was the suitable medium with some modification with replacing horse serum with inactivated human serum, the parasite incubated aerobic at (37ºC). The results showed that the higher growth rate occurred after (24 hr) , the numbers of the parasite were ( 777.75 cell /ml), and ( 495.62 cell/ml ) after (48 hr) , the vacuolar form of the parasite was the main form founded in the culture. The present study included making HLA typing to (30) diagnosed Iraqi Arab Muslim patients with irritable bowel syndrome ,all of them infected with Blastocystis hominis, (24) of them were males , and (6) females ,with age ranged between (20 - 53 year) , control group consist of (30) healthy Iraqi Arab Muslims individuals, where (25) was males , and (5) females, with age ranged between (18 - 55 year), the results revealed that there was a genetic predisposition factor for the infection with Bastocystis hominis by acquiring the allele HLA - DR B1*03,and allele HLA - DRB1*14. The effectiveness of Saccharomyces boulardii yeast as vital probiotic on this parasite was studied in the laboratory animals (mice ) and compared with metronidazole which is used usually in the treatment of intestinal parasites including Blastocystis hominis . A gradually decreasing in the numbers of parasite in feces of mice was noticed since the first day of treatment parasite disappeared on the day (12th ) of treatment with Saccharomyces yeast, and disappeared on the day (13th ) of treatment with metronidazole.The efficacy of treatment was estimated for both of S. boulardii and metronidazole ,and the result proved that this yeast have a higher efficacy for treatment (87.45%) , compared with mitronidazole efficacy which was (81.36%). The microscopic examination to histological sections of the infected mice in cecum and colon regions showed the ability of the parasite to make histological changes included intense inflammatory - cell infiltration, and mucosal damage. The yeast of Saccharomyces boulardii showed higher ability in the healing and recover damaged tissues compared with metronidazole

التحري عن مقاومة المجموعة الامينوكلايكوسيدية المتواسطة بمثيلة 16S rRNA في بعض انواع البكتريا السالبة لكرام Detection of 16S rRNA Methylation Gene between Two Species of Gram Negative with High Level Resistance to Aminoglycosides

اسم المؤلف: اسراء محمد صفي عبد علي الكاظمي

اسم المشرف: سوسن ساجد محمد علي الجبوري

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2012

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - البكتريا

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: • جمعت 100 عزلة من البكتريا السالبة لصبغة كرام مشخصة مبدئيا بانها وEscherichia coli Pseudomonas aeruginosa من مرضى باصابات مختلفة في مستشفى الكندي التعليمي ومستشفى الكاظمية التعليمي ومستشفى ابن البلدي ومستشفى الامام علي خلال الفترة مابين تموز الى تشرين الثاني2011. تضمنت 68 عزلة من خمجات المجاري البولية و8 عزلات من عينات القشع و6 من خمجات الحروق و18 عزلة من اصابات تجرثم الدم. • شخصت العزلات مبدئيا بزراعتها على وسطي اكار الماكونكي واكار الدم. تبع ذلك اجراء عدد من الفحوص المورفولوجية والكيموحيوية ثم شخصت العزلات بشكل نهائي ودقيق باستخدام اشرطة api20E.تبعا لذلك توزعت العزلات المائة بواقع 58 عزلة تعود لبكتريا E. coli اما العزلات ال 42 الباقية فكانت لبكتريا P. aeruginosa.• اجري اختبار فحص الحساسية للمضادات الحيوية بطريقة انتشار الاقراص لـ 7 من مضادات المجموعة الامينوكلايكوسيدية . اوضحت النتائج وجود اختلافات واضحة في نمط المقاومة المظهري لهذه العزلات .فقد بلغت نسبة مقاومة بكتريا E. coli لمضاد الاميكاسين 34.4%)20\58)و53.4%(31\58)للنتلامايسين و67.2%(39\58) للتوبرامايسين و87.9% (51\58 ) لللسيسومايسين , و94.8%(55\58 ) لكلا من مضادي الكانامايسين والستربتومايسين واخيرا بلغت النسبة للجنتامايسين 98.2%(57\58) . كما هو الحال مع بكتريا E. coli , فقد ظهر ان افضل فاعلية ضد بكتريا P.aeruginosa كانت للاميكاسين حين بلغت نسبة المقاومة45.2%(20\42) تلا ذلك مضاد النتلامايسين52.3%(22\4222) وبلغت 57.1%(27\42) و59.5%(25\42) للسيسومايسين والتوبرامايسين على التوالي اما للكانامايسين فقد بلغت 90.4%(38\42) للستربتومايسين 92.8%(39\42) واعلى نسبة مقاومة كانت ضد مضاد الجنتامايسين حيث بلغت 95.2%(40\42). • استخدمت طريقة التراكيز المتضاعفة المتسلسلة لحساب التركيز المثبط الادنى لست من مضادات المجموعة الامينوكلايكوسيدية. بينت النتائج وجود اختلافات في قيم MIC المحسوبة لهذه النوعين من العزلات.فمن اصل (58) عزلة من بكتريا E.coli كانت منها 20 مقاومة للاميكاسين(%34.4 ( وبقيم MIC تراوحت ما بين(64 - 128 مايكروغرام\مل), 56 عزلة)87.5%(مقاومة للبارومايسين وبقيم MIC تراوحت ما بين)16 - 1024مايكروغرام\مل) , 57 عزلة) %98.2) مقاومة للستربتومايسين وبقيم MIC تراوحت ما بين(16 - 256مايكروغرام\مل), وكانت جميع العزلات (100%) مقاومة لكل من الجنتامايسين والنيومايسين والكانامايسين وبقيم MIC تراوحت ما بين)128 - 1024مايكروغرام\مل) للجنتامايسين والنيومايسين بينما تراوحت للكانامايسين ما بين(128 - 1024مايكروغرام\مل(. اما بالنسبة لبكتريا P.aeruginosa كانت20 (47.6%) عزلة مقاومة للاميكاسين وبقيم MIC تراوحت ما بين(16 - 1024مايكروغرام\مل) و39 عزلة (92.5%)عزلة مقاومة للكانامايسين والستربتومايسين وبقيم MIC تراوحت ما بين(64 - 1024مايكروغرام\مل)و)16 - 1024مايكروغرام\مل) على التوالي,جميع العزلات وبنسبة (100%) كانت مقاومة للجنتامايسين والنيومايسين وبقيم MIC تراوحت ما بين )16 - 1024مايكروغرام\مل), واخيرا جميع العزلات اظهرت مقاومة تامة للبارومايسين (100%) وبقيم MIC تراوحت ما بين)32 - 1024مايكروغرام\مل).• تم التحري عن انتاج انزيم البتالاكتاميز باستخدام اختبار الاشرطة السريع, وتضمن اربع اختبارات : اختبار المسح الاولي للبتالاكتاميز,اختبار انزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف ESβLs التاكيدي وMetallo - β - lactamase وانزيم AmpC. اظهرت النتائج انه 84 عزلة من مجموع 100 (84%) كانت موجبة للمسح الاولي للبيتالاكتميز توزعت مابين50 عزلة(86.2%) لبكتريا E.coli و34عزلة (80.9%) لبكتريا P.aeruginosa. اما بالنسبة للـ ESβLs فكانت نسبة العزلات المنتجة له هي 83% توزعت كالاتي 86.2%(50\58) لبكتريا E.coli و80.9%(34\42) تعود لبكتريا P.aeruginosa اما نتائج MβL فقد كانت اقل نسبيا لتصل الى 75% موزعة مابين %77.5)45\58) لبكتريا E.coli و71.4% (30\42) لبكتريا P.aeruginosa بينما 70% من العزلات كانت منتجة لانزيم AmpC توزعت مابين 56.8%(33\58) لبكتريا E.coli و88.9%(37\42) لبكتريا P.aeruginosa.• تم التحري عن المحتوى البلازميدي لعدد من العزلات المنتخبة والتي اظهرت مستوى مقاومة عالية وذلك باستخدام modified alkaline lysis method. اظهرت النتائج ان معظم العزلات كانت حاملة لاكثر من بلازميد باحجام مختلفة , وبعض منها ت احتوى على بلازميدات كبيرة.• اعتمدت طريقتان مختلفة لتحضير الدنا القالب لغرض استخدامها في التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا ( PCR) وهي : طريقة الغليان وطريقة استخلاص البلازميد. اظهرت النتيجة ان طريقة عزل البلازميد كانت ادق في اظهار النتائج بالمقارنة مع طريقة الغليان.مع ذلك فان الطريقة الاولى هي الاكثر شيوعا في العمل الروتيني .• اختيرت 20 عزلة من كل نوع لغرض الدراسة الجينية اعتمادا على مستوى المقاومة العالية الذي اظهرته هذه العزلات . استخدمت تقنية التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا (PCR) للتحري عن جين blaCTX - M المسؤول عن انتاج ESβLs فضلا عن التحري عن ستة من جينات مثيلة 16S rRNA ArmA )و RmtAو RmtBو RmtCو RmtD وNpmA ) .• بينت نتائج التحري عن جين blaCTX - M في E.coli ان جميع العزلات حاملة لهذا الجين (100%) لتقل النسبة الى 85% (17\20( لبكتريا P.aeruginosa بالاعتماد على وجود القطعة المكثرة بحجم 550 زوج قاعدي بالمقارنة مع دليل الدنا المستخدم بحجم 100 زوج قاعدي المرحل في 1%من هلام الاجاروز .• اوضحت نتائج التحري عن جينات مثيلة 16S rRNA بتقنية الـ (PCR) لعزلات E.coli ان16 عزلة من مجموع20 (80%) كانت حاملة لجين ArmA اعتمادا على وجود القطعة مكثرة بحجم 846 زوج قاعدي بالمقارنة مع دليل الدنا الحجمي (100 زوج قاعدي )بعد الترحيل في هلام الاجاروز 1% فيما اظهرت عزلة واحدة من مجموع20 (5%) امتلاكها لجين المثيلة RmtB بحجم قطعة مكثرة 584 زوج قاعدي , بينما كانت 3 عزلات من مجموع 20(15%)حاملة لجين RmtC بالاعتماد على وجود حزم بحجم 711 زوج قاعدي , وعزلة واحدة فقط (5%) حاملة لجين RmtD بوجود قطعة مكثرة بحجم 500 زوج قاعدي , واخيرا فان جين المثيلة السادس وهو npmA فقد حدد في عزلة واحدة (5%) من اصل 20 عزلة بالاعتماد على وجود حزمة بحجم 641 زوج قاعدي.• اظهرت نتائج التحري عن جينات مثيلة 16S rRNA في بكتريا P.aeruginosa وجود نوع واحد من هذه الجينات وهو ( RmtD) وقد حدد في 3 عزلات من اصل20 (15%)بالمقارنة مع دليل الدنا الحجمي 100 زوج قاعدي.• كلا نوعي البكتريا E.coli وP.aeruginosa لم يظهرا احتوائها على جين RmtA , بينما كان جين ArmA هو الجين السائد في بكتريا E.coli.• اظهرت النتائج ان عزلة واحدة من بكتريا E.coli رقم(37) حاملة لخمسة انواع من جينات مثيلة 16S rRNA فضلا عن جينblaCTX - M ,بينما كانت اربع عزلات من بكتريا E.coli ذات التسلسل(11 و32 و40و42) لاتحتوي على اي جين من جينات المثيلة ماعدا جينblaCTX - M .• اظهرت نتائج الدراسة الحالية ان هنالك ترابط بين التنميط المظهري لمقاومة المضادات مع التنميط الجيني , فقد لوحظ ان العزلات الحاملة لجين المثيلة 16S rRNA هي العزلات التي اظهرت مقاومة عالية لكل من المضادات الاميكاسين والجنتامايسين ولكل المجموعة الامينوكلايكوسيدية ماعدا الستربتومايسين لبكتريا E.coli وبكتريا P.aeruginosa فضلا عن مقاومتهما لبقية المضادات ,لكن بكتريا P.aeruginosa اظهرت احتوائها على نوع واحد من جينات المثيلة وهو (RmtD) وقد ظهرت في العزلات رقم (14و28و37) بالاضافة الى جين blaCTX - M بالرغم من مقاومتها العالية لمضادات مجموعة الامينوكلايكوسيدية, وهذا يعزى لاحتوائها على اليات مقاومة اخرى مثل مضخة الدفق وتحوير الانزيمات وتغيير حاجز النفاذية والاكثر شيوعا هو مضخة الدفق للمضاد. • بينت النتائج على الاقل وجود احدى جينات المثيلة مرافقة لجينات مقاومة اخرى مثل جين blaCTX - M المسؤول عن انتاج ESβLs سيما في بكتريا . E.coli | A total of (100) clinical isolates of gram negative bacteria primary identified as Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa were collected from Al - Kindey hospital, Al - Kadhymia teaching hospital, Ibn - Albalady hospital and Alemam - Ali hospital in Baghdad city , during the period between July 2011 to November 2011. They were obtained from mid stream urine from patients suffering from urinary tract infections (68 isolates), sputum samples from patients suffering from respiratory tract infection (8 isolates), wounds infections (6 isolates) and from bacteraemia (18 isolates).• The isolates were initially identified by culturing on MacConkey agar and blood agar then diagnosed by performing some morphological and biochemical tests. A confirmatory test as a final diagnoses was done using api20E system. According to this, the 100 isolates were distributed as 58 isolates of Escherichia coli while the remaining 42 isolates were Pseudomonas aeruginosa.• Antibiotic susceptibility test for 7 aminoglycoside antibiotic was performed using disc diffusion method. The results demonstrated a clear differences in the phenotypic resistance among the isolates. The percentage of highest resistance in E.coli isolates reached 98.2%(57\58) for gentamicin while lower reached 34.4% (20\58) for amikacin. As with E.coli the best activity against P.aeruginosa the highest resistance was against gentamicin when the percentage reached 95.2%, while the lower percentage aganist amikacin when the percentage of resistance was 47.6%(20\42). • Two fold serial dilution agar was used to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) using six aminoglycosides antibiotic. The results showed that there were differences in the MICs values among the two species. Out of (58) E.coli isolates, 20(34.4%) were resisted to amikacin (MIC ranged from 64–128 µg /ml) , and all isolates 58 (100%) were resisted to gentamicin, neomycin and kanamycin when the MICs ranged from (32–1024µg /ml) to gentamicin and neomycin while it was (128–1024 µg /ml) to kanamycin. In P.aeruginosa, 20(47.6%) isolates were resisted amikacin (MIC ranged from 64–128 µg /ml), all isolates(100%) were resistant to gentamicin and neomycin (MIC ranged from 16–1024 µg /ml) and finally all the isolates showed complete resistance towards Paromomycin (100%) with MIC ranged from (32–1024µg /ml).• The detection of β - lactamases production was performed using the easy rapid strip test including four tests : preliminary screening test for β - lactemase, Extended - Spectrum Beta - Lactamases (ESβLs) confirmation, Metallo β lactamases and AmpC enzymes. The results showed that 84 isolates out of 100 (84%) were positive in Preliminary screening of β - lactamases distributed between 58(86.2%) for E.coli and 42(80.9%) for P.aeruginosa . In ESβL, the rate of producer isolates were 83% distributed as (50/58)86.2% of E.coli isolates and (34/42)80.9% for P.aeruginosa. Results of MβL production revealed that the rate of producer isolates reduced to 75% distributed as (45/58)77.5% for E.coli and (30/42)71.4% for P.aeruginosa, while 70%of the isolates were AmpC producers distributed as (33/58)56.8% and (37/42)88.09% for E.coli and P.aeruginosa respectively.• The detection of plasmid content was done for selected isolates which showed very high level of resistance using modified alkaline lysis method. The results showed that most of the isolates were harboring more than one plasmids of different size, and some isolates appeared to have mega plasmid. • Template DNA used for polymerase chain reaction (PCR) reaction was prepared using two different methods : the boiling method and the plasmid DNA. The results revealed that the plasmid DNA was more specific in demonstrating the result as compared with the boiling method however, the first method is more common in routine work. • Twenty isolates from each species were selected according to their high - level resistance for the genotypic study. PCR technique was performed to detect blaCTX - M gene responsible for ESβLs production beside detecting six 16S rRNA methylation genes including (ArmA, RmtA, RmtB, RmtC, RmtD, and NpmA). • The results for detecting blaCTX - M gene in E.coli showed that all of the isolate (100%) were harboring this gene, while the rate decreased to 85%(17/20) for P.aeruginosa based on the presence of an amplified segment with 550bp (as compared with 100bp DNA ladder) in agarose gel (1%) .• The results of detection 16S rRNA methylation by PCR in E.coli isolate showed that 16 isolates out of 20 (80%) were harboring ArmA based on the presence of 846 bp bands (as compared with 100bp DNA ladder) after running in (1%) agarose gel. Only one isolates out of 20(5%) harbored RmtB methylation gene with amplified size 584bp, while 3 isolates out of 20(15%) contains RmtC gene based on the presence of 711bp bands , 1 isolates(5%) harbored RmtD gene and the size of the amplified segment was 500bp, and the final sixth methylation gene was npmA which was detected in only one isolate (5%) out of 20 based on the presence of 641bp bands. • The results of detection 16S rRNA methylation in P.aeruginosa showed that only one methylation gene( RmtD) was found in the isolates and it was detected in 3 isolates out of 20 (15%) as compared with DNA ladder 100bp.• Both of bacteria E.coli and P.aeruginosa didn’t show any positive results to RmtA gene, while ArmA gene was the most predominant in E.coli.• The results showed that there was only one E.coli isolate(no.37) harbored the five 16S rRNA methylation genes beside blaCTX - M gene, while four E.coli isolates (no. 11, 32, 40 and 44) devoid any one of them except blaCTX - M gene. • The results of the current study showed that there was a correlation between phenotypic and genotypic resistance pattern. The isolates harboring 16S rRNA methylation genes are considered to show high - level resistance to amikacin, gentamicin and even to all aminoglycosides except streptomycin, for E.coli and P.aeruginosa beside resistance to other antibiotic, but in P.aeruginosa only one methylase gene (RmtD) gene appeared in three isolates(no.14, 28,37) in addition to blaCTX - M gene despite the high level of resistance towards aminoglycoside group and this is due to contain other types of resistance such as efflux mechanisms, aminoglycoside modifying enzymes and impermeability of the cell wall may cause reduced susceptibility to aminoglycosides and the most prevalent was efflux mechanisms.• At least one Methylation resistance genes was coupled with other resistance gene such as blaCTX - M gene responsible for ESβLs production

التغيرات الدموية والكيميائية الحياتية في الفئران البيضاء المستحثة بواسطة المبيد الحشري Prothor (Imidacloprid) Hematological and Biochemical changes in the white mice induced by insecticide prothor (Imidacloprid)

اسم المؤلف: اسراء سليم عبد الزهرة الدباغ

اسم المشرف: ليلى جبار محمد البهادلي

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2015

الموضوع الدقيق: الحيوان

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: اجريت هذه الدراسة لتحديد تاثير تراكيز مختلفة للمبيد الحشريImidacloprid (IMD)على 204 ذكور الفئران السويسرية البيض ، تتراوح اعمارهم بين 8 - 12 اسابيع ومعدل اوزانها 20 - 25 غرام ، وتنقسم الى تجربتين رئيسيتين : - التجربة الاولى (التاثيرات شبه المزمنة) : اجريت هذه التجربة لتحديد تاثير التركيز الموصى به (ADI) Acceptable daily intake60.0 ملغم/كغم من وزن الجسم وتركيزين مختلفين ) 0.12،0.18 ملغم/كغم من وزن الجسم ( واظهرت التراكيز المختلفة تاثيرات مختلفة على الاوزان المختلفة للاعضاء مثل (الكبد ،الكلى والطحال) بالاضافة الى تغييرفي انزيمات الكبد، معايير وظائف الكلى ومعايير الدم للاعضاء سابقة الذكر. تم فحص التاثيرات بعد 14 و28 يوم من التجريع الفموي اليومي، اكدت النتائج وجود انخفاض (p ≤0.05) في اوزان الاعضاء الكبد، الكلى والطحال والتي سجلت اقل وزنا للكبد (0.720±0.04 ) ،الكلى(0.140±0.024) والطحال (0.040±0.005) بعد 14 يوم من التجريع الفموي اليومي بالمبيد (IMD) وبالتركيز 0.18 ملغم/كغم من وزن الجسم ؛ بينما اكدت النتائج التي اجريت بعد 28 يوم من التجريع الفموي على وجود انخفاض غير معنوي (p ≥0.05) في وزن الكبد، الكلى والطحال وللجرعات 0.06،0.12 و0.18 ملغم/ كغم من وزن الجسم. اظهرت النتائج بعد 14 يوم من التجريع الفموي زيادة معنوية(p ≤0.05) في مستويات انزيم Aspartate aminotransferase (AST) and alkaline phosphatase (ALP)عند الجرعتين 0.12 و0.18 ملغم/كغم من وزن الجسم AST (27.40±2.34 ؛ 31.10±0.65) وALP (82.84±7. ؛ 49.04±1.07) على التوالي، تمت مقارنة كل قياسات التجربة مع مجموعة السيطرة، في حين سجل مستوى alanine aminotransferase (ALT) انخفاض معنوي (p ≤0.05) عند جرعتي 0.06 و0.18 ملغم من وزن الجسم (13.80±0.45 و12.36±0.51) على التوالي. اظهرت النتائج وجود زيادة معنوية (p ≤0.05) في مستويات انزيمات AST (36.96±5.04)، (24.90±1.52) ALT وALP (62.52±8.10) بعد 28 يوم من التجريع الفموي عند الجرعة 0.18 ملغم من وزن الجسم بالمقارنة مع مجموعة السيطرة. كما وجدت زيادة معنوية (p ≤0.05) بمستويات معايير وظائف الكلى مصل الكرياتنيين (0.920±0.10) واليوريا (47.20±2.35) بعد 14 يوم من التجريع الفموي وبالجرعة 0.06 ملغم/كغم من وزن الجسم في حين كانت التاثيرات غير معنوية (p ≥0.05) بعد 28 يوم من التجريع الفموي في مصل الكرياتنين واليوريا عند جميع الجرع (0.06،0.12 و0.18 ملغم/كغم من وزن الجسم) بالمقارنة مع مجموعة السيطرة. اظهرت النتائج انخفاض معنوي (p ≤0.05) في مجموع خلايا الدم الحمراء Total red blood cells count (7.62±0.46) (RBCs)، محتوى الهيموغلوبين(11.62±0.53) Hemoglobin content (HB)، حجم رصيص الدم(PCV) Packed cell volume (29.02±1.45) ومستوى الصفيحات الدمويةPlatelets (341.80±67.57)(PLT)بعد 14 يوم من الجريع اليومي وبالجرعة 0.06 ملغم/كغم من وزن الجسم مقارنة مع مجموعة السيطرة. اكدت نتائج الدراسة حصول زيادة معنوية (p ≤0.05) بعد 28 يوم من التجريع الفموي في محتوى HB (26.18±3.48) , PCV (77.72±12.15)وباعدادRBCs (16.52±1.23) عند الجرعة 0.06 ملغم/كغم من وزن الجسم في حين بينت الدراسة ان الزيادة معنوية (p ≤0.05) باعدادPLT (1156.80±74.36) عند الجرعة 0.12 ملغم/كغم من وزن الجسم، كذلك اكدت نتائج الدراسة حصول انخفاض معنوي (p≤0.05) بالعدد الكلي لخلايا الدم البيضاءTotal white blood cells count (WBCs) بعد 14 يوم من التجريع الفموي اليومي ولجميع الجرع (0.06 ،0.12 و0.18 ملغم/كغم من وزن الجسم (3.83±1.01 و(6.74±1.46, 5.98±0.57 على التوالي. في حين اظهرت النتائج ل (WBCs) بعد 28 يوم من التجريع الفموي اليومي انخفاضا معنويا (p ≤0.05) عند الجرعتين 0.06 و0.18 ملغم/كغم من وزن الجسم 6.80±1.21) و(7.01±0.96 على التوالي بينما في الجرعة 0.12 ملغم/كغم من وزن الجسم اظهرت النتائج زيادة معنوية (p ≤0.05) (11.26±1.46) بالمقارنة مع مجموعة السيطرة. اظهر مستوى الخلايا اللمفاويةLymphocytes cells ( (LYM انخفاضا معنويا (p ≤0.05) في 14 يوم بعد التجريع الفموي ولجميع الجرع 0.06، 0.12 و0.18 ملغم/طغم من وزن الجسم (3.70 ± 0.22، 4.10 ± 0.91 و2.46 ± 0.52) على التوالي بالمقارنة مع مجموعة السيطرة؛ بينما بعد 28 يوم من التجريع الفموي كان التاثير غير معنوي( (p ≥0.05 للجرعتين 0.12 و0.18 ملغم/كغم من وزن الجسم (6.32 ± 0.64 و6.80 ± 1.21) على التوالي مقارنة مع مجموعة السيطرة ، النتائج اظهرت انخفاض غير معنوي ( (p ≥0.05 في جرعة 0.06 ملغم/كغم من وزن الجسم للفترتين 14 و28 يوم من التجريع الفموي. التجربة الثانية (التاثيرات المزمنة) : الهدف من الدراسة هو تحديد الاثار المترتبة على تركيز اقل من ADI هو 0.03 ملغم/كغم من وزن الجسم بعد تناوله عن طريق الفم وملاحظة التاثيرات المختلفة للتركيز المذكور على نفس المعايير السابقة التي درست في التجربة الاولى ، فحصت التاثيرات بعد 45، 60، و90 يوم من التجريع الفموي اليومي، اظهرت النتائج انخفاضا معنويا (p ≤0.05) في اوزن اعضاء الكبد، الكلى والطحال وسجلت اقل انخفاض بوزن الكبد (0.820±0.07) ووزن الكلى (0.160±0.02) بعد 60 يوما من التجريع الفموي بينما سجل الطحال سجل اقل انخفاض بعد 45 يوما (0.120±0.02). اظهرت النتائج زيادة معنوية (p ≤0.05) في مستويات انزيمات الكبد حيث سجلت اعلى ارتفاع بمستوي انزيم 31.60±0.62)AST) وانزيم ALT (23.54±4.69) بعد فترة 90 يوم من التجريع الفموي وللانزيم .64±8.81)ALP 75) بعد 45 يوم من التجريع الفموي ، كذلك حصول زيادة معنوية (p ≤0.05) بمستويات معايير وظائف الكلى مصل الكرياتنين (1.14±0.08) واليوريا (56.40±1.58) بعد 90 يوم من التجريع الفموي. اكدت نتائج الدراسة حصول انخفاض معنوي (p ≤0.05) باعداد كريات الدم الحمراء (RBCs)، محتوى الهيموغلوبين (HB)، حجم رصيص الدم (PCV)ومستوى الصفيحات الدموية (PLT) بنسب متفاوتة ولجميع الفترات الزمنية، كذلك حصول انخفاض معنوي (p ≤0.05) باعداد كريات الدم البيضاء (WBCs) (4.16±0.30) والخلايا اللمفاوية ( 2.50±1.69) (LYM) بعد 45 يوم من التجريع الفموي | This study conducted to determine the effect of different concentrations of the insecticide Imidacloprid (IMD) at 204 male Swiss mice aged 8 - 12 weeks with a body weight ranged between 20 - 25 g, and divided into two main experiments : The first experiment) Subchronic effects) : experiments conducted in order to determine the acceptable daily intake (ADI) 0.06 mg/kg from body weight, with different concentration (0.12, 0.18mg/kg.bw) and showed different effects of different concentration at weight of organs like (liver, kidney and spleen). The results demonstrated many changes in liver enzymes, kidney function parameters and hematological changes for the previous organs. The effects have been examined after 14, 28 fallowing daily oral administration, also results showed a significant decrease (p ≤0.05) in the weight of organs liver, kidney and spleen, which recorded less weight for liver (0.720±0.04), kidney (0.140±0.024) and spleen (0.40±0.005) after 14 days of oral administration with insecticide (IMD) at dose 0.18 mg/kg.bw; while experiment conducted at 28 days of oral administration non - significant (p ≥0.05) decrease in liver, kidney and spleen weight at all doses 0.06, 0.12 and 0.18mg/kg.bw. Results at 14 days fallowing daily oral administration illustrated a significant increase (p ≤0.05) in Aspartate aminotransferase (AST) and alkaline phosphatase (ALP) levels at dose 0.12 and 0.18mg/kg.bw, AST (27.40±2.34 ; 31.10±0.65) and ALP (82.84±7.20 ; 49.04±1.07) respectively, all measurement experiments were compared with control group, while alanine aminotransferase (ALT) level recorded a significant decrease (p ≤0.05) at dose 0.06 and 0.18mg/kg.bw (13.80±0.45 and 12.36±0.51) respectively. The results illustrated a significant increase (p ≤0.05) at level of enzymes AST (36.96±5.04), ALT level (24.90±1.52) and ALP (62.52±8.10) after 28 days of daily oral administration at dose 0.18 mg/kg.bw in comparison with control group. Also found a significant increase (p ≤0.05) at levels of kidney function parameters serum creatinine (0.920±0.10) and urea (47.20±2.35) after 14 days from oral daily administration at dose 0.06 mg/kg.bw; however at 28 days after administration there was non - significant effect (p ≥0.05) in creatinine and urea at all doses (0.06, 0.12 and 0.18 mg/kg.bw) in comparison with control group. The results showed a significant decrease (p ≤0.05) in total red blood cells count (RBCs) (7.62±0.46), Hemoglobin content (HB) (11.62±0.53), packed cell values (PCV) (29.02±1.45) and Platelets (PLT) (341.80±67.57) following 14 days from oral administration at dose 0.06 mg/kg.bw in comparison with control group. While the results of study demonstrate a significant increase (p ≤0.05) after 28 days from oral administration in HB (26.18±3.48), PCV (77.72±12.15) content and numbers of RBCs (16.52±1.23) at dose 0.06 mg/kg.bw however the study show a significant increase (p ≤0.05) in number of PLT(1156.80±74.36) at dose 0.12 mg/kg.bw , as well as the results of study confirmed a significant decrease (p ≤0.05) in number of total white blood cells count (WBCs) after 14 days following daily oral administration at all doses 0.06, 0.12and 0.18mg/kg.bw (6.74±1.46, 5.98±0.57 and 3.83±1.01) respectively; while the results of (WBCs) at 28 days after administration showed a significant decrease (p ≤0.05) at doses 0.06 and 0.18mg/kg.bw(7.01±0.96 and 6.80±1.21) respectively while at 0.12mg/kg.bw the results showed a significant increase (p ≤0.05) (11.26±1.46) in comparison with control group. The level of Lymphocytes cells (LYM) showed a significant decrease (p ≤0.05) at 14 days after administration at all doses 0.06, 0.12 and 0,18 mg/kg.bw(3.70±0.22, 4.10±0.91 and 2.46±0.52) respectively in comparison with control group ; while at 28 days after administration there was non - significant effect (p ≥0.05) at dose 0.12 and 0.18 mg/kg.bw (6.32±0.64 and 6.80±1.21) respectively in comparison with control group and the results showed a non - significant decrease (p ≥0.05) at dose 0.06mg/kg.bw for two periods 14 and 28 days after administration. The second experiment (Chronic effects ) : The aim of this study was to determine the effects of concentration less than ADI which 0.03 mg/kg.bw in oral administration and note the different effects of the obvious concentration at same parameters studying in first experiment , the effects have been examined after 45, 60 and 90 days after oral administration. The results demonstrated a significant decrease (p ≤0.05) in weight organs liver , kidney and spleen , results recorded less weight for liver (0.820±0.07) , kidney (0.160±0.020) after 60 days from oral administration either spleen weight recorded less decline in period 45 days (0.120±0.02), also results showed a significant increase (p ≤0.05) at levels of liver enzymes and recorded a highest increase for AST level (31.60±0.62), ALT level (23.54±4.69) after 90 days from administration , either enzymes ALP (75.64±8.81) after 45 days from administration , also happen a significant increase (p ≤0.05) at levels of kidney function parameters ,serum creatinine (1.14±0.08) and urea (56.40±1.58) after 90 days from administration. The results of study confirmed happen a significant decrease (p ≤0.05) in number of (RBCs), (HB), (PCV) and (PLT) in varying degrees and for all periods, also happen a significant decrease (p ≤0.05) in number of (WBCs) (4.16±0.30) and (LYM) (2.50±1.69) after 90 days from oral daily administration.

دراسة وراثية خلوية وجزيئية بين عينة من المرضى المصابين بالهوجكنزلمفوما Cytogenetic and molecular study among Hodgkin’s lymphoma patients

اسم المؤلف: اسراء حسين حمزة

اسم المشرف: عبد الامير ناصر الركابي عبد الحسين مويت الفيصل

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2015

الموضوع الدقيق: الحيوان

الدرجة: دكتوراه

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: صممت هذه الدراسة لفحص وتحديد نسبة انتشار التناقل الكروموسومي لكروموسومي (14و18) الذي يحدث بين جين bcl2و JH في بعض المرضى العراقين المصابين بسرطان الهوجكن لمفوما وايضا تم التحرى عن جين (BNRF1)الخاص بفايروس (EBV)كذلك تم التحرى عن التشوهات الكروموسومية بواسطة استخدام تقنية التهجين الموضعي . تضمنت الدراسة 75 عينة من المرضى المصابين (25 عينة من الدم و50 عين من الخزع النسيجية المحفوظة بالفورمالين والمطمورة بشمع البارافين) مع عشر عينات من الخزع النسيجية التابعة لمرضى الاورام الحميدة .تم جمع الدم من وحدة امراض الدم في مستشفى بغداد في مدينة الطب ببغداد. اما الخزع النسيجية فقد جمعت من مختبرات الامراض النسيجية في مختلف المستشفيات خلال الفترة من شهر ايلول لعام 2013 لغاية شهر اذار لعام 2014. ان تحديد وفحص التناقل الكرموسومي )14;18) تضمن المناطق المتغايرة بالجين الورمي bcl2 وهي منطقة الانكسار الرئيسية MBR التي تقع بالجزء الغير مشفر بالنهاية 3ʹومنطقة الانكسار الثانوية MCR ولتحديد علاقة هذه المناطق بالتناقل الكروموسومي فقد تم استخدام تسعة بوادى امامية من الجين الورمي bcl2 وبادئ واحد عكسي من جين JH بالاضافة الى السيطرة الموجبة لكل منطقة انكسار والذي تم تصنيعه في المختبر باستخدام تقنية الربط وبناء القطع والذي يعتبر اول دراسة في هذا المجال في العراق والشرق الاوسط. .تم تضخيم الحامض النووي دنا(DNA ) لكل عينات المرضى المصابة بسرطان الهوجكنز لمفوما وعينات المستخدمة للسيطرة بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل PCR والتتابع المباشر والتي تضمنت استخدام ثلاث مجاميع من البوادئ لتغطية المناطق الانكسار المراد فحصها على الجين الورميbcl2 على كروموسوم 18. وقد تم تصميم هذه البوادئ باستعمال برامج NCBI (Primer plus 3) حيث تم تصميم بوادئ امامية لكل من (MBR(MBR1,MBR2) و3MBR(3MBR1, 3MBR2, 3MBR3, 3MBR4) وMCR(MCR1,MCR2, 5MCR)) وتم تصميم بادئ عكسي من جينJH لكل هذه البوادئ الامامية وتم استخدامهم لكل العينات المراد فحصها للانتقال الكروموسومي (14و18) كل على انفراد وباستخدام سيطرة موجبة للفحص والذي تم تصنيعه بالمختبر باستخدام تقنية التضخيم المتداخل والتضخيم متعدد الارسال. وقد تم ضبط ظروف التضخيم وحسب البوادئ المستخدمة وفحص الناتج بواسطة الترحيل الكهربائي لتحديد العينات الموجبة للتناقل ثم تحديد موقع التناقل بواسطة طريقة التتابع المباشر ومقارنتها مع التتابع المباشر للسيطرة الموجبة. كما تم استخدام الدنا المستخلص سابقا لتحديد وجود جين BNRF1 الخاص بفايرس EBVبواسطة استخدام تقنية التضخيم العددي ((qRT - PCR واستخدام تتابع نيوكليوتيدي (بادئ) ومجس خاص . بالاضافة الى استخدام تقنية التهجين الموضعي لتحديد التشوهات الكرموسومية في بعض من عينات الخزع النسيجية المثبتة على سلايدات التهجين الخاصة بذلك .وقد اظهرت الدراسة النتائج التالية : هناك فروق معنوية عالية (p<0.01) بين العوامل المتغيرة في التجربة كما اوضحت النتائج ان نسبة انتشار المرض كان بالاعمار البالغين بين (60 - 70) سنة بنسبة (25.33%) وبالنسبة للجنس فقد حقق جنس الذكور نسبة حدوث اكثر من الاناث وبنسبة (58.67%) اما بالنسبة الى نوع المرض فقد سجل نوع Mixed cellularity اعلى نسبة حدوث بالنسبة للانواع الاخرى من المرض (53.33%)اما بالنسبة الى موقع العقد اللمفاوية المصابة بالورم فكانت اكثر الاماكن اصابة وحدوث الورم هي العقد اللمفاوية العنقية (53.33%) . واظهرت نتائج الدراسة ان نسبة انتشار الانحراف الكروموسومي للجين الورمي في المرضى المصابين بورم الهوجكن ظهر في 26(35%) عينة موجبة وكان 5(19.2%) منهم بمنطقة الانكسار MBR1 و4(15.38%)في منطقة الانكسار MBR2 و3(11.5%) في منطقة 3MBR1 و2(8%) في منطقة 3MBR2 و7(27%) في منطقة 3MBR4 ولم تظهر اي نتيجة موجبة في المنطقة 3MBR3 اما بالنسبة الى مناطق الانكسار الثانوية فقد سجلت 4(15.38) في منطقة الانكسارMCR1 و1(4%) في منطقة MCR2 و2(8%) في منطقة الانكسار 5MCR ولم تسجل اي نتيجة موجبة بالنسبة للعينات الاورام الحميدة المستخدمة للسيطرة . وبهذا فقد بينت النتائج ان نسبة انتشار الانحراف كانت في مناطق الانكسار الرئيسية اكثر من مناطق الانكسار الثانوية. وبالنسبة الى العمر فان نسبة الانتشار كانت باعمار البالغين والاكثر عند الذكور وبفروق معنوية عالية ايضا. بعد تحليل النتائج بواسطة طريقة التتابع المباشرة ومقارنتها بنتائج الموقع العالمي للمعلومات الجينية (NCBI) ومقارنتها كذلك مع تتابع السيطرة الموجبة . تم تقديم العينات ذات الحجم المساوي الى bp200 او اكثر الى بنك الجينات في المواقع العالمية لتسجيل التتابعات الجينية حيث تم تسجيلها في الموقع الامريكي ال(Gene Bank) وتم تسيجلها في الموقع الاوربي (EMBL) كذلك تم التمكن من تسجيلها في الموقع الياباني لبنك الجينات (DDBJ) وتم الموافقة ونشرت تحت عنوان : (Homo sapiens DNA, IGH/BCL2 transition region, isolate : hodgkins - bcl2 - t (14 - 18) mbr - p.)واعطيت ارقام تعليم خاصة بها في بنك الجينات تبدا من (LC041134 - LC041142) واعتبرت كمصدر عن معلومات العراقيين الجينية والتي تعتبر قليلة ضمن بنك الجينات العالمي. كما اظهرت النتائج وجود 40(53.33%) حالة موجبة وبفروق معنوية عالية لجين الابشتاين بار فايروس لمرضى الاورام اللمفية الهوجكن مقارنة بالاورام الحميدة التي لم تظهر اي نتيجة موجبة . اضافة الى ذلك اظهرت النتائج ان اكثر المرضى المصابين بالفايروس كانوا من جنس الذكور ومن نوع Mixed cellularity HL . في مايتعلق باختبار التهجين الموضعي فقد اظهرت النتائج وجود عينة واحدة موجبة للفحص من اصل 6 عينات. نستنتج من هذه الدراسة ان تحديد الانتقال الكروموسومي (14;18) في مرضى الاورام اللمفية الهوجكن يمكن تحديدها باستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل وباستخدام عدة بوادئ لكل مناطق الانكسار الرئيسية والثانوية .اضافة الى استنتاج دقة اختبار التضخيم الكمي في تقيم وتحديد الفايرس ومن الممكن اعتبارها كوسيلة لتشخيص الاورام اللمفية واي نوع من السرطان ذات العلاقة بالفايرس والذي يعتبر كمؤشر للورم.اما بالنسبة لتقنية التهجين الموضعي فقد تبين انها ادق من تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل وذلك بسبب كبر حجم المجس الضوئي المستخدم للفحص . | The study was design to investigate and to determine the frequency of chromosomal translocation involve the bcl2 and JH genes t (14, 18) (q32; q21) in some of Hodgkin’s lymphoma Iraqi patients. The study also aimed to detect the BNRF1 gene of EBV in patients and using FISH technique for other chromosomal aberrations in the same patients. The study include 75 Iraqi patients with Hodgkin’s lymphoma (25 samples as blood and 50 samples as formalin fixed paraffin embedded (FFPE) tissue blocks) and 10 samples as reactive hyperplasia blocks for control. The blood samples were collected from hematology unit in Baghdad hospital in medical city but paraffin blocks tissue were collected from histopathological laboratories in different hospitals during the period from September 2013 till March 2014. The detection of t (14; 18) translocation involved the hot spots regions of the bcl2 gene which included the major breakpoints region (MBR located in the 3ʹ untranslated region of bcl2 exon 3) and the minor cluster region (MCR located in the 3ʹ region of bcl2 exon 3). To detect the involvement of these regions in the t (14; 18), nine forward primers were used for bcl2 regions and one reverse primer for JH gene as well as to positive controls for each breakpoints which were prepared by synthesized artificial chromosomal translocation in laboratory by using splicing technique and construct fragments of genes and considered the first work in this field not just in Iraq or middle east but in all world. The DNA for all samples was submitted for PCR (Polymerase Chain Reaction) amplification which performed using three set of primers (multiple primers) defined multiplex PCR to detect MBR, 3ʹMBR and MCR regions on bcl2 gene on 18 chromosome, the three set primers which designed by using NCBI programs (Primer plus 3 program) as forward primer [forward MBR (MBR1,MBR2), 3MBR( 3MBR1, 3MBR2, 3MBR3, 3MBR4), MCR (MCR1, MCR2, 5MCR) and reverse primers (reverse JH used ) in which case each of primer sets forward were used to evaluate the transposition of t (14;18) separately for the same samples with positive control for each breakpoint that was synthesized in lab by nested and multiple primers defined multiplex PCR. The PCR conditions were optimized according to suitable sets of primers used for reproducing the replacement. By gel electrophoresis for the products to identify the fragments with juxtaposed bcl2 and IGH JH enhancer positive and subjected for genotype analysis [these artificial breakpoints (positive control) and each positive samples for t(14, 18) assay] by using Sanger method with Agencourt® CleanSEQ® dye - terminator Removal Kit for direct sequence analysis. The DNA which was extracted before was also used to detect the existence of BNRF1 gene specific for EBV loaded in patients samples by using real time quantitation PCR (qRT - PCR) with specific primer and probe. In addition to use FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) technique to detect abnormal chromosome in tissue samples with the PathVysion Kit applied on tissue section fixed on positive charge slides (thermo fisher scientific). The unstained 3 µm sections of six samples were tested for t (14; 18) using a dual color - dual fusion translocation probes set (Vysis LSI IgH/ BCL2; Abbott Molecular). A total of 200 interphase nuclei were enumerated and scored for the presence of two fusion signals per nuclei. The results in this study showed high significant (P<0.01) between parameters. The results reported that the age of HL patients in the current study ranged between 10 - 80 years and more incidences in old adult with the age range (60 - 70) years (25.33%). There were males predominance among HL patients 44(58.67%) than females 31(41.33%) with high significant (P<0.01). The highest subtype HL number was recorded in mixed cellularity (MC) (53.33%). The cervical lymph node was recorded the highest infected site and included tumor 53.33% than other sites of lymph node and according to stage of disease , most cases in the current study were stage II (72%). Regard to the t (14;18) chromosomal translocation the results noticed a total of 26(35%) positive cases showed IGH/BCL2 gene rearrangement with high significant compared with control. 5 (19.2%) for major breakpoint MBR1, 4(15.38%) for MBR2 and (3(11.5%);2(8%);7(27%)) for 3ʹMBR1, 3ʹMBR2 and 3ʹMBR4 respectively but no cases positive for 3ʹMBR3 while (MCR1, MCR2, 5ʹMCR) were recorded in (4(15.38%); 1(4%); 2(8%)) respectively. And (0%) in reactive hyperplasia for control. The results indicate higher frequency of breakpoints in the MBR regions than MCR cluster region, and the incidence of t (14; 18) translocation was increased in adult’s age depending on age while depending on gander the incidence among males was high. After the sequence analysis for all breakpoints sequence and compared with NCBI by (http : //blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) and compared with construct fragment sequence (positive control). The breakpoints sequence that its product size equal 200 bp or more that were submitted to the NCBI (National Center for Biotechnology Information) site for registration in the Gene Bank database, (DNA Data Bank of Japan) (DDBJ) and in the EMBL (European Molecular Biology Laboratory) and accepted in these three international sites for bioinformatics, thus published under title (Homo sapiens DNA, IGH/BCL2 transition region, isolate : hodgkins - bcl2 - t(14 - 18) mbr - p.) with special ID number (Accession number) specific for these breakpoints sequence which is begin from (LC041134 to LC041142) in gene bank database and considered as a document reference about Iraq people data which is little in gene bank database. The EBV DNA genome encoding the non - glycosylated membrane protein (BNRF1) was detected in 40(53.33%) positive cases of 75 Hodgkin’s lymphoma samples and no cases positive for EBV in reactive hyperplasia with high significant . The majority of positive patients were males 33(82.5%) than females. In addition to the EBV was more frequently detected in mixed cellularity subtype of HL 27(67.5%). According to the FISH assay, the results showed that just one sample from six was positive for t (14; 18) translocation and this case was recorded negative results in PCR assay. In conclusion, the detection of t (14; 18) in HL patients can be achieved by PCR technique by including multiple primers for all three breakpoint regions which are MBR, 3ʹMBR, MCR and performing multiplex amplification. And the positive fragments can also be used as an indicator of minimal residual disease following treatment. The qPCR assay allows precise quantification of EBV load and can be used as a tool for diagnosis and management of EBV related lymphoma patients and for any cancers that EBV DNA may be considered as tumor biomarker. The FISH technique considered more sensitive than PCR for detection t (14, 18) because of large size of FISH probes which used in technology, the IGH probe labeled in green is about 1.5 Mb and includes nearly the entire IgH locus and 300 kb beyond the 3ʹ end and the locus - specific bcl2 probe labeled in orange about 750 kb to include the entire bcl2 gene sequence and additional sequence extending about 250 kb distal and proximal to the ge

الجوانب المناعية والفسلجية خلال صيام رمضان IMMUNOLOGICAL and PHYSIOLOGICAL ASPECTS DURING RAMADAN FASTING

اسم المؤلف: احمد فرحان شلال

اسم المشرف: ماجد محمد محمود الجواري كاظم عبد الامير محسن

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2013

الموضوع الدقيق: الحيوان - المناعة

الدرجة: دكتوراه

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: تهدف الدراسة الحالية لتقييم تاثير صيام شهر رمضان على بعض المعاير المناعية والفسلجية,اذ شملت الفحوصات المناعية قياس مستوى الكلوبيولينات المناعية Immunoglobulin G , Immunoglobulin A Immunoglobulin M, (IgM,IgG,IgA) والحركيات الخلويةTumor Necrosis factor - alpha (TNF - α), Interferon - Gamma(IFN - γ) , Interleukin - 4(IL - 4), Interleukin - 17A (IL - 17A), Transforming growth factor - β (TGF - β) في مصل الدم. اما الفحوصات الفسلجية فقد شملت قياس مستوى بعض الهرمونات الجنسية Luteinizing hormone ,Follicle - stimulating hormone(FSH) (LH) , Testosteroneوانزيمات الكبد ,Aspartate Transaminase (AST) Alanine(ALT) ,Transaminase , Alkaline phosphatase (ALP) بالاضافة الى تاثير الصيام على ضغط الدم ووزن الجسم Body weight and Blood pressure.اجريت الاختبارات على اربعين شخصا حيث كان جميعهم ذكور, غيرمتزوجين,غير مدخنين,اصحاء ظاهريا واعمارهم مابين ((30 - 20 سنة.استخدم فحص Single Radial Immuno Diffusion (SRID)) ) لقياس مستويات الكلوبيولينات المناعية قبل الصيام كمجموعة ضابطة وبعد (14) و(28) يوم من الصيام . استخدمت تقنية (ELISA) لقياس مستوى الحركيات الخلوية قبل وخلال الصيام فيما تم قياس تراكيز الهرمونات باستخدام جهاز (TOSOH) بالاضافة الى قياس فعالية الانزيمات وضغط الدم ووزن الجسم . اظهرت نتائج الدراسة بان هناك انخفاضا معنويا في مستوى IgA)) عند مستوى احتمالية(P<0.05) حيث كان متوسط مستوياته قبل الصيام ( (189.693mg/dlوانخفض الى (107.260mg/dl) ثم الى (67.668mg/dl) خلال (14 ) و(28) يوم من الصيام على التوالي. لوحظ انخفاضا غير معنوي في تركيز (IgG). حيث كانت نتائج (14) و(28) يوما (1792. 15 mg/dl) ، (1501.08mg/dl) على التوالي مقارنة مع القيمة قبل الصيام (1878.63mg/dl). واظهرت الدراسة انه ليس للصيام تاثيرا على تركيز (IgM) حيث كانت قيمة متوسطة خلال (14) يوم 258.150mg/dl)) وفي (28) يوم من الصيام كانت (263.425mg/dl) بالمقارنة مع القيمة قبل الصيام (255.705mg/dl). بينت نتائج الدراسة بان الصيام يؤدي الى تغيير في المؤشرات الالتهابية(TNF - α, IFN - γ, IL - 4, IL - 17A, TGF - β) , ففي الوقت الذي كان متوسط تركيز (TNF - α) قبل الصيام (12.288pg/dl)انخفض معنويا(P<0.05) للفترة (14) و(28) يوم من الصيام الى (9.978pg/dl) ، (7.698pg/dl) على التوالي . بينت الدراسة كذلك حدوث انخفاضا معنويا(P<0.05) في تركيز (IFN - γ) بعد (14) يوم (38.880pg/dl) وبعد (28) يوم الى (28.668pg/dl) بعد ان كان قبل الصيام (48.223pg/dl). واوضحت الدراسة بان الصيام كان له تاثير في حصول زيادة معنوية(P<0.05) في تركيز (IL - 4) حيث كانت قيمة متوسطة الفترة (14) يوم من الصيام (18.808 pg/dl) اما بعد (28) فكانت ( 24.100 pg/dl) مقارنة بالقيمة قبل الصيام التي كانت (13.323 pg/dl) . ومن نتائج الدراسة ايضا العلاقة بين الصيام والانخفاض في تركيز ( IL - 17A ) ولكن هذا الانخفاض لم يكن معنويا حيث كانت متوسط تركيزة قبل الصيام (37.52 pg/dl) فيما كانت قيم متوسطات للفترة (14) و(28) يوم من الصيام (31.69 pg/dl ) ، (28.99 pg/dl ) على التوالي . فيما اظهرت النتائج حدوث زيادة معنوية(P<0.05) في تركيز (TGF - β ) حيث بلغت قيم المتوسطات للفترة (14) و(28) يوما من الصيام (pg/dl 54.70 ) ، (pg/dl 62.15) على التوالي مقارنة مع القيمة قبل الصيام حيث كانت (48.80 pg/dl). اما بشان الهرمونات الجنسية فقد بينت النتائج حدوث زيادة غير معنوية في تركيز (FSH) حيث كانت قبل الصيام (mIU/mL 9.810) وبعد (14) ، (28) يوما من الصيام (mIU/mL 10.715) ، (mIU/mL 12.028) على التوالي . فيما اظهرت انخفاضا في تركيز (LH) ولكن لم يكن معنويا, ففي الوقت الذي كان متوسط مستواه قبل الصيام (mIU/mL 6.628) انخفضت في الايام (14)، (28) الى (mIU/mL 5.988) ، (mIU/mL 5.393) على التوالي . كما اظهرت حدوث انخفاضا غير معنوي في تركيز(Testosterone) ، اذ كانت قيمته قبل الصيام (ng/dl 430.85)اما وخلال الايام (14) و(28)فكانت (398.59 ng/dl) ، (ng/dl 381.30) على التوالي . كان للصيام تاثيرا في مستويات انزيمات الكبد فبالنسبة للانزيم (AST) كانت قيمة قبل الصيام (U/L 11.545) مقارنة مع قيم المتوسطات في الفترة (14) ، (28) حيث كانت القيم (10.020 U/L ) ، (U/L 8.963) على التوالي ، وعند مقارنة قيم المتوسطات فكانت معنوية(P<0.05) ما بين فترة قبل الصيام وخلال الصيام. كما امتد تاثير الصيام على انزيم (ALT) فقد انخفضت مستوياته كذلك ولم يكن معنويا اذ بلغت قيم المتوسطات قبل وخلال (14) و(28) حيث كانت القيم (U/L 12.448) ، (U/L 11.353) ، (10.798 U/L) على التوالي . وكذلك لوحظ انخفاضا طفيفا غير معنوي في نشاط انزيم (ALP) فكانت على التوالي وللفترات قبل الصيام بعد 14،28 يوما هي(U/L 52.86) (U/L 50.72) ، (U/L 48.18). واظهرت نتائج الدراسة حدوث انخفاضا معنويا(P<0.05) في ضغط الدم الشرياني الانقباضي والانبساطي Systolic and Diastolic pressure اذ كانت قيمة متوسط ضغط الدم الانقباضي خلال (14) و(28) (mmHg 11.550) ، (mmHg 10.800) على التوالي بعد ان كان قبل الصيام (mmHg 12.375). اما بالنسبة للضغط الانبساطي Diastolic Pressure كانت النتيجة حدوث انخفاضا معنويا (P<0.05)حيث كانت قيم المتوسطات للفترة قبل الصيام و(14) و(28) (8.150 mmHg) ، (mmHg 7.375) ،( mmHg 7.075) على التوالي. اظهرت الدراسة كذلك حصول انخفاضا غير معنويا في وزن الجسم حيث كانت قيم المتوسطات (S.E Kg± M 67.575) ، (Kg S.E ±65.808 M ) ، (64.300 M ±S.E Kg) للفترات (قبل الصيام وبعد 14 و28 يوما ) على التوالي. | The objective of the present study is to assess the effect of Ramadan fasting on some immunological and physiological parameters. Immunological studies included measurement of immunoglobulins (Igs) : Immunoglobulin A , Immunoglobulin G and Immunoglobulin M (IgA,IgG,IgM),cytokines : Tumor Necrosis factor - alpha , Interferon - gamma , Interleukin - 4 , Interleukin - 17A and Transforming growth factor - beta (TNF - α, IFN - γ, IL - 4, IL - 17A, TGF - β). Physiological studies involved serum levels of some sex hormones : Follicle - stimulating hormone, Luteinizing hormone and Testosterone (FSH, LH), Liver enzymes : Aspartate Transaminase, Alanine Transaminase and Alkaline phosphatase (AST, ALT, ALP) in addition to the body weight and arterial Blood pressure. These tests were done on sample of forty apparently healthy males who were single; non - smoker and their age range were 20 - 30 years. Single Radial Immuno Diffusion (SRID) was used to measure immunoglobulin levels before fasting (as a control group) and after (14, 28) days of fasting. Enzyme - linked Immune Sorbent Assay (ELISA) technique was used to measure cytokines levels before and during fasting while concentration of hormones were measured by using (TOSOH) system, in addition to measuring activity of enzymes, body weight and arterial blood pressure. The results showed that, there was a significant decrease (P<0.05) in the serum IgA level. The mean value of pre - fasting was 189.693 mg/dl and decreased to 107.2 mg/dl, and then to 67.6 mg/dl during 14, 28 days of fasting respectively. In addition a decrease in IgG level during fasting but statistically was not significant. The results for 14 and 28 days were 1792.1 mg/dl, 1501.0 mg/dl respectively in comparison to its value at the pre - fasting days of Ramadan which was 1878.6 mg/dl. The study showed that, IgM level was not affected by fasting. The mean value during the 14th day of fasting was 258.1 mg/dl and in the 28th day was 263.4 mg/dl in comparison to its value at the pre - fasting 255.7 mg/dl.The study demonstrated that fasting lead to change in inflammatory markers(TNF - α, IFN - γ, IL - 4, IL - 17A, TGF - β). Mean concentration of TNF - α for pre - fasting days was 12.288 pg/dl and decrease statistically (P<0.05) during period of the 14th and 28th days of fasting to 9.978 pg/dl, 7.698 pg/dl respectively. The study proved as well a significant decrease (P<0.05) in concentration of IFN - γ after 14 days of fasting to 38.880 pg/dl and after 28 days to 28.668 pg/dl after it was at the pre - fasting 48.223pg/dl. The study showed that fasting causes a significantly an increase (P<0.05) in concentration of IL - 4. The mean value of the 14th day was 18.808 pg/dl and after 28 days it was 24.100 pg/dl in comparison to its value at the pre - fasting days which was 13.323 pg/dl. From the results of this study also, the fasting caused decrease in concentration of IL - 17A, but the decreasing was not significant. The mean concentration of IL - 17A for pre - fasting days was 37.52 pg/dl and mean values of the 14 and 28 days of fasting were 31.69 pg/dl, 28.99 pg/dl, respectively. The results showed that fasting caused a significant increase (P<0.05) in concentration of TGF - β. The means values for 14 and 28 days of fasting were 54.70 pg/dl and 62.15 pg/dl respectively in comparison to its value at the pre - fasting days of Ramadan which was 48.80 g/dl. A non - significant increase in the serum level of FSH also recorded. The mean value of pre - fasting was 9.810 mIU/mL, and after 14, 28 days of fasting were 10.715 mIU/mL and 12.028 mIU/mL respectively. The study showed a decrease in LH concentration but it does not reach to be significant. Mean level of pre - fasting days was 6.628 mIU/mL and decreased in 14 and 28 days of fasting to 5.988mIU/mL and 5.393mIU/mL respectively. The study showed as well a decrease in concentration of Testosterone even it was not significant. Its value of pre - fasting day was 430.85 ng/dl and during the 14th and 28th days were 398.59ng/dl and 381.30ng/dl respectively. Fasting also affects the levels of liver enzymes. The mean value of AST for pre - fasting days was 11.545U/L compared with the means values after 14 and 28 days of fasting which were 10.020 U/L and 8.963U/L, respectively. These values were significantly (P<0.05) differ between pre - fasting and the two fasting periods. ALT enzyme also underwent some changes under the effect of fasting. ALT decreased in its levels but not significantly.The means values of pre - fasting, (14), (28) days of fasting were 12.448U/L, 11.353U/L and 10.798 U/L, respectively. Also a slight decreasing in enzyme activity of (ALP) had been noticed. The mean values of (ALP) for the pre - fasting, 14th, 28th days of fasting were 52.86U/L, 50.72U/L and 48.18 U/L, respectively. The study showed a significant decrease (P<0.05) in systolic and diastolic pressure. The means value of systolic pressure after 14 and 28 days of fasting were 11.550 mmHg and 10.800 mmHg respectively after it was at the pre - fasting 12.375 mmHg. The means values of diastolic blood pressure for the pre - fasting, 14 and 28 days of fasting were 8.150 mmHg, 7.375mmHg and 7.075 mmHg respectively. The study showed as well a decrease in body weight but non - significant. The means values of body weights were 67.575 M ±S.E /Kg, 65.808 M ±S.E /Kg and 64.300M ±S.E /Kg for periods (pre - fasting, 14 and 28 days), respectively

دراسة بكتريولوجية وجزيئية للجين norA في بكتريا Staphylococcus species المقاومة للمثيسيلين Bacteriological and molecular study of norA gene in Methicillin Resistant Staphylococcus species bacteria

اسم المؤلف: احلام خليفة عبد الله التميمي

اسم المشرف: محمد فرج شذر المرجاني

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2014

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - البكتريا

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: One hundred clinical isolates of methecillin resistant Staphylococcus spp. were collected from different sources including : (80,10,5,3,2) isolates from wounds, blood, urine, pus, otitis media respectively from different hospitals in Baghdad during the period from 1/9/2013to 1/1/2014. All isolates were identified through morphological, cultural and some biochemical testes. Coagulase test was performed done by using both tube and slide method The results showed that 75% of isolated were positive for this test which refer to Staphylococcus aureus, and 25% were Coagulase negative Staphylococci (CoNS) .The antibiotic susceptibility test against 10 antimicrobials were determined by the agar diffusion method ; Results showed that all isolates were resistant to ceftriaxone, cloxacillin and aztreonam. The most effective antibiotic aganist isolates were ciprofloxacin and norfloxacin. The Minimum inhibitory concentrations (MICs) for ciprofloxacin and norfloxacin were determined by agar dilution method .The MIC isolates ranged from 4 to 1024 μg/ml for both antibiotics. On the other hand the minimum inhibitory concentrations (MICs) were determined for quartenary ammonium compounds and chloroxylenole . Results revealed that MIC for chloroxylenole were 50 - 500μg/ml and 500μg/ml for quartenary ammonium compounds.Thirty Four of methicillin resistant isolates were choosen for detect efflux pumps by using Ethidium Bromide - Agar Cartweel Methode (EtBrCW), which include ethidium bromide dye as marker to detect efflux pumps, the result showed that 18 isolates(52.9%) give positive result, 3 isolates (8.82%) were intermediate, wherase remaining isolates 13 isolates(38.29%) were give negative result.Polymerase Chain Reaction (PCR) technique was performed done using specific primer targeting the specific sequences of the norA gene, The results showed that norA found in 16 isolates (47%). Nucleotide sequence for norA gene in 9 isolates were determined ,results revealed consistency reaching up to 90 % as compared nitrogen bases sequence of the norA gene present in the Staphylococcus aureus strain in NCBI Detection of gene expression was performed done by using q RT - PCR technique after RNA extraction and cDNA syenthesis , the result showed that gene expression were various among isolates , and the gene expression increase with increasing MIC of ciprofloxacin and norfloxacin.The effect of biosurfactant as efflux inhibitors was tested by detection of MIC for ciprofloxacin alone and mixed with biosurfactant , the result showed ability of biosurfactant in decreasing the MIC to two or four - fold in the presence of inhibitor this refer to biosurfactant effective material against NorA efflux pump.

تثبيـط نمو وتكوين الغشاء الحيوي لبكتريا Pseudomonas aeruginosa بالبروتينات المنتجة من خـمـيرة cerevisiae Saccharomyces Inhibition of Pseudomonas aeruginosa Biofilm formation and Growth by inhibitory Proteins Produced by Saccharomyces cerevisiae

اسم المؤلف: احسان علي رحيم السوداني

اسم المشرف: نبراس نزار محمود

الموضوع العام: علوم الحياة

السنة: 2014

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - البكتريا

الدرجة: ماجستير

الجامعة: الجامعة المستنصرية - كلية العلوم

اللغة: الانكليزية

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

المستخلص: جمعت 207عينة سريرية من بعض مستشفيات بغداد ولفئات عمرية مختلفة ولكلا الجنسين للفترة من 15/10/2013 - 15/1/2014 وعزلتﹸ وشخصتﹸ 68 عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa ومن مصادر مختلفة شملت (28) عينة من الحروق و(21) من اخماج الجروح و(6) اخماج المسالك البولية و(6) من اخماج الاذن الوسطى و(4) من التهاب البلعوم و(3) من القشع. شخصتﹸ العزلات البكتيرية اعتمادا على صفات المستعمرات المظهرية والمجهرية عند تنميتها في الاوساط الزرعية التفريقية والاختيارية فضلا عن الفحوصات الكيموحيوية ولتاكيد نتائج الفحوصات الكيموحيوية استعمل نظام Vitek2 compact كخطوة تكميلية . استعملت في هذه الدراسة طريقتين للتحري عن تكوين الغشاء الحيوي وهي طريقة Congo Red Agar Method(CRA) وطريقة اطباق المعايرة الدقيقة Microtitration plates method (MTP).اظهرت النتائج ان طريقة (MTP) كانت الاكثر دقة في التحري عن تكوين الغشاء الحيوي , اذ لوحظ ان (28)عزلة من اصل (68) عزلة كانت مكونة للغشاء الحيوي , في حين كانت (40) عزلة غير مكونة للغشاء الحيوي قياسا بطريقة (CRA) التي كانت عدد العزلات المكونة للغشاء الحيوي فيها (16) عزلة و(52 ) عزلة غير مكونة للغشاء الحيوي .اخضعت العزلات المكونة للغشاء الحيوي لفحص الحساسية تجاه (17) مضادا حيويا بطريقة الاقراص , وقد تبين ان عزلات الدراسة تحمل صفة المقاومة المتعددة للمضادات (Multi drug resistance) اذ اظهرت جميع العزلات السريرية لبكتريا P.aeruginosa مقاومة بنسبة 100% للمضادات Piperacillin , Amoxicillin/Clavulanic acid , Ticarcillin/Clavulanic acid, Ceftazidime, Ceftriaxone , Aztreonam, Cefoxitin , Çefodizime, Trimethoprim/Sulphamethoxazole , Nalidixic Acid , Rifampicin , ثـم تـدرجت مــقاومة البكــتريا لـبقية المــضادات ,فــي حيـــن كانـــت حساسة لمضاد Imipenem بنسبة 100%. قدر التركيز المثبط الادنى (MIC) لعزلات بكتريا P. aeruginosa باستعمال نظام compact Vitek2 وحددت النتائج بوصف البكتريا مقاومة R او حساسة S.استعملت خمائر الخبز الجافة المستوردة من مناشئ مختلفة والمتوفرة في الاسواق المحلية من اجل الحصول على عزلات لخميرة Saccharomyces cerevisiae التي شملت كل من العزلة AY من خميرة Angel الصينية المنشا والعزلة MY من خميرة Magestic الصينية المنشا والعزلة PY من خميرة Packmaya التركية المنشا والعزلة LY من خميرة Altunsa التركية المنشا، وتم التاكد من جنس الخميرة ونوعها باعتماد المفاتيح التشخيصية التي تشمل كل من الصفات المظهرية والزرعية والفحوصات الكيموحيوية.اجريت غربلة لرواشح عزلات الخميرة من اجل انتخاب العزلة الاكفا في انتاج المواد البروتينية المثبطة باستعمال طريقة الانتشار في الحـفر لمعــرفة تاثير هــذه المواد تجاه بكتريا P. aeruginosa المنتــجة للــغشاء الحــيوي قيد الدراسة , لم تظهر الرواشح الخام (غير المركزة) لعزلات خميرة S. cerevisiae اي تاثير تثبيطي ضد العزلات البكتيرية , في حين ادى تركيز راشح خميرة AY S. cerevisiae لمرة واحدة ولمرتين الى اظهار فعاليتها التثبيطية تجاه عزلات بكتريا P. aeruginosa المنــتــجة للغشاء الحيوي وبمعدل اقطار تثبيط بلغ (15.5, 20.4) ملم عـلـى الـتـوالـي . فـي حـين بــلــغ مــعــدل اقـــطارمــنطـــقــة الــتثــبيط لراشح خميرة PY S. cerevisiaeالمركز لمرة واحدة ولمرتين (13.8, 18.2) ملم على التوالي.اظهرالراشح المركز لعزلة AY S.cerevisiae المنماة في وسط Yeast Extract Glucose Peptone Broth (YEGPB) تاثيرا تثبيطيا واضحا تجاه العزلات قياسا براشح العزلة المنماة في وسط (PDB) Potato dextrose broth . عـدت مدة الحضن (24) ساعة افضل مدة زمنية تحتاجها الخميرة لتحفيز انتاج المواد المثبطة.شـملت خــطوة تنــقية البروتينات المثبطة استعمال كبريتات الامونيوم بنسبة اشباع تراوحـت بــين 30 الــى 70% لتــرســيب الــبروتينات الــموجــودة فـــي وسط النمو للعزلة AY S. cerevisiae , وكان للبروتين المثبط المنقى جزئيا فعلا مضادا لنمو البكتريا . اذ بلغ التركيز المثبط الادنى للبروتين المثبط المنقى جزئيا (64) ملغرام/ملليلتر, ما عدا عزلة واحدة بلغت قيمة (MIC) لها (32) ملغرام/ملليلتر. وتباينت فعالية البروتين المثبط والمنقى جزئيا المضادة لتكوين الغشاء الحيوي على عزلات بكتريا P. aeruginosa , كانت العزلة الاكثر تحسسا للبروتين المنقى جزئيا العزلة Ps33 والاقل تحسسا لها Ps68.