دراسة وراثية لبكتريا Pseudomonas aeruginosa المسببة لاخماج الحروق والجروح في محافظة بابل
Author name:
انوار كاظم حسين الصفار
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Genetics
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3206 - p.pdf
Abstract:
تم عزل وتشخيص 20 عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa من اصل 87 مسحة من المرضى الراقدين في مستشفى الحلة التعليمي نتيجة لاصابتهم باخماج الحروق والجـروح حيث كانت نسبة عزل هذه البكتريا مـن الحروق %45.5وهي اعلـى مـن الـجروح والبالغة % 9.25 . تم التاكد من التشخيص باستخدام نظامAPI - 20E فضلا عن اجراء الاختبارات الزرعية والمجهرية والكيموحياتية.درست بعض عوامل الضراوة التي تمتلكها هذه البكتريا فقد اظهرت النتائج ان جميع العزلات البكترية حاوية على المحفظة (Capsule) واظهرت مستعمرات العزلتين61 و62 عند تنميتها على وسط Tryptic soy agar اللزوجة العالية بسبب الانتاج المفرط لمادة الالجنيت المكونة للمحفظة.اظهرت بعض العزلات قابلية في انتاج السايدروفور(Siderophore) والبعض الاخر انتاج الهيمولايسين, في حين كانت العزلات كافة منتجة لانزيمات البروتيز مما يشير الى ان عزلات البكتريا تمتلك احد الانظمة لتزويدها بالحديد اما السايدروفور او انتاجها للهيمولايسين.درس تاثير بعض المضادات الحيوية اذ اظهرت نتائج الدراسة ان جميع العزلات كانت مقاومة لكل من الامبيكلوكس والسيفوتاكسيم والكاربنسلين والاموكسسلين والكولستين والتتراسايكلين والسيفالكسين والجنتامايسين والامبسلين والكلورمفنيكول والترايمثبريم بنسبة % 100 والستربتومايسين بنسبة % 85 والاميكاسين % 70والسبروفلوكساسين % 65, في حين كانت جميع العزلات حساسة لكل من الامبينيم والريفامبسين بنسبة % 100 .اظهرت عزلات بكتريا P.aeruginosa المعزولة من اخماج الحروق والجروح اربعة انماط للنسق البلازميدي وبعضها كان خالي مــن البلازميدات اذ اظهـرت العزلتين 22 و24 احتوائها على بلازميد كبير مفرد فضلا عن وجود ثلاث حزم بلازميدية صغيرة, اما النمط الثاني فقد اشتركت العزلتين61 و62 باحتوائها على بلازميد كبير مفرد وحزمتين بلازميديتين صغيرتين, والنمط الثالث اظهرت العزلة 25 احتوائها على حزمة بلازميدية كبيرة, اما النمط الرابع فقد اشتركت العزلات27 و32و34و87و93 باحتوائها على حزمتين بلازميديتين صغيرتين في حين كانت العزلات 48و49و71و78 خالية من البلازميدات على الرغم من مقاومتها المتعددة للمضادات الحيوية ويعتقد بان الجينات المشفرة لصفة المقاومة للمضادات الحيوية قد تكون كروموسومية.اجريت عملية الاقتران البكتري للعزلات 24و25و62 كعزلات واهبة مع السلالة المستلمة E.coli MM294 واظهرت النتائج انتقال البلازميدات ونقل صفة المقاومة لعدد من المضادات الحيوية وهي الامبسلين والتتراسايكلين والستربتومايسين والكلورمفينكول اضافة الى نقل صفة اللزوجة. كما بينت نتائج عملية التحول الوراثي للعزلات 22و24و25و61و 62انتقال البلازميدات الى جميع العزلات المتحولة واكتسبت الخلايا المتحولة المقاومة للمضادات الحيوية, واوضحت نتائج هذه الدراسة اشتراك هذه العزلات في بعض البلازميدات المتحولة اذ انها تشابهت في انتقال صفة المقاومة للمضادات الحيوية فيما بينها, كما في حالة تشابه المجموعة 22 - A مع 62 - B في اكتساب صفة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والتتراسايكلين والامبسلين والترايمثبريم والكلورمفينكول, والمجموعة 22 - B مع 61 - A في صفـة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والامبسلين والسيفاتكسيم والترايمثبريم والكلورمفينكول,وتشابهت المجموعة 24 - B مع 61 - E في اكتساب صفة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والامبسلين والترايمثبريم, اما مجموعة 24 - A فقد تشابهت مع المجموعة 25 في نقل صفة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والامبسلين والترايمثبريم والكلورمفينكول, وتشابهت المجموعـة 61 - C مع المجموعة 62 - A في نقل صفة المقاومة لمضادات الاموكسسلين والتتراسايكلين والامبسلين والسيفاتكسيم والترايمثبريم والكلورمفينكول, اضافة الى اكتساب الخلايا المتحولة في العزلتين 61و 62الصفة المخاطية. | Twenty strains of P.aeruginosa were isolated from 87 swab samples of patients suffering from burn and wound infections in Al - Hilla Teaching Hospital of Babil Governorate. The results appeared that the isolation of P.aeruginosa from the burn was more (45.5%) than from wound (9.25%). All bacterial isolates were identified by the biochemical, cultural and microbial characteristics and confirmed by api - 20 E system. Some of the bacterial virulence factors, were studied. The results showed that all bacterial isolates were capsulated and the colonies of P.aeruginosa no. 61 & 62 showed mucoid phenotype on tryptic soy agar plates due to overproduction of alginate of the capsule. Some of the isolates showed the ability to produce siderophore, while others (50,53,61,62,65,71,87 and 93) produce haemolysin indicating that these isolates had one Iron providing system either siderophore or haemolysin production; All the isolates produced protease. Also, all isolated showed multiple resistance to antibiotics, they were resistant (100%) to Cefotaxime, Carbencillin, Amoxycillin, Colistin, Tetracyclen, Cephalexin, Gentamicin, Ampcillin, Chloramphenicol and Trimethoprim. The others showed variable resistance to Streptomycin (85%), Amikacin (70%), Ciprofloxacin (65%). All of the isolates were sensitive (100%) to Impenium and Rifampicin. The DNA content of these isolates revealed the presence of four types of plasmid profiles and some of them are plasmidless (48,49,71 and 78) on agarose gel electrophoresis. The DNA content of the isolates No. 22& 24 showed single large plasmid band and three small plasmid bands.The second type 61 and 62 showed the presence of single large plasmid and two small plasmid band, third type isolate no.25 showed a large plasmid band only. The fourth type (the isolates 27, 32,34, 87 and 93) revealed the presence of two small plasmid bands on gel electrophoresis. The plasmids, of the isolates 24, 25 and 62 was transferred by conjugation into the recipient plasmidless cells of E.coli MM294, the results showed that these plasmids encoded for Ampcillin, Tetracyclin, Streptomycin and Chloramphenicol resistance and mucoid phenotype. The plasmids of the isolates 22, 24, 25, 61 and 62 were transformed into the plasmidless competent cells of E.coli MM294. The results showed that all transformed plasmids encodes antibiotic resistance and the plasmids of the isolates 61 & 62 encoded mucoid phenotype in transformant colonies in addition to antibiotic resistance. The results also pointed to the plasmids of the group 22 - A was similar to the plasmid of group 62 - B in acquiring the resistance to antibiotics (Amoxcillin, Tetracyclin, Ampcillin, Trimethoprim and Chloramphenicol ).The plasmid of group 22 - B was similar to the plasmid of group 61 - A in acquining the resistance to antibiotics (Amoxcillin, Ampcillin, Cefotaxime, Chloramphenicol and Trimethoprim). The plasmid of group 24 - B was similar to group 61 - E in acquiring the resistance to antibiotics ( Amoxcillin, Ampcillin, Trimethoprim), group 24 - A was similar to group 25 in acquiring the resistance to antibiotic (Amoxcillin, Ampcillin, Trimethoprim and Chloramphenicol) and group 61 - C was similar to group 62 - A in acquiring the resistance to antibiotics (Amoxcillin, Tetracyclin, Ampcillin, Cefotaxime, Trimethoprim and Chloramphenicol) and mucoid phenotype .
