تثبيـط نمو وتكوين الغشاء الحيوي لبكتريا Pseudomonas aeruginosa بالبروتينات المنتجة من خـمـيرة cerevisiae Saccharomyces == Inhibition of Pseudomonas aeruginosa Biofilm formation and Growth by inhibitory Proteins Produced by Saccharomyces cerevisiae
Author name:
احسان علي رحيم السوداني
Supervisor name:
نبراس نزار محمود
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Bacteria
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3179 - p.pdf
Abstract:
جمعت 207عينة سريرية من بعض مستشفيات بغداد ولفئات عمرية مختلفة ولكلا الجنسين للفترة من 15/10/2013 - 15/1/2014 وعزلتﹸ وشخصتﹸ 68 عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa ومن مصادر مختلفة شملت (28) عينة من الحروق و(21) من اخماج الجروح و(6) اخماج المسالك البولية و(6) من اخماج الاذن الوسطى و(4) من التهاب البلعوم و(3) من القشع. شخصتﹸ العزلات البكتيرية اعتمادا على صفات المستعمرات المظهرية والمجهرية عند تنميتها في الاوساط الزرعية التفريقية والاختيارية فضلا عن الفحوصات الكيموحيوية ولتاكيد نتائج الفحوصات الكيموحيوية استعمل نظام Vitek2 compact كخطوة تكميلية . استعملت في هذه الدراسة طريقتين للتحري عن تكوين الغشاء الحيوي وهي طريقة Congo Red Agar Method(CRA) وطريقة اطباق المعايرة الدقيقة Microtitration plates method (MTP).اظهرت النتائج ان طريقة (MTP) كانت الاكثر دقة في التحري عن تكوين الغشاء الحيوي , اذ لوحظ ان (28)عزلة من اصل (68) عزلة كانت مكونة للغشاء الحيوي , في حين كانت (40) عزلة غير مكونة للغشاء الحيوي قياسا بطريقة (CRA) التي كانت عدد العزلات المكونة للغشاء الحيوي فيها (16) عزلة و(52 ) عزلة غير مكونة للغشاء الحيوي .اخضعت العزلات المكونة للغشاء الحيوي لفحص الحساسية تجاه (17) مضادا حيويا بطريقة الاقراص , وقد تبين ان عزلات الدراسة تحمل صفة المقاومة المتعددة للمضادات (Multi drug resistance) اذ اظهرت جميع العزلات السريرية لبكتريا P.aeruginosa مقاومة بنسبة 100% للمضادات Piperacillin , Amoxicillin/Clavulanic acid , Ticarcillin/Clavulanic acid, Ceftazidime, Ceftriaxone , Aztreonam, Cefoxitin , Çefodizime, Trimethoprim/Sulphamethoxazole , Nalidixic Acid , Rifampicin , ثـم تـدرجت مــقاومة البكــتريا لـبقية المــضادات ,فــي حيـــن كانـــت حساسة لمضاد Imipenem بنسبة 100%. قدر التركيز المثبط الادنى (MIC) لعزلات بكتريا P. aeruginosa باستعمال نظام compact Vitek2 وحددت النتائج بوصف البكتريا مقاومة R او حساسة S.استعملت خمائر الخبز الجافة المستوردة من مناشئ مختلفة والمتوفرة في الاسواق المحلية من اجل الحصول على عزلات لخميرة Saccharomyces cerevisiae التي شملت كل من العزلة AY من خميرة Angel الصينية المنشا والعزلة MY من خميرة Magestic الصينية المنشا والعزلة PY من خميرة Packmaya التركية المنشا والعزلة LY من خميرة Altunsa التركية المنشا، وتم التاكد من جنس الخميرة ونوعها باعتماد المفاتيح التشخيصية التي تشمل كل من الصفات المظهرية والزرعية والفحوصات الكيموحيوية.اجريت غربلة لرواشح عزلات الخميرة من اجل انتخاب العزلة الاكفا في انتاج المواد البروتينية المثبطة باستعمال طريقة الانتشار في الحـفر لمعــرفة تاثير هــذه المواد تجاه بكتريا P. aeruginosa المنتــجة للــغشاء الحــيوي قيد الدراسة , لم تظهر الرواشح الخام (غير المركزة) لعزلات خميرة S. cerevisiae اي تاثير تثبيطي ضد العزلات البكتيرية , في حين ادى تركيز راشح خميرة AY S. cerevisiae لمرة واحدة ولمرتين الى اظهار فعاليتها التثبيطية تجاه عزلات بكتريا P. aeruginosa المنــتــجة للغشاء الحيوي وبمعدل اقطار تثبيط بلغ (15.5, 20.4) ملم عـلـى الـتـوالـي . فـي حـين بــلــغ مــعــدل اقـــطارمــنطـــقــة الــتثــبيط لراشح خميرة PY S. cerevisiaeالمركز لمرة واحدة ولمرتين (13.8, 18.2) ملم على التوالي.اظهرالراشح المركز لعزلة AY S.cerevisiae المنماة في وسط Yeast Extract Glucose Peptone Broth (YEGPB) تاثيرا تثبيطيا واضحا تجاه العزلات قياسا براشح العزلة المنماة في وسط (PDB) Potato dextrose broth . عـدت مدة الحضن (24) ساعة افضل مدة زمنية تحتاجها الخميرة لتحفيز انتاج المواد المثبطة.شـملت خــطوة تنــقية البروتينات المثبطة استعمال كبريتات الامونيوم بنسبة اشباع تراوحـت بــين 30 الــى 70% لتــرســيب الــبروتينات الــموجــودة فـــي وسط النمو للعزلة AY S. cerevisiae , وكان للبروتين المثبط المنقى جزئيا فعلا مضادا لنمو البكتريا . اذ بلغ التركيز المثبط الادنى للبروتين المثبط المنقى جزئيا (64) ملغرام/ملليلتر, ما عدا عزلة واحدة بلغت قيمة (MIC) لها (32) ملغرام/ملليلتر. وتباينت فعالية البروتين المثبط والمنقى جزئيا المضادة لتكوين الغشاء الحيوي على عزلات بكتريا P. aeruginosa , كانت العزلة الاكثر تحسسا للبروتين المنقى جزئيا العزلة Ps33 والاقل تحسسا لها Ps68.
