Abstract: يتميز التهاب الكبد الفايروسي بقابليته الوبائية على اصابة العديد من الافراد ويطلق مصطلح التهاب الكبد الفايروسي على عدد من الفايروسات المصيبة للكبد التي تم تسميتها حسب اكتشافها الى A,B,C,D,E,F,G ويعتبر التهاب الكبد الفايروسي C وBمشكلة كبيرة وذلك لعدم امكانية تشخيص الاصابة الفايروسية منذ البداية لكون اغلب الاصابات تكون بدون اعراض مرضية او باعراض خفيفة.المواد وطرائق العمل : شملت الدراسة الوبائية 1159عينة لمرضى الثلاسيميا الذين يراجعون مركز الثلاسيميا في الرصافة، والمجموعة الثانية 140915 عينة اخذت لمتبرعي الدم في المركز الوطني لنقل الدم اعتمدت من السجلات. وتم اجراء الفحوص الفايروسية (HCV,HBV,HIV) لهذه المجاميع، واجريت الفحوص الفايروسية التشخيصية الاخرى على مرضى الثلاسيميا، فضلا عن اجراء الفحوص المناعية، فحوص الدم، والفحوص الكيميوحيوية.النتائج : افرزت نتائج مرضى الثلاسيميا عن نسبة 24.76% (70عدد الذكور و110 عدد الاناث) موجبة لفحص anti - HCV، ونسبة 0.77% (7 من الذكور و2 من الاناث) موجبة لفحص HBsAg، وبنسبة 0.34% (2 من الذكور و2 من الاناث) موجبة لكلا الفحصين (علما ان جميع المرضى بدون علاج الانترفيرون) مقارنة مع متبرعي الدم بنسبة 0.4% لـanti - HCV و0.97% لـHBsAg،علما ان جميع نتائج فحص HIV كانت سالبة لمرضى الثلاسيميا ومتبرعي الدم، هذا بالنسبة للدراسة الوبائية. اظهرت الدراسة التحليلية المختبرية ان نسبة الاصابة بفايروس التهاب الكبد HCV اعلى في الذكور بنسبة 27.48% مقارنة مع الاناث بنسبة 21.35% بوجود فرق ذو دلالة احصائية معنوية لارتفاع نسبة الذكور عن الاناث، فيما لوحظ ان النسبة هي ذاتها 0.3% لذكور واناث مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV ولوحظ ارتفاع الاصابة مع ازدياد العمر فاعلى نسبة للاصابة بـ HCV 41.5% هي للاعمار ما بين 21 - 30سنة وللمصابين بـHBV بنسبة 1.7% للاعمار ما بين 1 - 11سنة. ولوحظ ارتفاع نسبة الاصابة بـ HCV بين الاكراد بنسبة 85.7%. اما بالنسبة الى HBV فقد لوحظ ان النسبة هي 5.7% بين الاكراد، اما في العرق العربي فقد لوحظت نسبة HCV 22.83%، وHBV 0.63% وفي الكلدان لوحظ ان نسبة الاصابة بـHCV 20%. اجري فحصPCR على بعض مرضى الثلاسيميا واظهرت الدراسة ان 50% من النتائج موجبة، وباجراء الكشف عن النوع الجيني لفايروس HCV بطريقة RFLP تم الحصول على انماط جينية مختلفة تضمنت 3b,4,6,3a,2b,1b واجريت دراسة مناعية على المرضى الموجبين لفحص PCR، وكشفت النتائج ان 18% من اولئك المرضى قد ابدوا تفاعلات موجبة لاضداد النواة واضداد العضلات الملساء في حين لم يظهر اي نتيجة موجبة لاضداد الدنا، اضداد الميتوكوندريا واضداد الشحوم المفسفرة. اجري الترحيل الكهربائي لبروتينات المصل وتبين وجود ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لبروتين الكلوبيولين مقارنة بالالبومين، بارتفاع معدل بروتين كاما وانخفاض معدل بروتين الالبومين لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص HCV - PCR.اجري على بعض مرضى الثلاسيميا فحوصات عمل الكبد ولوحظ ارتفاع معدل TSB في مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg فضلا عن ارتفاع معدل ALTفي المرضى الموجبين لفحص HBsAg عن المرضى الموجبين لفحص anti - HCV، كذلك لوحظ ارتفاع معدل AST لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg فيما لوحظ ان معدل انزيم الفوسفاتيز القاعدي هو ضمن الحد الطبيعي لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg، وتم اختيار مجموعة من مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg وغير المصابين بـ HCV,HBV واجريت عليهم عدد من الفحوص الكيميوحيوية لمستوى (البروتين الكلي، الالبومين، الكلوبيولين، اليوريا، الكرياتنين، حامض اليورك، البوتاسيوم، الفسفور غير العضوي، الكالسيوم، النحاس، الكلسترول والسكر) في الدم، ولم يلاحظ اي دلالة احصائية معنوية لهذه الاختبارات، عدا اختبار الكولسترول حيث لوحظ انخفاض معدل الكولسترول في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV الى 112.7mmol/L، وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـHBV بمعدل mmol\L93.69 كما لوحظ وجود انخفاض ذو دلالة احصائية معنوية بين مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV,HBV مقارنة مع غير المصابين بـHCV,HBV، كذلك لوحظ وجود دلالة احصائية معنوية لانخفاض معدل حامض اليورك لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV,HBV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا غير المصابين، ووجد ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لمستوى النحاس في الدم لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV وغير المصابين مقارنة مع المصابين بـHBV. ووجد ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لمستوى السكر في الدم لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة بمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV وتبين وجود فرق معنوي لارتفاع معدل الفسفور غير العضوي لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV وغير المصابين بـHCV,HBV مقارنة بالمصابين بـHBV. اجريت الفحوص المناعية على مجموعة من مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg وغير المصابين وتضمنت الدراسة المناعية الكشف عن مستويات الكلوبيولينات المناعية في الدم ومكونات المتممة C3,C4فضلا عن الكشف عن اضداد الذات، ولوحظ ارتفاع نسب اضداد الذات لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة مع غيرهم من مجاميعمرضى الثلاسيميا وتبين ارتفاع نسبة اضداد المايتوكوندريا (43.4%)، اضداد الهستون (40.9%)، اضداد العضلات الملساء (17%)، الاضداد النووية (17%)،اضداد شحم القلب (11.6%)، اضداد الشحوم المفسفرة (17%)، اضداد الدنا المزدوج الشريط (31.8%)، اضداد بروتينات النواة A - Jo - 1 (2.27%)، SS - B (4.5%)، A - Scl (3.4%) في حين ان اضداد الذات من نوع A - RNP/Sm,SS - A,A - Sm,AC - B لم يلاحظ اي نتيجة موجبة لها. اما في مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV فقد تم الحصول على نسبة (15.38%) لكل من اضداد الهستون، اضداد شحم القلب، اضداد الشحوم المفسفرة فيما كانت نسبة اضداد الميتوكوندريا (38.46%). كما لوحظ ارتفاع نسبة المصابين بالعامل الرثوي والبروتين الفعال في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV بنسبة 46%، 68% على التوالي مقارنة مع غير المصابين بـHCV,HBV وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV بنسبة 38.4% لكل من RF,CRP. وتبين وجود فرق معنوي ذو دلالة احصائية لارتفاع الاصابة باضداد الذات ضد الهستون في الاناث مقارنة مع الذكور وارتفاع الذكور عن الاناث في اضداد المايتوكوندريا في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV. كذلك لوحظ ارتفاع بعض الكلوبيولينات المناعية في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV بمستوى 1789 mg/dl للـIgG، ولوحظ مستوى 305.8 mg/dl للـ IgA فيما كان المستوى 203.3 mg/dl للـIgM، وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV لوحظ ارتفاع مستوى IgG الى mg/dl1823.6، اما مستوى IgM وIgA فقد كان بمستوى 229.6 mg/dl، 278.8mg/dl بالتعاقب، وفي بروتينات المتممة C3,C4 لوحظ انخفاض مستوى C3 الى 82.6mg/dl فيما كان مستوى C4 23.7mg/dl وهو ضمن الحد الطبيعي الادنى في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV، اما في مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV فقد لوحظ ان مستوى بروتينات المتممة C3 اقل من المستوى الطبيعي 78.1 mg/dl فيما كان المستوى 20.3mg/dl الى C4.في اختبارات امراض الدم تم الحصول على دلالة احصائية معنوية لارتفاع معدل PT لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة مع غير المصابين ومرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV، كما لوحظ انخفاض معدل تعداد كريات الدم العدلة لمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV ومرضى الثلاسيميا غير المصابين. ولوحظ انخفاض معدل تعداد الصفائح الدموية لمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV ومرضى الثلاسيميا غير المصابين. | Viral Hepatitis characterized by its epidemic ability to infect many people. Viral hepatitis called to many hepatic viral infection that had been classified into A,B,C,D,E,F,G. Hepatitis C infection considered a big problem related to the inability to diagnose the viral infection from the beginning because of mild or no symptoms. Material & Methods : - The epidemic study contains two groups, first group 1159 sample of thalassemic patients in Al - Rusafa Center For Thalassemic Patients. Second group 140915 samples taken from blood donors in the national blood bank from the records.Viral tests had been done for these groups (HCV,HBV,HIV). Diagnostic tests done on thalassemic patients like immunological, hematological, biochemical tests.Results : - For the epidemic study the result shows a 24.76% for thalassemic patients infected with HCV , 0.77% for thalassemic patients infected with HBV, & 0.34% for thalassemic patients infected with both HCV,HBV. 74.89% for non infected thalassemic patients compared with blood donors of 0.4% for HCV infection, and 0.97% for HBV infection.Studies for investigating laboratory tests done on thalassemic patients after confirming HCV,HBV infections through doing diagnostic viral tests.HCV Viral results shows higher percentage of male to female by 27.48% for male, 21.35% for female respectively and it was seen that the same rate of 0.3% for male and female infected with HBV. Higher infection rate with age increasing of 41.5% for age group 21 - 30 years of HCV thalassemic patients, and 1.7% for age group 1 - 11 years for HBV thalassemic patients. Higher HCV infection rate noticed for Kurdish people 85.7% , Christians 20%, and in Al - Sabeaa 40%.while the percentage of HBV in Kurdish people 5.7%, and no one infected with HBV infection in Christian and Al - Sabeaa people. For Arabic patients the percentage of HCV infection is 22.83% and 0.63% for HBV infection.HCV - PCR Thalassemic patient results show that 50% of results are positive and 50% are negative (11 out of 22 patients), doing genotyping of HCV by RFLP test shows different subtypes of HCV (3b, 2b, 1b, 3a, 4, 6).Immunological study done on PCR positive patients’ shows antibodies percentage of 18% to ASMA, ANA and 0% for each of AMA, ADNA, APL. Electroforeces done for protein of these patients show significant statistical increasing values of protein globulin in comparison to albumin decreasing.For liver function tests, applied on thalassemic patients it had been noticed that there is a significant statistical increasing values in the thalassemic patients infected with HCV as compared to other thalassemic patients not infected with HCV. Increasing the level of ALT in HBV patients compression with HCV patients, increasing the level of AST of HBV, HCV thalassemic patients where the level of alkaline phosphates in the upper limit of normal value of HCV, HBV thalassemic patients.No significant statistical values where noticed for the biochemical tests applied on some thalassemic patients infected with HCV, HBV infection except cholesterol where it had been noticed a decrease of level 112.7 mmol/L in thalassemic patients infected with HCV. 93.69 mmol/L in HBV infection patients, a significant statistical decrease value between HBV , HCV thalassemic patients in comparison with non infected patients.There is a decrease level of uric acid for the thalassemic patients infected with HCV compared with non infected patients, significant increase of copper level in the blood of HCV thalassemic patients compared with HBV infected thalassemic patients and not infected thalassemic patients.Significant statistical value increment for the random blood sugar in HCV thalassemic patients compared with HBV infected thalassemic patients.Regarding immunological study, it had been noticed that there is an increasing in autoantibody with significant statistical value for thalassemic patients infected with HCV compared with other thalassemic groups. It had been seen that there is an increasing in the mitochondrial antibodies (AMA - M2) 43.4%, antihiston antibodies (AHA)40.9%, antismooth muscle antibodies (ASMA)17%, antinuclear antibodies (ANA)17%, anticardiolipin antibody antibodies (ACL)11.6%, antiphosphotidel serin antibodies (APL - S)17%, antidouble stranded DNA antibodies (A - ds - DNA) 31.8%, other antinuclear proteins like A - Jo1 2.27%, SS - B 4.5%, A - ScL 3.4%, where the other auto antibodies A - RNP/Sn, SS - A, A - Sm, anticentromer B antibodies (A - C - B) show zero percent for each one of them while in the HBV thalassemic patients a 15.38% was obtained for each APL - S , ACL & AHA.. A 38.46% for AMA - M2.There is an increase in rheumatoid factor (RF), CRP in thalassemic patients infected with HCV compared with non infected thalassemic patients with a ratio of 46%, 68% respectively. In HBV thalassemic patients 38.4% for each RF and CRP. Significant statistical difference for increasing incidence with auto antibodies in the females compared with males of autoantibodies type AHA, AMA - M2 in thalassemic patients infected with HCV noticed.We noticed an increasing in the immunoglobulines IgG 1789 mg/dl, 305.8mg/dl for IgA in thalassemic patients infected with HCV while IgM in the upper normal range 302.3 mg/dl, complimentary portions C3, C4 shows a decrease level in C3 82.6 mg/dl, and the level of C4 is 23.4mg/dl, which is regard as the lower normal limit. While in the HBV thalassemic patients we obtain a level 1515.3mg/dl for IgG, 204.8 mg/dl for IgM and for IgA 233.3mg/dl.In the hematological tests of thalassemic patients infected with HCV shows significant increment in the level of PT test was obtained as compared with other groups of thalassemic patients. Percentage decrement in neutrophil of WBC cells in HCV thalassemic patients as compared with HBV and non infected thalassemic patients. There is a decrement in platelets count in HBV thalassemic patients compared with HCV and non infected thalassemic patients.

انتاج وتوصيف Protease من بكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة من بعض الحالات السريرية وعلاقته ببعض المضادات الحيوية == Production and Characterization of Protease from Pseudomonas aeruginosa Isolated from Some Clinical Cases and its Relation with some Antibiotic Agent

Author name: رنا مجاهد عبد الله الشويخ

Supervisor name: سمير فتح الله سمعان | سعود رشيد العاني

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: جمعت (170) عينة من حالات مرضية مختلفة التي تضمنت (35) مسحة من الجروح و(47) مسحة من الحروق و(25) مسحة من حالات التهابات الاذن الوسطى فضلا عن عينات الادرار التي تضمنت (63) عينة وجمعت العينات من مستشفى الكاظمية التعليمي للمدة من 1 - 5 - 2005 ولغاية 1 - 8 - 2005 .  تم تشخيص (50) عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa اذ زرعت على اوساط اغنائية وتفريقية لغرض العزل الاولي ثم اخضعت المزارع البكتيرية للفحوصات المجهرية والبايوكيميائية لغرض تشخيصها ، ثم استخدمت عدة الفحصapi20E للتشخيص النهائي لهذه العزلات ، اذ تضمنت (8)عزلات من بكتريا Pseudomonas aeruginosa (16%) من حالات التهاب الجروح ، (16) عزلة (32%) من التهابات الحروق ، (20) عزلة (40%) من حالات التهاب المجاري البولية و(6) عزلات (12%) من حالات التهاب الاذن الوسطى .  اختبرت حساسية بكتريا Pseudomonas aeruginosa ضد (20) مضادا حيويا وقد اظهرت العزلات تباينا واضحا وبنسب مختلفة في مقاومتها للمضادات الحيوية . اذ اظهرت بكتريا Pseudomonas aeruginosa نسبة المقاومة(100%) تجاه مضادات الامبسلين ، الاموكسسلين ، الاموكسسلين / حامض كلافيولونك ،الكلوكساسلين والسيفازولين . بينما بلغت نسبة المقاومة لمضادات السيفاكسيم ، الكاربنسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم (98%) ، (84%) ، (80%) و(78%) على التوالي. وبلغت نسبة المقاومة لمضادات الجنتاميسين ، التوبرامايسين ، الببراسيلين ، النورفلوكساسين ، الاميكاسين والسبروفلوكساسين (52%)، (26%) ، (24%) ،(14%) ،(6%) و(4% )على التوالي . في حين اظهرت جميع العزلات لبكتريا Pseudomonas aeruginosa حساسية عالية (100%) تجاه مضادات الازترونام ، امبينيم والسيفابيم البيفلوكساسين والافلوكساسين .  قدرت التراكيز المثبطة الدنيا (MICs ) للمضادات الحيوية وكانت اعلى نسبة مقاومة لمضادات الاموكسسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم . اما نسبة المقاومة لمضادات الامينوكلايكوسايد فكانت تتراوح (4 - 128) مايكرو غرام / مل للتوبرامايسين ، (4 - 256) مايكرو غرام / مل للجنتاميسين اما لمضاد الاميكاسين فكانت (4 - 128) مايكرو غرام / مل. في حين اظهرت قيم MIC حساسية عالية (100%) لمضادي السبروفلوكساسين والسيفابيم.  اظهرت نتائج خلط مضادات السبروفلوكساسين مع كل من الجنتاميسين والسيفتازديم والببراسيلين نتائج مهمة في تخفيف التراكيز المثبطة الدنيا لكلا المضادين المستخدمين لوحدهما ضد هذه البكتريا . كذلك اظهرت نتائج خلط مضادي التوبرامايسين مع السيفتازديم فعالية عالية عند خلطهما معا واستعمالهما ضد بكتريا Pseudomonas aeruginosa . اظهرت (86%) من عزلات بكتريا Pseudomonas aeruginosa قابليتها على انتاج انزيم البروتييز . اظهرت النتائج تاثر انزيم البروتييز الخام ببعض المضادات الحيوية التي ادت الى انخفاض في فعالية الانزيم عند زيادة تركيز هذه المضادات .  كانت الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتييز عند استخدام وسط لوريا عند رقم هيدروجيني(8) ولمدة(48) ساعة من الحضن بدرجة حرارة(35) م º . نقي انزيم البروتييز من العزلة Pseudomonas aeruginosa PsaW2 باستخدام كروماتوغرافيا التبادل الايوني DEAE - celluloseوكروماتوغرافيا الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100. قدر الوزن الجزيئي للانزيم المنقى بطريقة الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100 وكان (21379 ) دالتون ، وبلغت درجة الحرارة المثلى لفعالية البروتييز (35) م º والرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية وثبات الانزيم كانت (8) . اوضحت نتائج تاثير بعض المثبطات والعوامل المختزلة والكلابية في فعالية الانزيم ، ان فعالية الانزيم قد ازدادت عند معاملته بايونات Ca++ وZn ++ مما يدل انها تلعب دورا في تحفيز وثبات الانزيم ، ولم تثبط فاعلية الانزيم بوجود العوامل المختزلة مثل السستين ، بينما تثبط فعالية الانزيم بوجود العوامل الكلابية EDTA .  اظهر انزيم البروتييز المنقى من بكتريا Pseudomonas aeruginosa فعالية عالية عند خلطه مع مضادي الفانكومايسين والسيفازولين في علاج التهابات العيون في الارانب والمتسبب عنها بكتريا Staphylococcus aureus . |  One - hundred and seventy swab samples were collected from different cases including (35) wound and (47) burn infection , (25) otitis media and (63) samples from urinary tract infections from Al - Kadhymia Teaching Hospital in Baghdad city . The study period was from 1 - 5 - 2005 to 1 - 8 - 2005 .  Fifty isolates of Pseudomonas aeruginosa were identified using different microscopical , cultural characteristics and biochemical tests . Final identification of bacteria were performed by using api20E system. The isolates were 8(16%) from burn infections , 20(40%) isolates from urinary tract infections , 16(32%) isolates from burn infections and 6(12%) isolates from otitis media . The sensitivity of Pseudomonas aeruginosa isolates was been tested against (20) antibiotics showed isolates version resistance with different percentage against antibiotics .Pseudomonas aeruginosa exhibited (100%) resistance to Ampicillin , Amoxycillin , Amoxycillin / clavulanic acid, cloxacillin and cefazolin .While percentages of resistance to cefixime , carbencillin, cefotaxime and ceftazidime were (98%) ,(84%) ,(80%) and ( 78%) respectively .Resistance percentages to Gentamicin ,Tobramycin , Piperacillin , Norfloxacillin , Amikacin and Ciprofloxacine were (52%),(26%),(24%),(16%),(14%)and(4%) respectively. All isolates of Pseudomonas aeruginosa were highly sensitive (100%) to Aztronam , imipenem , cefepime , P - ofloxacin and ofloxacin .  Minimum inhibitory concentrations of Amoxycillin , cefotaxime , ceftazidime and piperacillin showed higher percentage of resistance . While resistance to aminoglycoside antibiotics including Tobramycin was (4 - 128) μ g / ml , Gentamicin was (4 - 256) μ g / ml and Amikacin was (4 - 128) μ g / ml . On the other hand , all bacterial isolates were susceptible (100%) to Ciprofloxacine and Cefepime .  Combinations of Ciprofloxacine with Gentamicin , ceftazidime and piperacillin gave interesting results against the local bacterial isolates in reducing their MIC values . Tobramycin and ceftazidime gave an obvious decrease in MIC values after combination of these drugs and used against Pseudomonas aeruginosa . A (86%) of the isolates of Pseudomonas aeruginosa have ability to produce protease enzyme . Enzyme activity was affected by some antibiotics . This activity was reduced with increasing the concentrations of these antibiotics . The optimum conditions for protease production were in LB medium with a pH (8) after (48) hrs of incubation at (35) C .  Purification of the protease was done using ion exchange chromatography DEAE - cellulose and gel filtration with sephadex G - 100 .  Molecular weight of the purified protease was measured by sephadex G - 100 and it was found to be around (21379 ) Dalton . The optimum temperature of enzyme activity was (35) C . However , the pH (8) was for activity and stability of this enzyme .  Zn++ and Ca++ ions may play a role in the enhancement and stability of the enzyme . Enzyme activity was not inhibited in the presence of reducing agent such as Cysteine , but it was inhibited in the presence of EDTA .  Pseudomonas aeruginosa purified enzyme shows a high activity when combined with Vancomycin and cefazoline and used for the treatment of the eye infection in rabbits caused by Staphylococcus aureus .

عزل وتشخيص بكتريا Yersinia enterocolitica من بعض المصادر السريرية والبيئية

Author name: رعـد ناجي حسن الفلاحي الحسني

Supervisor name: هشام عطا شحاذة | ضحى سعد صالح

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Immunology

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: لغرض دراسة تواجد وانتشار بكتريا (Yersinia enterocolitica) في مناطق مختلفة من العراق ودراسة قابليتها على احداث المرض تم ولاول مرة في القطر التحري عن هذه الجرثومة في 422 عينة مختلفة المصادر شملت عينات الاسهال الدموي الحاد(Acute Bloody Diarrhea) (150) عينة , و(37 ) عينة من حالات الاصابة بالتهاب الزائدة الدودية الحاد(Acute Appendisitis) , و(60) عينة من مياه نهري دجلة والفرات, و(15) عينة من مزارع المواشي, و(100) عينة من محلات بيع لحوم الاغنام المحلية, و(60) عينة من معلبات اللحوم (المستوردة) من السوق المحلية.جمعت العينات السريرية من عشر مستشفيات متوزعة في مناطق مختلفة من العراق فيما يخص عينات الاطفال المصابين باسهال دموي حاد وحالات التهاب الزائدة الدودية الحاد ، وشملت العينات البيئية مياه من مناطق متفرقة من نهري دجلة والفرات، كما تمت دراسة لعينات لحوم اخذت من محلات بيع اللحوم الطازجة في ثلاث محافظات هي الانبار وبغداد وديالى . واخرى من لحوم المعلبات المستوردة.شمل البحث ايضا دراسة لعدد من العينات الماخوذة من مزارع المواشي في الاسحاقي والصويرة ومزرعة الجسامية في مدينة الفلوجة . لقد تم الحصول على عزلات عائدة لبكتريا Yersinia enterocolitica من 27 عينة شخصت هذه العزلات اعتمادا على الفحوصات الخاصة بالتشخيص الاولي والتي تضمنت الاغناء البارد(Cold Enrichment ) وتنمية العزلات على وسط (CIN agar )( Cefsulodin - Irgasan - Novobiocin agar ) ثم فحص اشكال المستعرات واشكال الخلايا وتفاعلاتها مع ملون غرام(Gram Stain) وفحص انظيمي الاوكسيديز ( Oxidase ) والكاتاليز ( Catalase ) واخضاع البكتريا للفحوصات الكيموحيوية المتضمنة لتخمر السكريات المختلفة وتم ايضا تنميط العزلات مصليا بالاعتماد على الطرائق العلمية المعروفة واظهر التنميط المصلي ان غالبية العزلات السريرية وعزلات اللحوم المعلبة تعود للنمط المصلي (O : 8) اما العزلات البيئية فتعود للنمط المصلي (O : 9) وتعود عزلات اللحوم العراقية للنمط ( O : 3).درست حساسية العزلات للمضادات الحيوية (Antibiotic Sensitivity ) واظهرت النتائج حساسية العزلات لمضادات Chloramphenecole ,Ciprofloxacin, Gentamycin ,Tetracycline ,Trimethoprim ,Sulphafurazole ومقاومتها لمضادات Clavulonic acid, Carbincillin, Ampicillin Ticarcillin,Amoxicillin ، ودرست ايضا قابلية هذه العزلات على انتاج انظيم البيتالاكتميز(β - lactamase ) بينما اظهرت بعض العزلات قابليتها على انتاج هذا الانظيم، ودرست قابلية البكتريا على احداث التهاب الامعاء والاسهال باستخدام الفئران التجريبية، كما اظهرت دراسة المحتوى البلازميدي احتواء اغلب العزلات على حزم بلازميدية باعداد متفاوتة تعتمد على مصدر العينة المعزولة منه البكتريا والمرض المسببة له، كما درست قابلية البكتريا على الحركة في درجتي حرارة 22مو37م واظهرت النتائج قدرتها على الحركة في درجة 22 درجة مئوية وعدم قدرتها على الحركة في درجة 37 درجة مئوية. | Serving the purpose of studying the presence and spreading of Yersinia enterocolitica in different areas in Iraq and to study its pathogenesis. The bacteria was detected in 422 different specimen comprising acute bloody diarrhea (150 specimen) cases of Acute Appendicitis (37 specimen), specimens were taken from Tigris and Euphrates water (60 specimen), from Cattle farms (15 specimen), from local sheep shopping (100 specimen), others taken from imported canned meat and other heat specimens taken from local market (60 specimen). The Clinical Specimens were taken from 10 different hospitals in various areas in Iraq concerning specimens from children infected with acute B.d. & acute Appendicitis. Whereas water specimens were taken from Tigris & Euphrates. Fresh meat samples were taken from the local butchers stores from three different districts; Anbar, Baghdad and Dyala. Other samples were taken from imported meat. The research comprised the study of several samples from cattle farms in Al - Eshaqi , Al - Sowera and Jassamiya in Falluja City. Bacteria Yersinia enterocolitica was isolated from 27 samples, these isolates were identified according to prelimary testing using Cold Enrichment, growing isolates in (CIN agar) (Cefsslodin - Irgsan - Novobiocin agar) and examination of colony and cell shapes and their interacting with Gram Stain and Oxidase testing Catalase and submitting Bacteria for Bio - chemic at test containing various sugar fermentation. In addition, isolates were sorted Plasmatic depending on the known scientific methods. This sorting showed that most tested isolates and canned meat isolates belong to serum type (O : 8). Whilst ambiance serum belongs to type (O : 9) and Iraqi meat isolates were of type (O : 3). Antibiotic sensitivity of the isolates are determined. The results showed isolates sensitivity for Chloramphenecole, Ciprofloxacin, Gentamycin, Tetracycline, Trimethoprim and Sulphafurazole and its resistance to Ampiciline, Carbinicillin, Clavulonic acid, Ticarcillin and Amoxicillin in the meanwhile ability of these isolates to produce β - lactamase was studied. The ability of Bacteria to produce bowl inflammation and diarrhea was studied by using experimental rats. Plasmids reveals the container of different numbers of plasmadic bands depending on the source of the isolate. Besides, the movement ability of the bacteria at 22C and at 37C were studied. The results explained its movement ability at 22C and its inability of movement at 37C.

بعض المظاهر المناعية للمرضى المصابين بفايروس التهاب الكـبد C في محافظة اربيل == Some Immunological Aspects of Patients Infected with Hepatitis C virus in Erbil Province

Author name: زاكروس كمال احمد البرزنجي

Supervisor name: احسان شفيق توفيق دميرداغ | ماجد محمد محمود

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Immunology

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: This study was designed to fined out the prevalence of anti - HCV in thalassemics and diabetic patients and HCV viremia in anti - HCV positive patients, to delineate the role of TH1 cytokines in HCV infection, and to fined out a possible diabetogenic role for HCV infectionThis study was carried out in Erbil province for the period Feb 2006 to March 2007. Different diagnostic test approaches are used like 3rd generation ELISA, RT - PCR to detect HCV infection and ELISA for cytokine determination. The screened patients and control group including : (347) β - thalassemics, (786) diabetic patient, and (465) as control population were subjected to above tests for the purpose of clarifying the sensitivity and specificity of ELISA vs PCR in risk and control groups moreover, to delineate the role of TH1 cytokines in HCV infection.The results can be briefly summarized as following : Anti - HCV anti body were detected among (28.24%) (5.97%), and (0.43). of thalassemics, diabetics, and control population. RT - PCR testing revealed (88.77%), (68%) positivity among anti - HCV positive thalassemics, and diabetics cases screened by ELISA test.Cytokine levels in thalassemics for TNF - α, IFN - γ, and IL - 2 were significantly higher in PCR - confirmed HCV cases than in HCV - negative thalassemics (P < 2.017E - 17), (P< 1.67E - 5), and (P< 6.048E - 8) respectively. A statistically higher significant levels of TNF - α, IFN - γ, and IL - 2 demonstrated also in thalassemic patients (PCR - confirmed HCV thalassemics and, HCV - negative thalassemics ) than in healthy controls In diabetic patients revealed only high significant association between PCR confirmed HCV infection and increased level of TNF - α (P < 1.19E - 10).Statistically significant high level of TNF - α only was detected among diabetic patients (PCR - confirmed HCV diabetics and, HCV - negative diabetics) than healthy control group (P < 1.19 E - 10).In PCR confirmed - HCV thalassemic patients (4.6%) were found to be diabetic in comparison with (0.9%) in HCV - negative thalassemic group.This study clearly demonstrates the highly prevalence of HCV - infection among thalassemic patients and to a lesser extent in diabetics.The elevation of TH1 cytokines (TNF - α, IFN - γ, and IL - 2) in thalassemics may contribute to cell mediated immunity and may be related to other infections not just HCV as a reason of frequent blood transfusion. The Study also confirm that the

التوصيف الجزيئي لذيفاني Panton Valentine leukocidine وExfoliatine في العزلات المحلية لبكتريا المكورات العنقودية المقاومة للمثسيللين == Molecular characterization of Panton Valentine leukocidine and Exfoliatine toxins in local isolates of Methicillin resistant Staphylococcus aureus

Author name: رغد عبد اللطيف عبد الرزاق العبيدي

Supervisor name: سوسن حسن عثمان كورجي | محمد فرج المرجاني

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تم الحصول على 100 عزله تعود لبكتريا Staphylococcus aureus المقاومة للمثيسيللين من المرضى المصابين بالاصابات الجلديه المختلفة (52 عزله من الجروح)و(32 عزله من الخراج )و(16 عزله من الحروق) والوافدين الى مستشفيات ابن البلدي ومستشفى حماية الاطفال والجراحات التخصصيه ومستشفى الشهيد غازي الحريري ومستشفى بغداد التعليمي والمختبرات التعليميه في بغداد للفتره من ايلول ولغايه كانون الاول 2013. اختبرت حساسية جميع العزلات تجاه 13 مضادا حيويا مختلفا وقد اظهرت العزلات جميعها مقاومة لمضاد Cloxacillin بنسبة (100%) ، يليها المقاومة لمضاد Cefoxitin (86%) ومضاد Cephalexine ( 51% ) ، فيما كانت اقل نسبة مقاومة تجاه مضاد Teicoplanin ( %4). تم الكشف عن امتلاك العزلات لجينات pvl وeta وetb المشفرة لذيفانات Panton Valentine leukocidin وExfoliatin باستعمال تقنيه تضاعف البلمره المتسلسله PCR)) ، اظهرت النتائج امتلاك 27 عزله (27%) لجين pvl وامتلاك 13 عزلة (13%) لجين eta فيما لم تظهر اي عزلة امتلاكها لجين.etb 16 عزله منتجه لجين pvl وعزلتان منتجه لجين eta ارسلت الى NICEM/USA - machine is ABI3730XLAppliedBIOSYSTEM لتحديد تعاقب القواعد النتروجينيه لجين pvl وeta في عزلات بكتريا S. aureus وبعد تحليل النتائج وجد ان نسبة (58.44%) من الطفرات في الجين pvl الشريط R هي طفرات استبدال و(.66%37( طفرات حذف و.89%)3(طفرات ادخال بينما كان .21%)34( من الطفرات في الجين pvl الشريط F هي استبدال و.89%)57(طفرات حذف و(.89%7(طفرات ادخال. وفيما يخص الجين eta فكانت )100%) من الطفرات هي طفرات حذف لكل من eta - R وeta - F.. انتخبت العزله رقم ( 84 ) لاستخلاص وتنقيه ذيفان PVL ،وقد انتج الذيفان بعد مرور 24 ساعه من الزرع، رسب بعدها الذيفان باستعمال كبريتات الامونيوم (حد الاشباع 80%) ومن ثم التنقيه باستخدام عمود المبادل الايوني DEAE - cellulose بعدها عمود كروموتوغرافي الترشيح Sepharose 6B ومن ثم عمود كروماتوكرافي hydroxyl apatite الكاره للماء . قدر تركيز البروتين عند كل خطوه من خطوات التنقية وقد بلغ التركيزعند اخر خطوه من التنقيه.43 22 مايكروغرام /مل ،وصف الذيفانPVL وحدد الوزن الجزيئي له بواسطة هلام الترشيح sepharose 6B وباستخدام منحنى قياسي لعلاقة لوغارتم الوزن الجزيئي وخاصية Ve/Vo وبوجود محاليل البروتينات القياسيه، اذ حدد الوزن الجزيئي للذيفان فكان 35448دالتون . لوحظ النشاط السمي للذيفانPVL ضد كريات الدم البيضاء متعددة النوى بظهور الثقوب في هذه الخلايا وبعد فترات حضن مختلفه مع الذيفان عند تركيز 10 مايكروغرام /مل اذ ادى ازدياد التركيز الى تحطم الكريات متعددة النوى مما يشير الى موت الخلايا وتنخرها اعتمادا على تركيز الذيفان. حدد التاثير السمي الخلوي للذيفانPVL بتحديد الجرعة القاتله النصفيه 50% من الحيوانات المختبريه اذ ظهرت النتائج ان نسبة موت الفئران (50%)حدثت بعد مرور 24 ساعة وعند تركيز 10 مايكروغرام /مل .اظهرت الفحوصات النسجيه قدرة ذيفانPVLعلى احداث الاصابه في بعض اعضاء الفئران المصابه تجريبيا عندما حقنت الفئران البالغه في الصفاق بتراكيز الذيفان (5،10،15،20،22.43) مايكروغرام /مل .اخذت الاعضاء وعملت المقاطع النسجيه بعد ساعتين ثم بعد 24 ساعة وكذلك قتلت مجموعه من الفئران بعد 24 ساعه من التجريع الانفي بالذيفانPVL لتفحص بعدها الاعضاء نسيجيا.اثبتت نتيجه الفحص النسيجي للاعضاء ظهور تنخربانسجة الرئه وارتشاح الخلاياالالتهابيه وتنخرانسجه الكبد وتضخم بانسجة الطحال | One hundred isolates of Methicillin resistant Staphylococcus aureus were obtained from patients suffering from a variety of skin infections (52 isolates from wound ) , ( 32 isolates from abscess) and (16 isolates from burn), from patients at hospitals of Baghdad governorate included Ibn - El Balady, Martyr gazi Alhariry for specialized surgery hospital, Welfare teaching hospital, department of teaching laboratories and Baghdad teaching hospital at a period between September until November 2013 and were identified by morphological and biochemical tests , all of them were tested for their susceptibility to 13 of antibacterial agents, and all isolates were resistant to cloxacillin(100%) ,followed by cefoxitin (86%) and cephalexin (51 %), 26% to lincomycin, 24% to Azithromycine ,23% to trimethoprim and 22% to rifampicin,18% to gentamycin, 17% to vancomycin, ,13% to clindamycin and levofloxacine while the minimum resistance were seen with teicoplanin (4%).All isolates were detected for pvl,eta and etb by amplification of genes by PCR technique ,results showed that from 100 isolates ( 27%)Carry pvl gene,(13%) carry etA gene, while etB gene did not appear in any isolate.Polymerase chain reaction Product of pvl gene for sixteen isolates of S.aureus and two isolates of eta gene were sent to NICEM/USA - machine is ABI3730XLAppliedBIOSYSTEM to determine nucleotides sequencing and were achieved by using the applied biosystem (ABI) Capillary system, that mutation on pvl - R (58.44%) was subsititution mutation , (37.66%) was deletion and(3.89%) was insertion ,pvl - F (34.21%) was subsititution,( 57.89%) was deletion and(7.89%) insertion, on eta (100%) was deletion . One of pvl positive isolate (No.84) was selected for extraction and purification of Panton valentine leukocidin ,this toxin was produced after 24 hr of inoculation and it increased during the beginning of stationary phase .Panton valentine leukocidin toxin was precipitated by ammonium sulphate (80% saturation ) and purified using ion exchang byEDAE - cellulose, gel filtration chromatography by sepharose 6B, and hydro phobic interaction chromatography by hydroxyapatite. Protein concentration in each step of purification was determined ,protein concentration in the last step of purification was22.43µg/ml . PVL characterized , Mwt was determined by gel filtration sepharose 6B .The standard curve that represent the relationship between Log M.Wt and Ve/Vo for standard protein.The molecular weight of PVL toxin was determined as 35448 Da. The leukotoxic activities of PVL toxin was down by pore forming occurrence on PMNs after incubation with 10 µg/ml concentration PVL with in different incubation period ,when increase concentration lead toPMNs rupture Thus, the modes of cell death in vivo (necrosis versus apoptosis) may critically depend on the PVL concentration.Cytotoxicity of PVL was detected when determined the dose which cause death of 50% of laboratory animals. The result showed the death percentage of mice after 24hr were 10µg/ml.Histopathological investigations proved the ability of PVL toxin to cause the infections in the most organs of infected experimentally mice. Adult mice were injected intraperitonially with PVL at a different concentration (22.4, 20,10,5) g/ml. Histological sectioning of the organs was done after 2hr,24hr.also living mices were killed after 24hrs after endotracheal instillation with 20 g/ml PVL toxin.Histological examination were done for organs (liver, spleen and lung) .Results showed the existence of lesions and necrosis Damage and necrosis of aleveolar tissue ,odema, emphysematous chang chronic inflammatory cell infiltration and destruction in lung with degeneration and necrosis hepatic cell and spleen enlargement of white pulp with mild necrosis of parenchymal tissue

دراسة تاثير مستخلصات اوراق نبات الدفلة Nerium oleander الخام والنقية في الخلايا الطبيعية وخطوط الخلايا السرطانية النامية في الزجاج وفي الفئران البيضاء == Study the effect of some crud & pure Nerium oleander leaves extractions on The normal cells and cancer cell lines in vitro and in vivo

Author name: رغد ضياء عبد الجليل الشيباني

Supervisor name: عبد العزيز مجيد الكبيسي | ناهي يوسف ياسين

General topic: Biology

Specific topic: Plant

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تم فصل 32 مركبا مختلفا من المستخلصات الخام المختلفة للاوراق ، و28 مركبا من المستخلصات الخام المختلفة للسيقان ، و36 مركبا من المستخلصات الخام المختلفة للازهار اي بحصيلة اجمالي 96 مركب . تم تمييز قسم من هذه المركبات المفصولة بمقارنتها بمركبات قياسية معروفة ، في حين بقي القسم الاخر منها مجهولا ، والمركبات المشخصة هي : Oleandrin ، Nerigoside ، Glucosylnerigoside، Odorside A ، Oleaside E ، Olaside A ، Adynerin . واختلف وجود هذه المركبات اعتمادا على نوع المستخلص وجزء النبات المستخدم في الاستخلاص .وفي تجارب تاثير المستخلصات الخام ومركب الاولندرين النقي على الوراثة الخلوية للخلايا اللمفاوية لدم الانسان فقد وجد ان التركيز غير السام خلويا من المستخلص المثيلي هو0.01µg/ml عند الحضن لمدة 1 ، 48 و72 ساعة على التوالي . وقد ادت جميع التراكيز الاعلى منها الى انخفاض معنوي في قيمة معامل الانقسام الخيطي Mitotic Index (MI)ومعامل التحول الارومي Blast Index (BI) وادت التراكيز الادنى الى زيادة معنوية في قيمة MI وBI وهذه الظاهرة تسمى الـ Hormetic effect التي ظهرت في هذا المستخلص بشكل واضح . ولمستخلص الاسيتونايترايل والمثلين كلورايد فقد كانت التراكيز غير السامة خلويا 0.1µg/ml، 1µg/mlو0.01 µg/ml عند الحضن لمدة حضن 1 ، 48 ساعة . وقد ادت جميع التراكيز الاعلى منها الى انخفاض معنوي في قيمة MIو BI . اما المستخلص المائي فقد كانت التراكيز غير السامة خلويا هي 1µg/mlو 0.1µg/ml و0.01µg/ml والتراكيز الادنى منها ولفترات الحضن ( 1، 48 ، 72 ) ساعة على التوالى ، وادت جميع التراكيز الاعلى منها الى انخفاض معنوي في قيمة MI وBI. ولوحظت ظاهرة الـ Hormetic effect ايضا عند التراكيز المختلفة من مركب الاولندرين لمدة ساعة واحدة مع الخلايا ، اذ ادت التراكيز العالية الى انخفاض معنوي في كل من MI وBIفي حين ادى التركيز الواطيء الى زيادتها ولو بشكل غير معنوي ، كانت التراكيز غير السامة هي 5ng/ml والتراكيز الادنى منها وعند زيادة فترة الحضن لمدة 48 ،72 ساعة فقد كانت جميع التراكيز المستخدمة سامة خلويا. وتم استخدام المستخلصات الخام والاولندرين باضافتها بدلا من المادة المشطرة PHA واظهرت النتائج عدم وجود اي تحفيز لانقسام الخلايا اللمفاوية وللتراكيز المستخدمة جميعها. كما تم استخدام المستخلصات الخام والاولندرين باضافتها بدلا من مادة الكولجسين ونتج عن ذلك وجود انقسام خلوي متوقف عند الطور الاستوائي metaphase وبفارق معنوي لكل من دليل الانقسام الخلوي ومعامل التحول الارومي .وجد تاثير ايجابي للمستخلص المثيلي الخام على دورة الخلية وتقدمها ولجميع التراكيز المستخدمة في التجربة ولمدة ( 1 ، 48 ) ساعة . وازدادت ايضا قيم Replicative Index (RI) دون ان يؤثر ذلك على تركيب الكروموسوم اذ لم تظهر استخدام التركيزين الوسطي والعالي اي فروق معنوية في Sister Chromatid Exchange (SCE) بالمقارنة مع السيطرة ، بينما ادى التركيز الواطيء الى انخفاض SCE وبنسبة تثبيط بلغت 6.67 % لمدتي تعريض ( 1 ، 48 ) ساعة. وظهر تاثير Hormetic effect بشكل واضح عند اطالة فترة المعاملة لمدة 72 ساعة اذ اختفت التاثيرات الايجابية على دورة توالي الخلية CCP وانخفضت قيم RI وازدادتSCE عند استخدام التركيز العالي وبشكل معنوي بالمقارنة مع السيطرة ، وحدث العكس تماما عند استخدام التركيز الواطيء فظهر تحسن في دورة توالي الخلية الخليةCell Cycle rogression (CCP). وزيادة RI وانخفاض قيمة SCEمعنويا وبنسبة تثبيط 25 % ، في حين لم يكن التركيز الوسطي مؤثرا . اما مستخلص الاسيتونايترال فقد ادت جميع التراكيز المستخدمة الى تسريع دورة الخلية وتقدمها ، كما ازدادت RI وذلك عند حضن المستخلص مع الخلايا لمدة ساعة واحدة بالمقارنة مع السيطرة. وادى ذلك في الوقت ذاته الى انخفاض في SCE بالمقارنة مع السيطرة وبنسبة تثبيط بلغت 6.25 % و6.25 % و16.67 % للتراكيز 10µg/ml و1µg/ml و0.1µg/ml على التوالي. اما عند زيادة فترة الحضن لمدة اطول ( 48 ساعة ) فقد ادى التركيزين العالي والوسطي الى تقدم دورة الخلية وزيادة RI معنويا . رافق ذلك زيادة SCE وبشكل معنوي . بينما ادى التركيز الواطيء الى انخفاض في قيمة SCE وبنسبة تثبيط 16.67 % بالمقارنة مع السيطرة (تاثير Hormetic effect ). وعند زيادة فترة الحضن لمدة 72 ساعة لوحظ بطيء في دورة الخلية وانخفاض RI وبشكل معنوي ، ترافق ذلك مع حدوث زيادة معنوية في SCE عند استخدام التركيزين الوسطي والعالي. وعلى العكس من ذلك ادى التركيز الواطيء الى انخفاض معنوي في SCE وبنسبة تثبيط بلغت 25 % بالمقارنة مع السيطرة (تاثير Hormetic effect ).اختلف المستخلص المائي ومركب الاولندرين في تاثيرهما الايجابي عن بقية المستخلصات اذ كانت جميع التراكيز المستخدمة منهما مؤثرة ولفترة التعريض التي امتدت من الساعة الى الـ 72 ساعة فادت الى تسريع دورة الخلية وتقدمها وازدادت قيمة RI وبشكل معنوي ولجميع التراكيز والمعاملات . شمل هذا التاثير الايجابي ايضا حدوث انخفاض في معدلات SCE معنويا وذلك عند معاملة الخلايا لمدة ساعة واحدة وبنسب تثبيط بلغت 8.33 % و16.67 % و20.83 % للتراكيز 1µg/ml و0.1µg/ml و0.01µg/ml للمستخلص المائي على التوالي و16.67 % و22.97 % و25 % للتراكيز 50 picog/ml و5 picog/ml و0.5 picog/ml لمركب الاولندرين على التوالي. وعند زيادة فترة الحضن لمدة (48 , 72) ساعة فان التركيزين الواطيء والوسطي لم يحدثت ضررا في التركيب الكروموسومي في حين ادى اما عن التاثير السمي على خطوط الخلايا التركيز العالي الى زيادة معنوية في معدل SCE بالمقارنة مع السيطرة ولنفس مدة الحضن . السرطانية فقد وصل التركيز السام للمستخلصات (المثيلي والاسيتونايترال في المثلين كلورايد والمائي) الخام القاتل لنصف عدد الخلايا السرطانية CC50 الى 14 ng/ml، 5.5ng/ml ، 21.5 ng/ml لخط Hep - 2 و19.5 ng/ml و7 ng/ml و21.5 ng/ml لخط AMN - 3 عند حضنها لوحدها من دون مزج لمدة ساعة واحدة . وقد انخفضت هذه التراكيز القاتلة لنصف عدد الخلايا عند معاملتها بالمستخلصات الخام لمدة 72 ساعة . كما اظهرت اغلب المستخلصات الخام سمية اكبر على خط خلاياHep - 2 بالمقارنة مع خط AMN - 3. اما عند استخدام مركب الاولندرين لوحده لمدة ساعة واحدة فقد انخفض التركيز السام والقاتل لنصف عدد الخلايا السرطانية CC50 الى0.54picog/ml و7.5 picog/ml لخط Hep - 2 وAMN - 3 على التوالي بالمقارنة مع المستخلصات الخام . وادى المزج بين المستخلصين الخام المائي والمثيلي ومزيج المستخلصين المثيلي والاسيتونايترايل في المثيلين كلورايد الى انخفاض التركيز السام القاتل لنصف عدد الخلايا السرطانية CC50 عند الحضن لمدتي تعريض (1 و72) ساعة بالمقارنة مع استخدام المستخلصات الخام لوحدها دون مزج ، ولكلا الخطين المستخدمين في التجربة . واظهر الفحص الخلوى بوساطة المجهر الضوئي ان لاستخدام التراكيز الواطئة من المستخلصات الخام ومركب الاولندرين قدرة حالة وسامة خلويا عند فترات الحضن الثلاث تمثلت باحداث تغيرات واضحة في نمو الخلايا السرطانية وفقدانها الشكل الخلوي المميز . بينت نتائج التحليل الكروموسومي للخط الخلوي السرطانـيHep - 2 قبل اضافة اي مستخلص الى وجود خلايا اقل من ثلاثية المجموعة الكروموسومية Hypotriploidy ( 64 كروموسوم) ولم يظهر اي انقسام خلوي عند معاملة الخلايا لساعة واحدة بالمستخلصات ولجميع التراكيز المستخدمة في التجربة .وفي التجارب البايولوجية داخل الجسم الحي in vivo فقد تم تحديد الجرعة الوسطية المميتة LD50 للفئران المختبرية وهي 168.43 mg / kg، 206.11 mg / kg و211.68 mg / kg للمستخلص المائي والمثيلي والاسيتونايترال على التوالي ولمركب الاولندرين 21.525 µg / kg . اما في التجارب العلاجية على الفئران المختبرية الحاملة لسرطان الغدة اللبنية المغروس فقد كشفت نتائج العلاج بجرعات مختلفة من المستخلص المائي الخام ان الجرعتين 16.8 mg/kgو33.6 mg/kg اظهرت ضمورا كاملا للورم بعد اعطاء الحيوان معدل 7 و10 جرع وبنسبة تثبيط بلغت 100% و99.9 % على التوالي . والجرعة الواطئة 8.4 mg/kg اظهرت اختزالا لنمو الورم بنسبة82.54 % بعد اعطاء الحيوان معدل 5 جرعات . واظهر حقن الفئران المصابة بالورم بالمستخلص المثيلي بالجرعة العالية 41.2 mg/kg ضمورا كاملا للورم وذلك بعد اعطاء الحيوان معدل 10 جرعات وبنسبة تثبيط بلغت 100% بالمقارنة مع مجموعتي السيطرة السالبة والموجبة التي استمر نمو الورم فيهما دون توقف حتى موت الحيوان . ووجد ان استخدام المستخلص بالجرعة الاوطا التي مقدارها 20.6 mg/kg اظهرت اختزالا لنمو الورم بنسبة68.612 % وذلك بعد اعطاء الحيوان معدل 18 جرعة . كما اظهر استخدام المستخلص بجرعة مقدارها 10.3 mg/kg اختزالا لنمو الورم بنسبة58.74 % وذلك بعد اعطاء الحيوان معدل 18.7 جرعة. واظهر حقن الفئران المصابة بالورم بمستخلص الاسيتونايترال الخام بالجرعة الوسطية 21.16 g/kg ضمورا كاملا للورم بعد اعطاء الحيوان معدل 11.2 جرعة وبنسبة تثبيط بلغت 96.2% . كما وجد ان استخدام المستخلص بالجرعة الاوطا التي مقدارها 10.58 mg/kg اظهرت اختزالا لنمو الورم بنسبة54.912 % وذلك بعد اعطاء الحيوان معدل 10.6 جرعة . اما استخدام المستخلص بجرعة مقدارها 42.32mg/kg فقد ادى ذلك الى اختزال لنمو الورم بنسبة62.303 % . وقد اظهرت جميع المجاميع العلاجية اطالة واضحة في فترة البقاء على قيد الحياة بالمقارنة مع مجاميع السيطرة . وقد تاثرت اوزان الفئران المختبرية بالعلاجات المستخدمة بالزيادة او النقصان وبشكل يعتمد على نوع المستخلص والجرع المستخدمة .وكشف فحص المقاطع النسيجية للورم المعالج بالجرعتين الوسطية والعليا من المستخلصات الخام عن وجود نسيج ليفي يحيط ببقايا ورم الغدة اللبنية الخبيث مرتشح بعدد من الخلايا الالتهابية وحيدة النواة . واظهرت الجرعات الواطئة وجود تنخر واسع داخل الورم الخبيث ومحاط بنسيج ليفي حبيبي حاوﹴ على الخلايا الالتهابية وحيدة النواة فضلا عن خلايا العدلات. بين الفحص النسيجي للورم المعالج بالجرعة الواطئة والوسطية من مركب الاولندرين وجود مساحات من التنخر مع ارتشاح للخلايا الالتهابية وحيدة النواة . اما العلاج بالجرعة العالية فقد اظهر الفحص المجهري وجود مساحات اوسع من التنخر مع ارتشاح كثيف للخلايا الالتهابية وحيدة النواة وخلايا العدلات. في حين بين الفحص النسيجي لورم سرطان الغدة اللبنية المغروس في الفئران والغير المعالج عن وجود مراحل متقدمة من الورم السرطاني . اظهرت هذه الدراسة ان المستخلصات الخام لاوراق نبات الدفلة من الممكن ان يكون علاجا واعدا للسرطان وتبين ذلك من سلامة استخدامها في علاج سرطان الغدة اللبنية الفاري . ايد ذلك ما اشارت اليه نتائج دراسة تاثير الجرع الواطئة من المستخلصات الخام ومركب الاولندرين في الوراثة الخلوية لخلايا نقي عظم الفئران المختبرية . اذ لم تؤدي الجرعة الواطئة من المستخلص المائي الى تغيرات مهمة احصائيا في كل من MI وBI وC.A وSCE وRIوقد ظهر تحسن في دورة الخلية بالمقارنة مع السيطرة . اما مركب الاولندرين ومستخلص الاسيتونايترايل فقد وجدت ظاهرة الـ Hormetic effect بشكل واضح اذ ادت الجرع الواطئة (العلاجية) الى تحسين دورة الخلية وتقدمها وزيادة معنوية في BI مع عدم حدوث تغيرات مهمة في كل من MI وRI رافق ذلك انخفاضا في C.A وSCE . وحصل العكس من ذلك تماما عند استخدام الجرعة العالية من كلا المعاملتين. اما الجرع المستخدمة من المستخلص المثيلي فظهر تاثيرها الايجابي في الخلية من خلال زيادة MIوBI وCCP ولكن رافق ذلك حدوث زيادة في الـC.A وSCE. | Thirty tow active components analyzed from the different crud extractions of leaves, twenty eight from different crud stems extractions, thirty six from different crud flowers extractions were also analyzed . Some of these components are diagnosis as : Oleaside E, Odorside A, Glucosylnerigoside, Nerigoside, Oleandrin, Adynerin, Olaside A.Different results found in cytotoxic assay of crude extracts & oleandrin on human lymphocyte in vitro. The non cytotoxic concentrations of methanolic extraction were : 0.01µg/mll. The concentration below it shows significance induction on mitotic index and blast index of human lymphocytes but all of higher concentration shows significance reduction on them. This biological phenomenon is called Hormetic effect or Hormesis. The non cytotoxic concentrations of acitonitrial and methelin chlorid system solvent extractions were : 1µg/ml, 0.1µg/ml and 0.01µg/ml. The non cytotoxic concentrations of aquatic extraction were : 1µg/ml, 0.1µg/ml and 0.01µg/ml and whole lower concentrations within (1, 48, 72 hr.) exposure time respectively. All of the higher concentration of these three crude extractions shows significance reduction on mitotic index and blast index of human lymphocytes. The results revealed the inhibitory effect of it by different concentration of oleandrin after (48, 72 hr.) exposure time. Hormesis phenomenon, also, had seen when exposed oleandrin to peripheral blood lymphocytes after one hour exposure time characterized by low dose stimulation, high dose inhibition of mitotic index and blast index significance. The non cytotoxic concentration was 5μg/ml.Studying the effect of crude extracts & oleandrin on human lymphocyte without mitogen (PHA) in different exposure time shows no mitosis. Using different crude extracts & oleandrin in replacement of colchicin shows some mitotic cell with high significance comparison with control.Positive effect were found in CCP by different concentration of methanolic extraction within (1, 48, hr.) exposure time and RI was arise. The higher and medium concentrations perform increased SCE significantly while the lower concentrations resulted decreased of it after (1, 48, hr.) exposure time. This Positive effect in CCP and RI was disappeared when we elongate the exposure time to 72 hr. SCE was significantly increased by the higher concentrations whereas the lower concentrations resulted decreased of it in the same exposure time. All concentrations of acetonitril show improved CCP, increased RI significantly at (48, 72 hr.) exposure time but there were different significance changes in SCE depending on concentration and exposure time. In 1 hr. exposure time, there was decreased of SCE by different concentrations while the higher and medium concentrations of extractions raise SCE within 48 hr. exposure time. The lower concentrations resulted decreased of its spontaneous level in the same exposure time. The aquatic extraction and oleandrin showed different positive effect. They were improved CCP, increased RI significantly at (1, 48, 72 hr.) exposure time by all concentrations. There was significantly decreased of SCE at the time when used different concentrations within 1 hr. exposure time. There were no significance changes in SCE when we used lowered and medium concentrations of aquatic extraction and oleandrin at (48, 72 hr.) exposure times while the high concentrations shows increased of SCE significantly.The cytotoxic assay of crude extractions & oleandrin on two cancer cell lines was studied. The result is a clear cytotoxic activity of those crude extractions & oleandrin with high significances in Hep - 2, AMN - 3 cancer cell lines during the two exposure time. CC50 of methanol, acetonitril and aqueous extraction alone was; 14 ng/ml, 5.5ng/ml and 21.5 ng/ml of Hep - 2 and : 19.5 ng/ml, 7 ng/ml, 21.5 ng/m to AMN - 3 successively within 1 hr. These CC50 was greatly decrease when arise the exposure time to 72 hr., therefore there was difference significances between them. CC50 of oleandrin was 57picog/ml and 750 picog/ml in Hep - 2 & AMN - 3 successively within 1 hr. The result suggested that Hep - 2 cell line the most sensitive cancer cell line to most of crude extracts & oleandrin.Using a mixture of methanol and aqueous crud extractions or methanol and acetonitril crud extractions show reduction of CC50 through (48, 72 hr.) exposure time comparison with extractions without mixing. Microscopic examination of cell line treated with the lower concentrations of crud extractions and oleandrin show large cytotoxic through (48, 72 hr.) exposure time, appear event different changes in morphology of cell line. The effect of crude extractions & oleandrin on chromosomal profile of human cancer cell line (Hep - 2) before treating with different concentrations exhibited a clear Hypotripolidy (64 chromosomes). There was no mitosis cell when we treated cell line (Hep - 2) with low concentrations of extractions within 1 hr. In the first in vivo experiment, LD50 of aqueous, methanol, acetonitril and oleandrin were 168.43 mg / kg, 206.11 mg / kg, 211.68 mg / kg and 21.525 µg / kg.Crud extractions and oleandrin were further used for treatment of mice bearing murine mammary adenocarcinoma system by 3 doses per extractions. Complete regression was seen in 100% of treated mice with the high and medium doses of aqueous extraction while the low doses show partial reduction with 82.54 % growth inhibition. The result indicate that there was complete regression was noted in 100 % of treated mice by high doses of methanol extraction. The low dose exhibit partial reduction with 58.74 % growth inhibition. Reduction by the medium dose was 68.612 %. Complete regression was noted in 96.2% of treated mice by medium doses of acitonitrial extraction. The low dose demonstrates partial reduction with 54.915 % growth inhibition. Reduction by the medium dose was 62.303 %. All treated groups in those experiments showed prolong in surviving. More over, this study showed different changes of adult mice weigh depending on doses.The histopathology examination of treated tumor by high & medium doses of extractions show fibrous connective tissue surrounding the remainder of mammary adenocarcinoma gland filtering with large amount of mononuclear cells and basophile. Lowe doses demonstrate large central necrosis inside malignant mammary adenocarcinoma surrounding by fibrous connective tissue filtering with mononuclear cells and basophile. Histopathology examination of treated tumor by low & medium doses of oleandrin shows area of necrosis while the high doses show large area of necrosis with mononuclear cells and basophile. None treated tumor shows strong condensation of malignant mammary adenocarcenoma cell so that it block off asini of mammary gland adenocarcenoma. No effect has been seen in other organs (heart, kidney and liver) of treated mice with low & high doses of crud extractions & oleandrin. While the liver tissue treated with high doses show bulkiness of liver cell which it recovered liver sinosaet and in another place it seems to be active, occurrence grades of necrosis cell that located around central liver vein, filtering with mononuclear cells around it. Kidney cortical shows hemorrhage from kidney artery with congestion of it in another place and filtering with mononuclear cells. This feature of histopathological examination was similar in almost experiments. This study showed that the crud extractions of Nerium oleander and oleandrin might be promise therapy for cancer; they are safe to use in adult mice. The therapeutic doses of aqueous crud extractions was non cytotoxic to boon marrow cells in mice because there was no significance changes in mitotic index, blast index, sister chromatid exchanges, replicative index and cell cycle regressions.Hormesis effect had seen by oleandrin & acitonitrial extractions time characterized by low dose stimulation, high dose inhibition of MI, BI, CCP, RI, significantly. In contrast, low dose inhibition, high dose stimulation of C.A, SCE. Different concentrations of methanolic extraction were stimulation MI, BI, CCP, RI, significantly but there was stimulation of C.A, SCE. Histopathology examination shows no effect in organs (heart, kidney and liver) of normal mice with therapeutic dose of crud extractions & oleandrin.