Share
انتاج وتوصيف Protease من بكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة من بعض الحالات السريرية وعلاقته ببعض المضادات الحيوية == Production and Characterization of Protease from Pseudomonas aeruginosa Isolated from Some Clinical Cases and its Relation with some Antibiotic Agent
Author name:
رنا مجاهد عبد الله الشويخ
Supervisor name:
سمير فتح الله سمعان | سعود رشيد العاني
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Doctorate
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3286 - p.pdf
Abstract:
جمعت (170) عينة من حالات مرضية مختلفة التي تضمنت (35) مسحة من الجروح و(47) مسحة من الحروق و(25) مسحة من حالات التهابات الاذن الوسطى فضلا عن عينات الادرار التي تضمنت (63) عينة وجمعت العينات من مستشفى الكاظمية التعليمي للمدة من 1 - 5 - 2005 ولغاية 1 - 8 - 2005 . تم تشخيص (50) عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa اذ زرعت على اوساط اغنائية وتفريقية لغرض العزل الاولي ثم اخضعت المزارع البكتيرية للفحوصات المجهرية والبايوكيميائية لغرض تشخيصها ، ثم استخدمت عدة الفحصapi20E للتشخيص النهائي لهذه العزلات ، اذ تضمنت (8)عزلات من بكتريا Pseudomonas aeruginosa (16%) من حالات التهاب الجروح ، (16) عزلة (32%) من التهابات الحروق ، (20) عزلة (40%) من حالات التهاب المجاري البولية و(6) عزلات (12%) من حالات التهاب الاذن الوسطى . اختبرت حساسية بكتريا Pseudomonas aeruginosa ضد (20) مضادا حيويا وقد اظهرت العزلات تباينا واضحا وبنسب مختلفة في مقاومتها للمضادات الحيوية . اذ اظهرت بكتريا Pseudomonas aeruginosa نسبة المقاومة(100%) تجاه مضادات الامبسلين ، الاموكسسلين ، الاموكسسلين / حامض كلافيولونك ،الكلوكساسلين والسيفازولين . بينما بلغت نسبة المقاومة لمضادات السيفاكسيم ، الكاربنسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم (98%) ، (84%) ، (80%) و(78%) على التوالي. وبلغت نسبة المقاومة لمضادات الجنتاميسين ، التوبرامايسين ، الببراسيلين ، النورفلوكساسين ، الاميكاسين والسبروفلوكساسين (52%)، (26%) ، (24%) ،(14%) ،(6%) و(4% )على التوالي . في حين اظهرت جميع العزلات لبكتريا Pseudomonas aeruginosa حساسية عالية (100%) تجاه مضادات الازترونام ، امبينيم والسيفابيم البيفلوكساسين والافلوكساسين . قدرت التراكيز المثبطة الدنيا (MICs ) للمضادات الحيوية وكانت اعلى نسبة مقاومة لمضادات الاموكسسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم . اما نسبة المقاومة لمضادات الامينوكلايكوسايد فكانت تتراوح (4 - 128) مايكرو غرام / مل للتوبرامايسين ، (4 - 256) مايكرو غرام / مل للجنتاميسين اما لمضاد الاميكاسين فكانت (4 - 128) مايكرو غرام / مل. في حين اظهرت قيم MIC حساسية عالية (100%) لمضادي السبروفلوكساسين والسيفابيم. اظهرت نتائج خلط مضادات السبروفلوكساسين مع كل من الجنتاميسين والسيفتازديم والببراسيلين نتائج مهمة في تخفيف التراكيز المثبطة الدنيا لكلا المضادين المستخدمين لوحدهما ضد هذه البكتريا . كذلك اظهرت نتائج خلط مضادي التوبرامايسين مع السيفتازديم فعالية عالية عند خلطهما معا واستعمالهما ضد بكتريا Pseudomonas aeruginosa . اظهرت (86%) من عزلات بكتريا Pseudomonas aeruginosa قابليتها على انتاج انزيم البروتييز . اظهرت النتائج تاثر انزيم البروتييز الخام ببعض المضادات الحيوية التي ادت الى انخفاض في فعالية الانزيم عند زيادة تركيز هذه المضادات . كانت الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتييز عند استخدام وسط لوريا عند رقم هيدروجيني(8) ولمدة(48) ساعة من الحضن بدرجة حرارة(35) م º . نقي انزيم البروتييز من العزلة Pseudomonas aeruginosa PsaW2 باستخدام كروماتوغرافيا التبادل الايوني DEAE - celluloseوكروماتوغرافيا الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100. قدر الوزن الجزيئي للانزيم المنقى بطريقة الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100 وكان (21379 ) دالتون ، وبلغت درجة الحرارة المثلى لفعالية البروتييز (35) م º والرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية وثبات الانزيم كانت (8) . اوضحت نتائج تاثير بعض المثبطات والعوامل المختزلة والكلابية في فعالية الانزيم ، ان فعالية الانزيم قد ازدادت عند معاملته بايونات Ca++ وZn ++ مما يدل انها تلعب دورا في تحفيز وثبات الانزيم ، ولم تثبط فاعلية الانزيم بوجود العوامل المختزلة مثل السستين ، بينما تثبط فعالية الانزيم بوجود العوامل الكلابية EDTA . اظهر انزيم البروتييز المنقى من بكتريا Pseudomonas aeruginosa فعالية عالية عند خلطه مع مضادي الفانكومايسين والسيفازولين في علاج التهابات العيون في الارانب والمتسبب عنها بكتريا Staphylococcus aureus . | One - hundred and seventy swab samples were collected from different cases including (35) wound and (47) burn infection , (25) otitis media and (63) samples from urinary tract infections from Al - Kadhymia Teaching Hospital in Baghdad city . The study period was from 1 - 5 - 2005 to 1 - 8 - 2005 . Fifty isolates of Pseudomonas aeruginosa were identified using different microscopical , cultural characteristics and biochemical tests . Final identification of bacteria were performed by using api20E system. The isolates were 8(16%) from burn infections , 20(40%) isolates from urinary tract infections , 16(32%) isolates from burn infections and 6(12%) isolates from otitis media . The sensitivity of Pseudomonas aeruginosa isolates was been tested against (20) antibiotics showed isolates version resistance with different percentage against antibiotics .Pseudomonas aeruginosa exhibited (100%) resistance to Ampicillin , Amoxycillin , Amoxycillin / clavulanic acid, cloxacillin and cefazolin .While percentages of resistance to cefixime , carbencillin, cefotaxime and ceftazidime were (98%) ,(84%) ,(80%) and ( 78%) respectively .Resistance percentages to Gentamicin ,Tobramycin , Piperacillin , Norfloxacillin , Amikacin and Ciprofloxacine were (52%),(26%),(24%),(16%),(14%)and(4%) respectively. All isolates of Pseudomonas aeruginosa were highly sensitive (100%) to Aztronam , imipenem , cefepime , P - ofloxacin and ofloxacin . Minimum inhibitory concentrations of Amoxycillin , cefotaxime , ceftazidime and piperacillin showed higher percentage of resistance . While resistance to aminoglycoside antibiotics including Tobramycin was (4 - 128) μ g / ml , Gentamicin was (4 - 256) μ g / ml and Amikacin was (4 - 128) μ g / ml . On the other hand , all bacterial isolates were susceptible (100%) to Ciprofloxacine and Cefepime . Combinations of Ciprofloxacine with Gentamicin , ceftazidime and piperacillin gave interesting results against the local bacterial isolates in reducing their MIC values . Tobramycin and ceftazidime gave an obvious decrease in MIC values after combination of these drugs and used against Pseudomonas aeruginosa . A (86%) of the isolates of Pseudomonas aeruginosa have ability to produce protease enzyme . Enzyme activity was affected by some antibiotics . This activity was reduced with increasing the concentrations of these antibiotics . The optimum conditions for protease production were in LB medium with a pH (8) after (48) hrs of incubation at (35) C . Purification of the protease was done using ion exchange chromatography DEAE - cellulose and gel filtration with sephadex G - 100 . Molecular weight of the purified protease was measured by sephadex G - 100 and it was found to be around (21379 ) Dalton . The optimum temperature of enzyme activity was (35) C . However , the pH (8) was for activity and stability of this enzyme . Zn++ and Ca++ ions may play a role in the enhancement and stability of the enzyme . Enzyme activity was not inhibited in the presence of reducing agent such as Cysteine , but it was inhibited in the presence of EDTA . Pseudomonas aeruginosa purified enzyme shows a high activity when combined with Vancomycin and cefazoline and used for the treatment of the eye infection in rabbits caused by Staphylococcus aureus .
