الصفحات الاولى:

اسم المؤلف: مهـند كـريم عنيد الساعدي

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: نورية عبد الحسين علي

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: التقنيات الاحيائية

الدرجة: ماجستير

اللغة: الانكليزية

السنة: 2013

مكان الجامعة: بغداد

الصفحات الاولى:

دراسة تاثير بعض العوامل البيئية والمطهرات على التصاق بكتريا Proteus vulgaris على بعض الاسطح صلبة Study The Effect of Certain Ecological Factors and Disinfectants on Proteus vulgaris Adherence to Certain Solid Surfaces

اسم المؤلف: منال سلمان محمد كسار

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: رشيد محجوب مصلح

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - البكتريا

الدرجة: ماجستير

اللغة: الانكليزية

السنة: 2011

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: جمعت 430عينة سريرية ونماذج بيئية للفترة من تشرين الاول 2009 لغاية اذار 2010 من عدد من مستشفيات بغداد بواسطة مسحات قطنية معقمة ومغلقة. جمعت 220 عينة سريرية شملت الادرار ومسحات الجروح ومسحات للاذن وخراج الكبد ; وجمعت 210 نموذج من بيئة المستشفيات شملت والارضيات والجدران واسرة المرضى ووحدات العناية المركزة وغرف الاطفال الخدج والهواء عن طريق فتح الاطباق المحتوية وسط اكار المكونكي لمدة دقيقة واحدة . تبعا للصفات المظهرية والاختبارات الكيموحيوية تم الحصول على 32 عزلة شخصت لجنس Proteus التي تم غربلتها وحددت العزلة الاكفا انتاجا للطبقة اللزجة) (slime layer ودراسة تاثير قيم مختلفة من الحرارة والاس الهيدروجيني على نمو هذه البكتريا ودراسة عملية التصاق هذه البكتريا على الاسطح الصلبة وتاثير الحرارة والمطهرات على عملية الالتصاق وعمل دمج بين المطهرات الكيمائية وتاثيرها على الالتصاق . ونتائج هذه الدراسة يمكن ان تلخص بما يلي : - 1.اظهرت النتائج اعتمادا" على الاختبارات الكيمو حيوية و20E system - APIان نسية عزل بكتريا Proteus spp. كانت11,3% للعزلات السريرية بواقع 25 عزلة من مجموع 220 عينة سريرية واكثر عدد عزلات كان من الادرار)13عزلة ) بينما كانت نسبة العزلات البيئية 3, 3 % فقط بواقع 7 عزلات من مجموع 210 نموذج بيئي اخذ من مواقع مختلفة من بيئة المستشفيات واكثر عدد عزلات من وحدة العناية المركزة(3 عزلات). النوعين P. mirabilis وP. Vulgaris هما النوعان السائدان وp. mirabilis ذات نسبة عزل اكثر في العينات السريرية والنماذج البيئية حيث تشكل 87% بينما P. vulgaris فقط 13% من عزلات Proteus .. 2اختبرت كل العزلات عن قابليتها على انتاج الطبقة اللزجة (Slime layer) بطريقة احمر الكونكو(Congo red agar method) وطريقة كريستينس (Christensen method) واظهرت النتائج بان جميع العزلات التابعة للنوع Proteus vulgaris كانت منتجة للطبقة اللزجة بكلا الطريقتين في حين كانت جميع العزلات التابعة للنوع P. mirabilis غير منتجة للطبقة اللزجة بكلا الطريقتين . 3. العزلة الاكفا في انتاجها للطبقة اللزجة والاجدر في اختيارها لاجراء باقي تجارب الدراسة من بين عزلات بكتريا P. vulgaris هي العزلة (U3) المعزولة من عينة الادرار .4. درجة حرارة المثلى لنمو بكتريا P. vulgaris (U3) كانت 37° ﻢ في حين ان الاس الهيدروجيني الامثل كان7 .5.عن طريق اجراء اختبار الفة البكتريا للزايلين تم قياس قيمة صفة الاسطح الكاره للماء لعزلات P. vulgaris وقد تراوحت القيم 42 - 50 % الذي يعنني امتلاك جميع العزلات سطوح كارهة للماء.6.عن طريق اجراء دراسة مقارنة عن قابلية بكتريا P. vulgaris (U3) في الالتصاق على ثلاثة سطوح صلبة (stainless steel, polyurethane and glass surface )المستخدمة في تصنيع العدد الطبية والجراحية فقد اظهرت نتائج الدراسة ان سطح الفولاذ المقاوم للصدا (stainless steel ) كان اكثر السطوح جذبا للبكتريا يليه سطح البولي يوريثين بينما كانت السطوح الزجاجية الاقل جذبا للبكتريا عند درجة حرارة 37° ﻢ. 7. لوحظ زيادة في قابلية البكتريا في الالتصاق على السطوح الصلبة عند درجة حرارة 4 ° ﻢ وعند 40° ﻢ مقارنة مع التصاق هذه البكتريا على نفس السطوح عند درجة حرارة 37° ﻢ.8.كانت قيم التراكيز المثبطة الدنيا للمطهرات (MIC) لبكتريا P. vulgaris (U3) كالاتي : 400 مايكروغرام ⁄مللترللمطهر الكيميائي صوديوم هايبوكلورات و1500 مايكروغرام ⁄مللتر للمطهر الكيميائي اليود و230 مايكرو غرام ⁄ مللتر للمطهر الكيميائي الديتول واخيرا السافلون الذي كانت قيمة التركيز المثبط الادنى له 90 مايكرو غرام ⁄ مللتر في حين اظهرت النتائج بان المطهر الكيميائي صوديوم هايبوكلورايت كان اكفا مطهر من بين المطهرات الاربع في قابليته في ازالة البكتريا الملتصقة على الاسطح الثلاثة الصلبة يليه اليود ثم الديتول واخيرا السافلون عند التركيز المثبط الادنى لهذه المطهرات 9. اظهرت نتائج خلط المطهرات بان جميع حالات الدمج بين المطهرات الكيميائية كانت اكفا في ازالة البكتريا لملتصقة على الاسطح الثلاثة الصلبة مقارنة بالمطهر الكيميائي الديتول والسافلون عند استخدامهما بصورة منفردة باعتبار ان هذين المطهرين الاقل كفاءة في ازالة البكتريا الملتصقة على الاسطح الصلبةوكفا حالات خلط المطهرات فكان .½ MIC of povidone - iodine +½MIC of savlon. : | From October 2009 to March 2010 ,430 specimens and samples were collected from different Baghdad s' hospitals using aseptic capped cotton swabs submerged in sterile nutrient broth. The clinical specimens were two hundred twenty included urine ,ear swabs ,wound swabs ,vaginal swabs and liver abscess, while ,the samples were two hundred ten collected from hospitals' environment included tables ,beds ,floors, walls ,infantsʹrooms and air by open the dish that contain MaCconkey agar for one min .According to morphological characteristics and biochemical tests 32 of Proteus isolates were obtained. All isolates were tested for slime layer producing . The more efficient isolate to produce slime layer was chosen to study effect of different values of temperature and pH on the growth of Proteus ,the ability of Proteus to adhere to three solid surfaces ( stainless steel , polyurethane and glass surface ) and study the effect of different values of temperature and four chemical disinfectants(separate and in combination) on adherence process. The results of this study could be summarized as follows : 1.Depending on the biochemical tests and API 20 E system results, Proteus spp. represent 11.3% of microorganisms isolated from clinical specimens and only 3.3% of microorganisms isolated from environmental samples. Proteus mirabilis and Proteus vulgaris were the dominant Proteus species, P. mirabilis was the highest Proteus spp. isolation percentage among the clinical specimens and hospitals' environment samples which was 87 %; while P. vulgaris was only 13% of Proteus spp.The urine gave the highest isolation number among clinical specimens( 13 Proteus isolates) , whereas intensive care unit (ICU) gave the highest isolation number among hospitals' environment samples(3 Proteus isolates). 2. All the Proteus isolates were tested for production of slime layer by Congo red agar and Christensen method. The results showed that all of P. vulgaris isolates gave positive results for two methods whereas all of P. mirabilis isolates showed negative result for two methods.3. P. vulgaris (U3) was the most slime layer producing among P. vulgaris isolates so it was selected for further experiments.4.The effect of different temperature values and pH values on P. vulgaris (U3) showed that optimum growth temperature was 37°C and the optimum pH for growth was 7.5. By using affinity of bacteria to xylene test ,the P. vugaris isolates were tested for measuring hydrophobicity cell surface .The results showed that the values of hydrophobicity test ranged 42 - 50% which meant that all isolates of P. vulgaris had hydrophobic cell surface.6. Comparing study of the ability of P. vulgaris(U3) to adhere on three solid surface materials used for manufacturing of medical ,surgery and health care devices,it was stated in this study that the stainless steel was the most attractive surface to the bacteria followed by polyurethane while the least ability to attract the bacteria was glass surface at 37°C.7. P. vulgaris(U3) adherence on solid surface was observed at the low temperature 4°C and high temperature 40°C better than at 37°C.8. The MIC values of chemical disinfectants for P. vulgaris were as follows bleach was 400µg/ml, iodine solution 1500µg/ml , dettol 230µg/ml and savlon was90µg/ml. and the bleach at MIC concentration was the most efficient disinfectants than other disinfectants in its ability to remove the adherent bacteria on three solid surfaces followed by iodine solution ,dettol then savlon.9 .The results of disinfectants combination showed that all the combinations were more efficient in removing of adherent bacterial cells than dettol and savlon when they were used alone and the combination between ½MICof iodine solution + ½MICof savlon was the most efficienty to remove adherent bacteria on solid surface than other combinations.

الصفحات الاولى:

انتاج انزيم الاميليز من بكتريا Bacillus licheniformis Bs7 وتقييد الخلايا المنتجة له بالاقتناص والامتزاز Production of amylase from Bacillus licheniformis Bs7and immobilization of the producing cells by entrapment and adsorption

اسم المؤلف: مريم باسم انيس

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: سناء برهان الدين

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - البكتريا

الدرجة: ماجستير

اللغة: الانكليزية

السنة: 2011

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: تم الحصول على 50 عزلة عائدة لجنس Bacillus من مصادر بيئية مختلفة شملت التربة ,الماء والغذاء. اختبرت قدرة هذه العزلات على انتاج انزيم الاميليز, وبينت نتائج الغربلة على ان العزلة Bacillus Bs7 المعزولة من التربة هي الاغرز انتاجا والتي شخصت على انها احدى سلالاتBacillus licheniformis.درست الظروف المؤثرة في انتاج الاميليز, ولوحظ ان اعلى انتاجية تكون عند زرع البكتريا في وسط S.Y.P. الحاوي على 1%نشا,0.2% مستخلص الخميرة, 0.5% ببتون, 0.4% كبريتات المغنيسيوم, 0.05% كلوريد الصوديوم و0.015% كلوريد الكاليسيوم, برقم هيدروجيني 7 وحضنها بدرجة حرارة 50م لمدة 48 ساعة في حاضنة هزازة بسرعة 150 دورة/دقيقة.رسب انزيم الاميليز بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع 70% وكانت الففعالية نوعية 540 وحدة/ملغم بروتين بعدد مرات تنقية 1.2وبحصيلة انزيمية مقدارها48%.تم تقييد خلايا B. licheniformis Bs7 وانزيم الاميليز المنقى جزئيا بتقنية الاقتناص (Entrapment) داخل الجينات الكاليسيوم والاكار وعديد الاكريلامايد وتبين ان الخلايا المقيدة داخل الجينات الكاليسيوم احتفظت ب110% من الفعالية الانزيمية بعد مرور 5 دقائق من زمن التفاعل يليها الاكار ثم عديد الاكريلامايد بفعالية متبقية 75%و 61% على التوالي مقارنة مع الخلايا الحرة التي امتلكت فعالية انزيمية 94% بعد مرور5 دقائق من زمن التفاعل كما احتفظت الخلايا المقيدة داخل الجينات الكاليسيوم ب 50% من فعاليتها الانزيمية بعد مرور 60 دقيقة من زمن التفاعل في حين احتفظت الخلايا الحرة ب 37% من فعاليتها بنفس الوقت. اما الانزيم المقيد داخل الجينات الكاليسيوم فقد احتفظ ب 85% من فعاليته الانزيمية بعد مرور 5 دقائق يليه الاكار 70% ثم عديد الاكريلامايد 50% مقارنة مع الانزيم الحر حيث احتفظ بفعالية انزيمية قدرها 79%.تم تقييد خلايا B. licheniformis Bs7 بطريقة الامتزاز (Adsorption) على السطوح الصلبة لمواد مختلفة شملت الفحم والقطن والنايلون ونشارة الخشب وعديد استارين والسيفاديكس G - 150, ثنائي اثيل امينو اثيل Sephadex - DEAE.احتفظت الخلايا المقيدة بنشارة الخشب باعلى فعالية انزيمية بلغت 128% عند حضنها بدرجة حرارة 50م لمدة 5 دقائق و79% عند حضنها لمدة 30 دقيقة بالمقارنة مع الخلايا الحرة والتي امتلكت فعالية انزيمية 87% و40% على التوالي في الظروف نفسها.وجد ان درجة الحرارة 50م هي الدرجة الحرارية التي تظهر اعلى فعالية الخلايا المقيدة بنشارة الخشب حيث احتفظت ب 125% من فعاليتها الانزيمية بعد مرور 5 دقائق مقارنة بالخلايا الحرة والتي امتلكت فعالية انزيمية 88% بعد مرور 5 دقائق.وعند تعرض الخلايا المقيدة بنشارة الخشب لدرجات حرارية مختلفة تراوحت بين 40 - 70 م لوحظ ان الخلايا المقيدة احتفظت ب 123% من فعاليتها بدرجة 60 م و97% بدرجة 70م في حين كانت هذه النسبة للخلايا الحرة 94% و70% على التوالي.وكان افضل رقم هيدروجيني للمحافظة على فعالية الخلايا المقيدة بنشارة الخشب هو 7 حيث بقت الخلايا المقيدة محتفظة ب 129% من فعاليتها في حين احتفظت الخلايا الحرة ب 90%.جرى استخدام الخلايا المقيدة بنشارة الخشب لثمان دورات. حيث لوحظ امكانية اعادة استخدام الخلايا المقيدة للدورات الثلاثة الاولى بفعالية متبقية مقدارها 95% و49% للدورات الثلاثة الاخرى وانخفضت الفعالية الى 30% في الدورة الثامنة.اختبرت قابلية الخلايا المقيدة بنشارة الخشب على ازالة البقع من الالبسة حيث لوحظ ان استخدام الخلايا المقيدة مع المنظفات افضل في ازالة البقع عن الالبسة من المنظفات لوحدها. | Fifty isolates belong to Bacillus spp. were isolated from different sources including soil, water and food. The ability of amylase production by these isolates was screened. Bacillus Bs7 which isolated from soil was the highest amylase producer; it was identified as a strain of Bacillus licheniformis. Optimal condition for α - amylase production were studied and the highest production of amylase was obtained when the bacteria were cultured in S.Y.P medium which contained 1% starch, 0.2% yeast extract, 0.5% peptone, 0.05% Mgso4 , 0.05% Nacl and 0.015% Cacl2 at pH 7 and incubated at 50˚C in shaking incubator at 150 rpm for 48hrs. Amylase was extracted by 70% ammonium sulphate precipitation and the specific activity was 849 u/mg protein. B. licheniformis Bs7 cells and partially purified amylase were immobilized by entrapment methods in calcium alginate, agar and polyacrylamide. The immobilized cells into calcium alginate retained 110% of enzyme activity after 5 minutes followed by agar and polyacrylamide with remaining activity 75% and 61%, respectively when compared with the free cells that have enzyme activity of 94% after the same time. Immobilized cells into calcium alginate retained 50% of enzyme activity after 60 min while free cells had remaining activityof 37% after the same time. Amylase that immobilized into calcium alginate retained 85% of enzyme activity after 5 min followed by agar and polyacrylamide that retained 70% and 50% of enzyme activity respectively, compared with the free enzyme with remaining activity of 79%. B. licheniformis Bs7 cells were immobilized by adsorption method on solid surfaces of different carriers including charcoal, cotton, nylon, sawdust, polystyrene, sephadex G - 150 and DEAE - sephadex. The immobilized cells on sawdust showed maximum enzyme activity of 128% when incubated at 50˚C for 5 min and 79% after 30 min incubation compared with free cells that showed 87% and 40% enzyme activity respectively at the same times. Optimum temperature for the activity of immobilized cells on sawdust was 50˚C which had 125% of enzyme activity after 5 min compared to free cells with remaining activity of 88% after the same time. Immobilized cells on sawdust when incubated at different temperatures ranged between 40 - 70˚C for 5 min, revealed that the immobilized cells had retained 123% of activity at 60˚C and 97% at 70˚C compared to the free cells which retained 94% and 70% at the two temperatures respectively. The optimum pH that kept the activity of immobilized cells on sawdust was 7 with remaining activity of 129% while free cells kept 90% of activity at this pH value. The immobilized cells on sawdust were repeatedly used for 8 cycles. The immobilized cells showed the maximum enzyme activity during the first three cycles with remaining activity of 95%, and 49% for the second three cycles; the remaining activity was reduced to 30% in eighth cycle. The ability of immobilized cells on sawdust to remove the stains from clothes was tested. The results showed that the ability of immobilized cells with detergents for removing stains was better than detergent alone.

الصفحات الاولى:

تكون الغشاء الحيوي بوساطة Klebsiella pneumoniae الملوثة للمثبتات الخارجية ومقاومته لمضادات الحياة Biofilm Formation by The External Fixators Contaminating Klebsiella pneumoniae and Its Antibiotic Resistance

اسم المؤلف: مروى حميد مطشر الخفاجي

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: مي طالب فليح

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية

الدرجة: ماجستير

اللغة: العربية

السنة: 2008

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: شخصت 98 عزلة بكتيرية منماة بظروف هوائية من مجموع 100 عينة سريرية ماخوذه من الاخماج المصاحبة للمثبتات الخارجية المستعملة في جراحة العظام والكسور. شكلت البكتريا السالبة لملون غرام اعلى نسبة 51% (50 عزلة) من المجموع الكلي للعزلات، في حين شكلت البكتريا الموجبة لملون غرام 49% (48 عزلة) منها ، وكانت بكتريا Klebsiella pneumoniae هي المسبب الاكثر شيوعا لهذه الاخماج اذ عزلت بنسبة 74% (37 عزلة) من المجموع الكلي للعزلات السالبة لملون غرام . اجري اختبار حساسية عزلات K. pneumoniae لمضادات الحياة ، وتبين ان العزلات جميعها كانت حساسة لمضاد Amikacin (100%) ، ومقاومة للمضادات : Ampicillin ، وCefalexine ، وCefalothin ، وCefotaxime ، وCiprofloxacin ، وRifampin بنسبة 100% ، وقد كانت نسبة مقاومتها لمضادات Ceftazidime ، وStreptomycin ، وTobramycin ، وGentamycin ، وNeomycin ، وNitrofurantoin ، وNorfloxacin ، وTetracycline ، وNalidixic acid 94.5% و86.5% و86.5% و67.5% و59.5% و37.8% و35.1% و32.5% و24.3% وعلى التوالي . تم تحديد التراكيز المثبطة الدنيا لعزلات بكتريا K. pneumoniae لمضادات الحياة Cefotaxime ، وCeftazidime ، وNalidixic acid ، وAmikacin فبلغت 1024 مايكروغرام/مليليتر، و128 مايكروغرام/مليليتر، و64 مايكروغرام/مليليتر، و16 مايكروغرام/مليليتر على التوالي للعزلة K13 ، و1024 مايكروغرام/مليليتر، و64 مايكروغرام/مليليتر، و16 مايكروغرام/مليليتر، و4 مايكروغرام/مليليتر على التوالي للعزلة K51 . كما تم تحديد التراكيز القاتلة الدنيا لهذه المضادات وتراوحت مابين اكثر من 1024 مايكروغرام/مليليتر، و1024 مايكروغرام/مليليتر، و128 مايكروغرام/مليليتر، و32 مايكروغرام/مليليتر، على التوالي للعزلة K13 ، واكثر من 1024 مايكروغرام/مليليتر، و256 مايكروغرام/مليليتر، و32 مايكروغرام/مليليتر، و8 مايكروغرام/مليليتر على التوالي للعزلة K51. تم التحري عن قابلية عزلات K. pneumoniae على انتاج الطبقة اللزجة ، واظهرت نتائج طريقة الفحص بالانابيب ان 83.8% (31عزلة) كانت منتجة للطبقة اللزجة ، في حين اظهرت طريقة احمر الكونغو ان 97.3% (36عزلة) كانت منتجة للطبقة اللزجة . تم التحري عن فوعة عزلات K. pneumoniae المعزولة من الاخماج المصاحبة للمثبتات الخارجية وذلك باختبار قابليتها لربط البنفسج البلوري وكانت العزلات جميعها فائعة (Virulent) . اختبرت قدرة عزلات K. pneumoniae على انتاج الغشاء الحيوي باستخدام اطباق المعايرة الدقيقة فاظهرت النتائج ان العزلات جميعها كانت منتجة للغشاء الحيوي لكن بدرجات سمك متفاوتة ، وتراوحت قيم الامتصاصية مابين (0.111 - 2.899)، وكانت العزلة K13 هي العزلة الاكثر فعالية في انتاج الغشاء الحيوي حيث سجلت اعلى قيمة امتصاصية 2.899 . اختبر تاثير التراكيز تحت المثبطة الدنيا من مضادات الحياة Cefotaxime ، وCeftazidime ، وNalidixic acid ، وAmikacin في الاغشية الحيوية المتكونة بفعل العزلتين K13وK51 في اطباق المعايرة الدقيقة باعمار مختلفة 24 ساعة و48 ساعة ، واظهرت النتائج ان هذه التراكيز ثبطت التصاق البكتريا على سطح البولي ستيرين مما ادى الى انفصال الغشاء الحيوي ، كما تبين ان الاغشية الحيوية الاقدم اكثر مقاومة للعوامل ضد الميكروبية . تم تحديد التراكيز المثبطة الدنيا للغشاء الحيوي واظهرت النتائج انها اكبر بثلاث او اربع مرات من التراكيز المثبطة الدنيا لعزلات K. pneumoniae العالقة في الوسط الزرعي | Out of 100 clinical samples taken from infected external fixation devices used in orthopedic surgery 98 bacterial isolates grown in aerobic conditions had been diagnosed. The higher ratio 51% (50 isolates) of the total number of the isolates occupied by gram negative bacteria while gram positive bacteria represented the rest 49% (48 isolate) , Klebsiella pneumoniae was the most common aetiological agent of these infections which accounted 74% (37 isolates) of the total number of gram negative bacterial isolates. The sensitivity test against different antibiotics was done. It was found that all K. pneumoniae isolates (100%) were sensitive to Amikacin and resistant to Ampicillin, Cefalexine, Cefalothin, Cefotaxime, Ciprofloxacin, and Rifampin . While their resistance percetage to the antibiotics Ceftazidime, Streptomycin, Tobramycin, Gentamycin, Neomycin, Nitrofurantoin, Norfloxacin, Tetracycline, and Nalidixic acid were 94.5% , 86.5% , 86.5% , 67.5% , 59.5% , 37.8% , 35.1% , 32.5% , 24.3% respectively. Minimum inhibitory concentrations to K. pneumoniae isolates had been determined for the antibiotics Cefotaxime, Ceftazidime, Nalidixic acid, and Amikacin , they were 1024 Mcg/ml , 128 Mcg/ml , 64 Mcg/ml , and 16 Mcg/ml respectively for the isolate K13 , and they were 1024 Mcg/ml , 64 Mcg/ml, 16 Mcg/ml, and 4 Mcg/ml respectively for the isolate K51. Minimum bactericidal concentrations for the same antibiotics had been estimated and they were higher than 1024 Mcg/ml, 1024 Mcg/ml, 128 Mcg/ml, and 32 Mcg/ml respectively for K13 isolate, and higher than 1024 Mcg/ml, 256 Mcg/ml, 32 Mcg/ml, and 8 Mcg/ml respectively for the isolate K51. The ability of K.pneumoniae isolates to produce slime layer was detected , the results revealed that 83.3% (31 isolates) were slime layer producers by tube method, while 97.3% (36 isolates) were slime producers by congo red method. The virulence of K.pneumoniae isolates isolated from external fixators infections had been detected via detection the crystal violet binding ability of these isolates, all the isolates were virulent. The ability of K.pneumoniae isolates to produce the biofilm had been tested by using microtiter plates , results revealed that all the isolates were biofilm producers with different thickness degrees, absorbance values rendered between (0.111 - 2.899) , K13 was the best biofilm producer isolate, it,s absorbance value was 2.899 . The effect of subinhibitory concentrations of the antibiotics Cefotaxime, Ceftazidime, Nalidixic acid, and Amikacin , on biofilms formed by K13 and K51 isolates in microtiterplates in different ages , 24 hr and 48 hr had been tested , results revealed that these concentrations inhibited bacterial adhesion on polysteren surface and consequently causes biofilm detachment , also it was demonstrated that aged biofilms are more resistant to antimicrobial agents . Minimum inhibitory concentrations for the biofilm had been estimated, and the results revealed that these concentrations were three to four times higher than minimum inhibitory concentrations for the planktonic K.pneumoniae isolates.

الصفحات الاولى:

دراسـة الاستجابة المناعيـة للاشخاص بعد تلقيحهم بلقاح الحصبـة الالمانية Immune - status of Individuals after Immunization with Rubella vaccine

اسم المؤلف: ليلى فؤاد علي

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: غنيمة صادق محمد

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية

الدرجة: ماجستير

اللغة: العربية

السنة: 2005

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: بدا برنامج التلقيح الموسعExpanded programme on immunization(EPI) في العراق عام 1985وبتوجيه من منظمة الصحة العالمية وبضمنه لقاح الحصبة الالمانية في برنامج التلقيح الاعتيادي للاطفال وبعمر 15شهر بهدف القضاء على مرض متلازمة الحصبة الالمانية الولادية نظرا لما يسببه هذا المرض من اضرار كبيرة في الجنين حيث قد يولد الطفل المصاب مشوه وقد تؤدي الاصابة بحياته الى الموت (Laura & Susan,2002). شملت الدراسة (116) عينة دم ماخوذة من اشخاص اصحاء ،كان منها 30 عينة دم لاطفال اصحاء بعد اسبوعين من تلقيحهم بلقاح الحصبة الالمانية حسب الجدول التلقيحي المتبع في القطر وقد تراوحت اعمارهم مابين (18 - 20) شـهر ، و20 عينة دم لاناث تراوحت اعمارهن مابين(12 - 15) سنة بعد اسبوعين من تلقيحهن بلقاح الحصبة الالمانية . اما مجموعة السيطرة فتضمنت 12 عينات دم لاطفال و10 عينات لاناث بعمر (12 - 15) سنة لم يتلقوا لقاح الحصبة الالمانية . هذه العينات اجريت لها الاختبارات المناعية لتقييم الاستجابة المناعية الخلطية والخلوية للقاح الحصبة الالمانية.كما تضمنت الدراسة 44 عينة دم لاشخاص ملقحين منها 22 عينة كانت نتائج فحص تثبيط التلازن الدموي لها موجبة و22 عينة كانت نتائج فحص تثبيط التلازن الدموي لها سالبة ، تم اختبار هاتين المجموعتين باختبار الادمصاص المناعي المرتبط بالانظيم (ELISA) لمعرفة العلاقة بين الفحصين والحساسية والنوعية لفحص (ELISA)نسبة الى فحص تثبيط التلازن الدموي . في هذه الدراسة تم قياس الاستجابة المناعية الخلطية وذلك بقياس تركيز الاضداد النوعية للحصبة الالمانية ، بالاضافة الى تقدير التركيز الكلي للكلوبيولينات المناعية صنفA وM وG.كما تضمنت الدراسة قياس الاستجابـة لمناعية الخلوية وذلك بقياس قابلية الخلايا البلعمية على البلعمة ،وقياس قابلية الخلايا اللمفاوية التي تم تحفيزها بالملزن النباتي (PHA) على التحول والانقسام . من خلال هذه الدراسة تم الحصول على النتائج التالية : - 1 - اظهرت مصول الاطفال نسبة 96.7 % ،واظهرت مصول الاناث نسبة 95 % تراكيز فعالة من الاجسام المضادة النوعية للحصبة الالمانية اعلى من 11وحدة عالمية \مليلتر باختبار الادمصاص المناعي المرتبط بالانظيم ELISA بعد عملية التلقيح .2 - اظهرت مجموعتي الاطفال والاناث الملقحين انخفاض في اجمالي الكلوبيولين المناعي صنف GوAوبفروق معنوية (p<0.05) ( p>0.05 ) مع ارتفاع في الكلوبيولين المناعي صنف Mوبفروق معنوية عالية(p<0.01) مقارنة بمجموعتي السيطرة .3 - وجد من خلال فحص النسبة المئوية لعملية البلعمة ان كل من الاطفال والاناث الملقحين اظهروا ارتفاعا في النشاط الالتهامي للخلايا البلعمية وبفروق معنوية (p<0.05) مقارنة بمجموعتي السيطرة .4 - اظهرت نتائج فحص التحول والانقسام اللمفاوي ان هناك انخفاض غير معنوي ( p>0.05 )في مجموعتي الاطفال والاناث الملقحين مقابلة بمجموعتي السيطرة . 5 - لا توجد فروق معنوية في الاستجابة المناعية الخلطية والخلوية بين مجموعة الاطفال الملقحين ومجموعة الاناث الملقحات ( p>0.05 ) .6 - وجد ان فحص الادمصاص المناعي المرتبط بالانظيم هو اكثر حساسية من فحص تثبيط التلازن الدموي في قياس تركيز الاجسام المضادة النوعية للحصبة الالمانية ،وعليه فهو الافضل في تقييم الاستجابة المناعية للقاح الحصبة الالمانية .7 - وجد ان هناك علاقة ايجابية قوية بين فحصي الادمصاص المناعي المرتبط بالانظيم وتثبيط التلازن الدموي في قياس تركيز الاجسام المضادة النوعية للحصبة الالمانية حيث كانت قيمة ( r = 0.585 ) . | The Expanded Programme on Immunization (EPI) began in Iraq in 1985, including Rubella vaccine. MMR vaccine is represent one of combined vaccines of rubella ,measles and mumps that given for children at age of 12 - 15 months. Vaccination with rubella vaccine is the best way to eradicate Congenital Rubella Syndrome which have severe complications for women in their first trimester of pregnancy These complications include severe birth defects or death of the fetus. In this study, (116) blood samples were taken from healthy individuals after 2 - 4 weeks after vaccination with rubella vaccine .(30) from children of age (12 - 18) and (20) from females at age of (12 - 15) years old . Control group included (12) healthy children and (10) healthy females ,both did not have rubella vaccine through their life .These samples were tested to evaluate the immune - states of individuals after immunization . the study include (44) blood samples tested by HItest and ELISA test . In this study specific haemagglutination antibodies & IgM antibodies were measured ,total Immunoglobulines IgM ,IgG ,IgA also determined .Lymphocyte transformation and ability of phagocyte cell to phagocytosis were measured. The following results were obtained in this study : 1. The percentage of children whom observed levels of specific antibodies ≥ 11AU/ml was 96.7% and 95% by ELISA test for children and females groups respectively after vaccination .2. The decreasing total of IgG and IgA with the increasing of IgM in both groups of children and females with significant differences (p>0.05) (p>0.05) (p<0.01) receptively comparison with control group.3. The increasing percentage of phagocytic cell to phagocytosis in both groups of children and females in significant differences (p<0.05) comparison with control group .4. The decreasing percentage of lymphocyte transformation in both children and females groups in non significant differences (p>0.05) comparison with control group .5. The non significant differences in humoral and cellular immune Response between child and female groups .6. The higher sensitivity of ELISA test to HI test in determination of rubella specific antibodies , so it is better than HI test in measuring the immune - status of individuals vaccinated with rubella vaccine .7. A positive relationship between ELISA test and HI test (r= 0.585) .

الصفحات الاولى:

الاستخلاص والتنقية الجزئية للخملة من بكتريا Proteus mirabilis ودراسة دورها في الالتصاق على الخلايا الطلائية البولية Extraction and Partial Purification for Fimbriae from Proteus mirabilis and Study Their Role in Adhesion to Uroepithlial Cells

اسم المؤلف: عامر سعيد علي الكعبي

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: مي طالب فليح

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - البكتريا

الدرجة: ماجستير

اللغة: العربية

السنة: 2007

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: تضمنت هذه الدراسة عزل وتشخيص البكتريا السالبة لملون كرام من ادرار المرضى المراجعين لمستشفى الكاظمية التعليمي ومستشفى اليرموك في بغداد واللذين شخصت اصابتهم بخمج المسالك البولية سريريا . عزلت البكتريا السالبة لملون كرام من 61 عينة ادرار وبنسبة عزل 28.9% من اصل 211 عينة ادرار , كانت نسبة عزل بكتريا Escherichia coli 70.49% , اما بكتريا Klebsiella pneumoniae , وPseudomonas aeruginosa فكانت نسبـة عزلهما 8.19% و6.55% وعلى التوالي . اظهرت بكتريا Proteus spp. نسبة عزل 14.75% وبلغت نسبة عزل P.mirabilis 11.47% اما نسبة عزل P.vulgaris فكانت 3.27% . تم التحري عن قدرة سللات بكتريا P.mirabilis للتعبير عن خمل لاصق الخلايا الطلائية البولية (Uroepithelial Cell Adhesin)(UCA) , بالاعتماد على اعلى معدل التصاق للبكتريا بالخلايا الطلائية البولية للانسان , اذ تم اختبار العزلة P.mirabilis U7 التي كان معدل التصاقها 30.2% عند تنميتها على وسط مرق اللوريا وفترة حضن 24 ساعة بدرجة حرارة 37 م , وعند تنميتها على وسط اكار اللوريا كان معدل التصاقها 20.3% مقارنة بالعزلة P.mirabilis U4 التي ابدت معدل التصاق واطيء عند تنميتها على وسط مرق اللوريا واكار اللوريا اذ بلغ معدل الالتصاق 4.7% و1.65% وعلى التوالي . اظهرت العزلة P.mirabilis U7 قدرة للتعبير عن الخمل المقاوم للمانوز شبية البروتيس (MR ∕P) والخمل المقاوم للمانوز شبية الكلبسيلا (MR ∕K) , اذ لازنت هذه العزلة كريات الدم الحمر للانسان نوع O+ وخنازير غينيا والخراف وبوجود سكر المانوز دلالة على وجود خمل MR ∕P , كما لازنت كريات الدم الحمر المدبغة للابقار وبوجود المانوز دلالة على وجود خمل MR ∕K عند تنمية هذه العزلة على وسط مرق اللوريا وفترة حضانة 48 ساعة وبدرجة حرارة 37 م , كما اختزل التعبير عن الخمل MR ∕Pو MR ∕K عند تنمية P.mirabilis U7 على الاوساط الزرعية الصلبة . تم عزل خمل UCA وتنقيته جزئيا باستخدام اليوريا بتركيز 2 مولر والصدمة الحرارية وكبريتات الامونيوم وبنسبة تشبع 50% وDeoxycholate , كان تركيز بروتين UCA هو 1.65 مايكروغرام/مليلتر وبحجم نهائي 1.5 مليلتر ناتج من استخدام 3 لتر من مرق اللوريا . اظهر الترحيل الكهربائي وبوجود المادة الماسخة SDS حزمتين بروتينية لبروتين UCA المنقى جزئيا والذي بلغ وزنه الجزيئي 17.782 دالتون . تم حقن الـ UCA المنقى جزيئا في الارانب للحصول على المصل المضاد اذ وجد ان تركيز المصل المضاد هو 128 كما تم الاستدلال على وجود الاضداد النوعية لمستضد خمل UCA . ثبطت اضداد خمل UCA المحضرة في الارانب والمخففة بتراكيز 1 : 50 و1 : 100 , 1 : 200 التصاق العزلة P.mirabilis U7 بالخلايا الطلائية البولية (معدل البكتريا الملتصقة كان 5.6 و11.75 و21.05 خلية بكتيرية /خلية طلائية وعلى التوالي ) , اظهرت هذه الاضداد اختلافا معنويا (P≤0.05) في معدل الالتصاق عند مقارنتها بمصل السيطرة والمستعمل بنفس التراكيز (معدل عدد البكتريا الملتصقة كان 29.8 و30 و31.6 خلية بكتيرية /خلية طلائية وعلى التوالي ) ,كما اظهرت النتائج وجود اختلاف معنوي (P≤0.05) بين تراكيز المصل المضاد المستخدمة في تثبيط الالتصاق . تم اختبار قدرة خمل UCA المنقى جزئيا على التمنيع وحماية اناث الفئران من الاصابة بخمج المسالك البولية , تم اصابة الفئران الممنعة وغير الممنعة ببكتريا P.mirabilis U7 بتركيز (5×105) وحدة مكونة لمستعمرة/ مليلتر عن طريق الاحليل وبعد مرور اسبوع على الاصابة وجد ان اعداد الخلايا البكترية الحية في كلية الفئران الممنعة انخفض الى (2.6 : Log10 ) وحدة مكونة لمستعمرة /مليلتر مقارنة بـ(3.7 : Log10 ) وحدة مكونة لمستعمرة /مليلتر لكلية الفئران غير الممنعة ,اما مثانة الفئران الممنعة فقد اختفت الاصابة وبشكل كامل مقارنة بمثانة الفئران غير الممنعة (3.3 : Log10 ) وحدة مكونة لمستعمرة /مليلتر .

الصفحات الاولى:

التهابات المجاري البولية الناتجة عن دنا بكتريا Staphylococcus aureus مقارنه بدنا الخميرة Candida albicans

اسم المؤلف: صبا نزيه عبد الغفار الحسون

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: حارث جبار فهد المذخوري

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية

الدرجة: ماجستير

اللغة: الانكليزية

السنة: 2010

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: جمعت ٣٠٨ عينة ادرار للفترة من تشرين الاول ٢٠٠٩ لغاية كانون الثاني ٢٠١٠ من مرضى يعانون من التهاب المجاري البولية من مستشفى اليرموك التعليمي والمختبرات التعليمية لمدينة الطب. اذ تم عزل وتشخيص٧٢ عزلة تابعة لجنس المكورات العنقودية وبنسبة عزل بلغت (٢٣٫٣٪) من مجموع عينات الادرار٬ وتم اثبات عائدية ٥١ عزلة الى المكورات العنقودية السالبة لاختبار الكواكيوليز٬ وكانت ٢١ عزلة منها تابعة للنوع S. aureus وبنسبة عزل (٢٩٫٢٪) من مجموع المكورات العنقودية٬ وبنسبة (٦٫٨٪) من المجموع الكلي لعينات الادرار٬ بينما ٣٦ (١١٫٦٪) عزلة قد شخصت على انها C. albicans من مجموع عينات الادرار. وقد شخصت هذه تم اختبار حساسية عزلاتS. aureus لمجموعة من المضادات الحياتية٬ وكان هناك تباينا ومقاومة متعددة تجاه تلك المضادات٬ حيث اظهرت اغلب العزلات مقاومة عالية ضد ampicillin (٩٠٫٥٪(٬ amoxicillin(٨١٪)٬cefotaxime (٧٦٫٢٪)٬ وكانت المقاومة لل oxacillin (٦٦٫٧٪) وmethicillin (٦٦٫٧٪) ٬ بينما كان المضاد vancomycin الاكثر تاثيرا على كل العزلات (٠٪). تم استخلاص دنا من بكتريا S. aureus S11 بواسطة استعمال عدةWizard genomic DNA purification٬ وحطم جدار البكتريا بانزيم اللايسوزايم بينما استخلص دنا خميرة C. albicans C3 باستعمال طريقة Harju٬ وحطم جدار الخميرة بتكرار تجميد واذابة الخلايا بالاضافة الى دور المنظفات الموجودة بدارئ التحلل .(Harju buffer) عندما تم قياس امتصاصية محاليل الدنا بواسطة المطياف وجد ان تركيز دنا S. aureus S11 كان ٠٫٨٢٥ مايكروغرام\مايكروليتر٬ والنقاوة ١٫٧٥. بينما كان تركيز دنا C. albicans C3 ٢٫٤٥٥ مايكروغرام\مايكروليتر ٬ والنقاوة ١٫٧٠. ومن كلا تركيزي دنا S. aureus S11 ودنا C. albicans C3 حضر سلسلة تراكيز (٥٠٬٤٠٬٣٠٬٢٠٬١٠ مايكروغرام\١٠٠مايكروليتر). لوحظت تفاعلات خفيفة جدا للفئران البيض المحقونة عن طريق الاحليل ب١×٨١٠ وحدة مكونة للمستعمرة\مل من خلايا C. albicans C3 بالمقارنة مع فئران محقونة ب١×٨١٠ وحدة مكونة للمستعمرة\مل من خلايا S. aureus S11 . فقد عكست الكلى المحقونة ب S. aureus S11 احتقان مع ارتشاح الخلايا الالتهابية وانحلال للنبيبات البولية بينما المثانة عكست وذمة مع ارتشاح متوسط للخلايا الالتهابية وتقرح بؤري لسطح الطبقة الطلائية المخاطية. اظهرت الكلى المحقونة ب C. albicans C3 احتقان ولم يلاحظ تغيرات نسيجية واضحة٬ بينما المثانة اظهرت ارتشاح خفيف للخلايا الالتهابية مع وذمة في الطبقة تحت الطلائية. لمعرفة التاثير المرضي لدنا S. aureus S11 ودنا C. albicans في الجهاز البولي للفئران البيض ٬ حقنت الفئران عن طريق الاحليل بخمسة تراكيز لكل من دنا S. aureus S11 ودنا C. albicans C3 . كان التاثير المرضي لكليهما معتمد على التركيز فقد ازدادت الشدة بزيادة تركيز الدنا وكانت اشدها عند تركيز ٥٠ مايكروغرام\مايكروليتر٬ ولكن اظهر دنا C. albicans C3 تغيرات نسيجية اقل شدة من التي لوحظت مع دنا . S. aureus S11 اظهرت الاعضاء (الكلى والمثانة) للفئران المحقونة بدنا S. aureus S11تغيرات مرضية مختلفة٬ في الكلى تراوحت من انحلال خفيف وتنخر للنبيبات البولية٬ ارتشاح خفيف الى شديد للخلايا الالتهابية٬ احتقان الاوعية الدموية الى مظهر قريب للحالة الطبيعية للكلى. بينما تمثلت التغيرات في المثانة بتحطم الجدار المخاطي٬ ارتشاح خفيف الى شديد للخلايا الالتهابية٬ وذمة خفيفة٬ انسلاخ سطح الطبقة الطلائية المخاطية الى مظهر قريب للحالة الطبيعية للمثانة.تراوحت التغيرات المرضية للكلى المحقونة بدنا C. albicans C3 من احتقان الاوعية الدموية٬ ارتشاح متوسط للخلايا الالتهابية الى مظهر قريب للحالة الطبيعية للكلى. بينما المثانة اظهرت وذمة خفيفة٬ ارتشاح خفيف للخلايا الالتهابية الى مظهر قريب للحالة الطبيعية للمثانة. | From October 2009 to January 2010, 308 mid stream urine specimens were collected from patients suffering from urinary tract infections at AL - Yarmouk Teaching Hospital and The Educational Laboratories of Madienat Al - Teb. Staphylococci were isolated from 72 (23.3%) urine specimens, 51 isolates were coagulase negative staphylococci, out of these 21 were identified as Staphylococcus aureus (29.2%) from the total count of staphylococci and (6.8%) from total urine specimens. While 36 (11.6%) specimens were identified as Candida albicans isolates. The isolates were diagnosed by biochemical tests, API Staph. and Candida system. Susceptibility of S. aureus isolates to antibiotics was examined, the results revealed different and multi resistance to these antibiotics, that S. aureus isolates were highly resistant to ampicillin (90.5%), amoxicillin (81%) and cefotaxime (76.2%), the resistant to oxacillin (66.7%), methicillin (66.7%), while vancomycin found to be the most effective agents against all of the isolates (0%). Staphylococcus aureus S11 DNA was extracted by using Wizard genomic DNA purification kit method, the cell wall of S. aureus was hydrolyzed by using lysozyme enzyme. While C. albicans C3 DNA was extracted by using a Harju method, the cell wall of C. albicans was ruptured by using repeated freeze - thawing of cells as well as the role of the detergents found in a lysis buffer (Harju buffer). When the absorbance of DNA solutions was measured by the spectrophotometer apparatus it was found the concentration of S. aureus S11 DNA was 0.825 µg/µl, the purity was 1.75. While the concentration of C. albicans C3 DNA was 2.455 µg/µl, the purity was 1.70. From the each concentrations of S. aureus S11 DNA and C. albicans C3 DNA was prepared serial of concentrations (10, 20, 30, 40 and 50 µg/100µl(. Mildest reactions were obtained from mice challenged with 1×108 cfu/ml viable organisms of C. albicans C3 compared with mice challenged with 1×108 cfu/ml viable organisms of S. aureus S11. Kidney treated with S. aureus S11 revealed congestion, inflammatory cells infiltration and degenerative changes of renal tubules, while its bladder revealed oedema with moderate inflammatory cells infiltration and focal mucosal surface epithelial ulceration. However kidney treated with C. albicans C3 showed that there was congestion and no obvious histological changes, while its bladder developed mild infiltration of inflammatory cells with oedema in subepithelial lining layer.In order to testify the pathogenicity of S. aureus DNA and C. albicans DNA in murine urinary tract system, mice were injected intraurethraly with five doses of each S. aureus S11 DNA and C. albicans C3 DNA. The histological changes for each was dose - dependent, the magnitude increased with increasing the DNA dose with the maximal at 50 µg/100µl, but C. albicans C3 DNA developed throughout less intense histological changes than observed with DNA from S. aureus S11.Organs of mice (kidneys and bladders) treated with S. aureus S11 DNA showed different pathological changes, in kidneys the changes ranged from mild degenerative and necrosis of renal tubules, mild to severe infiltration of inflammatory cells, congestion of blood vessels to near normal structure appearance of the kidney. Whereas the bladders developed damage of mucosal wall, mild to severe inflammatory cells infiltration, mild oedema, sloughing of mucosal epithelial surface to near normal structure appearance of the bladder. However kidneys treated with C. albicans C3 DNA ranged from congestion of blood vessels, moderate inflammatory cells infiltration to near normal structure appearance of the kidney. While its bladder developed mild oedema, mild inflammatory cells infiltration to near normal structure appearance of the bladder.

الصفحات الاولى:

دراسة بعض الخصائص الفيزيائية والكيميائية لانزيم Staphylolysin المنتج من بكتريا Pseudomonas aeruginosa Study of Some Physical and Chemical properties of Staphylolysin produced by Pseudomonas aeruginosa

اسم المؤلف: شيماء سهيل نجم

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: مي طالب فليح

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - انزيمات

الدرجة: ماجستير

اللغة: العربية

السنة: 2009

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: عزلت (50) عزلة عائدة لبكتريا Pseudomonas aeruginosa من 120 عينة سريرية جمعت من مصادر مختلفة تضمنت (الادرار،والقشع ،والبراز ،ومسحات الاذن ، والجروح،والحروق).تم التحري عن انتاج بعض من عوامل الضراوة للعزلات قيد الدراسة مثل : الهيمولايسين، والايلاستيز ، والبروتيز ، ووجد ان نسبة انتاج الهيمولايسين والايلاستيز كانت 76% ، فيما كانت نسبة انتاج البروتيز 72% في العزلات المحلية قيد الدراسة.اختبرت قابلية العزلات المحلية على انتاج انزيم الستافيلولايسين ، وبينت نتائج الغربلة شبه الكمية ان 18 عزلة (36%) من العزلات لها القابلية على انتاج الانزيم وبنسب متفاوتة،اذ تراوحت اقطار الهالة الشفافة من(5 - 22)ملم ، وتميزت خمس عزلات منها باعطاءها اوسع مناطق تحلل على وسط ] ترتبك صويا الصلب + 0.2% (وزن/حجم) من بكتريا Staphylococcus aureus المعزولة المقتولة بالحرارة بدرجة 100م [تراوحت من (16 - 22)ملم ، وتم انتخاب العزلة 16P لاستخلاص الستافيلولايسين A (LasA) ، اذ بلغت الفعالية النوعية لها (8.59)وحدة / ملغم بروتين ، والعزلة 5P لاستخلاص الستافيلولايسين D (LasD)، اذ بلغت الفعالية النوعية لها (0.66)وحدة / ملغم بروتين ،لكونهما الاغزر انتاجا للانزيم عند اجراء الغربلة الكمية.استخلص انزيم الستافيلولايسين بالنبذ المركزي المبرد وتمت تنقيته جزئيا بترسيبه بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع 80% ثم بكروموتوغرافيا التبادل الايوني باستخدام المبادل DEAE - Cellulose ، بينت النتائج ان الفعالية الانزيمية الحالة للعنقوديات (Staphylolytic activity) لانزيم الستافيلولايسين A ظهرت في القمة الاولى، وبلغت عدد مرات التنقية 10.74 مرة وبحصيلة انزيمية 14.2%،فيما اظهرت القمة الثانية الفعالية الانزيمية الحالة للعنقوديات لانزيم الستافيلولايسين D بعدد مرات تنقية 9.1 مرة وبحصيلة انزيمية 18.14%.درست بعض خصائص الانزيمين فكان الوزن الجزيئي 20.417 كيلو دالتون و23.988 كيلو دالتون للستافيلولايسين D,A على التوالي عند تقديرهما بطريقة الترحيل الكهربائي في هلام SDS - PAGE. لوحظ ان الرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية الستافيلولايسين A هو 8 اذ اعطى اعلى فعالية بلغت 150 وحدة / مل ، ولثبات الانزيم 7.5 - 8.5 اذ احتفظ الانزيم بكامل فعاليته تقريبا ، فيما كان الرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية الستافيلولايسين D هو 9.5 اذ اعطى اعلى فعالية بلغت 16 وحدة / مل ، ولثبات الانزيم 8.5 - 9.5 اذ احتفظ الانزيم بكامل فعاليته تقريبا ، وظهرت اقصى فعالية للانزيمين عند درجة حرارة 40م اذ بلغت الفعالية النوعية للستافيلولايسين A 140 وحدة /مل وللستافيلولايسين D 16.4 وحدة/ مل ، واحتفظ كلا الانزيمين بكامل فعاليتهما تقريبا عند حضنهما بدرجة حرارة 25 - 40م لمدة ساعة.عند دراسة تاثير بعض المواد في الفعالية الانزيمية للستافيلولايسين D,A كان لكلوريد الصوديوم وكلوريد البوتاسيوم بتركيز 1 و5 ملي مولار تاثير منشط للفعالية الانزيمية قياسا بالسيطرة اذ احتفظ انزيم الستافيلولايسين A بـ105% و108% من فعاليته على التوالي عند معاملته بكلوريد الصوديوم ، واحتفظ بـ 102% و104% من فعاليته على التوالي عند معاملته بكلوريد البوتاسيوم، في حين ثبطت الفعالية الانزيمية عند معاملتهما بكلوريدات الحديد والزئبق والخارصين وبنسب متفاوتة ،اذ احتفظ انزيم الستافيلولايسين A بـ 73% و7% من فعاليته على التوالي عند معاملته بـ5ملي مولار من كلوريد الحديد والزئبق على التوالي،و9% فقط من فعاليته عند معاملته بـ 0.1 ملي مولار من كلوريد الخارصين ، فيما احتفظ انزيم الستافيلولايسين D بـ45% و13% من فعاليته فقط عند معاملته بـ5 ملي مولار من كلوريد الحديد والزئبق على التوالي،و23% فقط من فعاليته عند معاملته بـ0.1 ملي مولار من كلوريد الخارصين، بينما احتفظ كلا الانزيمين بكامل فعاليتهما عند المعاملة بمادة EDTA بتركيز 10 ملي مولار ،وفنيل مثيل سلفونيل فلورايد (PMSF) بتركيز 0.4 ملي مولار. | Fifty isolates of Pseudomonas aeruginosa were obtained from 120 various clinical samples included (urine, sputum, stool, ear, wound & burn swabs). Detection of the production of some virulence factors (hemolysin, elastase and protease) by the local isolates was studied. Results showed that the hemolysin and elastase production ratio were 76%, while the protease production ratio was about 72% by the local isolates.Detection of the ability of local isolates to produce staphylolysin enzyme was studied, the semi quantity screening results showed that 18 (36%) of the isolates have the ability to produce this enzyme in variable ratios , the diameters of lysis Zone ranged from(5 - 22)mm, and five isolates were characterized by giving the highest lysis zone on (Tryptic soya agar + 0.2% (wt./vol.) of heat killed Staphylococcus. aureus at temperature 100oC ) medium which were ranged from(16 - 22)mm, then the isolate P16 was chosen to extract staphylolysin A (LasA) and it's specific activity reaches 8.59 unit /mg protein, whi1e chosen the isolate P5 to extract staphylolysin D (LasD) where it's specific activity reaches 0.66 unit /mg protein since the two isolates were the most production of enzyme by quantity screening . Staphylolysin enzyme was extracted by cooling centrifugation and partially purified by ammonium sulphate precipitation in saturation percentage of 80%, this step was followed by Ion exchange chromatography technique by using DEAE - cellulose column, results showed that the enzymatic activity (Staphylolytic activity) of the staphylolysin A appeared in first peak with purification folds and recovery of 10.74 fold and 14.2% respectively, while the second peak appeared the activity for staphylolysin D with purification folds and recovery of 9.1 fold and 18.14% respectively.Some of the characters of the two enzymes were studied, so the molecular weights were 20.417 kilo dalton & 23.988 kilo dalton for staphylolysin A&D respectively were estimated by SDS - polyacryl amide gel e1ectrophoresis. The optimum pH for staphylolysin A activity was found to be 8 which gives higher activity reaches 150 unit/ml, and for enzyme stability was 7.5 - 8.5 in which the enzyme nearly retained it's full activity, while there were for staphylolysin D 9.5 that gives higher activity of 16 unit/ml.& 8.5 - 9.5 in which the enzyme nearly retained it's full activity respectively, Maximum activity of two enzymes was obtained at 40 C in which the specific activity were for staphylolysin A and D 140 and 16.4 unit/ml , and the activity for two enzymes at 25 - 40 C remained approximately without change for one hour. When the effects of some materials on staphylolysin A & D activity were studied, the results showed that both sodium chloride & potassium chloride at 1 & 5 mM had the activator effect on enzymatic activity compared with its control where the staphylolysin A and D retained 105% ,108% and 102%, 104% of their activity, respectively when treated with sodium chloride, while they retained 110%, 114% and 133%, 118% of their activity, respectivity when treated with potassium chloride, while ferric, mercury & zinc chlorides inhibited the activity in variable ratios in which the staphylolysin A and D kept only 73%, 7% and 45%, 13% respectively of their initial activity when treated with 5mM of ferric and meracury chloride and 9%, 23% respectively of their initial activity when treated with 0.1mM zinc chlorid & enzymatic activity for both enzymes were not affected when treated with EDTA at 10mM & phenyl methyl sulphonyl fluoride (PMSF) at 0.4mM.

الصفحات الاولى:

انتاج وتوصيف الليفان من بكتريا Paenibacillus polymyxa المعزولة محليا

اسم المؤلف: شمم ناصرراضي

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: شذى سلمان حسن سناء برهان الدين

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - البكتريا

الدرجة: ماجستير

اللغة: الانكليزية

السنة: 2010

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: تم الحصول على 88 عزلة تعود لجنس Bacillus من التربة والمياه من اصل 112 عزلة بكتيرية اعتمادا على الفحوصات الزرعية والمجهرية , اظهرت 25عزلة تعود لهذا الجنس مستعمرات لزجة عند زرعها على وسط الاملاح الصلب الحاوي على %20 من السكروز, من ضمن هذه العزلات تم اختيار 10 منها والتي اعطت اعلى درجة من النمو اللزج لزرعها على وسط الاملاح السائل الحاوي على السكروز. كانت العزلة B2 الافضل في انتاج الليفان ((levan حيث اعطت اعلى وزن جاف من الليفان والذي بلغ 4.1غم /100مل واعلى نسبة من السكريات الكلية 91% والسكريات المختزلة 80%. الفحوصات المزرعية والكيموحيوية لهذه العزلة اظهرت انها تعود للنوع Paenibacillus polymyxa . تم استخدام ثلاثة انواع من المذيبات العضوية لغرض استخلاص الليفان وهي ايثانول, ميثانول وايزوبروبانول بنسبة (1 : 4حجم /حجم) اعطى المذيبان الايثانول والايزوبروبانول اعلى قيمة من الوزن الجاف للليفان والتي بلغت 4.1 غم /100مل بينما اعطى الميثانول 3.7 غم / 100 مل. تم تحليل الليفان نوعيا للكشف عن محتواه من السكريات المختلفة والكاربوهيدرات وذلك باستخدام اربعة كشوفات : الكشف الاول كون حلقة بنفسجية مع محلول الليفان بينما لم يعطي الليفان اي تغيير في اللون مع الكشف الثاني ممايدل على خلو الليفان من الانواع الاخرى من السكريات المتعددة ((Polysaccharide كالنشاء والكلايكوجين والدكستران. الليفان المتحلل جزئيا بفعل حامض الهيدروكلوريك المركز (HCl) كون راسب برتقالي اللون عند تفاعله مع الكاشف الثالث مما يدل على وجود سكريات مختزلة تفاعلت مع الكاشف بينما اعطى الكشف الاخير لون احمر قاني مع محلول الليفان مما يدل على وجود السكر الاحادي الفركتوز. حددت الظروف المثلى لانتاج الليفان من العزلة B2 واظهرت النتائج ان الوسط الامثل للانتاج كان وسط الاملاح الحاوي على20% من السكروز وبدون اي مصدر نايتروجيني برقم هيدروجيني (pH) 7 وبدرجة حرارة 37 ˚م وبحجم لقاح2 % من المزروع البكتيري ولمدة حضانة 48 ساعة في حاضنة هزازة بسرعة 100 دورة في الدقيقة, حيث بلغت قيمة الوزن الجاف لليفان 4.8 غم/100مل وكانت النسبة المئوية للسكريات الكلية 95.8% ونسبة السكريات المختزلة 92%. ان انتاج الليفان في اوساط خام طبيعية مثل وسط عصير قصب السكر ووسط مستخلص التمر ادى الى انخفاض في انتاج الليفان مقارنة مع وسط الاملاح الحاوي على السكروز. تمت دراسة مواصفات الليفان اعتمادا على لزوجته ((viscosity عند تراكيز مختلفة حيث اظهرت النتائج ان اللزوجة تزداد بزيادة التركيز حتى تصل الى اعلى قيمة لها 3.18 سنتيبويز عند 20% , كذلك تمت ايضا دراسة تاثير الحرارة والرقم الهيدروجيني وتاثير املاح الصوديوم NaCl بتراكيز مختلفة على لزوجة محلول الليفان عند تركيزين هما 2% و20% حيث اظهرت النتائج بان اللزوجة عند 20% تقل بزيادة درجة الحرارة حتى تصل الى 0.67 سنتيبويزعند 100˚م ولوحظ بان هذا التاثير عكسي حيث ان الليفان يستعيد لزوجته تدريجيا بانخفاض درجة الحرارة الى 20˚م اما بالنسبة للاس الهيدروجيني pH فكان له تاثير طفيف على اللزوجة عند الرقم الهيدروجيني 4 و10. لقد لوحظ بان الزيادة في تركيز املاح الصوديوم تؤدي الى الزيادة في لزوجة الليفان عند تركيز20% حتى تصل الى 4 سنتيبويز عندما يكون تركيز املاح الصوديوم 10%. تم تحليل نموذج الليفان المستخلص من العزلة B2 وذلك باستخدام تقنية ال FT - IR وقد اظهرت النتائج وجود المجاميع الكيميائية الفعالة (CO) التي تمثل اهتزاز مط ((Stretching و,(CH) (OH) الذي يمثل اهتزاز انحناء ((Bending عند الترددات 1370,1265.2,1093,1165,813.7,945.2سم - 1 ان تحليل الليفان باستخدام تقنية Thin Layer Chromatography اظهرت الليفان كبقعة واحدة سوداء تمثل الفركتوز وكانت قيمة الجريان النسبي((Relative flow لكل من الليفان والفركتوز (0.57) عند استخدام محلول المذيبات الذي يتالف من البيوتانول : البروبانول : الماء المقطر : حامض الخليك بنسبة 7 : 5 : 4 : 2. تمت دراسة تاثير الليفان ودوره كعامل مشجع بريبيوتك ((Prebiotic لنمو البكتريا المفيدة مثل Lactobacillus acidophilus حيث وجد ان الليفان يؤدي الى زيادة عدد البكتريا وبنسبة 172% عند تركيز 2% قياسا مع معامل السيطرة46 %.درس تاثير الليفان في عملية التهام خميرة الكانديدا (Candida) من قبل خلايا الدم البيض Polymorphonuclear (PMNs) خارج الجسم الحي وقد بينت النتائج ان معاملة خلايا الدم البيض مع الليفان كان لها تاثيرا واضحا في تحفيز الخلايا البلعمية وزيادة فعاليتها في عملية الالتهام وبالتالي زيادة معامل البلعمة Phagocytic Index)) وان هذا التاثير يزداد مع زيادة تركيز الليفان مع وجود فروق معنوية كبيرة مقارنة مع معامل السيطرة عند p<0.01)) وان اعلى معامل بلعمة تم الحصول عليه هو 68% عند التركيز 100 مايكروغرام / مل.

الصفحات الاولى:

انتاج وتوصيف بيتا - هيدروكسي بيوتاريت (? - hydroxybutyrate) من عزلة محلية لبكتريا Azotobacter chroococcum Production and Characterization of ? - hydroxybutyrate from Azotobacter chroococcum local isolate

اسم المؤلف: سعاد علي احمد

الجامعة: جامعة بغداد

اسم المشرف: شذى سلمان حسن

الموضوع العام: علوم الحياة

الموضوع الدقيق: الاحياء المجهرية - البكتريا

الدرجة: ماجستير

اللغة: الانكليزية

السنة: 2011

مكان الجامعة: بغداد

المستخلص: تم الحصول على 12 عزلة من بكتريا Azotobacter chroococcum من اصل 20 عينة تربة جمعت من مناطق مختلفة بالقرب من جذور النبات من حقل ذرة في كلية الزراعة في ابو غريب في الفترة الزمنية بين اب وكانون الثاني. درست قابلية العزلات على تجميع عديد هيدروكسي بيوتاريت وذلك بتصبيغ العزلات بصبغة Sudan black B . اظهرت جميع العزلات القدرة على انتاج المتعدد PHB وان العزلة A. chroococcum 9 كانت اكثرهم تجميعا للمتعدد PHB .درست تاثيرات ظروف مختلفة في انتاج المتعدد فوجد ان الظروف المثلى لانتاج PHB من العزلة A. chroococcum 9 بتنميتها في وسط Stockdale nitrogen free medium الحاوي على الكلوكوز مصدرا كربونيا والببتون مصدرا نيتروجينيا عند رقم هيدروجيني 7.5 , والملقح ب 3.8 × 104 خلية/ مل عند درجة حرارة 30 م˚ والحضن في حاضنة ساكنة لمدة 48 ساعة, حيث كانت نسبة PHB في هذه الظروف ( 40.3% ) .درست انتاجية البكتريا A. chroococcum 9 في الوسط المحتوي على مخلفات طبيعية مثل مولاس قصب السكر ومستخلص التمر(الزهدي) والشرش وكذلك الوسط المحتوي على الكليسيرول او احد انواع الزيوت ( زيت الزيتون , زيت الذرة , زيت زهرة الشمس ) حيث استخدمت بصفتها اوساط رخيصة لانتاج المتعدد PHB . كانت اعلى نسبة للعديد ( 78% ) تم الحصول عليها من تنمية البكتريا A. chroococcum 9 في وسط Stockdale nitrogen free medium المحتوي على 5% من مولاس قصب السكر . استخلص PHB من العزلة A. chroococcum 9 بعدة طرائق تضمنت الاستخلاص بمحلول هايبوكلورات الصوديوم وطريقة SDS مع هايبوكلورات الصوديوم واستعمل هيدروكسيد الصوديوم في الطريقة الثالثة . كانت طريقة الاستخلاص باستخدام محلول هايبوكلورات الصوديوم الافضل حيث بلغت نسبة المتعدد 39.5% ) ) .اظهرت نتائج توصيف PHB ان الوزن الجزيئي للمتعدد المستخلص من بكتريا A. chroococcum 9 كان 2.6×105 دالتون وان درجة الانصهار له كانت 180 م˚ .درست ذائبية PHB في عدة مذيبات عضوية ولوحظ ان PHB يذوب في الكلوروفورم و1 - 2 ثنائي كلوريد الايثانول الا انه غير ذائب في الميثانول , الايثانول , الاسيتون , الهكسان , ثنائي اثيل ايثر ورباعي كلوريد الكاربون .درست لزوجة PHB المستخلص من بكتريا A. chroococcum 9 في عدة ارقام هيدروجينية , حيث لوحظ اختزال في لزوجة المتعدد في الوسط الحامضي (pH 4) والقاعدي (pH 10) مما يعني اختزال في الوزن الجزيئي للمتعدد . في حين كان الرقم المتعادل (pH 7) ملائما للحفاظ على تركيبه اذ لم تتغير اللزوجة عند هذا الرقم .وجد ان PHB المستخلص من بكتريا 9 A. chroococcum يتحلل حيويا بفعل انواع مختلفة من البكتريا تضمنت P. aerugenosa , B. subtilis و. A. chroococcum | Twelve Azotobacter chroococcum isolates were obtained from 20 soil samples collected from different places in corn field in Agricultural College in Abu - Ghrabe near the plant roots in the period between August and January . The ability of polyhydroxybutyrate accumulation of the isolates was examined by staining with Sudan black B stain. All the isolates were able to produce PHB . A. chroococcum 9 was the highest PHB producer. The effect of different conditions on accumulation of PHB from A. chroococcum 9 were determined . The favorable productivity appeared when Stockdale nitrogen free medium containing 2% glucose as carbon source and 1% peptone as nitrogen source at pH 7.5 was inoculated with 3.8 × 104 Cell/ml and incubated in static incubator at 30 ˚C for 48 h , PHB productivity at these conditions was 40.3% . Media containing natural wastes including cane molasses , date extract , whey and media containing glycerol or a kind of oil ( olive oil ,sunflower oil and corn oil) were used as economic media for PHB production . High productivity was observed in Stockdale nitrogen free medium containing 5% cane molasses , PHB content was 78% . PHB was extracted from A. chroococcum 9 by different methods including sodium hypochlorite , SDS and sodium hypochlorite and by NaOH. The optimum recovery of PHB was 39.5% by using sodium hypochlorite extraction method . The molecular weight of PHB extracted from A. chroococcum 9 was 2.6×105 dalton and the melting point was 180 ˚C . The solubility of PHB in several solvents was studied . The PHB was soluble in chloroform and in 1 - 2 dichloroethanol , while it was insoluble in methanol , ethanol , acetone , hexane , diethyl ether and carbon tetrachloride . The viscosity of A. chroococcum 9 PHB was determined at different pH values , a decreasing in viscosity was at acidic pH (pH 4) and at alkaline pH (pH 10) which indicate a reducing in PHB MW , while neutral pH (pH 7) was kept the structure of PHB . PHB extracted from A. chroococcum 9 was found to biodegradable by different kinds of bacteria included P. aerugenosa , B. subtilis and A. chroococcum

الصفحات الاولى: