Share
تكون الغشاء الحيوي بوساطة Klebsiella pneumoniae الملوثة للمثبتات الخارجية ومقاومته لمضادات الحياة == Biofilm Formation by The External Fixators Contaminating Klebsiella pneumoniae and Its Antibiotic Resistance
Author name:
مروى حميد مطشر الخفاجي
Supervisor name:
مي طالب فليح
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3155 - p.pdf
Abstract:
شخصت 98 عزلة بكتيرية منماة بظروف هوائية من مجموع 100 عينة سريرية ماخوذه من الاخماج المصاحبة للمثبتات الخارجية المستعملة في جراحة العظام والكسور. شكلت البكتريا السالبة لملون غرام اعلى نسبة 51% (50 عزلة) من المجموع الكلي للعزلات، في حين شكلت البكتريا الموجبة لملون غرام 49% (48 عزلة) منها ، وكانت بكتريا Klebsiella pneumoniae هي المسبب الاكثر شيوعا لهذه الاخماج اذ عزلت بنسبة 74% (37 عزلة) من المجموع الكلي للعزلات السالبة لملون غرام . اجري اختبار حساسية عزلات K. pneumoniae لمضادات الحياة ، وتبين ان العزلات جميعها كانت حساسة لمضاد Amikacin (100%) ، ومقاومة للمضادات : Ampicillin ، وCefalexine ، وCefalothin ، وCefotaxime ، وCiprofloxacin ، وRifampin بنسبة 100% ، وقد كانت نسبة مقاومتها لمضادات Ceftazidime ، وStreptomycin ، وTobramycin ، وGentamycin ، وNeomycin ، وNitrofurantoin ، وNorfloxacin ، وTetracycline ، وNalidixic acid 94.5% و86.5% و86.5% و67.5% و59.5% و37.8% و35.1% و32.5% و24.3% وعلى التوالي . تم تحديد التراكيز المثبطة الدنيا لعزلات بكتريا K. pneumoniae لمضادات الحياة Cefotaxime ، وCeftazidime ، وNalidixic acid ، وAmikacin فبلغت 1024 مايكروغرام/مليليتر، و128 مايكروغرام/مليليتر، و64 مايكروغرام/مليليتر، و16 مايكروغرام/مليليتر على التوالي للعزلة K13 ، و1024 مايكروغرام/مليليتر، و64 مايكروغرام/مليليتر، و16 مايكروغرام/مليليتر، و4 مايكروغرام/مليليتر على التوالي للعزلة K51 . كما تم تحديد التراكيز القاتلة الدنيا لهذه المضادات وتراوحت مابين اكثر من 1024 مايكروغرام/مليليتر، و1024 مايكروغرام/مليليتر، و128 مايكروغرام/مليليتر، و32 مايكروغرام/مليليتر، على التوالي للعزلة K13 ، واكثر من 1024 مايكروغرام/مليليتر، و256 مايكروغرام/مليليتر، و32 مايكروغرام/مليليتر، و8 مايكروغرام/مليليتر على التوالي للعزلة K51. تم التحري عن قابلية عزلات K. pneumoniae على انتاج الطبقة اللزجة ، واظهرت نتائج طريقة الفحص بالانابيب ان 83.8% (31عزلة) كانت منتجة للطبقة اللزجة ، في حين اظهرت طريقة احمر الكونغو ان 97.3% (36عزلة) كانت منتجة للطبقة اللزجة . تم التحري عن فوعة عزلات K. pneumoniae المعزولة من الاخماج المصاحبة للمثبتات الخارجية وذلك باختبار قابليتها لربط البنفسج البلوري وكانت العزلات جميعها فائعة (Virulent) . اختبرت قدرة عزلات K. pneumoniae على انتاج الغشاء الحيوي باستخدام اطباق المعايرة الدقيقة فاظهرت النتائج ان العزلات جميعها كانت منتجة للغشاء الحيوي لكن بدرجات سمك متفاوتة ، وتراوحت قيم الامتصاصية مابين (0.111 - 2.899)، وكانت العزلة K13 هي العزلة الاكثر فعالية في انتاج الغشاء الحيوي حيث سجلت اعلى قيمة امتصاصية 2.899 . اختبر تاثير التراكيز تحت المثبطة الدنيا من مضادات الحياة Cefotaxime ، وCeftazidime ، وNalidixic acid ، وAmikacin في الاغشية الحيوية المتكونة بفعل العزلتين K13وK51 في اطباق المعايرة الدقيقة باعمار مختلفة 24 ساعة و48 ساعة ، واظهرت النتائج ان هذه التراكيز ثبطت التصاق البكتريا على سطح البولي ستيرين مما ادى الى انفصال الغشاء الحيوي ، كما تبين ان الاغشية الحيوية الاقدم اكثر مقاومة للعوامل ضد الميكروبية . تم تحديد التراكيز المثبطة الدنيا للغشاء الحيوي واظهرت النتائج انها اكبر بثلاث او اربع مرات من التراكيز المثبطة الدنيا لعزلات K. pneumoniae العالقة في الوسط الزرعي | Out of 100 clinical samples taken from infected external fixation devices used in orthopedic surgery 98 bacterial isolates grown in aerobic conditions had been diagnosed. The higher ratio 51% (50 isolates) of the total number of the isolates occupied by gram negative bacteria while gram positive bacteria represented the rest 49% (48 isolate) , Klebsiella pneumoniae was the most common aetiological agent of these infections which accounted 74% (37 isolates) of the total number of gram negative bacterial isolates. The sensitivity test against different antibiotics was done. It was found that all K. pneumoniae isolates (100%) were sensitive to Amikacin and resistant to Ampicillin, Cefalexine, Cefalothin, Cefotaxime, Ciprofloxacin, and Rifampin . While their resistance percetage to the antibiotics Ceftazidime, Streptomycin, Tobramycin, Gentamycin, Neomycin, Nitrofurantoin, Norfloxacin, Tetracycline, and Nalidixic acid were 94.5% , 86.5% , 86.5% , 67.5% , 59.5% , 37.8% , 35.1% , 32.5% , 24.3% respectively. Minimum inhibitory concentrations to K. pneumoniae isolates had been determined for the antibiotics Cefotaxime, Ceftazidime, Nalidixic acid, and Amikacin , they were 1024 Mcg/ml , 128 Mcg/ml , 64 Mcg/ml , and 16 Mcg/ml respectively for the isolate K13 , and they were 1024 Mcg/ml , 64 Mcg/ml, 16 Mcg/ml, and 4 Mcg/ml respectively for the isolate K51. Minimum bactericidal concentrations for the same antibiotics had been estimated and they were higher than 1024 Mcg/ml, 1024 Mcg/ml, 128 Mcg/ml, and 32 Mcg/ml respectively for K13 isolate, and higher than 1024 Mcg/ml, 256 Mcg/ml, 32 Mcg/ml, and 8 Mcg/ml respectively for the isolate K51. The ability of K.pneumoniae isolates to produce slime layer was detected , the results revealed that 83.3% (31 isolates) were slime layer producers by tube method, while 97.3% (36 isolates) were slime producers by congo red method. The virulence of K.pneumoniae isolates isolated from external fixators infections had been detected via detection the crystal violet binding ability of these isolates, all the isolates were virulent. The ability of K.pneumoniae isolates to produce the biofilm had been tested by using microtiter plates , results revealed that all the isolates were biofilm producers with different thickness degrees, absorbance values rendered between (0.111 - 2.899) , K13 was the best biofilm producer isolate, it,s absorbance value was 2.899 . The effect of subinhibitory concentrations of the antibiotics Cefotaxime, Ceftazidime, Nalidixic acid, and Amikacin , on biofilms formed by K13 and K51 isolates in microtiterplates in different ages , 24 hr and 48 hr had been tested , results revealed that these concentrations inhibited bacterial adhesion on polysteren surface and consequently causes biofilm detachment , also it was demonstrated that aged biofilms are more resistant to antimicrobial agents . Minimum inhibitory concentrations for the biofilm had been estimated, and the results revealed that these concentrations were three to four times higher than minimum inhibitory concentrations for the planktonic K.pneumoniae isolates.
