اسم المؤلف:
هبة خليل توفيق
اسم المشرف:
مي طالب فليح
حارث جبار فهد
المستخلص:
من مجموع 150 عينة ادرار تم الحصول على 61 عزلة عائدة للجنس Staphylococcus , جمعت من مرضى مصابين بخمج المجاري البولية من مستشفيات الزعفرانية واليرموك للمدة من الاول من ايلول 2005 - الاول من كانون الثاني 2005 . تم التاكد من عائدية 10 عزلات للنوع S. xylosus وبنسبة عزل 16.3% من مجموع العنقوديات ، وقد تم تشخيصها بوساطة الاختبارات الكيموحيوية كما تم اختبار حساسيتها للمضادات الحيوية وتبين ان 8 عزلات كانت مقاومة للمضاد Erythromycin ، والعزلات جميعها حساسة للمضاد Ciprofloxacin . تم استخلاص الجدار الخلوي باستخدام طريقة التكسير بالحبيبات الزجاجية (Glass beads) وتم اجراء تنقية جزئية للببتيدوكلايكان من الجدار باستعمال مواد كيميائية مثل : SDS , EDTA , LiCL2 , CaCL2 والهضم بالانزيمات DNase , RNase , Trypsin , Pronase . ولغرض التاكد من جودة طريقة التنقية تم اجراء الرحلان الكهربائي بهلام متعدد الاكريل امايد تحت ظروف غير ماسخة فقد انخفض عدد الحزم البروتينية من 6 حزم في الجدار الخلوي الخام الى 4 حزم بعد التنقية . لقد اظهرت الدراسة الحالية التاثيرات الكيموحيوية السريرية للببتيدوكلايكان في مصل الارانب المحقونة عن طريق الزيادة الحاصلة في انزيمات الكبد والكلية ؛ اذ لوحظ زيادة معتدلة في كل من انزيمات : GoT وGpT وAlkaline phosphatase وكذلك Bilirubin ، والـ Urea ، والـ Creatinine ؛ مما يدل على حدوث خلل وظيفي في الكبد والكلية . تم دراسة امراضية مستخلص الببتيدوكلايكان للعزلة S.xylosus S24 (المقاومة لاكثر عدد من مضادات الحياة قيد الدراسة ) في الجهاز البولي للفئران البيض السويسرية الاناث اذ حقنت خمس مجاميع من الفئران بواقع ثلاثة مكررات لكل مجموعة عبر الاحليل باستخدام القثطرة بالتراكيز 1000000 ، 2000000 ، 3000000 ، 4000000 ، 5000000 نانوغرام / 1 مليلتر ، وحقنت خمس مجاميع اخرى بمستخلص قياسي للـ LPS من بكتريا E.coli بالتراكيز 10, 25, 50, 75, 100 نانوغرام/مليليتر ، وبعد مرور يومين من الحقن تم تشريح الفئران حيث اظهرت الاعضاء (الكلية) تغييرات نسيجية تمثلت : بانكماش الكبيبة الكلوية ، واحتقان الاوعية الدموية ، وارتشاح الخلايا الالتهابية وفي المثانة فقدان طبقة الكيراتين وحدوث التنكس الاستسقائي لخلايا الطبقة الظهارية في كلا المستخلصين ومن خلال موازنة هذه التغييرات المرضية النسيجية لكل من مستخلص الببتيدوكلايكان وعديد السكريد الشحمي اتضح ان مستخلص عديد السكريد الشحمي اكثر شدة وامراضية اذ بدات التاثيرات بتراكيز (50, 75, 100) نانوغرام/مليليتر اقل من تراكيز مستخلص الببتيدوكلايكان 3000000 ، 4000000 ، 5000000 نانوغرام / 1 مليلتر ، فضلا عن وجود تغييرات نسيجية اخرى حدثت في مستخلص عديد السكريد الشحمي وغير موجودة في مستخلص الببتيدوكلايكان. | Our of 150 urine specimens collected from patients presented with urinary tract infections attending Alza’farania and Alyarmoouk hospitals in Baghdad for the period of September , 1st 2005 to December, 1st 2005 , 61 staphylococci were obtained. Ten isolates (16 , 3%) were confirmed to be Staphylococcus xylosus identified by using of biochemical tests. Antibiotic susceptibility tests . however , 8 of them were resistant to erythromycin while all of them were sensitive to ciprofloxacin.The Crude cell wall was extracted by mechanical disintegration using glass beads and a partial purification was done to the peptidoglycan by means of chemicals such as SDS , EDTA , LiCl2 and CaCl2 in addition to enzymes like DNase , RNase , trypsin and pronase.In order to prove the efficiency of the purification method , polyacrylamide gel electrophoresis was achieved under undenaturing conditions as the proteins bands number was reduced from 8 in the crude extract to 4 bands at the final stage.The present study showed clinical biochemical effects of the peptidoglycan in sera of injected rabbits through the increase resulted in liver enzymes ad renal function tests represented by GOT , GPT , alkaline phosphatase , total serum bilirubin , urea and creatinin , an indication to a malfunction of liver and kidney.The pathogenicity of peptidoglycan extracted from S. xulosus S24 (the isolate that resist highest number of studied antibiotics) was studied in urinary tract of female Swiss mice by injecting five animal groups , as triplicates catheter at concentrations reached 1000000 , 2000000 , 3000000 , 4000000 and 5000000 ng / 1 ml , plus another five groups with 10 , 25 , 50 , 75 and 100 ng / ml of E. coli LPS. Two days later , animals were killed ; kidneys and urinary bladder were taken for histopathological study as they showed different pathological changes included shrinkage of glomerulus , congestion of blood vessels and infiltration of inflammatory cells in kidney , whereas dekeratinization and edematous dehydration of the epithelium were seen in urinary bladder.Passing through a comparison between these pathological changes in both extracts , LPS developed the highest severity and pathogenecity since the effects started with concentration (50 , 75 and 100 ng / ml) less than those was withpeptidoglycan (3000000 , 4000000 and 5000000 ng / 1 ml) in addition to the presence of some changes developed by LPS rather than peptidoglycan
