Author name:
ميادة نوري اقبال الدوسكي
Supervisor name:
رجوه حسن عيسى الربيعي | جاسم طعمه حسين الخفاجي
Abstract:
اجريت هذه الدراسة بهدف الحصول على المزيد من الايضاحات حول تاثير الاضطرابات المناعية على الحالة المرضية عند مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل من العراقيين ،لقد تم خلال هذه الدراسة اخضاع 124 مريضا من كلا الجنسين (55مريضاﹰمن الذكور و69من الاناث ) تتراوح اعمارهم ما بين(6 - 55 ) سنة من الذين شخصوا كمرضى التهاب جلدي متماحل ،حيث كان بينهم 48 مريضاﹰ من المصابين بالتهاب الجلدي المتماحل البسيط و76 مريضاﹰ من المصابين بالتهاب الجلدي المتماحل الشديد ، اضافةﹰالى(50) شخصاﹰمن الاصحاء ظاهرياﹰ كمجموعة سيطرة ، تم اخضاعهم الى مختلف الاختبارات بضمنها الفحوصات المختبرية المالوفة للحساسيةوقياس المعلمات المناعية حديثة الاكتشاف بالاضافة الى عزل وتشخيص بكتريا الـ Staphylococcus spp. .اظهرت النتائج اختلاف انتشار مرض التهاب الجلدي المتماحل بين مختلف الفئات العمرية وكذلك بين الجنسين حيث كان نسبة انتشار المرض عند الاناث اكثرمن الذكور. من خلال فحص الجلد وباستخدام (13) نوع من المستارجات، تم التوصل الى انه المستارجات داخل المباني indoor allergens اعلى نسبة للتفاعل الموجب لفحص الجلد ضمن كل مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل ،ومن بينها كان حلم الغبار المنزل HDM هو اكثر الانواع تكرارا فى الظهور بنسبة =5‚68 في حين كان لثيل البرمودا Bermuda grass وخليط انواع المختلفة النسبة الاعلى بين حبوب اللقاح =7‚ 13 % و1‚ 12 % على التوالي ، وكذلك لخليط الفطريات نوع MMI النسبة الاعلى بين الفطريات =9‚12%. باستخدام اختبار الامتزاز المناعي للانظيم المرتبط ELISA تم قياس مستوى الكلوبيولين المناعي(E) الكلي والنوعي في مصل الدم ، وكانت قيمة المتوسط الحسابي للكلوبيولين المناعي(E) الكلي لدى مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل الشديد اعلى وذات فرق احصائي معنوي عنها في كل من مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل البسيط ومجموعة السيطرة الاصحاء.وكذلك تم احتساب مستوى الكلوبيولين المناعي (E)النوعي في مصل الدم وذلك لـ 19 نوع المستارجات اظهرت نتائج الدراسة ان الكلوبيولين المناعي (E)النوعي الاكثر تكرارا في كل مجاميع الدراسة من المرضى كان للمستارج D2 بنسبة =7‚ 63 % يتبعه للمستارج H2بنسبة = 7‚ 59 % ،ثم للعشب G2 وبنسبة = 9‚ 58 % تبعهم الكلوبيولين النوعي للفطر M1 = 5‚ 57 % ، F29 =8‚ 54 % ، = F23‚ 54 %، W6 =6‚ 51 % ، M4 = 50 % ، G1 = 50 % ، G15 =2‚ 49 % ، W1 =5‚ 43 % ، M6 =8‚ 46 % ، D1 =46 % ، M2 =5‚ 43 % ، بينما كانت نسبة الكلوبيولين (E ) النوعي للـ F73 مساوي لـ T9 = 1‚ 37 % ،و 9‚ 33 % للمستارج W9 . في حين كانت اقل نسب للكلوبيولين النوعي ضد كل من T3 ، T5 وكانت تساوي 4‚ 23 % ،1، 16 % على التوالي .ان نسبة التطابق الاجمالية بين فحص الجلد ومستوى الكلوبيولينات المناعية النوعية لـخمسة من المستارجات كانت بمقدار9‚ 83 % كما كانت حساسية الاختبار بنسبة 100% لاشجار Mediterranean و19% لاعشاب Mugwort في حين كانت نسبة خصوصية الاختبار 98 % مساوية لكل من Plantain ,Betula واعقبتها المستارجات Fagac ,Bermuda =5‚97% ، 7‚96% على التوالي .اما المستارج HD اظهر اقل نسبة خصوصية وكانت2‚74% لم يلاحظ اي اختلاف معنوي في مستوى الكلوبيولينات المناعية (M , A ) واحدى مكونات المتمم C3 في المصل بين المجاميع الثلاثة قيد الدراسة بينما لوحظ ارتفاع معنوي في مستوى الكلوبيولين المناعي G واحدى مكونات المتمم C4 عند مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل مقارنة بمجموعة السيطرة الاصحاء. وجد ان عدد خلايا اليفة الايوسين في الدم اعلى معنويا عند كل من مجموعتي المرضى بالمقارنة مع الاصحاء. لم تظهر النسبة المئوية للخلايا اللمفاوية التي تعبر المعلم السطحي CD3 اي فروقات معنوية ضمن مجاميع الدراسة ،بينما النسبة المئوية للخلايا اللمفاوية التي تعبر المعلم السطحي .CDميادة نوري اقبال الدوسكيكانت اعلى معنويا عند مجموعة مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل الشديد عما هو عليه في كل من مجموعتي مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل البسيط والاصحاء. المعلم المناعي الـ CD8 اظهر انخفاض معنوي عند مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل مقارنة بمجموعة السيطرة الاصحاءولوحظ فروقات معنوية في نسبة الخلايا اللمفاوية الموجبة للـ CD4 ضمن مجاميع الدراسة مما ادى الى ارتفاع نسبة ((CD4/CD8 ارتفاعا ملحوظا ضمن مجموعتي مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل ومقارنة بالاصحاء وخاصة عند مجموعة مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل الشديد.كذلك لوحظت اضطرابات في الاستجابة المناعية الخلوية تجاه المشطر اللانوعي PHA ومستخلص البروتيني عند مجموعة مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل الشديد.احد النتائج المهمة في هذه الدراسة هي ان متوسط مستوى الانترلوكين نوع IL - 4 يزداد بشكل معنوي لدى مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل عن الاصحاء ،ان مجموعة مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل البسيط اظهرت زيادة معنوية مقارنة بمرضى الالتهاب الجلدي المتماحل الشديد والاصحاء (1‚84، 9‚58،4 ‚15 بيكوغرام/مل ) في حين ان مستوى الانترلوكين نوع IL - 5 في المصل كان اعلى في مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل الشديد عن مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل البسيط والاصحاء(5‚95، 9‚75، 2 ‚23 بيكوغرام/مل ) ، بالاضافة الى ذلك ظهرت علاقة خطية موجبة بين IL - 5 واعداد خلايا اليفة الايوسين في مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل اما فيما يتعلق بمجاميع الدم فلم تظهر اية علاقة معنوية موجبة بين مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل ومجاميع فصائل الدم بالرغم من انتشار مرض الالتهاب الجلدي المتماحل ضمن الاشخاص ذوي فصائل الدم A, B .الجزء الاخير من الدراسة تضمن اخذ مسحات للجلد لكل من المرضى والاصحاء ، تم زرعها بشكل مناسب لعزل وتشخيص بكتريا المتواجدة فيه . لقد اوضحت النتائج ان بكتريا Staphylococcus aureus كانت الاكثر تكرارا لدى مرضى الالتهاب الجلد المتماحل بنسبة 7‚ 76 % وبالاخص مجموعة مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل الشديد بينما Staphylococcus epidermidis كانت نسبتها3‚ 23 % .فيما يخص علاقة الكلوبيولين المناعي (E) الكلي في المصل مع مختلف المعلمات المناعية ،فقد لوحظ وجود علاقة خطية موجبة معنوية مع عدد من الفحوصات الموجبة للجلد والكلوبيولين المناعي (E) النوعي ،الى جانب ذلك فقد بينت النتائج وجود علاقة الكلوبيولين المناعي (E) الكلي مع عدد خلايا اليفة الايوسين عند كل مرضى الالتهاب الجلد المتماحل النسب المئوية للخلايا اللمفاوية الموجبة للـ CD4 وCD19ونسبة CD4/CD8 وIL - 4 ضمن مجاميع مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل اظهرت علاقة موجبة معنوية مع مستوى الكلوبيولين المناعي (E) الكلي ،في حين علاقة الانترلوكين IL - 5 مع الكلوبيولين المناعي (E) الكلي هي علاقة سلبية واظهرت النتائج ايضا وجود الـ Staphylococcus aureus ضمن مجاميع مرضى الالتهاب الجلدي المتماحل هو مقترن مع زيادة او ارتفاع مستوى الكلوبيولين المناعي (E) الكلي في المصل مما ادى الى علاقة موجبة .فيما لم تظهر الكلوبيولينات المناعية ( M , A ) علاقة موجبة مع الكلوبيولين المناعي (E) الكلي عدا الكلوبيولين المناعي G حيث اظهر علاقة ضعيفة ،كذلك الحال بالنسبة لعلاقة شدة المرض مع مختلف المعلمات المناعية حيث اظهرت النتائج وجود علاقة موجبة ذات قيمة معنوية احصائيا مع كل من عدد الفحوصات الموجبة للجلد والكلوبيولين المناعي (E) وعدد خلايا اليفة الايوسين ،ونسبة CD4/CD8 ، مستوى الانترلوكين IL - 5 في المصل ، اضافة الى ذلك كانت نسبة انتشار بكتريا Staphylococcus aureus مقترنة مع شدة المرض. | The favor of this work, is first at all, and above all, is all Allah's. I would like to express my profound thanks and sincere gratitude to my supervisor Dr. Rajwa H.AL - Rubai’e for her valuable scientific guidance, encouragement and support that made it possible for me to accomplish this study. I extend my deep gratitude also to my supervisor Dr. Jassem T. AL - Khafaji for his scientific advice, clinical instructions, in addition to his provision of laboratory materials and equipment. I should express my gratitude to the head and all the employees of the Department of Biology in the College of Science, AL - Mustansiriya University.Deepest gratitude goes to consultant center for Allergy and Asthma especially, Dr. Arij AL - Ani and Dr. Omar AL - Janabi for preparing the diagnostic cases and the chemist Mrs. Aysar F.AL - Aumari and Alaa’s father, Hamssa’s mother for their generous help and their kind assistance in presenting the possible facilities in the lab work.Thanks are also dedicated for Fransois Tron for his cooperation in help me to complete our research in laboratories of Rouen University France. My sincere gratitude presented to Dr. Abdul Alkhaliq AL - Naqeb for their efforts and help in statistical analysis.From my deep hearts, I would express my thanks and respect to my colleagues for their encouragement during my study. Finally, I would like to express my deepest and warmest gratitude and indebtedness to my family, for their kind, love and help in one way or another, and to all those who have contributed to the completion and success of this project. Mayada N. AL - DoskiResearcher SummaryA Prospective study was conducted to obtain more clarification about the impact of immunological abnormalities on the clinical expression of atopic dermatitis (AD) among Iraqi patients. One hundred twenty four cases of AD (55 males and 69 females), ranging in age between (6 to 55) years, Patients were grouped as mild AD (48) and severe AD (76), according to severity, and (50) apparently healthy individuals used as a control group (24 males and 26 females). They were studied using different allergic, immunological and hematological tests; in addition to that Staphylococcus species were isolated and diagnosed, Atopic Dermatitis occurred in different ages and most frequently in females than males.Skin test analysis of 13 allergens revealed that AD patients had higher proportions of positive skin reactivity to indoor allergens, among them House dust mites HDM was the most frequent = 68.5%, Bermuda grass and grasses mixture had the highest frequency = 13.7%, and 12.1% respectively among pollens, whereas mould mixture I were the most frequent moulds = 12.9%. Enzyme linked immunosorbent assay ELISA was used to measure serum IgE levels. The mean total IgE was significantly higher in severe than in mild AD and healthy control groups. The quantitative of serum specific IgE was carried out for 19 allergens. Among all AD cases, the most frequent specific IgE was found to D2 = 63.7% followed by H2 = 59.7%, G2 = 58 .9%, M1=56.5%, F29= 54.8%, F2= 54.03%, W6= 51.6%, M4= 50%, G1=50%, G15= 49.2%, W1= 43.5%, M6 = 46.8%, D1 = 46%, M2 = 43.5% and F73 and T9 are equal = 37.1% and 33.9 % for W9. However the least rates were to T3 and T5=23.4% and 16.1% respectively, in contrast to that of healthy controls which showed negative results for most allergens with the exception of M1= 24% = followed by W9 = 16% . The relationship of skin test with serum specific IgE level for seven compatible allergens showed an overall agreement of (83.9%) sensitivity for Mediterranean trees=100%, Mugwort=99%, specificity for Plantain equal to Betula = 98%, followed by specificity for Bermuda and Fagac = 97.5%, 96.7% respectively while the least were to HD = 74.2%. No significant differences between all AD patients and healthy controls as well as between two types of AD patients could be detected in IgM, IgA and C3 serum levels, while serum IgG and C4 levels were significantly increased in both types of illness compared to healthy controls. Blood eosinophil counts were significantly higher in all AD patients than healthy controls. No significant differences between all AD patients and healthy subjects in CD3+ lymphocyte percentage while CD19+ lymphocyte percentage was significantly higher in severe AD group than mild and healthy control groups. CD8+ lymphocyte percentage was significantly lower in all AD patients than healthy control group . Statistically significant differences were observed between the study groups in CD4+ lymphocyte percentage, the mean CD4+ / CD8+ ratio was higher in severe AD group compared to mild AD and healthy control. On the other hand a disorder observed in cellular immunity response to PHA and proteins extract among patients with severe AD. One of the important findings of this study, was that the mean serum IL - 4 was significantly increasing among AD patients as compared to healthy controls, also it was significantly higher in mild AD than severe AD and healthy control groups = 84.1, 58.9 and 15.4 pg/ml respectively, whereas serum level of IL - 5 was obviously higher in cases with severe AD group than mild AD and healthy control groups= 95.5, 75.9 and 23.2 pg/ml respectively. More over a significant positive linear correlation was found between IL - 5 and peripheral eosinophil counts in atopic dermatitis. The relationship between AD and ABO system has shown no significant correlation in spite of the highest frequency of A and B blood groups among atopic dermatitis patients. The last part of this study included skin swabs which were taken from AD patients. Samples were cultured on suitable media for isolation then identification bacteria. The results showed that Staphylococcus aureus was the most common organism isolated from AD patients =76.7% while Staphylococcus epidermidis was =23.3%. In severe AD group; the incidence of Staphylococcus aureus was higher than in mild AD group =70 %, 60% respectively. Regarding the association between total serum IgE and different immunological markers, the mean serum total IgE concentration was significantly increased with number of positive skin tests as well as serum specific IgE scored by subjects with AD. Also, the eosinophil counts revealed a statistically significant positive linear correlation with total serum IgE level in all AD group.CD4+ and CD19+ lymphocyte percentage and CD4+/CD8+ ratio among all AD groups showed significant positive linear correlation with total serum IgE concentration.The relationship between total serum IgE levels and IL - 4 concentration gave positive linear correlation; whereas, between IL - 5 and total IgE levels the results showed negative correlation. The results revealed that persistence of Staphylococcus aureus colonization in AD patients was associated with higher levels of total serum IgE leading to positive correlations between serum total IgE and Staphylococcus aureus persistence. There were no significant differences in level concentration of IgM, IgA with the exception of the IgG which showed a weak correlation. In conclusion, the association between AD severity and different immunological markers were assessed. The severity of AD group was associated with higher total serum IgE levels and number of specific IgE scored by subjects, as well as, eosinophil counts, CD4+/CD8+ ratio, level of cytokine in serum (IL - 5), in addition, the persistence of Staphylococcus aureus were associated with severity of AD disease.
