Author name:
شمس حامد كاظم خليل السلطاني
Supervisor name:
ماهر علي جتان القريشي
Abstract:
اجريت الدراسة الحالية في الفترة من شهر ايلول2015 ولغاية اب 2016 للتحري عن وبائية الطفيليات المعوية الاميبا الحالة للنسيج Entamoeba histolytica والاميبا غير الممرضة Entamoeba dispar بطريقة الفحص المجهري وطريقة تفاعل سلسلة البلمرة PCR والمقارنة بين كلا الطفيليين في بعض جينات عوامل الضراوة السستين بروتينيز 5 وamoebapor A ، Ap - B ، Ap - C . كذلك تضمنت الدراســـــة تقدير تركـــــيز الضــــد الافرازي S - IgA ، وكذلك قياس تركيز الاضداد IgA ، IgG ، IgMفي مصول المرضى والسيطرة.بلغ عدد العينات المفحوصة 200 عينة خروج لمرضى يعانون من الاسهال لفئات عمرية مختلفة تم جمعها من المستشفيات والمراكز الصحية وبعض العيادات الخاصة في محافظة بابل، تم فحص العينات بطريقة المسحة المباشرة وطريقة تفاعل تسلسل البلمرة باستخراج الدنا الخاص بالطفيليات منها ، في مختبرات المستشفيات والمراكز الصحية ومختبر الطفيليات المتقدم في كلية العلوم/ جامعة بابل .اظهرت نتائج الفحص المجهري ان نسبة الاصابة الاجمالية بالطفيليات المعوية اميبا الزحار 20% ) 40عينة) ، بينما بلغت 73% بطريقة تفاعل تسلسل البلمرة في حين كانت نسبة الاصابة 27.5 % لطفيلي E. dispar باستخدام البرايمر الخاص بهذا الطفيلي Ed - 1. وتضمنت الدراسة الحالية ارتباط عامل العمر والجنس ومنطقة السكن واشهر السنة بنسبة انتشار كلا الطفيليين وباستخدام الفحص المجهري وPCR واوضحت نتائج التحليل الاحصائي عدم وجود فروق معنوية في عدد المصابين بين العمر والجنس الريف والمدينة وباختلاف نوع الطفيلي، بينما وجدت فروق معنوية لنسب انتشار كلا الطفيليين حسب اشهر السنة .بينت نتائج الفحص المجهري حسب الفئة العمرية ان اعلى نسبة اصابة بلغت 37.5% للفئة العمرية (1 - 10) سنة ، بينما بلغت اقل نسبة اصابة 2.5 % للفئة العمرية (31 - 40) سنة، في حين اشارت الدراسة الجزيئية الى ان اعلى نسبة اصابة36.36 و41.3 % للفئة العمرية (1 - 10) سنة واقل نسبة اصابة هي 9.09 و3.4% لكلا من طفيلي E. dispar وE. histolytica ، على التوالي.حسب الجنس بلغت اعلى نسبة اصابة لطفيلي E. histolytica للذكور67.5 % في حين كانت في الاناث32.5 %بطريقة الفحص المجهري ، اي كانت اعلى من نتائج الـــ PCR ، اذ بلغت 41% ، 59 % للاناث والذكور على التوالي ، مقارنة بطفيلي E. dispar 73% للذكور اعلى من الاناث 27%.بلغت نسبة الاصابة بطفيلي اميبا الزحار حسب منطقة السكن في الريف 75% اعل من المدينة 25% بطريقة الفحص المجهري ، مقارنة بنتائج الـــ PCR كانت نسب الاصابة في الريف 69% اعلى من المدينة 31% ، بينما لطفيلي E. dispar في المناطق الريفية 64% اعلى من المدينة 36%.وفقا للاشهر السنوية للدراسة كانت الاصابة اكثر شيوعا في يونيو ويوليو 20و 27.5% على التوالي بطريقة الفحص المجهري، واقل نسب في نوفمبر وديسمبر ويناير ومارس بنسبة 2.5% , مقارنة لنتائج الـــPCR لاميبا النسيج كان الاصابة اكثر شيوعا في يونيو ويوليو 16.6 ، 33.3 % على التوالي، وكان اقل تواترا في اكتوبر، نوفمبر، ديسمبر، ومارس 3.3% ، في حين لطفيليE. dispar كان معدل الاصابة مرتفع في مايو ويوليو 36.36% ، واقل في سبتمبر9.09٪، مع وجود فروقات معنوية بين الطفيليات لكلتا الطريقتين.اوضحت نتائج الدراسة الجزيئية ان هناك تغاير في الدنا الخاص بعوامل الضراوة في كلا الطفيليين ، اذ كانت جميع عينات طفيلي اميبا الزحار موجبة للجين البادئ سستين بروتينيز 5 CP5 وكذلك لــ amoebapor A ، Ap - B، Ap - C، في حين لطفيلي E. dispar وجدت سبعة عينات 63.6% موجبة لــ amoebapore A ، وستة عينات 54.5% لــ Ap - B ، وثلاث عينات 27.2% لــ Ap - C، مع وجود فروق معنوية لكلا الطفيليين . اظهرت نتائـــــــــــــــــج الدراسة المناعية وجود فــــــــــــــروق معنوية للمرضــــــى المصابيــــــن بطفيلي اميبا الزحار مقارنـــــــــــــــة مع مجموعــــــــــة السيطــــــــــرة ، وبلـغ مستوى تركيز الكلوبيوليــــن المناعي S - IgA (8.582 ± 0.351) مايكروغرام/ ديسيلتر لطفيلي E. histolytica و(5.213 ± 0.421) مايكروغرام/ ديسيلتر لــ E. dispar و(1.935±0.03) مايكرو غرام/ ديسيلتر لمجموعة السيطرة ، كذلك بلغ اعلى تركيز لـــــ IgA , IgG, IgM (387.9 , 707.4, 294.9) ملغ/دل لطفيلي اميبا الزحار مقارنة مع طفيلي E. dispar مع مجموعــــــــــة السيطــــــــــرة ، مع وجود فروق معنوية للمرضى المصابين باميبا الزحار . | The present study conducted in the period from September 2015 to Augusts 2016 to determination of epidemiology for Entamoeba histolytica and nonpathogenic Entamoeba dispar by microscopic examination and conventional PCR and compromise some virulence factors cysteine proteinase CP5 gene , amoebapore A , Ap - B, Ap - C, for both parasites and estimate immunoglobulin G,A,M, and S - IgA in serum of patientsAll stool samples (200) collected from patients for different ages suffering from diarrhea or bloody diarrhea and attended to some hospitals and medical centers in Babylon governorate . All samples were examined by direct wet preparation method and polymerase chain reaction by extract the parasites DNA, in hospital and medical centers laboratories and the advanced parasites laboratory in the Biology Department / College of Science / Babylon University. The microscopic examination results show out of 40 stool samples had E. histolytica with percent 20% ,in compromise to PCR product infection rate was higher 73% , and for E. dispar 27.5% by Ed - 1 primer specific for this parasite.This study includes the relation of age, gender, and residence for both parasites infection, without significant differences for both parasites, while the annual study months had significant differences for both parasites by two methods . The microscopic study results according to ages group the highest infection percentage 37.5% for ages (1 - 10) year and the lower percentage was 2.5% for ages (31 - 40) year, while by PCR technique higher percentage 41.3 , 36.36 % for ages (1 - 10) , while the lower percentage was 3.4% , 9.09 % for (21 - 30) years, for E. histolytica and E. dispar , respectively . According to the gender, the infection Percentage in male and female 67.5% , 32.5% respectively by microscopic examination ,is higher than infection rate by PCR product 59% , 41%, for E. histolytica respectively, in compromise for E. dispar in male 73 % is higher than female 27 %.E. histolytica infection according to rural regions was 75 % higher than urban regions 25 % by microscopic examination ,in compromise to PCR product ,infection rate in rural regions was 69 % higher than urban regions 31 %, while for E. dispar in rural regions was 64% higher than urban 36 %.According to annual months of the study, the most frequent infection was in June and July 20 , 27.5% respectively by microscopic examination , and lower frequent was in November , December , January and March 2.5%, in compromise to PCR product results for E. histolytica the most frequent infection was in June and July (16.6 , 33.3)% respectively , and lower frequent was in October, November , December , and March 3.3% , while for E. dispar The high infection rate was in May and July 36.36%, and lower frequent was in September 9.09 %, with significant differences between parasites for both methods. For molecular study results, out of (40) stool samples, only (29) sample showed positive for CP5 gene marker for E. histolytica and 11 (27.5%) samples showed negative for this gene, moreover (11) stool samples showed also positive for (Ed) primer which is specific for E. dispar ,all samples of E. histolytica were positive for cysteine proteinase CP5 gene , amoebapore A , Ap - B, Ap - C, while for E. dispar only seven samples 63.6% positive for amoebapore A, six samples 54.5 % for Ap - B, and three samples 27.2% for Ap - C , with significant differences between both parasites virulence factors genes. The level of secretory IgA showed significant differences in patients with E. histolytica compared with control group, The level of secretory - IgA was (8.582 ± 0.351) μg /dL for E. histolytica and (5.213 ± 0.421) μg /dL for E. dispar and (1.935±0.03) for control group.The result of the present study, revealed the concentrations of immunoglobulin IgA , IgG , IgM, (387.9 , 707.4, 294.9 mg/dl), were higher in E. histolytica patients group compared to E. Dispar patients and control group , with a significant differences at p ≤ 0.05 for E. histolytica group
