Author name:
سلمى سعيد عباس
Supervisor name:
سامي جبر المالكي | علي عبد اللطيف العلي
Abstract:
اجريت الدراسة الحالية لمعرفة تاثير هرمون الثايروكسين على تمايز العظم وبعض المعايير الفسلجية والتي شملت المعايير الدموية والهرمونات المحرضة للقند واوزان واطوال الاجنة واوزان المواليد في الفئران المختبرية البيضاء Mus musculus L.,اذ قسمت اناث الفئران المختبرية في الدراسة الحالية على مجموعتين هما : المجموعة الاولى الرئيسية : لدراسة تاثير هرمون الثايروكسين L.Thyroxine hormone على المعايير الدموية للاناث الحوامل وغير الحوامل وعلى تمايز العظم في الاجنة(باستخدام طريقة تحضير المقاطع النسجية الاعتيادية للاجنة والطريقة الجزيئية باستخلاص المادة الوراثية (RNA) من الاجنة وباستخدام تقنية النسخ العكسي RT - PCR والبلمرة الكمية qRT - PCR ومعرفة تاثيره على اوزان المواليد والاجنة, وتالفت من 90 انثى بالغة بعمر(10 - 12)اسبوع وقسمت على مجموعتين ثانوية ,و هي مجموعة السيطرة والتي حقنت حيواناتها بـ 0.1 مل من المحلول الفسيولوجي0.9% ولمدة 10 ايام متتالية.بينما المجموعة المعاملة حقنت حيواناتها بـ0.1 مل من هرمون الثايروكسين وبجرعة مقدارها 0.5 ملغم /كغم/يوم ولمدة 10 ايام يوميا بعدها شرحت 5 اناث من كلا المجموعتين ,و زوجت 40 انثى المتبقية ولكلا المجموعتين مع الاستمرار بالحقن لحين تشريح الاناث واستخراج الاجنة خلال فترات عمرية متباينة (9و10و11و12و13و14و15) يوم.اما المجموعة الثانية الرئيسية خصصت لدراسة تاثير هرمون الثايروكسين على الهرمونات المحرضة للقند وهرمونات الدرقية وانزيم Alkaline phosphatase.وتتالف من 15 انثى وقسمت على ثلاث مجاميع ثانوية تضم كل منها (5) اناث, وهذه المجاميع هي : مجموعة السيطرة وحقنت بـ0.1 مل من المحلول الفسيولوجي 0.9%.ومجموعة المعاملة الاولى وحقنت بـ0.1 مل من محلول هرمون الثايروكسين وبجرعة 0.5 ملغ/كغم/يوميا ولمدة 15 يوم للاناث العذارى قبل التزاوج.ومجموعة المعاملة الثانية حقنت بـ0.1 مل من محلول هرمون الثايروكسين وبجرعة 0.5 ملغ/كغم/يوميا ولمدة 30 يوم . اظهرت نتائج الدراسة الحالية ان المعايير الدموية قد تباينت قيمها خلال الفترات الزمنية وللمجموعات ضمن المدى الطبيعي عدا في حالات قليلة ,اذ وجد هناك انخفاض معنوي في اعداد خلايا الدم البيض والخلايا الحبيبية والخلايا الوحيدة والخلايا اللمفية والنسب المئوية للخلايا الحبيبية والوحيدة واللمفية واعداد كريات الدم الحمر,وكذلك قيم مستوى كمية الهيموكلوبينHb والنسب المئوية لحجم الدم المضغوط PCV(HCT)% ومعدل كمية الهيموكلوبين MCHومعدل تركيز الهيموكلوبينMCHC ومعدل حجم كريات الدم الحمرMCV والصفيحات الدموية PLT في فترات متباينة من الحمل للمجموعة المعاملة مقارنة مع مجموعة السيطرة. وبينت النتائج وجود زيادة معنوية في خلايا الدم البيض والخلايا الحبيبية والخلايا الوحيدة والخلايا اللمفية والنسب المئوية للخلايا الحبيبية والوحيدة واللمفية, ومعدل تركيز الهيموكلوبينMCHC والنسبة المئوية لحجم الدم المضغوط %HCT ومعدل حجم كريات الدم الحمر MCVو الصفيحات الدميةPLT في مدد متباينة من الحمل للمجموعة المعاملة مقارنة مع مجموعة السيطرة. وسجلت نتائج الدراسة الحالية حصول ارتفاع معنوي في قيم هرموني T4,T3في الحيوانات المعاملة مع انخفاض معنوي في تركيز هرمون TSHفي الاناث المعاملة مقارنة مع السيطرة,و اوضحت النتائج ايضا انخفاضا معنويا في مستوى الهرمون اللوتيني LH وهرمون الحليب وللمجموعتين(15و30) يوم وزيادة معنوية في الهرمون المحفز للجريبات FSHللمجموعة الثانية(30 يوما) ,مقارنة مع مجموعة السيطرة, ولايوجد تاثير معنوي لهرمون الثايروكسين على هرمون الشحمون الخصوي ولنفس الفترتين مقارنة مع مجموعة السيطرة, وحصلت زيادة معنوية في مستوى انزيم الفوسفاتيز القاعدي بعد 30 يوما من الحقن بهرمون الثايروكسين مقارنة مع مجموعة السيطرة ,وحصول انخفاض في اوزان الاجنة بعمر 15يوما والمواليد للاناث المعاملة مقارنة مع مجموعة السيطرة , وبينت الدراسة زيادة معنوية في اطوال الاجنة المعاملة بعمر 9 و10و11و15يوما مقارنة مع مجموعة السيطرة. اما الدراسة النسجية فقد بينت ان الهيكل العظمي في الاجنة بعمر 9و10و11 يوما عبارة عن بداءات اعضاء تتكون من نسيج ميزنكيمي,ولم تسجل الدراسة النسجية وجود فرق بين مجموعة السيطرة والمعاملة في تمايز العظم .وظهرت بداية التعظم الغشائي والغضروفي في الاجنة بعمر12يوما ,اذ لوحظ بداية تمايز الخلايا الميزنكيمية الى ارومات عظمية,مع وجود القليل من المادة البينية الشبيهة بالعظم بين الارومات العظمية في منطقة الفك السفلي قرب غضروف ميكل ,والفك العلوي والعظم الحنكي واللامي وغضاريف الاضلاع ,اما في الاجنة بعمر13 و14و15يوما فقد ازدادت عمليات تمايز العظم بنوعية ,فاضافة الى النمو الذي حصل في العظام السابقة في تكوينها فقد ظهرت عظام جديدة في مناطق اخرى من هيكل الجنين تمثلت بعظام الصفيحة القاعدية والفخذ وحزام الكتف وحزام الحوض والاضلاع ,اما النتائج الجزيئية الخاصة بتمايز النسيج العظمي في اجنة الفئران المختبرية فقد اشارت الى التعبير الجيني لبعض جينات النسيج العظمي وتشمل Runx2وOSX وOsteo(OSC) وSialo(BSP) والتي بلغت ذروتها في مرحلة (13) يوم. ان لهرمون الثايروكسين تاثير على التعبير الجيني لبعض الجينات التي ترتبط مع التمايز النسجي للعظم اذ يؤدي هذا الى التغير في التعبير الجيني زيادة احيانا وانخفاضا خلال المدد العمرية المختلفة للاجنة .نستنتج من الدراسة الحالية ان زيادة مستوى هرمون الثايروكسين يسبب اضطراب في المعايير الدموية والتعبير الجيني لجينات العظم وانخفاض مستوى الهرمونات المحرضة للقند (LH وProlactin) وزيادة مستوى الهرمون المحفز للجريبات, وتعد هذه الدراسة الاولى على مستوى جامعة البصرة | the present study was performed to know the effect of thyroxine hormone on differentiation of bone tissue and some of physiological parameters, which included blood parameters and Gonadotropine hormones and Weights and Lengths and birth weight of mus musculus L.the females are divided into two groups ;the main first group which included 90 adult females (10 - 12)week, that subjected to study effect of thyroxine hormone on blood parameters of pregnant , nonpregnant females ,and bone differentiation of embryos (by using tissue sections method and molecular technique by RT PCR , and qRT PCR), and also known it is effect on weight of fetus and newborns; this group was also subdivided into two secondary subgroup : - control group ; was injected with 0.1 ml of normal saline (0.9%) for 10 consecutive days ,and treated group; was injected with 0.1 ml of thyroxine hormone (0.5mg/kg/day) for 10 consecutive days ,after that, 5 females from both groups were anatomized,while 40 females were mated of the both groups with continuous of injection until the females were subjected to anatomical practices and then the the embryo were taken during varied peroids (9,10,11,12,13,14,15) day. The main second group which included 15 females ,was selected to study the effect of thyroxine hormone on ;sexual hormone ,thyroid hormone and alkaline phosphatase . this group was divided into another 3 subgroups,one regarded as control group which ; was injected with 0.1 ml of normal saline (0.9%) for 15 consecutive days.and second the first treated group (T1) ; was injected with 0.1 ml of thyroxine hormone (0.5mg/kg/day) for 15 consecutive days ,and without mating of the females,and the second treated group ; (T2);was injected with 0.1 ml of thyroxine hormone (0.5mg/kg/day) for 30 consecutive days and also without mating of the females. Results of the present study were shown that the blood parameters were varied in value between periods and groups (decreasing and increasing among normal value ) with exception in few cases , significant decrease of W.B.C , the granular cells ,monocytes, lymphocytes ,lymphocytes percentage ,granulocytes percentage and monocytes percentage during different periods of pregnancy in the treated animals compared with control , and was decreased RBC ,Hb ,HCT percentage ,MCH ,MHCH ,MCV, and PLT in varied periods , and we noticed a significant increase in WBC ,granular cells ,monocytes ,lymphocytes , granulocytes percentage , monocytes percentage , MCHC ,HCT percentage,MCV, and PLT in varied periods of pregnancy in the treated animals compared with control. Our study was exhibited significant increase in levels of T3 and T4 hormones of the treated animals compared with control, with significant decrease in TSH of treated animals , also significant decrease in LH and prolactin H and for groups(15 and 30 days) ,and significant increasing in FSH of second group (30 day) ,when compared with the control , and there was no effect of thyroxine on TEST H level and for 2 periods(15 and 30) , significant increasing in alkaline pho after 30 days from injection with TH H , decreased of body weight of embryos (15 days) and newborns of the treated females ,the current study showed significant increase of lengths of treated embryos (9,10,11,15 days). The histological study was explained the skeletal tissue ossification of embryos during (9,10,11)day post gestation was primitive organs of mesenchymal tissue and The histological study was not show asignificant differences of bone differentiation between treated and control groups,and intramemberaneous ossification was appeared of embryos at 12 days ,in this stage the begining of differentiation of mesenchyme cells was appeared into osteoblast , with a little of matrix like bone between osteoblasts in Mandible near the meckle cartilage , Maxilla, Palatine,and Hyoid, and endochondral ossification as in Ribs, where in embryos (13,14,and 15) The bone differentiation processes were increased of bone (the intramembranous ossification and endochondral ossification),in addition to the growth of previously formed bones,also new bones were appeared in different areas in embryo skeleton like Basal plate,femur,Scapula girdle , pelvis girdle and the Ribs . In other hand, the molecular results of bone differentiation in embryo ,were exhibited peak of expression of some of the genes of bone tissue (Runx2 ,OSX, Osteo(OSC) ,and Sialo(BSP) ) at 13 days of embryo age, also the thyroxine hormone was effected in expression of some the bone genes that included disturbanceas like increasing of expression during peroids and decreasing in other peroids of embryos life. We concluded from the present study that the increase of thyroxine hormone level caused disturbances of blood parameters and gene expression of the bone genes & decreasing of the level of LH & prolactin hormones and increase the level of FSH. This is the first study on the Basrah University
