Author name:
شيماء فخري جاسم السالم
Supervisor name:
بشرى محمد جابر علوش
Abstract:
تعد هذه الدراسة مسح لبعض المكونات الفعاله لنبات البنفسج العطري Viola odorata L. وعزل هذه المركبات الفعالة (Stigmasterol and β - sitosterol)، كما تم اجراء دراسه بايولوجيه لتحديد فاعليتها كمركبات مضادة للاكسدة وكمضادات بكتيرية حيث تضمنت الدراسه مايلي : - • تم استخلاص هذه المركبات كمستخلص خام من كل جزء من اجزاء النبتة الجذور،الاوراق, الازهار والبذور باستخدام الميثانول والبتروليوم ايثر واجراءالتقدير الكمي والنوعي للمركبين Stigmasterol) و( β - sitosterolفي كل جزء باستخدام تقنيات TLC, HPLC,CC• تم استخلاص وعزل وتشخيص المركبين (Stigmasterol and β - sitosterol) وذلك باستخدام طرق استخلاص وتجزئه وعزل مختلفه• تم استخدام المستخلص الخام لنبات البنفسج العطري Viola odorata L. والمركبات الستيرويدية Stigmasterol) و( β - sitosterol كمضادات للاكسدة على المركب 1 - diphenyl - 2 - picrylhydrazyl (DPPH) الفعال لاحتوائه على الجذور الحرة وتحويله الى مركب 1,1 - diphenyl - 2 - picryl - hydrazine باستخدام التراكيز 25, 50, 100, 200 و400 مايكروغرام/مليلتر والمقارنة مع حامض الاسكوربك كمعاملة قياسية• تم استخدام المستخلص الخام لنبات البنفسج العطري Viola odorata Lو المركبات الستيرويديه( Stigmasterol و( β - sitosterol كمضادات بكتيرية فاعلة ضد بكتيريا staphylococcus aureus وPseudomonas aeruginosa وبتراكيز 2, 5, 10, 20, 30, 40 و50 مايكروغرام/مليلتر والمقارنة مع المضاد الحيوي Gentamicin كمعاملة قياسية• اظهرت النتائج وجود كميات كبيرة من المركبات الستيرويدية(Stigmasterol and β - sitosterol )في كل اجزاء نبتة البنفسج العطري Viola odorata L. اذ كانت تراكيز مركب Stigmasterol في الاوراق 2 ملغم/100مليلتر وللازهار 7.3 ملغم/100مليلتر وللجذر 4.5 ملغم/100مليلتر وللبذور 2.4 ملغم/100مليلتر, فيما كانت تراكيز المركب β - sitosterol في الاوراق 3.2 ملغم/100مليلتر وللازهار 5.3 ملغم/100مليلتر وللجذر 9.2 ملغم/100مليلتر وللبذور 3 ملغم/100مليلتر, اذ كان اعلى تركيز للمركب Stigmasterol في مستخلص الازهار 7.3 ملغم/100مليلتر واعلى تركيز للمركب β - sitosterol في الجذر 9.2 ملغم/100مليلتر.• اظهرت النتائج الفاعلية الكبيرة للمستخلص الخام لنبات Viola odorata L. بالتركيز 400 مايكروغرام/مليلتر كمضاد للاكسدة بنسبة 94% وللتراكيز 25, 50, 100 و200 مايكروغرام/مليلتر بنسبة 72, 80, 84 و92% على التوالي بالمقارنة مع المعاملة القياسية, اذ اظهرت النتائج فروقا معنوية P≤ 0.05 ما بين التراكيز للمستخلص الخام, فيما اظهر التركيز 400 مايكروغرام/مليلتر لخليط المركبات( stigmasterol وβ - sitosterol) كفاءة كبيرة كمضادات للاكسدة وبنسبة 74% وللتراكيز 25, 50, 100 و200 مايكروغرام/مليلتر بنسبة 59, 63, 66 و70% على التوالي مقارنة بالمعاملة القياسية وبفروق معنوية P≤0.05 ما بين التراكيز.• اظهرت تراكيز المستخلص الخام للنبتة فاعلية كمضاد للبكتيريا اذ كان مدى تثبيط بكتيريا Staphylococcus aureus على الوسط المغذي الصلب 0, 5, 15, 18, 20, 22 و25 مليمتر باستخدام التراكيز 2, 5, 10, 20, 30, 40 و50 مايكروغرام/مليلتر على التوالي, واظهر خليط الستيرويدات مدى تثبيط 0, 0, 0, 14, 16, 19 و21 مليمتر لنفس التراكيز على التوالي ومقارنة بالمعاملة القياسية, كذلك اظهر المستخلص الخام كفاءة كمضاد بكتيري ضد بكتيريا Pseudomonas aeruginosa بمدى تثبيط 0, 5, 12, 15, 17, 19 و22 مليمتر ولخليط الستيرويدات بمدى تثبيط 0, 0, 0, 11, 13, 17 و18 مليمتر مقارنة بالمعاملة القياسية, وبينت النتائج ان التركيز الادنى المثبط للمستخلص الخام للنبتة ضد بكتيريا Staphylococcus aureus وPseudomonas aeruginosaهو 5 مايكروغرام/مليلتر ولخليط الستيرويدات هو 20 مايكروغرام/مليلتر. | This study is considered as a survey of the some secondary metabolits present in Viola odorata L., collected from plant nursery in Baghdad between April and July, followed by the fractionation and isolation of Stigmasterol and β - sitosterol.The biological study demonstrated the effect of the Stigmasterol and β - sitosterol found in Viola odorata L. as antioxidant and antibacterial. This study involved the following : - • Extraction of Stigmasterol and β - sitosterol as a crude extract from each part of the plant roots, leaves, flowers and seeds using (Petrolium ether and Methanol) to qualitative and quantitative estimation of Stigmasterol and β - sitosterol in each part of the plant by using TLC, HPLC and CC. • Fractionation and Isolation of sterols compounds (Stigmasterol and β - sitosterol) present in Viola odorata L., by using different methods . • Crude extract and sterols compound (Stigmasterol and β - sitosterol) has been studies in experimental work to determination the antioxidant activity against1,1 - diphenyl - 2 - picrylhydrazyl (DPPH) which is considered as stable free radical and convert it into 1,1 - diphenyl - 2 - picryl - hydrazine ,by using different concentrations (25,50,100,200 and 400µg/ml). Compare ascorbic acid.• Crude extract and sterols compound (Stigmasterol and β - sitosterol) has been used to determination the antibacterial activity using different concentrations (2, 5, 10,20,30,40 and 50µg/ml) against staphylococcus aureus and pseudomonas aeruginosa by using agar well diffusion method compare with Gentamicin as a standard control. • The phytochemical results showed that all the plant parts contain high amount of sterols, the quantitative data revealed that the total content of Stigmasterol in roots(4.5mg/100g) ,in leaves(2mg/100g),in flowers(7.3mg/100g) and in seeds(2.4mg/100g).The content of β - sitosterol in roots(9.2mg/100g),in leaves(3.2mg/100g),in flowers(5.3mg/100g) and in seeds(3mg/100g), highest amount of stigmasterol founded in flowers (7.30mg/100g) ,the maximum amount of β - sitosterol in roots (9.2 mg/100g) .• The results showed that crude extract of Viola odorata in concentration of 400µg/ml have a higher antioxidant effect by 94%, and concentrations of 25, 50, 100 and 200 µg/ml by 72, 80, 84 and 92% respectively which are comparing with standard control Ascorbic acid, the results showed there are significant difference at (P≤ 0.05) between the concentrations in the same crude extract, while the stigmasterol and β - sitosterol of Viola odorata also showed higher antioxidant effect in concentration of 400µg/ml by 74% and concentrations of 25, 50, 100 and 200µg/ml by 59, 63, 66 and 70% respectively comparing with standard control Ascorbic acid with significant difference at (P≤0.05) between them ,and with significant difference at (P≤0.05)between the concentrations in the same fraction.• Antibacterial results of crude extract showed Staphylococcus aureus growth inhibition zone by 0, 5, 15, 18, 20, 22 and 25 mm with 5 µg/ml as MIC, while, sterols compound showed inhibition zone by 0, 0, 0, 14, 16, 19 and 21 mm with 20 µg/ml as MIC comparing with Gentamicine standard control. Furthermore inhibition zone in pseudomonas aeruginosa culture when using crude extract by 0, 5, 12, 15, 17, 19 and 22 mm with 5 µg/ml as minimum inhibitory concentrations (MIC), while, sterols compound showed inhibition zone by 0, 0, 0, 11, 13, 17 and 18 mm with 20 µg/ml as Minimum inhibitory concentration (MIC) compar with Gentamicin standard control .Stigmasterol and β - sitosterol compound showed inhibition zone by 0,0,0,11,13,17 and 18 mm with 20 µg/ml MICcompared with Gentamicine standard control.
