First pages:

دراسة تاثير بعض العوامل البيئية والمطهرات على التصاق بكتريا Proteus vulgaris على بعض الاسطح صلبة == Study The Effect of Certain Ecological Factors and Disinfectants on Proteus vulgaris Adherence to Certain Solid Surfaces

Author name: منال سلمان محمد كسار

Supervisor name: رشيد محجوب مصلح

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: جمعت 430عينة سريرية ونماذج بيئية للفترة من تشرين الاول 2009 لغاية اذار 2010 من عدد من مستشفيات بغداد بواسطة مسحات قطنية معقمة ومغلقة. جمعت 220 عينة سريرية شملت الادرار ومسحات الجروح ومسحات للاذن وخراج الكبد ; وجمعت 210 نموذج من بيئة المستشفيات شملت والارضيات والجدران واسرة المرضى ووحدات العناية المركزة وغرف الاطفال الخدج والهواء عن طريق فتح الاطباق المحتوية وسط اكار المكونكي لمدة دقيقة واحدة . تبعا للصفات المظهرية والاختبارات الكيموحيوية تم الحصول على 32 عزلة شخصت لجنس Proteus التي تم غربلتها وحددت العزلة الاكفا انتاجا للطبقة اللزجة) (slime layer ودراسة تاثير قيم مختلفة من الحرارة والاس الهيدروجيني على نمو هذه البكتريا ودراسة عملية التصاق هذه البكتريا على الاسطح الصلبة وتاثير الحرارة والمطهرات على عملية الالتصاق وعمل دمج بين المطهرات الكيمائية وتاثيرها على الالتصاق . ونتائج هذه الدراسة يمكن ان تلخص بما يلي : - 1.اظهرت النتائج اعتمادا" على الاختبارات الكيمو حيوية و20E system - APIان نسية عزل بكتريا Proteus spp. كانت11,3% للعزلات السريرية بواقع 25 عزلة من مجموع 220 عينة سريرية واكثر عدد عزلات كان من الادرار)13عزلة ) بينما كانت نسبة العزلات البيئية 3, 3 % فقط بواقع 7 عزلات من مجموع 210 نموذج بيئي اخذ من مواقع مختلفة من بيئة المستشفيات واكثر عدد عزلات من وحدة العناية المركزة(3 عزلات). النوعين P. mirabilis وP. Vulgaris هما النوعان السائدان وp. mirabilis ذات نسبة عزل اكثر في العينات السريرية والنماذج البيئية حيث تشكل 87% بينما P. vulgaris فقط 13% من عزلات Proteus .. 2اختبرت كل العزلات عن قابليتها على انتاج الطبقة اللزجة (Slime layer) بطريقة احمر الكونكو(Congo red agar method) وطريقة كريستينس (Christensen method) واظهرت النتائج بان جميع العزلات التابعة للنوع Proteus vulgaris كانت منتجة للطبقة اللزجة بكلا الطريقتين في حين كانت جميع العزلات التابعة للنوع P. mirabilis غير منتجة للطبقة اللزجة بكلا الطريقتين . 3. العزلة الاكفا في انتاجها للطبقة اللزجة والاجدر في اختيارها لاجراء باقي تجارب الدراسة من بين عزلات بكتريا P. vulgaris هي العزلة (U3) المعزولة من عينة الادرار .4. درجة حرارة المثلى لنمو بكتريا P. vulgaris (U3) كانت 37° ﻢ في حين ان الاس الهيدروجيني الامثل كان7 .5.عن طريق اجراء اختبار الفة البكتريا للزايلين تم قياس قيمة صفة الاسطح الكاره للماء لعزلات P. vulgaris وقد تراوحت القيم 42 - 50 % الذي يعنني امتلاك جميع العزلات سطوح كارهة للماء.6.عن طريق اجراء دراسة مقارنة عن قابلية بكتريا P. vulgaris (U3) في الالتصاق على ثلاثة سطوح صلبة (stainless steel, polyurethane and glass surface )المستخدمة في تصنيع العدد الطبية والجراحية فقد اظهرت نتائج الدراسة ان سطح الفولاذ المقاوم للصدا (stainless steel ) كان اكثر السطوح جذبا للبكتريا يليه سطح البولي يوريثين بينما كانت السطوح الزجاجية الاقل جذبا للبكتريا عند درجة حرارة 37° ﻢ. 7. لوحظ زيادة في قابلية البكتريا في الالتصاق على السطوح الصلبة عند درجة حرارة 4 ° ﻢ وعند 40° ﻢ مقارنة مع التصاق هذه البكتريا على نفس السطوح عند درجة حرارة 37° ﻢ.8.كانت قيم التراكيز المثبطة الدنيا للمطهرات (MIC) لبكتريا P. vulgaris (U3) كالاتي : 400 مايكروغرام ⁄مللترللمطهر الكيميائي صوديوم هايبوكلورات و1500 مايكروغرام ⁄مللتر للمطهر الكيميائي اليود و230 مايكرو غرام ⁄ مللتر للمطهر الكيميائي الديتول واخيرا السافلون الذي كانت قيمة التركيز المثبط الادنى له 90 مايكرو غرام ⁄ مللتر في حين اظهرت النتائج بان المطهر الكيميائي صوديوم هايبوكلورايت كان اكفا مطهر من بين المطهرات الاربع في قابليته في ازالة البكتريا الملتصقة على الاسطح الثلاثة الصلبة يليه اليود ثم الديتول واخيرا السافلون عند التركيز المثبط الادنى لهذه المطهرات 9. اظهرت نتائج خلط المطهرات بان جميع حالات الدمج بين المطهرات الكيميائية كانت اكفا في ازالة البكتريا لملتصقة على الاسطح الثلاثة الصلبة مقارنة بالمطهر الكيميائي الديتول والسافلون عند استخدامهما بصورة منفردة باعتبار ان هذين المطهرين الاقل كفاءة في ازالة البكتريا الملتصقة على الاسطح الصلبةوكفا حالات خلط المطهرات فكان .½ MIC of povidone - iodine +½MIC of savlon. : | From October 2009 to March 2010 ,430 specimens and samples were collected from different Baghdad s' hospitals using aseptic capped cotton swabs submerged in sterile nutrient broth. The clinical specimens were two hundred twenty included urine ,ear swabs ,wound swabs ,vaginal swabs and liver abscess, while ,the samples were two hundred ten collected from hospitals' environment included tables ,beds ,floors, walls ,infantsʹrooms and air by open the dish that contain MaCconkey agar for one min .According to morphological characteristics and biochemical tests 32 of Proteus isolates were obtained. All isolates were tested for slime layer producing . The more efficient isolate to produce slime layer was chosen to study effect of different values of temperature and pH on the growth of Proteus ,the ability of Proteus to adhere to three solid surfaces ( stainless steel , polyurethane and glass surface ) and study the effect of different values of temperature and four chemical disinfectants(separate and in combination) on adherence process. The results of this study could be summarized as follows : 1.Depending on the biochemical tests and API 20 E system results, Proteus spp. represent 11.3% of microorganisms isolated from clinical specimens and only 3.3% of microorganisms isolated from environmental samples. Proteus mirabilis and Proteus vulgaris were the dominant Proteus species, P. mirabilis was the highest Proteus spp. isolation percentage among the clinical specimens and hospitals' environment samples which was 87 %; while P. vulgaris was only 13% of Proteus spp.The urine gave the highest isolation number among clinical specimens( 13 Proteus isolates) , whereas intensive care unit (ICU) gave the highest isolation number among hospitals' environment samples(3 Proteus isolates). 2. All the Proteus isolates were tested for production of slime layer by Congo red agar and Christensen method. The results showed that all of P. vulgaris isolates gave positive results for two methods whereas all of P. mirabilis isolates showed negative result for two methods.3. P. vulgaris (U3) was the most slime layer producing among P. vulgaris isolates so it was selected for further experiments.4.The effect of different temperature values and pH values on P. vulgaris (U3) showed that optimum growth temperature was 37°C and the optimum pH for growth was 7.5. By using affinity of bacteria to xylene test ,the P. vugaris isolates were tested for measuring hydrophobicity cell surface .The results showed that the values of hydrophobicity test ranged 42 - 50% which meant that all isolates of P. vulgaris had hydrophobic cell surface.6. Comparing study of the ability of P. vulgaris(U3) to adhere on three solid surface materials used for manufacturing of medical ,surgery and health care devices,it was stated in this study that the stainless steel was the most attractive surface to the bacteria followed by polyurethane while the least ability to attract the bacteria was glass surface at 37°C.7. P. vulgaris(U3) adherence on solid surface was observed at the low temperature 4°C and high temperature 40°C better than at 37°C.8. The MIC values of chemical disinfectants for P. vulgaris were as follows bleach was 400µg/ml, iodine solution 1500µg/ml , dettol 230µg/ml and savlon was90µg/ml. and the bleach at MIC concentration was the most efficient disinfectants than other disinfectants in its ability to remove the adherent bacteria on three solid surfaces followed by iodine solution ,dettol then savlon.9 .The results of disinfectants combination showed that all the combinations were more efficient in removing of adherent bacterial cells than dettol and savlon when they were used alone and the combination between ½MICof iodine solution + ½MICof savlon was the most efficienty to remove adherent bacteria on solid surface than other combinations.

انتاج انزيم الاميليز من بكتريا Bacillus licheniformis Bs7 وتقييد الخلايا المنتجة له بالاقتناص والامتزاز == Production of amylase from Bacillus licheniformis Bs7and immobilization of the producing cells by entrapment and adsorption

Author name: مريم باسم انيس

Supervisor name: سناء برهان الدين

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تم الحصول على 50 عزلة عائدة لجنس Bacillus من مصادر بيئية مختلفة شملت التربة ,الماء والغذاء. اختبرت قدرة هذه العزلات على انتاج انزيم الاميليز, وبينت نتائج الغربلة على ان العزلة Bacillus Bs7 المعزولة من التربة هي الاغرز انتاجا والتي شخصت على انها احدى سلالاتBacillus licheniformis.درست الظروف المؤثرة في انتاج الاميليز, ولوحظ ان اعلى انتاجية تكون عند زرع البكتريا في وسط S.Y.P. الحاوي على 1%نشا,0.2% مستخلص الخميرة, 0.5% ببتون, 0.4% كبريتات المغنيسيوم, 0.05% كلوريد الصوديوم و0.015% كلوريد الكاليسيوم, برقم هيدروجيني 7 وحضنها بدرجة حرارة 50م لمدة 48 ساعة في حاضنة هزازة بسرعة 150 دورة/دقيقة.رسب انزيم الاميليز بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع 70% وكانت الففعالية نوعية 540 وحدة/ملغم بروتين بعدد مرات تنقية 1.2وبحصيلة انزيمية مقدارها48%.تم تقييد خلايا B. licheniformis Bs7 وانزيم الاميليز المنقى جزئيا بتقنية الاقتناص (Entrapment) داخل الجينات الكاليسيوم والاكار وعديد الاكريلامايد وتبين ان الخلايا المقيدة داخل الجينات الكاليسيوم احتفظت ب110% من الفعالية الانزيمية بعد مرور 5 دقائق من زمن التفاعل يليها الاكار ثم عديد الاكريلامايد بفعالية متبقية 75%و 61% على التوالي مقارنة مع الخلايا الحرة التي امتلكت فعالية انزيمية 94% بعد مرور5 دقائق من زمن التفاعل كما احتفظت الخلايا المقيدة داخل الجينات الكاليسيوم ب 50% من فعاليتها الانزيمية بعد مرور 60 دقيقة من زمن التفاعل في حين احتفظت الخلايا الحرة ب 37% من فعاليتها بنفس الوقت. اما الانزيم المقيد داخل الجينات الكاليسيوم فقد احتفظ ب 85% من فعاليته الانزيمية بعد مرور 5 دقائق يليه الاكار 70% ثم عديد الاكريلامايد 50% مقارنة مع الانزيم الحر حيث احتفظ بفعالية انزيمية قدرها 79%.تم تقييد خلايا B. licheniformis Bs7 بطريقة الامتزاز (Adsorption) على السطوح الصلبة لمواد مختلفة شملت الفحم والقطن والنايلون ونشارة الخشب وعديد استارين والسيفاديكس G - 150, ثنائي اثيل امينو اثيل Sephadex - DEAE.احتفظت الخلايا المقيدة بنشارة الخشب باعلى فعالية انزيمية بلغت 128% عند حضنها بدرجة حرارة 50م لمدة 5 دقائق و79% عند حضنها لمدة 30 دقيقة بالمقارنة مع الخلايا الحرة والتي امتلكت فعالية انزيمية 87% و40% على التوالي في الظروف نفسها.وجد ان درجة الحرارة 50م هي الدرجة الحرارية التي تظهر اعلى فعالية الخلايا المقيدة بنشارة الخشب حيث احتفظت ب 125% من فعاليتها الانزيمية بعد مرور 5 دقائق مقارنة بالخلايا الحرة والتي امتلكت فعالية انزيمية 88% بعد مرور 5 دقائق.وعند تعرض الخلايا المقيدة بنشارة الخشب لدرجات حرارية مختلفة تراوحت بين 40 - 70 م لوحظ ان الخلايا المقيدة احتفظت ب 123% من فعاليتها بدرجة 60 م و97% بدرجة 70م في حين كانت هذه النسبة للخلايا الحرة 94% و70% على التوالي.وكان افضل رقم هيدروجيني للمحافظة على فعالية الخلايا المقيدة بنشارة الخشب هو 7 حيث بقت الخلايا المقيدة محتفظة ب 129% من فعاليتها في حين احتفظت الخلايا الحرة ب 90%.جرى استخدام الخلايا المقيدة بنشارة الخشب لثمان دورات. حيث لوحظ امكانية اعادة استخدام الخلايا المقيدة للدورات الثلاثة الاولى بفعالية متبقية مقدارها 95% و49% للدورات الثلاثة الاخرى وانخفضت الفعالية الى 30% في الدورة الثامنة.اختبرت قابلية الخلايا المقيدة بنشارة الخشب على ازالة البقع من الالبسة حيث لوحظ ان استخدام الخلايا المقيدة مع المنظفات افضل في ازالة البقع عن الالبسة من المنظفات لوحدها. | Fifty isolates belong to Bacillus spp. were isolated from different sources including soil, water and food. The ability of amylase production by these isolates was screened. Bacillus Bs7 which isolated from soil was the highest amylase producer; it was identified as a strain of Bacillus licheniformis. Optimal condition for α - amylase production were studied and the highest production of amylase was obtained when the bacteria were cultured in S.Y.P medium which contained 1% starch, 0.2% yeast extract, 0.5% peptone, 0.05% Mgso4 , 0.05% Nacl and 0.015% Cacl2 at pH 7 and incubated at 50˚C in shaking incubator at 150 rpm for 48hrs. Amylase was extracted by 70% ammonium sulphate precipitation and the specific activity was 849 u/mg protein. B. licheniformis Bs7 cells and partially purified amylase were immobilized by entrapment methods in calcium alginate, agar and polyacrylamide. The immobilized cells into calcium alginate retained 110% of enzyme activity after 5 minutes followed by agar and polyacrylamide with remaining activity 75% and 61%, respectively when compared with the free cells that have enzyme activity of 94% after the same time. Immobilized cells into calcium alginate retained 50% of enzyme activity after 60 min while free cells had remaining activityof 37% after the same time. Amylase that immobilized into calcium alginate retained 85% of enzyme activity after 5 min followed by agar and polyacrylamide that retained 70% and 50% of enzyme activity respectively, compared with the free enzyme with remaining activity of 79%. B. licheniformis Bs7 cells were immobilized by adsorption method on solid surfaces of different carriers including charcoal, cotton, nylon, sawdust, polystyrene, sephadex G - 150 and DEAE - sephadex. The immobilized cells on sawdust showed maximum enzyme activity of 128% when incubated at 50˚C for 5 min and 79% after 30 min incubation compared with free cells that showed 87% and 40% enzyme activity respectively at the same times. Optimum temperature for the activity of immobilized cells on sawdust was 50˚C which had 125% of enzyme activity after 5 min compared to free cells with remaining activity of 88% after the same time. Immobilized cells on sawdust when incubated at different temperatures ranged between 40 - 70˚C for 5 min, revealed that the immobilized cells had retained 123% of activity at 60˚C and 97% at 70˚C compared to the free cells which retained 94% and 70% at the two temperatures respectively. The optimum pH that kept the activity of immobilized cells on sawdust was 7 with remaining activity of 129% while free cells kept 90% of activity at this pH value. The immobilized cells on sawdust were repeatedly used for 8 cycles. The immobilized cells showed the maximum enzyme activity during the first three cycles with remaining activity of 95%, and 49% for the second three cycles; the remaining activity was reduced to 30% in eighth cycle. The ability of immobilized cells on sawdust to remove the stains from clothes was tested. The results showed that the ability of immobilized cells with detergents for removing stains was better than detergent alone.

التهابات المجاري البولية الناتجة عن دنا بكتريا Staphylococcus aureus مقارنه بدنا الخميرة Candida albicans

Author name: صبا نزيه عبد الغفار الحسون

Supervisor name: حارث جبار فهد المذخوري

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: جمعت ٣٠٨ عينة ادرار للفترة من تشرين الاول ٢٠٠٩ لغاية كانون الثاني ٢٠١٠ من مرضى يعانون من التهاب المجاري البولية من مستشفى اليرموك التعليمي والمختبرات التعليمية لمدينة الطب. اذ تم عزل وتشخيص٧٢ عزلة تابعة لجنس المكورات العنقودية وبنسبة عزل بلغت (٢٣٫٣٪) من مجموع عينات الادرار٬ وتم اثبات عائدية ٥١ عزلة الى المكورات العنقودية السالبة لاختبار الكواكيوليز٬ وكانت ٢١ عزلة منها تابعة للنوع S. aureus وبنسبة عزل (٢٩٫٢٪) من مجموع المكورات العنقودية٬ وبنسبة (٦٫٨٪) من المجموع الكلي لعينات الادرار٬ بينما ٣٦ (١١٫٦٪) عزلة قد شخصت على انها C. albicans من مجموع عينات الادرار. وقد شخصت هذه تم اختبار حساسية عزلاتS. aureus لمجموعة من المضادات الحياتية٬ وكان هناك تباينا ومقاومة متعددة تجاه تلك المضادات٬ حيث اظهرت اغلب العزلات مقاومة عالية ضد ampicillin (٩٠٫٥٪(٬ amoxicillin(٨١٪)٬cefotaxime (٧٦٫٢٪)٬ وكانت المقاومة لل oxacillin (٦٦٫٧٪) وmethicillin (٦٦٫٧٪) ٬ بينما كان المضاد vancomycin الاكثر تاثيرا على كل العزلات (٠٪). تم استخلاص دنا من بكتريا S. aureus S11 بواسطة استعمال عدةWizard genomic DNA purification٬ وحطم جدار البكتريا بانزيم اللايسوزايم بينما استخلص دنا خميرة C. albicans C3 باستعمال طريقة Harju٬ وحطم جدار الخميرة بتكرار تجميد واذابة الخلايا بالاضافة الى دور المنظفات الموجودة بدارئ التحلل .(Harju buffer) عندما تم قياس امتصاصية محاليل الدنا بواسطة المطياف وجد ان تركيز دنا S. aureus S11 كان ٠٫٨٢٥ مايكروغرام\مايكروليتر٬ والنقاوة ١٫٧٥. بينما كان تركيز دنا C. albicans C3 ٢٫٤٥٥ مايكروغرام\مايكروليتر ٬ والنقاوة ١٫٧٠. ومن كلا تركيزي دنا S. aureus S11 ودنا C. albicans C3 حضر سلسلة تراكيز (٥٠٬٤٠٬٣٠٬٢٠٬١٠ مايكروغرام\١٠٠مايكروليتر). لوحظت تفاعلات خفيفة جدا للفئران البيض المحقونة عن طريق الاحليل ب١×٨١٠ وحدة مكونة للمستعمرة\مل من خلايا C. albicans C3 بالمقارنة مع فئران محقونة ب١×٨١٠ وحدة مكونة للمستعمرة\مل من خلايا S. aureus S11 . فقد عكست الكلى المحقونة ب S. aureus S11 احتقان مع ارتشاح الخلايا الالتهابية وانحلال للنبيبات البولية بينما المثانة عكست وذمة مع ارتشاح متوسط للخلايا الالتهابية وتقرح بؤري لسطح الطبقة الطلائية المخاطية. اظهرت الكلى المحقونة ب C. albicans C3 احتقان ولم يلاحظ تغيرات نسيجية واضحة٬ بينما المثانة اظهرت ارتشاح خفيف للخلايا الالتهابية مع وذمة في الطبقة تحت الطلائية. لمعرفة التاثير المرضي لدنا S. aureus S11 ودنا C. albicans في الجهاز البولي للفئران البيض ٬ حقنت الفئران عن طريق الاحليل بخمسة تراكيز لكل من دنا S. aureus S11 ودنا C. albicans C3 . كان التاثير المرضي لكليهما معتمد على التركيز فقد ازدادت الشدة بزيادة تركيز الدنا وكانت اشدها عند تركيز ٥٠ مايكروغرام\مايكروليتر٬ ولكن اظهر دنا C. albicans C3 تغيرات نسيجية اقل شدة من التي لوحظت مع دنا . S. aureus S11 اظهرت الاعضاء (الكلى والمثانة) للفئران المحقونة بدنا S. aureus S11تغيرات مرضية مختلفة٬ في الكلى تراوحت من انحلال خفيف وتنخر للنبيبات البولية٬ ارتشاح خفيف الى شديد للخلايا الالتهابية٬ احتقان الاوعية الدموية الى مظهر قريب للحالة الطبيعية للكلى. بينما تمثلت التغيرات في المثانة بتحطم الجدار المخاطي٬ ارتشاح خفيف الى شديد للخلايا الالتهابية٬ وذمة خفيفة٬ انسلاخ سطح الطبقة الطلائية المخاطية الى مظهر قريب للحالة الطبيعية للمثانة.تراوحت التغيرات المرضية للكلى المحقونة بدنا C. albicans C3 من احتقان الاوعية الدموية٬ ارتشاح متوسط للخلايا الالتهابية الى مظهر قريب للحالة الطبيعية للكلى. بينما المثانة اظهرت وذمة خفيفة٬ ارتشاح خفيف للخلايا الالتهابية الى مظهر قريب للحالة الطبيعية للمثانة. | From October 2009 to January 2010, 308 mid stream urine specimens were collected from patients suffering from urinary tract infections at AL - Yarmouk Teaching Hospital and The Educational Laboratories of Madienat Al - Teb. Staphylococci were isolated from 72 (23.3%) urine specimens, 51 isolates were coagulase negative staphylococci, out of these 21 were identified as Staphylococcus aureus (29.2%) from the total count of staphylococci and (6.8%) from total urine specimens. While 36 (11.6%) specimens were identified as Candida albicans isolates. The isolates were diagnosed by biochemical tests, API Staph. and Candida system. Susceptibility of S. aureus isolates to antibiotics was examined, the results revealed different and multi resistance to these antibiotics, that S. aureus isolates were highly resistant to ampicillin (90.5%), amoxicillin (81%) and cefotaxime (76.2%), the resistant to oxacillin (66.7%), methicillin (66.7%), while vancomycin found to be the most effective agents against all of the isolates (0%). Staphylococcus aureus S11 DNA was extracted by using Wizard genomic DNA purification kit method, the cell wall of S. aureus was hydrolyzed by using lysozyme enzyme. While C. albicans C3 DNA was extracted by using a Harju method, the cell wall of C. albicans was ruptured by using repeated freeze - thawing of cells as well as the role of the detergents found in a lysis buffer (Harju buffer). When the absorbance of DNA solutions was measured by the spectrophotometer apparatus it was found the concentration of S. aureus S11 DNA was 0.825 µg/µl, the purity was 1.75. While the concentration of C. albicans C3 DNA was 2.455 µg/µl, the purity was 1.70. From the each concentrations of S. aureus S11 DNA and C. albicans C3 DNA was prepared serial of concentrations (10, 20, 30, 40 and 50 µg/100µl(. Mildest reactions were obtained from mice challenged with 1×108 cfu/ml viable organisms of C. albicans C3 compared with mice challenged with 1×108 cfu/ml viable organisms of S. aureus S11. Kidney treated with S. aureus S11 revealed congestion, inflammatory cells infiltration and degenerative changes of renal tubules, while its bladder revealed oedema with moderate inflammatory cells infiltration and focal mucosal surface epithelial ulceration. However kidney treated with C. albicans C3 showed that there was congestion and no obvious histological changes, while its bladder developed mild infiltration of inflammatory cells with oedema in subepithelial lining layer.In order to testify the pathogenicity of S. aureus DNA and C. albicans DNA in murine urinary tract system, mice were injected intraurethraly with five doses of each S. aureus S11 DNA and C. albicans C3 DNA. The histological changes for each was dose - dependent, the magnitude increased with increasing the DNA dose with the maximal at 50 µg/100µl, but C. albicans C3 DNA developed throughout less intense histological changes than observed with DNA from S. aureus S11.Organs of mice (kidneys and bladders) treated with S. aureus S11 DNA showed different pathological changes, in kidneys the changes ranged from mild degenerative and necrosis of renal tubules, mild to severe infiltration of inflammatory cells, congestion of blood vessels to near normal structure appearance of the kidney. Whereas the bladders developed damage of mucosal wall, mild to severe inflammatory cells infiltration, mild oedema, sloughing of mucosal epithelial surface to near normal structure appearance of the bladder. However kidneys treated with C. albicans C3 DNA ranged from congestion of blood vessels, moderate inflammatory cells infiltration to near normal structure appearance of the kidney. While its bladder developed mild oedema, mild inflammatory cells infiltration to near normal structure appearance of the bladder.

انتاج وتوصيف الليفان من بكتريا Paenibacillus polymyxa المعزولة محليا

Author name: شمم ناصرراضي

Supervisor name: شذى سلمان حسن | سناء برهان الدين

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تم الحصول على 88 عزلة تعود لجنس Bacillus من التربة والمياه من اصل 112 عزلة بكتيرية اعتمادا على الفحوصات الزرعية والمجهرية , اظهرت 25عزلة تعود لهذا الجنس مستعمرات لزجة عند زرعها على وسط الاملاح الصلب الحاوي على %20 من السكروز, من ضمن هذه العزلات تم اختيار 10 منها والتي اعطت اعلى درجة من النمو اللزج لزرعها على وسط الاملاح السائل الحاوي على السكروز. كانت العزلة B2 الافضل في انتاج الليفان ((levan حيث اعطت اعلى وزن جاف من الليفان والذي بلغ 4.1غم /100مل واعلى نسبة من السكريات الكلية 91% والسكريات المختزلة 80%. الفحوصات المزرعية والكيموحيوية لهذه العزلة اظهرت انها تعود للنوع Paenibacillus polymyxa . تم استخدام ثلاثة انواع من المذيبات العضوية لغرض استخلاص الليفان وهي ايثانول, ميثانول وايزوبروبانول بنسبة (1 : 4حجم /حجم) اعطى المذيبان الايثانول والايزوبروبانول اعلى قيمة من الوزن الجاف للليفان والتي بلغت 4.1 غم /100مل بينما اعطى الميثانول 3.7 غم / 100 مل. تم تحليل الليفان نوعيا للكشف عن محتواه من السكريات المختلفة والكاربوهيدرات وذلك باستخدام اربعة كشوفات : الكشف الاول كون حلقة بنفسجية مع محلول الليفان بينما لم يعطي الليفان اي تغيير في اللون مع الكشف الثاني ممايدل على خلو الليفان من الانواع الاخرى من السكريات المتعددة ((Polysaccharide كالنشاء والكلايكوجين والدكستران. الليفان المتحلل جزئيا بفعل حامض الهيدروكلوريك المركز (HCl) كون راسب برتقالي اللون عند تفاعله مع الكاشف الثالث مما يدل على وجود سكريات مختزلة تفاعلت مع الكاشف بينما اعطى الكشف الاخير لون احمر قاني مع محلول الليفان مما يدل على وجود السكر الاحادي الفركتوز. حددت الظروف المثلى لانتاج الليفان من العزلة B2 واظهرت النتائج ان الوسط الامثل للانتاج كان وسط الاملاح الحاوي على20% من السكروز وبدون اي مصدر نايتروجيني برقم هيدروجيني (pH) 7 وبدرجة حرارة 37 ˚م وبحجم لقاح2 % من المزروع البكتيري ولمدة حضانة 48 ساعة في حاضنة هزازة بسرعة 100 دورة في الدقيقة, حيث بلغت قيمة الوزن الجاف لليفان 4.8 غم/100مل وكانت النسبة المئوية للسكريات الكلية 95.8% ونسبة السكريات المختزلة 92%. ان انتاج الليفان في اوساط خام طبيعية مثل وسط عصير قصب السكر ووسط مستخلص التمر ادى الى انخفاض في انتاج الليفان مقارنة مع وسط الاملاح الحاوي على السكروز. تمت دراسة مواصفات الليفان اعتمادا على لزوجته ((viscosity عند تراكيز مختلفة حيث اظهرت النتائج ان اللزوجة تزداد بزيادة التركيز حتى تصل الى اعلى قيمة لها 3.18 سنتيبويز عند 20% , كذلك تمت ايضا دراسة تاثير الحرارة والرقم الهيدروجيني وتاثير املاح الصوديوم NaCl بتراكيز مختلفة على لزوجة محلول الليفان عند تركيزين هما 2% و20% حيث اظهرت النتائج بان اللزوجة عند 20% تقل بزيادة درجة الحرارة حتى تصل الى 0.67 سنتيبويزعند 100˚م ولوحظ بان هذا التاثير عكسي حيث ان الليفان يستعيد لزوجته تدريجيا بانخفاض درجة الحرارة الى 20˚م اما بالنسبة للاس الهيدروجيني pH فكان له تاثير طفيف على اللزوجة عند الرقم الهيدروجيني 4 و10. لقد لوحظ بان الزيادة في تركيز املاح الصوديوم تؤدي الى الزيادة في لزوجة الليفان عند تركيز20% حتى تصل الى 4 سنتيبويز عندما يكون تركيز املاح الصوديوم 10%. تم تحليل نموذج الليفان المستخلص من العزلة B2 وذلك باستخدام تقنية ال FT - IR وقد اظهرت النتائج وجود المجاميع الكيميائية الفعالة (CO) التي تمثل اهتزاز مط ((Stretching و,(CH) (OH) الذي يمثل اهتزاز انحناء ((Bending عند الترددات 1370,1265.2,1093,1165,813.7,945.2سم - 1 ان تحليل الليفان باستخدام تقنية Thin Layer Chromatography اظهرت الليفان كبقعة واحدة سوداء تمثل الفركتوز وكانت قيمة الجريان النسبي((Relative flow لكل من الليفان والفركتوز (0.57) عند استخدام محلول المذيبات الذي يتالف من البيوتانول : البروبانول : الماء المقطر : حامض الخليك بنسبة 7 : 5 : 4 : 2. تمت دراسة تاثير الليفان ودوره كعامل مشجع بريبيوتك ((Prebiotic لنمو البكتريا المفيدة مثل Lactobacillus acidophilus حيث وجد ان الليفان يؤدي الى زيادة عدد البكتريا وبنسبة 172% عند تركيز 2% قياسا مع معامل السيطرة46 %.درس تاثير الليفان في عملية التهام خميرة الكانديدا (Candida) من قبل خلايا الدم البيض Polymorphonuclear (PMNs) خارج الجسم الحي وقد بينت النتائج ان معاملة خلايا الدم البيض مع الليفان كان لها تاثيرا واضحا في تحفيز الخلايا البلعمية وزيادة فعاليتها في عملية الالتهام وبالتالي زيادة معامل البلعمة Phagocytic Index)) وان هذا التاثير يزداد مع زيادة تركيز الليفان مع وجود فروق معنوية كبيرة مقارنة مع معامل السيطرة عند p<0.01)) وان اعلى معامل بلعمة تم الحصول عليه هو 68% عند التركيز 100 مايكروغرام / مل.

انتاج وتوصيف بيتا - هيدروكسي بيوتاريت (? - hydroxybutyrate) من عزلة محلية لبكتريا Azotobacter chroococcum == Production and Characterization of ? - hydroxybutyrate from Azotobacter chroococcum local isolate

Author name: سعاد علي احمد

Supervisor name: شذى سلمان حسن

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تم الحصول على 12 عزلة من بكتريا Azotobacter chroococcum من اصل 20 عينة تربة جمعت من مناطق مختلفة بالقرب من جذور النبات من حقل ذرة في كلية الزراعة في ابو غريب في الفترة الزمنية بين اب وكانون الثاني. درست قابلية العزلات على تجميع عديد هيدروكسي بيوتاريت وذلك بتصبيغ العزلات بصبغة Sudan black B . اظهرت جميع العزلات القدرة على انتاج المتعدد PHB وان العزلة A. chroococcum 9 كانت اكثرهم تجميعا للمتعدد PHB .درست تاثيرات ظروف مختلفة في انتاج المتعدد فوجد ان الظروف المثلى لانتاج PHB من العزلة A. chroococcum 9 بتنميتها في وسط Stockdale nitrogen free medium الحاوي على الكلوكوز مصدرا كربونيا والببتون مصدرا نيتروجينيا عند رقم هيدروجيني 7.5 , والملقح ب 3.8 × 104 خلية/ مل عند درجة حرارة 30 م˚ والحضن في حاضنة ساكنة لمدة 48 ساعة, حيث كانت نسبة PHB في هذه الظروف ( 40.3% ) .درست انتاجية البكتريا A. chroococcum 9 في الوسط المحتوي على مخلفات طبيعية مثل مولاس قصب السكر ومستخلص التمر(الزهدي) والشرش وكذلك الوسط المحتوي على الكليسيرول او احد انواع الزيوت ( زيت الزيتون , زيت الذرة , زيت زهرة الشمس ) حيث استخدمت بصفتها اوساط رخيصة لانتاج المتعدد PHB . كانت اعلى نسبة للعديد ( 78% ) تم الحصول عليها من تنمية البكتريا A. chroococcum 9 في وسط Stockdale nitrogen free medium المحتوي على 5% من مولاس قصب السكر . استخلص PHB من العزلة A. chroococcum 9 بعدة طرائق تضمنت الاستخلاص بمحلول هايبوكلورات الصوديوم وطريقة SDS مع هايبوكلورات الصوديوم واستعمل هيدروكسيد الصوديوم في الطريقة الثالثة . كانت طريقة الاستخلاص باستخدام محلول هايبوكلورات الصوديوم الافضل حيث بلغت نسبة المتعدد 39.5% ) ) .اظهرت نتائج توصيف PHB ان الوزن الجزيئي للمتعدد المستخلص من بكتريا A. chroococcum 9 كان 2.6×105 دالتون وان درجة الانصهار له كانت 180 م˚ .درست ذائبية PHB في عدة مذيبات عضوية ولوحظ ان PHB يذوب في الكلوروفورم و1 - 2 ثنائي كلوريد الايثانول الا انه غير ذائب في الميثانول , الايثانول , الاسيتون , الهكسان , ثنائي اثيل ايثر ورباعي كلوريد الكاربون .درست لزوجة PHB المستخلص من بكتريا A. chroococcum 9 في عدة ارقام هيدروجينية , حيث لوحظ اختزال في لزوجة المتعدد في الوسط الحامضي (pH 4) والقاعدي (pH 10) مما يعني اختزال في الوزن الجزيئي للمتعدد . في حين كان الرقم المتعادل (pH 7) ملائما للحفاظ على تركيبه اذ لم تتغير اللزوجة عند هذا الرقم .وجد ان PHB المستخلص من بكتريا 9 A. chroococcum يتحلل حيويا بفعل انواع مختلفة من البكتريا تضمنت P. aerugenosa , B. subtilis و. A. chroococcum | Twelve Azotobacter chroococcum isolates were obtained from 20 soil samples collected from different places in corn field in Agricultural College in Abu - Ghrabe near the plant roots in the period between August and January . The ability of polyhydroxybutyrate accumulation of the isolates was examined by staining with Sudan black B stain. All the isolates were able to produce PHB . A. chroococcum 9 was the highest PHB producer. The effect of different conditions on accumulation of PHB from A. chroococcum 9 were determined . The favorable productivity appeared when Stockdale nitrogen free medium containing 2% glucose as carbon source and 1% peptone as nitrogen source at pH 7.5 was inoculated with 3.8 × 104 Cell/ml and incubated in static incubator at 30 ˚C for 48 h , PHB productivity at these conditions was 40.3% . Media containing natural wastes including cane molasses , date extract , whey and media containing glycerol or a kind of oil ( olive oil ,sunflower oil and corn oil) were used as economic media for PHB production . High productivity was observed in Stockdale nitrogen free medium containing 5% cane molasses , PHB content was 78% . PHB was extracted from A. chroococcum 9 by different methods including sodium hypochlorite , SDS and sodium hypochlorite and by NaOH. The optimum recovery of PHB was 39.5% by using sodium hypochlorite extraction method . The molecular weight of PHB extracted from A. chroococcum 9 was 2.6×105 dalton and the melting point was 180 ˚C . The solubility of PHB in several solvents was studied . The PHB was soluble in chloroform and in 1 - 2 dichloroethanol , while it was insoluble in methanol , ethanol , acetone , hexane , diethyl ether and carbon tetrachloride . The viscosity of A. chroococcum 9 PHB was determined at different pH values , a decreasing in viscosity was at acidic pH (pH 4) and at alkaline pH (pH 10) which indicate a reducing in PHB MW , while neutral pH (pH 7) was kept the structure of PHB . PHB extracted from A. chroococcum 9 was found to biodegradable by different kinds of bacteria included P. aerugenosa , B. subtilis and A. chroococcum

دراسة التاثير التثبيطي لراشح بكتيريا Lactobacilli المعزولة من مصادر مختلفة على تكوين الغشاء الحياتي لبكتيريا Klebsiella pneumoniae == A Study On inhibitory effect of local Lactobacilli filtrate on formation of Klebsiella pneumoniae Biofilm

Author name: سحـر ظاهر عبد عسل

Supervisor name: حارث جبار فهد المذخوري

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: جمعت 312 عينة ادرار وجروح وقشع للمدة من اب الى ايار 2009 في اوعية معقمة من مرضى زائرين لخمسة مستشفيات في مدينة بغداد وشملت المختبرات التعليمية ,م.بغداد التعليمي,م.الشهيد غازي الحريري,م.الواسطي التعليمي للجراحة التقويمية وم.ابن النفيس التعليمي لامراض القلب.شخصت العينات باستخدام الفحوص البايوكيميائية ونظام Api 20 E ووجد ان 155 عزلة تعود لجنس . Klebsiellaحقق النوع Klebsiella pneumoniae اعلى نسبة عزل وصلت الى ما يقرب من 36,13 % في حين شكلت الانواع K. oxytoca وK. terrigena وK. mobilis وK. ornithinolytica حوالي 20,46% و18,06% و16,13% و9,03% على التوالي من مجموع عزلات جنس الكليبسيلا. فيما يخص نوع العينة، عزلت K. pneumoniae من الادرار (42,16%) مقارنة مع عينات الجروح (31,25%) والقشع (28,57%) من مجموع عزلات جنس الكليبسيلا.في الدراسة الحالية، حددت الاستجابة لمضادات الحياة لعزلات K. pneumoniae جميعها وسجل مضاد الامبيسيلين اعلى نسبة مقاومة (81,5%) تلاه مضادي التتراسايكلين والتراموكسازول بنسبة 74,1% لكل منهما. هذا وكان 59,3% و51,9% و48,1% و40,7% و40,7% و33,3% و22,2% من عزلات K. pneumoniae مقاوما لمضادات النايتروفيورانتوين والسيفوتاكسيم والتوبرامايسين والناليديكسيك اسد والسيبروفلوكساسين والسيفترياكسون والجنتامايسين على التوالي. من ناحية اخرى اظهر مضاد الاميكاسين اقل نسبة مقاومة بلغت 7,41%.قدرت قابلية عزلات K. pneumoniae على انتاج الغشاء الحياتي باستعمال تقنية التصبيغ بالبنفسج البلوري في طبق المعايرة الدقيقة وحددت قيمة الكثافة الضوئية عند طول موجي 540 نانوميتر التي مثلت درجة سمك الغشاء الحياتي. وجد ان (22) عزلة وبنسبة (39,29%) من العزلات عالية الانتاجية في حين كانت (34) عزلة وبنسبة (60,71%) عزلة ذات انتاجية جيدة ولم تظهر اية عزلة انتاجية ضعيفة. ومن الجدير ذكره ان العزلات K14 وK15 وK17 وK19 كانت الاكثر انتاجية من بين عزلات K. pneumoniae المفحوصة. علاوة على ذلك اظهرت العزلة K19 اسمك غشاء حياتي.قيمت فعالية مضادي الجنتامايسين والاميكاسين بتراكيزها الدنيا المثبطة (الذين حققا اعلى حساسية من بين المضادات الاخرى المدروسة) ضد تكوين الغشاء الحياتي للعزلات الاربعة K14 وK15 وK17 وK19 . فبالنسبة للعزلتين الاوليتين K14 وK15, بينت النتائج ان الكثافة الضوئية والعدد الحي قد انخفضت معنويا (P<0.05) موازنة مع القيم قبل المعاملة بهذين المضادين. وعند معاملة العزلة K17 بالمضادين نفسهما سجل الاميكاسين انخفاضا معنويا في قيمة الكثافة الضوئية مقارنة مع السيطرة في حين كان هذا الانخفاض غير معنويا عند المعاملة بالجنتامايسين. اما على صعيد التعداد الحي فكلا المضادين اظهرا فعالية معنوية ضد الغشاء الحياتي لهذه العزلة. وفيما يتعلق بالعزلة K19 فقد لوحظ ان هناك انخفاضا معنويا في العدد الحي عند المعاملة بالاميكاسين وغير معنويا عند المعاملة بالجنتامايسين. حتى مع هذا الانخفاض في العدد الحي والكثافة الضوئية فان المعاملة بكلا المضادين قد ترك خلايا حية عندمزارع الغشاء الحياتي على اطباق التعداد الحي.اختبرت قابلية الطافي الحامضي والمتعادل لبكتريا Lactobacillus acidophilus (Lb1) وبكتريا L. fermentum (Lb2) في تثبيط الخلايا الهائمة للعزلات K14 وK15 وK17 وK19 باستعمال طريقة الحفر على اطباق مولر هنتون. لم ينجح لا الطافي المتعادل ولا وسط MRS النقي في اظهار فعالية تثبيطية على هذه العزلات. في حين بينت النتائج ان للطافي الحامضي فعالية تثبيطية.وجدت فروق معنوية(P<0.05) في الكثافة الضوئية والعدد الحي بين بيانات قبل وبعد المعاملة بالطافي الحامضي للعزلتين Lb1 وLb2 . بخلاف المعاملة بالجنتامايسين والاميكاسين لم تترك المعاملة بالطافي الحامضي اية خلايا حية خلا حالتين Lb1 ضد العزلة K17 وLb2 ضد العزلة K15 اظهرت خلايا حية. | Three hundred and twelve specimens of urine, wounds and sputum were collected for the period from August 2008 to May 2009 in sterilized containers from patients attending five hospitals in Baghdad including Educational Laboratories, Educational Baghdad Hospital, Gazi Al - Harirri Martyr Hospital, Al - wasity teaching Hospital for Reconstructive surgery and Educational Ibn Al - Nafees Hospital.All specimens were identified using biochemical tests and Api 20 E system, it was found that 155 isolate back to genus Klebsiella.Klebsiella pneumoniae achieved the highest percentages of isolation reached 36.13%; while, K. oxytoca, K. terrigena, K. mobilis and K. ornithinolytica constituted 20.64%, 18.06%, 16.13% and 9.03%, respectively from Klebsiella isolates. Concerning the specimen type, K. pneumoniae was isolated more frequently from urine (42.16%) followed by wound (31.25%) then sputum (28.57%) from Klebsiella isolates.In the present study, in vitro susceptibility of all K. pneumoniae isolates to antibiotics were identified. The highest resistance percentages were found to Ampicillin (81.5%), Tetracycline (74.1%) and Trimoxazole (74.1%). Moreover, 59.3%, 51.9%, 48.1%, 40.7%, 40.7%, 33.3% and 22.2% of the K. pneumoniae isolates were resistant to Nitrofurantoin, Cefotaxime, Tobramycin, Nalidixic acid, Ciprofloxacin, Ceftriaxon and Gentamicin, respectively. On the other hand, Amikacin was the most effective antibiotics since it recorded the lowest resistance percentage; 7.41%. The ability of K. pneumoniae isolates to produce biofilm were evaluated by using crystal violet staining technique in pre - sterilized 96 - well polystyrene microtiter plates and then O.D. was determined at 540 nm. The O.D. represented the degree of the biofilm thickness. Twenty two (39.29%) isolates were considered as high producers while 34 (60.71%) isolates were good producers and none of the testes isolates were poor producers. What's more, K. pnumoniae isolates; K14, K15, K17 and K19 produced the thickest biofilm. Clearly, K. pnumoniae K19 accomplished the highest biofilm thickness.The effect of MIC of Amikacin and Gentamicin, which achieved the highest sensitivity percentage among several antibiotics, was assessed on biofilm. On the subject of the isolates K14 and K15 and the results revealed that the absorbance and viable count for these isolates declined in comparison to pretreatment data. These isolates showed significant differences (P<0.05) after the addition of Amikacin and Gentamicn. According to O.D. parameter, K17showed significant reduction (P<0.05) in comparison to control when treated with Amikacin while in case of Gentamicin there was an insignificant reduction; however, viable count showed that Gentamicin as well as Amikacin had a significant (P<0.05) efficacy on biofilm of K. pneumoniae K17. In regard to the isolate K19 a significant differences were observed when treated with Amikacin while insignificant decrease in viable count was found when the treatment involved Gentamicin. Even with the previous results, all treated biofilms developed presence of live cells when cultured on plate count agar.The ability of acid and alkaline supernatants of Lactobacillus acidophilus (Lb1) and L. fermentum (Lb2) to inhibit planktonic K. pneumoniae K14, K15, K17 and K19 isolates were separately tested on Mueller Hinton agar employing agar well assay. Neither neutralized supernatant nor did sterile MRS broth have an effect on these isolates. Yet, results showed that acid supernatant developed an inhibitory effect.Significant differences (P<0.05) were found in O.D. and viable count between pre and post treatment of K. pneumoniae K14, K15, K17 and K19 biofilms with acid supernatants of Lb1 or Lb2. Unlike the Amikacin and Gentamicin treatment which left live bacterial cells, Lactobacillus supernatant left no live cells except for two cases; Lb1 with K17 and Lb2 with K15.

استخلاص وتنقيـةlecithinase من بكتريا Proteus vulgaris ودراسة بعض تاثيراته الممرضه == Extraction and purification of Lecithinase from Proteus vulgaris and study some it is pathogenic effects

Author name: زهراء عباس جبر العيساوي

Supervisor name: رسمية عبد ابو ريشة

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: جمعت 162 عينة ادرار ومسحات جروح من المرضى المصابين بالتهابات المجاري البولية واصابات الجروح لكلا الجنسين للفترة من ايلول 2009 ولغاية شباط 2010. شخصت العزلات اعتمادا على الصفات المظهرية والفحوصات البايوكميائية ووجد ان 55 عزله تعود الى جنس Proteus وبنسبه عزل 33,9% كما وجد ان 5 عزلات تعود الى النوع Proeus vulgaris وبنسبه عزل 9,09% بعدما شخصت باستخدام نظام Api20E . حددت قابلية عزلات النوع Proeus vulgaris على انتاج انزيم lecithinase باستخدام طريقة الانتشار في الاكار. وجد ان اربع عزلات منتجة للانزيم وان العزلةProteus vulgaris (P1) هي الامثل في الانتاج. استخلص الانزيم من هذه العزلة وتم تنقيته باستخدام عملية الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبه تشبع 60% والتنقية باستخدام عمود الهلام sephacryl S - 200 حيث ظهرت قمتين بروتينية وتم قياس الفعالية النوعية للانزيم بعد التنقية حيث وجد انها تساوي 217 وحدة /ملغم وبتركيز بروتين 290,%ملغم/مل . درس تاثير عدد من المضادات الحيويه على انتاجية وفعالية الانزيم ووجد ان بعض المضادات تثبط انتاج الانزيم مثل اموكسلين / حامض كلافيولانك اسد ,ارثرومايسين وجنتمايسين وبتراكيز 60, 260 , 10 مايكروغرام/مل على التوالي بينما وجد ان البنزاثين بنسلين والريفامبين لايؤثر على الانتاجية ووجد ان الريفامبين يؤثر على فعالية الانزيم بتركيز 80مايكروغرام/ مل. حددت قابلية الانزيم السمية حيث درس التاثير القاتل للنصف للانزيم LD50)) في الحيوانات المختبرية ووجد ان نسبة الجرعة القاتلة للنصف تساوي 210 مايكرو غرام/مل كما حددت نسبة الجرعة المسببة لاصابة الكلى لنصف الحيوانات المختبرية KID50 ووجد ان النسبة تساوي 82,5 مايكروغرام/مل. كما درست التاثيرات النسجية التي يسببها الانزيم في اعضاء الحيوانات المحقونة والتي شملت اعضاء الكبد والكليه والطحال وجد ان الانزيم ياثر تاثيرا كبيرا في نسيج الكبد حيث سبب تنكس في الخلايا الكبدية مع تجمع للمواد الدهنية في الخلايا الكبدية ,تنخر , ارتشاح الخلايا الالتهابية , التهاب المنطقه البوابية , احتقان للاوعية الدموية وتكون خراجات في النسيج البرنكيمي وحدوث تليف حول هذه الخراجات. بينما التاثيرات في نسيج الكلى تمثلت بتنكس في الخلايا الكلوية , تنخر في نبيبات الكلية , ارتشاح الخلايا الالتهابية , وذمة وتجمع للسوائل ,وخراجات واحتقان الاوعية الدموية اما التاثيرات في نسيج الطحال فكانت اقل مقارنة مع الاعضاء الاخرى حيث سبب الانزيم توسع في اللب الابيض للطحال مع تنكس وتنخر بسيط في النسيج البرنكيمي | One hundred sixty two isolates of urine and wound specimens were collected from patients of both sex from September 2009 to February 2010. These isolates were identified according to morphological and biochemical tests, 55 isolates were found belong to genus Proteus with isolation percentage 33.9%. 5 isolates of P.vulgaris were obtained after using ApI 20E system which represent the isolation percentage 9.09% of total isolates. The ability of these isolates to produce lecithinase enzyme by using agar well diffusion method was determined, only 4 isolates of P. vulgaris produce this enzyme which appear as opaque zone around colonies on egg yolk agar, P. vulgaris P(1) was the best isolate for lecithiunase production.The lecithinase P. vulgaris P(1) strain was extracted and purified by precipitation with 60% saturation of ammonium sulfate, dialysis and gel filtration with Sephacryl S 200 column, two peaks of protein appeared in last step, the lecithinase activity was observed in second peak. The purified lecithinase has specific activity 217 unit/mg with protein concentration 0.29 mg/ml.P. vulgaris lecithinase was treated with different antibiotics to determine their effect on the production and activity of this enzyme, the antibiotics varied in their effect, some of them prevent production such as amoxillin/Clavulanic acid , erythromycin and gentamycin at 64, 256 and 8 µg/ml respectively, while benzathin penicillin and rifampin did not effect on the production of enzyme, but only rifampin was decreased lecithinase activity at 128 µg/ml. The LD50 and KID50 of partial pure enzyme was determined in mice and it was 210, 82.5µg/ml respectively. Histopathological effect of partial pure lecithinase was studied. It was found that the lecithinase was more effective on liver tissue than kidney tissue which caused sever degenerative changes of hepatocyte cells with accumulation of lipid materials (fatty change), necrosis, infiltration of inflammatory cell, inflammation of portal area, congestion of blood vessel, abscess formation in liver parenchyma and fibrosis around the abscess. while the effect of lecithinase on kidney showed degenerative of kidney cell, necrosis of renal tubule, with inflammatory cell infiltration, edema, abscess and congestion of blood vessel in kidney. Finally, less effect revealed by lecithinase on spleen tissue, which caused enlargement of white pulp forming germinal center with slight degenerative change and mild necrosis of parenchymal tissue

دراسة مقارنة بين انواع بكتريا Staphylococci المنتجة وغير المنتجة للانزيم المخثر للبلازما المقاومة للمثسلين == Comparative Study between Methicillin - Resistant Coagulase Positive and Negative Staphylococci

Author name: هالة محمد حسين الحسني

Supervisor name: مي طالب فليح

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تم جمع 161 عينة من المرضى والحاملين للبكتريا (العاملين في المستشفيات والمطاعم) (carriers) كانت العينات تشمل : مسحات الانف، مسحات الجروح، الحروق، التقيحات، القشع، مسحات الاذن وكذلك شملت افرازات من الثدي وعينات من البول والدم. شخصت 49 عزلة (30.4%) على انها تعود لجنس Staphylococcus. وبعد اجراء اختبار الانزيم المخثر للبلازما .Coagulase test اظهرت 37 عزلة (75.5%) من اصل 49 قدرتها على انتاج الانزيم المخثر للبلازما ]موجبة للانزيم المخثر للبلازما Coagulase - Positive Staphylococci (COPS)[، بينما اظهرت 12 عزلة (24.5%) عدم قدرتها على انتاج هذا الانزيم واعتبرت سالبة للانزيم المخثر للبلازماCoagulase - Negative Staphylococci(CONS). تم اجراء فحص الحساسية لمضادات الحياة للتحري عن وجود وانتشار بكتريا Staphylococci المقاومة للمضاد الحيوي المثسلين وكذلك تم استخدام العدة الخاصة للكشف عن هذا النوع من البكتريا (MRSA Kit) للتاكد من النتيجة، وقد كانت النتائج كالاتي : اظهرت 41 عزلة (83.7%) من اصل 49 مقاومتها لمضاد المثسلين بينما اظهرت 5 عزلات (10.2%) حساسيتها لهذا المضاد وكانت ثلاث عزلات فقط (6.1%) متوسطة المقاومة لهذا المضاد. وقد مثلت مسحات الانف (من الحاملين للبكتيريا) (carriers) اعلى نسبة (%63.4) بين العزلات المقاومة للمثسلين. ومن ناحية اخرى فقد اظهرت النتائج ان 30 عزلة (81%) من اصل 37 عزلة منتجة للانزيم المخثر للبلازما (COPS) كانت مقاومة لمضاد المثسلين بينما اظهرت 4 عزلات (10.8%) حساسيتها لهذا المضاد وثلاثة عزلات فقط (8.1%) متوسطة المقاومة للمثسلين. اما بالنسبة للعزلات السالبة للانزيم المخثر للبلازما (CONS) اظهرت 11 عزلة من اصل 12 عزلة (91.6%) مقاومتها للمثسلين بينما اظهرت عزلة واحدة فقط (8.3%) حساسيتها لهذا المضاد. ولم تظهر اي عزلة من العزلات السالبة للانزيم المخثر للبلازما مقاومة متوسطة لهذا المضاد. اما بالنسبة لفحص الحساسية لبقية مضادات الحياة فقد اظهرت النتائج ان كلا النوعين (الموجبة والسالبة للانزيم المخثر للبلازما) مقاومة لعدة انواع اخرى من المضادات اضافة للمثسلين (متعددة المقاومة للمضادات الحيوية). تم التحري عن قابلية بكتريا Staphylococcus aureus المقاومة للمثسلين (MRSA) والبكتريا السالبة للانزيم المخثر للبلازما المقاومة للمثسلين (MR - CONS) على انتاج بعض عوامل الفوعة وقد اظهرت النتائج ان بكتريا S. aureus المقاومة للمثسلين (MRSA) كانت منتجة لعدة انواع من الانزيمات والسموم التي تساهم عادة في امراضيتها ومن هذه الانزيمات انزيم البروتييز، اللايبيز، اليوريز، الانزيم المحلل للدنا اضافة الى انزيم الجلاتينيز، كذلك اظهر هذا النوع من البكتريا قدرته على انتاج ثلاثة انواع من الهيمولايسين (الفا، بيتا، ودلتا). اما بالنسبة للنوع الثاني، البكتريا السالبة للانزيم المخثر للبلازما والمقاومة للمثسلين (MR - CONS) فقد اظهرت قدرتها على انتاج نوعين فقط من الانزيمات (البروتييز واليوريز) اضافة الى انتاجها للانواع الثلاثة من الهيمولايسين. ولم تظهر اي عزلة قابليتها على انتاج سم متلازمة الصدمة السمية (TSST - 1) (Toxic Shock Syndrome Toxin). كذلك فقد تم التحري عن قابلية كلا النوعين السابقي الذكر من البكتريا على انتاج الطبقة اللزجة باستخدام طريقتي الانابيب واكار احمر الكونغو، وقد بينت النتائج ان كلا النوعين لها القدرة على انتاج الطبقة اللزجة باستخدام طريقة الانابيب الا ان كمية او نسبة المادة الملتصقة على السطح الداخلي للانابيب كانت متباينة بين العزلات، اما طريقة اكار احمر الكونغو فقد اظهرت ان 60% من عزلات بكتريا S. aureus المقاومة للمثسلين (MRSA) كانت منتجة للطبقة اللزجة وبكميات كبيرة بينما اظهرت 40% من عزلات هذا النوع عدم قدرتها على انتاج الطبقة اللزجة. اما بالنسبة للبكتريا السالبة للانزيم المخثر للبلازما والمقاومة للمثسلين (MR - CONS) فقد اظهرت جميع العزلات التي تم اختبارها (100%) انتاجيتها العالية للطبقة اللزجة. اختبرت قدرة كلا من بكتريا S. aureus المقاومة للمثسلين (MRSA) وبكتريا S. epidermidis المقاومة للمثسلين (MRSE) على انتاج او تكوين الغشاء الحيوي (biofilm) باستخدام اطباق المعايرة الدقيقة وقد بينت النتائج ان كلا النوعين له القدرة العالية على تكوين الغشاء الحيوي فقد كانت قيم الامتصاصية تتراوح بين 0.520 - 0.738 وان قيم الامتصاصية لبكتريا S. epidermidis المقاومة للمثسلين (MRSE) كانت اكبر من قيم الامتصاصية لبكتريا S. aureus المقاومة للمثسلين (MRSA)، اضافة لذلك فان قيم الامتصاصية وبالتالي تكوين الغشاء الحيوي قد ازدادت وبفارق معنوي عند اضافة سكر الكلوكوز وبنسبة 1% للوسط الزرعي. اظهرت النتائج كذلك ان هناك صلة بين المقاومة للمثسلين وتكوين الغشاء الحيوي في العزلات التابعة لبكتريا S. aureus. اختبر تاثير التراكيز تحت المثبطة الدنيا لاثنين من مضادات الحياة Vancomycin وClindamycin على تثبيط تكوين الغشاء الحيوي لكل من بكتريا S. aureus المقاومة للمثسلين (MRSA) وبكتريا S. epidermidis المقاومة للمثسلين (MRSE) وقد بينت النتائج ان كلا المضادين وبكلا التركيزيين المستخدمين (تحت المثبط الادنى الاول وتحت المثبط الادنى الثاني) قد اثر او ثبط تكوين الغشاء الحيوي وبفارق معنوي ولكلا العزلتين هذا عند استخدام كل مضاد بمفرده على الرغم من ان تاثير مضاد الـ Vancomycin في التثبيط كان افضل من تاثير مضاد الـ Clindamycin. اضافة الى ذلك فقد اثبتت النتائج ان عملية دمج المضادين وبكلا التركيزيين تحت المثبطين الادنيين قد ثبط عملية تكوين الغشاء الحيوي وبفارق معنوي ولكلا العزلتين على السواء. وعند المقارنة بين طريقتي استخدام كل مضاد بمفرده وبين عملية الدمج بين المضادين فان النتائج قد بينت عدم وجود اي فرق معنوي بين الطريقتين بالنسبة لبكتريا S. epidermidis المقاومة للمثسلين (MRSE)، بينما بينت النتائج ان هناك فرق معنوي بين استخدام الطريقتين بالنسبة للعزلة S. aureus المقاومة للمثسلين (MRSA) وان الطريقة الاولى (استخدام كل مضاد بمفرده) كانت افضل من الطريقة الثانية (عملية الدمج بين المضادين) في التاثير التثبيطي على عملية تكوين الغشاء الحيوي. | One hundred and sixty one specimens were collected from patients and carriers (workers in the hospitals and restaurants), the specimens included nasal swab, wound swab, burn swab, abscess and pus, sputum, ear swab, breast discharge, urine and blood culture. Only 49 (30.4%) isolates identified as Staphylococcus, the coagulase test was performed and the results showed that from total 49 isolates of Staphylococci, 37 isolates (75.5%) were coagulase - positive (COPS), while only 12 isolates (24.5%) were coagulase - negative (CONS). The distribution of Methicillin resistance among Staphylococcus spp. was investigated by disc diffusion method and MRSA Kit. The results indicated that from all 49 isolates, 41 isolates (83.7%) showed resistant to the Methicillin while 5 isolates (10.2%) were sensitive and only 3 isolates (6.1%) was intermediate resistance. The highest rate of Methicillin resistance Staphylococci (63.4%) was obtained from nasal swabs (carriers). On the other hand the results showed that out of total 37 coagulase - positive isolates (COPS), 30 isolates (81%) were resistant to Methicillin and 4 isolates (10.8%) were sensitive while only 3 isolates (8.1%) were intermediate resistance to the Methicillin. The total 12 isolates that identified as coagulase - negative (CONS), 11 isolates (91.6%) showed resistance to Methicillin while only 1 isolate (8.3%) was sensitive, and there was no intermediate resistance among CONS isolates. The results obtained from antimicrobial sensitivity test showed that both COPS and CONS isolates were resistant to many other antimicrobial agents in addition to the Methicillin (Multi - drug Resistant). The ability of Methicillin - Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and Methicillin - Resistant Coagulase - Negative Staphylococci (MR - CONS) isolates to produce some virulence factors were investigated and the results showed that MRSA isolates produce many enzymes and toxins that contributed in their virulence such as protease, lipase, urease, DNase and gelatinase, and also produce three types of haemolysins (alpha, beta, and delta), while MR - CONS showed the ability to produce only two enzymes (protease and urease) and three types of haemolysins. Toxic Shock Syndrome Toxin (TSST - 1) has not detected by any tested isolates. The ability to produce slime layer by MRSA and MR - CONS isolates was also investigated and the results showed that all isolates of both MRSA and MR - CONS were produced slime layer when tested by tube method but the amounts of adherent materials were different among the isolates. However, the results by Congo red agar method showed that 60% of MRSA isolates produced strong slime layer and 40% of MRSA obtained negative result, and in the case of MR - CONS all tested isolates (100%) had the ability to produce strong slime layer by this method. Similarly the ability of MRSA and Methicillin - Resistant Staphylococcus epidermidis (MRSE) isolates to produce biofilm by tissue culture plate (TCP) was investigated and the results indicated that both MRSA and MRSE showed highly and strong biofilm formation, and the OD value of biofilm formation ranged between 0.520 - 0.738, and the OD value obtained from MRSE isolates were higher compared to the MRSA isolates. Additionally the OD value of biofilm formation significantly increased in addition of 1% glucose to the media. The results showed that there are a possible correlation between Methicillin susceptibility and the biofilm formation in S. aureus isolates.The effect of Subinhibitory Antibiotics Concentration (sub - MIC) of two antibiotics (Vancomycin and Clindamycin) on the biofilm formation by MRSA and MRSE isolates were investigated and the results showed that both antibiotics at two subinhibitory concentration (one - half and two - half the MIC) were significantly inhibited the biofilm formation by both isolates when using of each antibiotic alone, but Vancomycin was most effective than Clindamycin. Additionally the results showed that the combination of these two antibiotics at different sub - MIC were also significantly reduced or inhibited the biofilm formation by both isolates. In comparison between the using of each antibiotics alone and the using of antibiotics combination the results showed that in the case of MRSE isolate there was no significant difference between the two treatment methods, while in the MRSA isolate there was a significant difference between the two methods. The using of each antibiotic alone (Vancomycin or Clindamycin) was most effective than the using of combination of these two antibiotics in the inhibition of biofilm formation.

انتاج الالجينت من بكتريا Azotobacter vinellandii المعزولة محليا ودراسة صفاته الفيزيوكيمياوية

Author name: حسام صباح اوهيم

Supervisor name: شذى سلمان حسن

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تم الحصول على 50 عزلة بكتيرية من 20 عينة تربة جمعت من حدائق جامعة بغداد في الجادرية ومن اماكن مختلفة من حقول الذرة في كلية الزراعة في ابو غريب, تبين ان 20 منها عائد الى جنسAzotobacter اعتمادا على الفحوصات المزرعية والمجهرية. اظهرت جميع عزلات Azotobacterمستعمرات لزجة عند زرعها على وسط الاملاح المعدنية الحاوي على السكروز. تم اختيار 10 عزلات والتي تميزت باعطاء لزوجة عالية عند نموها في الوسط لاجراء الغربلة الكمية لانتاج الالجينات وانتخبت العزلة A3 الاغزر انتاجا. وشخصت هذه العزلة باجراء الفحوصات الكيموحياتية وتبين انها احدى سلالات بلغ تركيز الالجينات المنتج من هذه العزلة 3 غم / لتر والكاربوهيدرات الكلية 3,15 غم / لتر ونسبة الالجينات في الكاربوهيدرات الكلية كانت 95,2 % . حددت الظروف المثلى لانتاج الالجينات من العزلة واظهرت النتائج ان الوسط الامثل للانتاج كان وسط الحاوي على 1% سكروز وخالي من المصدرالنايتروجيني برقم هيدروجيني 6,5 وبحجم لقاح 1% وعدد خلايا ( 3 × 10 4 خلية /مل ) وعند درجة حرارة 30 م۫ ولمدة حضانة 5 ايام في حاضنة هزازة بسرعة 150 دوره في الدقيقة . درست مواصفات الالجينات المظهرية والفيزيوكيميائية المنتجة من العزلة حيث ظهر هذا المركب بعد استخلاصه وتجفيفه بلون كريمي مائل الى البني ومظهر صمغي . اما صفاته الفيزيوكيميائية فقد بينت النتائج ان المركب ذائب في الماء وغير ذائب في الايثانول والميثانول والايزوبروبانول . كانت لزوجة المركب عالية عند التركيز 1% ودرجة حرارة 35 م۫ حيث بلغت 149,94 سنتيبويز وهذه اللزوجة تقل بارتفاع درجة الحرارة وتزداد عند انخفاض الرقم الهيدروجيني حتى وصلت الى اعلى قيمة لها عند الرقم الهيدروجيني 5. كانت درجة الانصهار البدائية (onset melting point ) 190 م۫ والدرجة النهائية (clear melting point ) 205 م۫ وكان الوزن الجزيئي للالجينات 223,23 كيلودالتون. درست قابلية الالجينات على امتزاز ايونات المعادن الثقيلة ( الزنك والنحاس ) وحددت الظروف المثلى لعملية الامتزاز. اظهرت النتائج ان الالجينات لها الفه وسعة ارتباط عالية لكل من ايونات الزنك والنحاس . وان افضل امتزاز حدث بعد مرور 10 ساعات من وقت المعاملة ( اضافة 150 مل من محلول الالجينات بتركيز 1% الى 50 مل من المحلول الحاوي على ايونات الزنك او النحاس ) وكان الرقم الهيدروجيني 9 الافضل في امتزاز ايونات الزنك والنحاس من الرقم الهيدروجيني المتعادل والحامضي . | Fifty bacterial isolates were obtained from 20 soil samples collected from Baghdad University's gardens at AL - Jadiria and different places in corn field at College of Agriculture in Abu - Ghrib. Twenty of these isolates were belonged to Azotobacter depending on cultural characteristics and microscopic examination and biochemical tests .All the Azotobacter isolates revealed mucoid colonies when grown on sucrose mineral - salt agar medium. From these isolates ten isolates of higher level of mucoid growth were screened for alginate production. Azotobacter vinellandii A3 isolate revealed highest alginate production (3 gm / L ) with total carbohydrates of (3.15 gm / L ) and 95.2% alginate percent in total carbohydrate . The optimum conditions for alginate production by A. vinellandii A3 were determined; the results showed that the best production level was obtained in Emtiazis medium, containing 1% sucrose without nitrogen source, at pH 6.5, inoculum's size 1% (3.1 × 104 CFU/ml) and incubated at 30˚C for 5 days in shaking incubator at 150 rpm. , alginate concentration was 3.9(gm / L) and alginate percentage in total carbohydrate was 95.1%. Alginate of A. vinellandii A3 characterization was performed, alginate color was cream to light brown, gummy texture and soluble in water but insoluble in ethanol, methanol and isopropanol, alginate had high viscosity at a concentration of 1% solution at 35˚C which was 146.94 centipoises, the viscosity decreased with increasing temperature ,and increase with lowering pH and reached the maximum at pH 5 , the onset melting point of sodium alginate was 190 ˚C and the clear melting point was 205˚C and the molecular weight of alginate was 223.23 KD. The ability of alginate of A. vinellandii A3 to adsorb heavy metal ions(Cu+2 , Zn+2 ) was also studied, the optimum conditions for adsorption process were determined, the results showed that alginate has a high affinity and binding capacity for Cu+2 and Zn+2 ions, and the best adsorption level was occurred after 10 hrs of treatment (addition 150 ml of 1% alginate to 50 ml of solutions contain Cu +2 ions or Zn +2 ions),alkaline pH (9) was more suitable for Cu+2 and Zn+2 adsorption than neutral or acidic pH.

انتاج وتوصيف الملبد الحيوي من بكتريا Bacillus coagulans المعزولة محليا == Production and Characterization of Bioflocculant From Locally Isolated Bacillus coagulans

Author name: جوان صباح باجلان

Supervisor name: سناء برهان الدين

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology - Bacteria

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: English

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تم عزل 48 عزلة بكتيريه تعود الى جنس Bacillus, جمعت من عينات الماء والتربة. اعطت اثنان وعشرون عزلة صفة اللزوجة عندمزارعت على وسط الاكار المغذي, اظهرت سبعة عزلات فقط من Bacillus نموا في وسط النشاء المغذي واعطت فعالية التلبد في عالق الكاؤلين. اعطت العزلة B8 ( المعزولة من التربة ) اعلى فعالية تلبد في عالق الكاؤلين (37%). اظهرت الاختبارات الكيموحيوية والفحص المظهري لهذه العزلة انها تعود الى نوع Bacillus coagulans . استخلص الملبد الحيوي من العزلة B8 B. coagulans باستعمال المذيبات العضوية شملت : الكحول الاثيلي بنسبة 2 : 1 حجم / حجم , الكحول الاثيلي بنسبة 4 : 1 حجم /حجم والاسيتون بنسبة 3 : 1 حجم / حجم . كان وزن الملبد الحيوي المستخلص من الكحول الاثيلي بنسبة 2 : 1 حجم / حجم ( 0.15 غم/100مل ) اعلى من المستخلص الناتج من الكحول الاثيلي بنسبة 4 : 1 حجم / حجم والاسيتون بنسبة 3 : 1 حجم / حجم التي كانت (0.117 غم/100مل و0.078 غم/100مل ) على التوالي . نميت العزلة B. coagulans B8 من اوساط وظروف مختلفة وبينت النتائج انه اعلى انتاجية للملبد الحيوي تكون عند زرع البكتيريا في الوسط النشاء الحاوي على 1% نشاء كمصدر كاربوني, كلوريد الامونيوم كمصدر نتروجيني, برقم هيدروجيني 8 وحضنت بدرجة 37 لمدة 48 ساعة. اشار التحليل الكيميائي للملبد الحيوي المستخلص الى انه مكون من 85% كاربوهيدرات و7% بروتين .اظهر التحليل الكروماتوغرافي للطبقة الرقيقة (TLC ) للملبد الحيوي المتحلل بواسطة حامض الهيدروكلوريك مع نظام الاذابة المكون من البيوتانول - حامض الخليك - ماء بنسبة 1 : 1 : 3 وزن /وزن والكحول الاثيلي 96% - ماء 63 : 37 وزن / وزن, انه الملبد الحيوي المنتج من B8 B. coagulans يحوي جزء كاربوهيدراتي وجزء بروتيني, حيث ظهرت بقعتان بنية اللون عند استخدام الفينول - حامض الكبريتيك لتحري عن الكاربوهيدرات(Rf = 0.41 , 0.58 ) التي ماثلت الكالكتوز والكلوكوز, وظهرت بقعة واحدة حمراء غامقة عند استخدام النينهايدرين للتحري عن الاحماض الامينية (Rf = 0.68 ) التي ماثلت الحامض الاميني الفنيل الالنيين . درست خصائص الملبد الحيوي اعتمادا على فعالية التلبد لعالق الكاؤلين : اظهرت النتائج ان الملبد الحيوي يعطي فعالية تلبد جيدة لعالق الكاؤلين ( 41.5 % ) عند حجم 0.5 مل لكل 50مل بوجود 1% من كلوريد الكالسيوم (مصدر الشحنة موجبة) لتحسين عملية التلبد. الاس الهيدروجيني الامثل لفعالية التلبد هو11pH واعطت افضل فعالية عند درجة حرارة 70 مئوي وكانت ( 78% ) . درست قابلية مادة التلبد على ازالة عكورة مياه النهر ومياه المجاري المنزلية, اظهرت النتائج القدرة على ازالة العكورة ( فعالية التلبد ) فقد اختزلت في كلاهما الى 66.36 % و62.7% على التوالي. | From September 2008 to May 2009, 122 specimens were collected by sterile cotton swaps from patients suffering from eye infection at Ibn Al - Haitham Teaching Eye Hospital, 12 of them were Pseudomonas aeruginosa isolates : they were named (P(1), P(2),……..P(12)) in 9.83% isolation percentage. All the isolates were diagnosed by biochemical tests, API 20 E system and agglutination sera for the grouping of P. aeruginosa. The results showed that all the isolates belong to the P. aeruginosa strains (6, 9, 12 and 16). After the adhesion test and lipopolysaccharide extraction and after studying the prophylactic role of LPS, the results demonstrated that : 1 - P (10) isolate have a greater ability to adhesion when all P. aeruginosa isolates were tested on Congo red agar medium and adherence to smooth surfaces. 2 - The chemical analysis of crude LPS that was extracted from P (10) by using digestive enzyme and hot phenol water method showed that the percentage of carbohydrates was 7.3% and the percentage of protein was 1.3%. No nucleic acids were found.3 - The chemical analysis of partially purified LPS that was made by gel - filtration chromatography by using Sephacryl 200 S showed that the percentage of carbohydrates in the partial purified LPS was 19.5% and the percentage of binding proteins was 0.006%. No nucleic acids were found. 4 - When the molecular weight of LPS was measured by gel - filtration chromatography by using Sepharose C1 - 6B - 200 it was found to be 630957 Dalton. 5 - The prophylactic role of LPS was studied as follows : a - The sera were prepared by using two wild type rabbits (weight 2 - 2.5 kg). They were injected with five doses over 70 days of different concentrations of partially purified LPS that have been extracted from P. aeruginosa P (10) isolate. One rabbit was used as a control that has been injected with PBS. The titer of antibodies in sera was determined by passive haemagglutination and it was in the immunized rabbit’s sera (160), and the best concentration of LPS was 10µg.b - The pathological infection was done by using two groups of female mice; the first group represents the non - immunized group while the second group represents the immunized group. The left and right eyes of the two groups were scratched, then the left eyes were infected with 5µl of (1×108 cell/ml viable organism) of P. aeruginosa P (10) while the right eyes serve as a control scratched eye. In the second group that represents the immunized group, the mice were immunized intraperitoneally with 0.2 ml of 2X concentrated sera, 18 hr. before scratching and infection and 1 - 2 hr. after scratching and infection in comparison with the control mice that were not immunized or scratched or infected with P. aeruginosa. The results have shown that : - Typical pathological scores were observed in the left eyes of non - immunized mice group 72 hr. after infection with P. aeruginosa while no pathological scores were observed in the left eyes of immunized mice. This indicated that the immunization with LPS gave a protection against P.aeruginosa corneal infection. - The histological sections of mice eyes of non - immunized and immunized mice show that there was a degenerative change and necrosis of retina with inflammatory cells infiltration in the left eye and hyperplasia of inner retinal cell layer in the right eye of non - immunized mice in comparison with the right and left eyes of control mice that have shown a normal appearance of retina, choroid and vitreous chamber while there was a hemorrhage and detachment of retina with certain inflammatory cells in the left eye and accumulation of blood along inner retina of vitreous chamber and certain detachment of retinal layer of right eye of immunized mice. These results indicate that immunization with LPS reduces the corneal infection caused by P. aeruginosa