Show: 25 50 75 100 Results

Search results: 25 out of 3,213

دراسة وراثية للبكتريوسين المنتج من بكتريا Klebsiella spp. المعزولة من مصادر سريرية مختلفة

Author name: علاء سالم حمزة حبيب
Supervisor name: رياض عبد الحسين دلول
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تضمنت الدراسة جمع (200) عينة سريرية توزعت الى (50) عينة ادرار و(50) عينة قشع و(50) عينة من التهابات الاذن الوسطى و(50) عينة من اصابات الجروح والحروق، ومن خلال نتائج الزرع البكتريولوجي على اوساط اكار الماكونكي واكار الدم ووسط Eosin Methylen Blue , والتشخيص المظهري والكيموحيوي، وتاكيد التشخيص باستخدام نظام API20E ، تم الحصول على( 40 ) عزلة تعود لبكتريا Klebsiella. توزعت الى 20 عزلة تعود للنوع K.pneumoniae و(11) عزلة للنوع K.oxytoca و(9) عزلات تعود للنوع K.planticola . تم الكشف عن مدى قابلية العزلات على انتاج البكتريوسين بثلاث طرائق تضمنت : طريقة الحفر (wells)، وطريقة اقراص الاكار cup assay))، وطريقة التخطيط المتقاطع ( (cross - streaking assay. وتم الحصول على سبع عزلات منتجة للبكتريوسين . تم استخلاص البكتريوسين بنوعيه المرتبط بالجدار وغير المرتبط بالجدار , واظهر البكتريوسين الخام المرتبط بالجدار فعالية عالية مقارنة بالبكتريوسين غير المرتبط بالجدار , وكانت فعالية البكتريوسين المرتبط بالجدار (5120) وحدة/مل، وكان تركيز البروتين (4000) مكغم/مل وقطر منطقة التثبيط (20) ملم , بينما كانت الفعالية للبكتريوسين غير المرتبط (320) وحدة/مل وتركيز البروتين (500 )مكغم/مل وقطر منطقة التثبيط (15) ملم . اظهر البكتريوسين الخام المرتبط بالجدار تاثيرا على مجموعة من البكتريا المرضية تضمنت Enterobacter sakazaki ، Shigella flexneri، E. coli، Acinetobacter baumannii ، Enterobacter aerugenes ، K.planticola Proteus mirabilis ، Serratia marcescens، Enterococcus fecalis ، Staphylococcus aureus . ولم يظهر البكتريوسين فعالية على Enterococcus faecalis ، Serratia marcescens ، Proteus mirabilis ، Pseudomonas aeruginosa تم اجراء فحص الحساسية لمضادات الحيوية للعزلات البكتيرية المنتجة للبكتريوسين، فقد تم استخدام (13) مضادا حيويا شملت كل من ( Cefotaxim وGentamycin وNorfloxacinو Nitrofurantoinو Amikacinو Ampicillin وTrimethoprimو Pipracillinو AztreonamوImipenem وCiprofloxacin وAugmentin وCephalexin ) وتم اختيار العزلات الاكثر مقاومة لهذه المضادات لاكمال الجانب الوراثي . تمت دراسة المحتوى البلازميدي للعزلات الاربعة (K2, K4, K20,K38) التي كانت اكثر مقاومة لمضادات الحيوية , وبينت النتائج احتواء العزلة(K4 )على حزمتين بلازميديتين، اما العزلات الاخرى فقد احتوت على حزمة بلازمية واحدة , ثم اجريت عملية تحييد الدنا البلازميدي باستخدام مادتي SDS ومادة Acridin orange , لم تنجح مادة SDS في تحييد الحزم البلازميدية , بينما نجحت مادة Acridin orange في تحييد الحزم البلازميدية عند تركيز (512) مايكروغرام/مل .تم التحري عن قابلية العزلات المحيدة على انتاج البكتريوسين والمقاومة لبعض مضادات الحيوية المستخدمة في الدراسة واظهرت النتائج فقدان العزلات (K2, K4, K38) لصفة انتاج البكتريوسين، واحتفاظ العزلة ((K20 بصفة انتاج البكتريوسين. بالنسبة لمضادات الحيوية , احتفظت العزلات بمقاومتها لمضادات Ciprofloxacin وNorfloxacin وTrimethoprim , اما بقية المضادات والتي شملت كل من Pipracillin وAztreonamو Ampicillin وCefotaximو Gentamycinو Nitrofurantionو Amikacinو Cephlexin وAugmentin، فقد اصبحت العزلات حساسه لها.اجري فحص الاقتران البكتيري بين العزلات (K2, K4, K20,K38) والعزلة القياسية E.coliMM294, وقد نجحت العزلتان ( K2, K4) في تحقيق عملية الاقتران بينما فشلت العزلتان (K20,K38) في تحقيق عملية الاقتران , وقد اكتسبت العزلة القياسية صفة انتاج البكتريوسين والمقاومة لمضادات الحيوية قيد الدراسة . | The study included (200) clinical sample, (50) urine,(50) sputum , (50) sample of otitis media and (50) sample with injuries and burns. Morphological and biochemical tests were employed to diagnose bacterial species and the results showed they were (40) isolates.They were (20) K.pneumoniae ,(11) isolates of K.oxytoca and(9) isolates of K.planticola. The ability of isolates to produce bacterocin were detected by three methods included the methods of wells, cup assay method, and cross - streaking assay. Results revealed that(7) isolates were able to produce bacteriocin.The wall - degraded bacteriocin was (5120) unit\ml, and protein concentration was (4000) μg/ml and the diameter of inhibition area was 20mm, while non wall - degraded was (320)unit\ml and the protein concentration (500) µ\ml and the inhibition area (15) mm. The effect of crude bacteriocin on some clinical isolates including Enterobacter sakazakii,S.auereus, K.oxytoca , Shigella flexneri, E. coli, Acinetobacter baumannii, K. planticola and Enterobacter aerogenes was studied. The results showed thier was effect on the above isolates, while the isolates of Proteus mirabilis, Serratia marcescens, Enterococcus fecales and Ps.aeruginosa were resistant to bacteriocin. Sensitivity of isolates that produced the bacteriocin was tested against (13) antimicrobial agents included (Cefotaxime, Gentamycin, Norfloxacin, Nitrofurantoin, Amikacin, Ampicillin, Trimethoprim, Pipracillin, Aztreonam, Ciprofloxacin, Imipenem ,Augmentin and Cephalexin). Results revealed that four isolates were resistant to the antibiotics. The plasmid content of the four isolates (K38, K20, K4, K2) which were the most resistant to the abovementioned antibiotics was studied ,The results showed That these isolates contain plasmids of different molecular weight. Curing was conducted by the use of SDS and Acridin orange. The isolates lost the plasmids at concentration 512µg/ml of Acridin orange. The production of bacteriocin and the resistance of the four selected isolates to the antibiotics were studied. The results showed that three of the examined isolates were unable to produce bacteriocin, they were (K38, K4, K2).The fourth isolate(K20) was able to produce bacteriocin.The four isolates appeared to resist the antibiotics Trimethoprim, Ciprofloxacin and Norfloxacin, while they were sensitive to the other antibiotics. The bacterial conjugation between (K38, K20, K4, K2) isolates and the standard strain E.coli MM294 was studied. The results showed That (2) isolates (K4, K2) were successful in transferring plasmids , while the other two (K20, K38) failed. The transconjugants were able to produce bacteriocin and resist Antibiotics.

تقدير مستوى انترلوكين - 1 - بيتا وانترلوكين - 6 في مصول وادرار اطفال مصابين بالتهاب الحويض والكليه الحاد == Estimation of IL - 1? and IL - 6 in Sera and Urine of Acute Pyelonephritis Patients

Author name: علاء لعيبي عبد الله الصرخي
Supervisor name: انتصار ناظـم خلخال
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: يعد التهاب الحويض والكلية الحاد من الامراض المعدية الشائعة في الاطفال وقد يؤدي الى تلف الكلى الدائم.صممت هذه الدراسة لغرض قياس مستويات اثنين من الانترلوكينات المهمة خلال الاصابة البكتيرية هما IL - 6 او IL - 1β، لدى الاطفال المصابين بالتهاب الحويض والكلية الحاد ولتحقيق هذا الهدف فقد جمعت (95) عينه ادرار ودم من اطفال باعمار تتراوح من (2شهر - 12عام) يعانون من حمى,حرقة عند التبول, وكثرة التبول (زيادة عدد مرات التبول) في مستشفى ابن البلدي للاطفال ومستشفى حميات للاطفال (بغداد) لمدة خمسة اشهر فضلا عن (20) عينه ادرار ودم لاطفال اصحاء من نفس الفئة العمرية عدت كمجموعة سيطرة. شخص 26 من الاطفال المصابين بالتهاب الحويض والكلية الحاد بواسطة الاعراض السريرية المميزة (حمى,غثيان,قيء, الم في الخاصرة , مع عسر وكثرة التبول) من قبل الاخصائي بالامراض البولية كما تم تاكيد التشخيص بالفحوصات المختبرية المتوفرة فضلا عن اجهزة الكشف بالموجات فوق الصوتية. كانت نتائج النسب المئوية للمظاهر السريرية للمصابين (الحمى,كثرة التبول,الم خاصرة، عسر التبول,والغثيان او القيء (88,4%, 83,3%, 61,5 %, 53,8%, 34,6%) على التوالي.اما نسب الحالات الاخرى (المعقدة) فكانت : 34,4% مع ارتداد مثاني, 23% مع hydronephros،19,2%يعانون من فشل كلوي حاد, 7,6% حصى الكلية 3,6% مع ارتفاع ضغط الدم.اظهرت النتائج ان النسبة المئوية للاطفال المصابين من الذكور (65,38%) اعلى من الاناث (34,62) كما ظهرت فروقات معنوية واضحة بين المصابين من الفئات العمرية المختلفة مقارنة مع بعضها وكذلك مع السيطرة,كذلك ظهرت فروقات معنوية مهمة في اعداد الخلايا القيحية والبكتريا البولية فضلا عن تراكيز البروتين البولي عند مقارنتها بين الفئات العمريه ولدى الجنسين كذلك مع السيطرة.شخصت العوامل المسببة للاصابة باستخدام نظام(Vitek2) وتم تاكيد التشخيص عند زرع الادرار على وسط اكار عالي الدقة والخصوصية باصابات المسالك البولية (HiCrome) تعتمد نتيجة التشخيص على التفاعل اللوني بين انزيمات العزلات البكتيرية المختلفة ومكونات الوسط الزرعي المتخصص هذا. واظهرت النتائج ان النسب المئوية للعزلات البكتيرية كانت كالاتي : (50%, 15,38% ,7,6%, 23,09%) لبكترياEnter.fecalis ,S.aureus ,E.coli, اصابة مختلطة باكثر من جنس بكتيري , فضلا عن الخميرة Candida albecans (3,85%)، كما ازدادت اعداد خلايا الدم البيض لاسيما الخلايا العدلة وعلى مستوى (p<0.05) , وبمستوى (p<0.01) عن بروتين CRPلدى الاطفال المصابين مقارنة مع مجموعة السيطرة، بينما لم تظهر اي فروقات معنوية في مستويات اليوريا والكرياتنين في الدم بين المرضى والسيطرة.قيسـت تراكـيز IL - 1β في الادرار والمصل للاطفال المصابين وكانت معدلاتها (1060,09, 571,84) جزء من الغرام/ مل على التوالي واظهرت فروقا معنوية مهمة عند مقارنتها مع معدلاتها في ادرار ومصول اطفال السيطرة ( 34,5, 45,29) جزء من الغرام/ مل عند مستوى معنوية (p < 0.05).لوحظت فروقات معنوية واضحة عند مقارنة معدلات IL - 6 في الادرار والمصل والتي بلغت ( 109,42, 28,86) جزء من الغرام/ مل مع معدلاتها لدى السيطرة (12,59, 6,93) جزء من الغرام/ مل عند مستوى معنوية ((p< 0.05. | Acute pyelonephritis (APN) is a common infectious disease in children may result in permanent renal damage. This study has been designed for measuring the level of IL - 1β and IL - 6 in pediatric APN during bacterial infection .A total of (95) urine &blood sample have been collected from children 2month - 12 years suffering from fever, dysurea, frequency from Dec.2013 - Apr.2014 at Ibn Al - Blady hospital and Welfare Teaching Hospital/ Medical city in Baghdad. Twenty Sample from healthy individuals of the same age range as control group. Twenty - sex patients of APN were included in the present study, those patients have been diagnosed by urologist, the diagnosis have been confirmed by available investigation methods; laboratory tests and ultrasound. Results of clinical features (fever, frequency, loin pain, dysuria and nausea or vomiting) were 88.4%, 83.3%, 61.5%, 53.8%, 34.6% respectively, Others were presented as complicated cases 34.6% with vesicoureteral reflux, 23.0% with hydronephros, 19.2% with acute renal failure, 7.6% with stone and 2.6% with hypertension. The percentage of infected males 65.38% was higher than females 34.62% and clear significant differences (p < 0.01) were noted between patients of different ages groups .Also important differences (p < 0.01) have been appeared in pyuria nembers and bacteruria as well as in proteinuria concentrations when compared between patients of two genders in different age groups to control group. Vitek 2 system has been used for suspected the identification of APN causative agents , diagnosis that was supported by culturing urine samples on high specialized and accurate medium; HiCrome medium which is specific for UTIs, Identification result depend on coloured reaction between microorganism enzymes and some reagents in that culture medium.Results were as following : 50.0% of E. coli , 15.38% of Staphylococcus. aureus , 7.6% of Enterococcus.faecalis ,and 23.09% of mixed infection (more than one bacterial genus), finally the yeast Candida albicans is 3.85%.No significant differences in urea and creatinine levels in patients sera compared to control while white blood cells specially neutrophiles (p < 0.05) as well as C - Reactive protein (p < 0.01) were significantly higher in patients than control. Level of IL - 1β has been measured in urine and serum of patients, the means 1060.09, 571.84 pg/ml respectively , have been clarified important significant differences p < 0.05 in comparison with their levels in controls 34.05, 45.29 pg/ml . Apparent significant differences p < 0.05 have been showed between IL - 6 concentration in urine and serum of patients ,means were; 109.24, 28.86 pg/ml comparing to control 12.59, 6.93 pg/ml .

دور عصيات حامض اللبنيك كنبيت طبيعي للتاثير على البكتيريا المرافقة المعزولة من الجهاز التناسلي الانثوي == The role of Lactobacilli as a normal microflora in preventing vaginal infection

Author name: صبا عبد الهادي مهدي شبع
Supervisor name: اكرام امين خاكي | خليل مصطفى خماس
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت خمسين عزلة لعصيات حامض اللبنيك من اعالي المهبل من نساء متزوجات مصابات بطريقة المسحة High Vaginal Swab(HVS) تراوحت اعمارهن بين 16 - 45 سنة واخضعت جميع العزلات للفحوصات المجهرية والزرعية الى جانب الفحوصات الكيموحياتية.اختبرت قدرة عزلات عصيات حامض اللبنيك على اعطاء افضل فعالية تضادية على وسط MRS الصلب بطريقة الاقراص Cup Assay Methodضد بعض المجاميع المرضية ومن ثم حضرت رواشح للعزلات الفعالة ودرست قابليتها على التثبيط في وسط MRSالسائل استنادا الى طريقة الانتشار في الحفر .Well Diffusion Assay Method اختبر تاثير pH في الفعالية التثبيطية لهذه الرواشح باستخدام قيم مختلفة للاس الهيدروجيني واجري فحص اختبار الحساسية لعصيات حامض اللبنيك. لوحظ مقاومة عصيات حامض اللبنيك لمعظم المضادات الحيوية المستخدمة في الدراسة وان فاعلية الرواشح البكتيرية ضد الممرضات المهبلية كانت افضل مقارنة بفاعلية العزلات.عند اجراء التحليل الاحصائي لمقارنة نتائج تقدير الفعالية التضادية لوحظ وجود فروق معنوية بين انواع عصيات حامض اللبنيك في تثبيطها لخميرةCandida على الوسط الصلب وقد امتلك النوع L.jensenii اعلى فاعلية تثبيطية لها كما تباينت رواشح عصيات حامض اللبنيك في تثبيطها لعزلات الاختبار اذ اظهرت هذه الرواشح اعلى تاثيرا ضد خميرة Candida وامتازت بكتريا E.coli بامتلاكها ادنى مستوى تاثر بهذه الرواشح. اعطت رواشح عزلات عصيات حامض اللبنيك افضل فعالية تثبيطية في pH (4) مقارنة بفعاليتها التثبيطية في pH (5,6) على التوالي في حين لم تظهر اي فعالية تثبيطية للرواشح ضد عزلات الاختبار في pH (7) وقد ظهر ذلك واضحا عند اجراء التحليل الاحصائي وقد وجد ان الاس الهيدروجيني المنخفض (4)يملك تاثيرا تثبيطيا ضد البكترية والخمائر المهبلية الممرضة اكثر من الاس الهيدروجيني الاعلى. | Fifty isolates of lactobacillus ssp. were taken from infected married women vagina by high vaginal swab. The age of the women ranged between (16 - 45) years. The isolated lactobacilli were identified by microscopical, cultural and biochemical tests. The effect of these isolates against pathogenic microorganism were tested on MRS agar medium by using cup assay method where as supernatant from active isolates were tested using the well diffusion assay. The effect of pH of the medium on the inhibitory effect of lactobacilli were also tested by using different values of pH. It has been observed that lactobacillus were resistant to most commonly used antipiotics which where used in this staday and the antimicrobial activity of lactobacillus supernatant were best compore with the antimicrobial activity of lactobacillus isolates against vaginal pathogens When the statistical analysis were done to compare the results of antimicrobial activity significant differences were observed between the lactobacilli species in their antimicrobial activity on Candida on solid MRS agar medium and L.casei have the highest antimicrobial activity, also supernatants of lactobacilli species were different in their antimicrobial activity thus these supernatants had highest effect on Candida while E. coli had lower value of effect by these supernatants, also these supernatants showed best antimicrobial activity at pH (4) compard with their antimicrobial activity at pH (5,6) and did not show any antimicrobial activity at pH (7) and that was clear when the statistical analysis were done. It has been found that low pH is more effective on the inhibitory activity of lactobacilli against vaginal pathogenic bacteria and Candida than at higher pH values

دراسة بكتريولوجية وبيئية لمياه نهر دجلة وثلاث محطات تصفية في محافظة بغداد == Bacteriological and Ecological Studies on Tigris River and three Purification Stations in Baghdad province

Author name: صبا حسين محمد النعيمي
Supervisor name: كاظم هاشم ياسين الاعرجي | خالد خورشيد كاظم البياتي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تضمن هذا البحث دراسة بعض العوامل الخاصة بمياه الشرب المؤثرة في صحة الانسان في مدينة بغداد . العامل الاول : هو العامل البايولوجي والفيزيائي والكيميائي الذي يؤثر في جودة مياه نهر دجلة . والعامل الثاني يتضمن دراسة كفاءة تعقيم المياه في ثلاثة محطات تصفية منشاة على طول نهر دجلة . اما العامل الثالث فقد تضمن تقييم مياه الشرب في منطقة الشعلة التي تزود بالمياه من احدى محطات التصفية ( محطة الكرامة ). فضلا عما سبق ,فقد تضمنت الدراسة مقارنة بين تلوث الماء من الناحية البكتريولوجية وحالات الاسهال في الاطفال تحت عمر السنتين, الذين قد راجعوا العيادة الخارجية لمستشفى الشهيد باقر الحكيم في منطقة الشعلة . تضمنت الدراسة ايضا تعيين جودة المياه في ثلاث محطات رئيسة للتصفية , وهي محطة شرق دجلة الواقعة شمال دجلة ومحطة الكرامة الواقعة في وسط دجلة فضلا عن محطة القادسية الواقعة جنوب نهر دجلة في مدينة بغداد , اخذت عينات الماء بواقع مكررين شهريا قبل وبعد عملية التصفية من المحطات المذكورة انفا ابتداءا من كانون الاول - 2009 ولغاية ايلول - 2010 . اما التحاليل البكتريولوجية للماء فقد تضمنت تقدير العدد الحي الكلي للبكتريا والعدد الحي الكلي للبكتريا المعوية والعدد الكلي لبكتريا E.coliوبكتريا Pseudomonas aeruginosa. فضلا عن وجود بعض البكتريا المعوية المرضية مثل Vibrio cholera وspp. Salmonella. حيث جمعت 60عينة من مياه النهر و60 من داخل مشاريع التصفية . وقد استخدمت لتشخيص هذه الانواع من البكتريا الطرائق الاعتيادية المعروفة للتشخيص فضلاعن عدة .API20E بينما تضمنت التحاليل الفيزيائية والكيميائية للماء قبل وبعد عمليات التصفية تعيين المعايير الاتية, الحرارة وتركيز ايون الهيدروجين والكدرة والتوصيلية الكهربائية والمواد الصلبة الذائبة الكلية والملوحة والاوكسجين الذائب والمتطلب الحيوي للاوكسجين , فضلا عن درجات حرارة الهواء في محطات التصفية الثلاثة. وقد اخذت العينات بواقع مكررين وجمعت 60عينة مياه لقياس الاوكسجين المذاب والمتطلب الحيوي للاوكسجين و60عينة اخرى لبقية الفحوصات الفيزيائية والكيميائية . كمااخذت اربعين عينة من ماء الحنفية من المنازل في منطقة الشعلة خلال اشهر الصيف وهي حزيران وتموز واب وايلول من عام 2010. وفي الوقت نفسه, وفي الفترات نفسها السابقة , اخذت عينات مماثلة (اربعون عينة ) من براز الاطفال تحت عمرالسنتين المصابين بالاسهال واربعون عينة مماثلة من براز اطفال اصحاء بالعمرنفسه للمقارنة ولتعيين انواع واعداد البكتريا الحية الكلية المرضية في هذه العينات . ولقد اشارت نتائج هذه الدراسات الى ان درجة حرارة الهواء اثرت بدرجات حرارة البيئة المحيطة وتراوحت بين (15 - 41 م), وكانت درجة حرارة مياه دجلة ما بين ( 13 - 32 م ) , بينما كانت درجة حرارة المياه بعد عمليات التصفية في المحطات الثلاثة بين ( 15 - 33 م) . كان تركيز ايون الهيدروجين للماء ( 7. 48 - 8.08 ) وبعد التصفية كان ( 7.31 - 7.89) اما كدرة مياه دجلة فقد تراوحت بين ( NTU156 - 26 ) ولمياه المحطات الثلاثة بين ( NTU 4 - 1 )كما بينت نتائج الدراسات الحالية الى ان التوصيلية الكهربائية لمياه دجلة كانت اقل منها في مياه المشاريع الثلاثة ( 606 - 776 مايكروسيمنز/سم ) و( 608 - 793 مايكروسيمنز/ سم ) على التوالي . والمواد الصلبة الذائبة الكلية لمياه المحطات ( 425 - 555 ملغرام / لتر ) ولمياه النهر كانت ( 429 - 554 ملغرام / لتر ) . بينما لم تتجاوز الملوحة في كل من مياه النهر والمحطات عن 0.49 ملغرام / لتر. كما كان تركيز الاوكسجين الذائب في مياه نهر دجلة بحدود 7.4ملغرام / لتر بينما اعلى تركيز للاوكسجين الذائب كان 10 ملغرام / لتر. اما المتطلب الحيوي للاوكسجين لمياه النهر فقد كان بحدود ( 1.2 - 4.4 مغرام / لتر ) وهذه النسبة هي ضمن الحدود المسموح بها دوليا .و من جهة اخرى اشارت الدراسات البكتريولوجية الى وجود نسبة عالية من اعداد البكتريا الحية الكلية في مياه المحطات الثلاثة وكانت بحدود ( 1 - C.F.U 64 ), وهذه الاعداد تشير الى عدم كفاءة عمليات التصفية والتعقيم الجارية في المحطات الثلاثة . وخاصة محطة الكرامة , بينما اعداد البكتريا الحية الكلية لمياه نهر دجلة كانت بحدود ( 468 - C.F.U 9100) . اما اعداد بكتريا القولون الكلية وبكتريا E.coli فقد تراوح بين ( 1.1 - 7.1 خلية / 100مل ) في المحطات الثلاثة وهذه الاعداد هي اكثر من الحدود المسموح بها دوليا . وقد تجاوزت اعداد بكتريا القولون الكلية في نهر دجلة عن ( 1795 - 63000 خلية / 100مل) ,بينما اعداد بكتريا E.coli فقد كانت بحدود ( 335 - 39000 خلية / 100مل ) .ا ما بالنسبة لبكتريا Pseudomonas aeruginosa فقد كان عددها ( 2.2 - 23 خلية / 100مل ) في المحطات الثلاثة واعلى تركيز في اعدادها كان قد سجل في اشهر الصيف , بينما كانت اعدادها في نهر دجلة بحدود( 580 - 160000 خلية / 100مل ) .ا ما نتائج اعداد البكتريا القولونية الكلية وبكتريا E.coliالمعزولة من مياه الحنفيات في منازل الشعلة فقد سجلت اعلى القيم للبكتريا القولونية الكلية وبكتريا E.coli 16)و9.2خلية/100مل)على التوالي, اما اقل القيم فكانت 1.1)و0.0خلية/100مل)على التوالي. كما اشارت الدراسة الى احتواء عينات البراز الماخوذة من الاطفال المصابين بالاسهال ,ا نواع البكتريا الاتية : - Citrobacter freundii 15% , Klebsiella pneumonia 21% , E.coli 45 % , Pseudomonas aeruginosa 11%,Serratia plymuthica 4% , Serratia ficaria 2% , Pseudomonas fluoresens 2%. وهذه الانواع هي في الواقع متوافقة مع الانواع نفسها من البكتريا المعزولة من ماء الحنفيات من المنازل في الشعلة وهي : - Klebsiella pneumonia 30% , E.coli 27% , Pseudomonas aeruginosa 23% Citrobacter freundii 14%, Serratia playmuthia 3% , Pseudomonas fluoresens 3% . لقد عزلت انواع من البكتريا غير السائدة مثل Sphingomonas paucimobilis, Pantoea spp. من مياه النهر ومياه المشاريع اذ تعود Pantoea spp.الى العائلة المعوية Enterobacteriaceae وتسبب بعض انواعها اعراضا مرضية خطيرة للانسان, وكثيراما تكون ملوثة للادوات الطبية اضافة الى ان بعض الاجناس ممكن ان تصيب مدى واسعا من المحاصيل الزراعية المهمة اقتصاديا ,وانواع من اشجار الغابات حول العالم كما توجد بشكل مجتمعات بكتيرية تلوث خزانات وقود الطائرات النفاثة اماالنوع Sphingomonas paucimobilisفيعود لعائلة Sphingomonasaceae الذي يوجد في البيئات المختلفة بضمنها المائية (مياه البحر والمياه العذبة) وبعض انواعها وخصوصاS.paucimobilis فقد توجد في الاجهزة الطبية في المستشفيات وانواع مختلفة من النماذج السريرية وبالرغم من ان الاصابة بها خطيرة ونادرة فقد تعالج باستخدام المضادات الحيوية . واخيرا اشارت نتائج هذه الدراسة الى ان استهلاك مياه الحنفيات من قبل عموم الناس قد يكون السبب الرئيس لحالات الاسهال التي تصيب الاطفال وغيرهم لاحتوائها على اعداد كبيرة من المسببات المرضية المختلفة. | The present work aimed to study different parameters of the drinking water that affect the health of people of Baghdad city .To perform this target three factors were studied. Firstly ,The Biological ,Physical and Chemical factors that influence water quality of the Tigris river .secondly, evaluation of the efficiency of water purification of three purification stations constructed along the river of Tigris ,and thirdly ,evaluation of drinking water of AL - Shulla region in Baghdad city that is provided with water from one of these purification stations (AL - Karama station). In addition to above ,the study also included the comparison between water pollution with respect to bacteriological point of view and diarrhea cases suffering children under two years of age ,attended the hospital of Baqir AL - Hakkem out - clinic in AL - Shula. The study included determination of the water quality from three main purification station, these stations were located to the Northern (Sharq - Diglla) ,middle (AL - Karama)and southern (AL - Qadisia)parts of Tigris river in Baghdad city.Duplicate water samples were taken on monthly basis before and after purification from December, 2009 to September 2010.Microbial analyses of the water included estimation of the number of total viable microbial counts ,total viable coliforms ,total viable E.coli and Pseudomonas aeruginosa .In addition to the presence of some pathogenic enteric microorganisms e.g. Salmonella spp. , Vibrio cholerae etc. using conventional bacteriological methods and API20E Technique for the identification of these bacteria, while Physical and chemical analyses of water before and after purification included determination of the following parameters ,temperature, pH, turbidity ,electrical conductivity ,total dissolved solids ,salinity ,dissolved oxygen and Biological oxygen demand along with the air temperatures at the three purification stations. . . On the other hand ,forty tape water samples were collected from the houses in AL - Shulla region during summer months June , July ,August and September ,2010.At the same time ,and during the same periods ,forty faecal samples from children under age of two years suffering from diarrhea and forty feacal samples from healthy children of the same age also were collected to determine the total pathogenic microorganisms in these samples .The results of these studies were indicated that the water temperature was influenced by the surrounding temperatures (15 - 41 °C)and the Tigris river temperature was between (13 - 32°C ),whereas the temperature of the water after purification in the three stations were around (15 - 33°C). . The pH of the water was (7.85 - 7.97) and after purification was around (7.31 - 7.87).The Turbidity of the river water was(156 - 26)NTU and of the stations were between (1 - 4NTU) The results of the present study also revealed that the electrical conductivity of the Tigris river water was less than that of the three stations, that is (606 - 776Ms/cm) and (608 - 793Ms /cm) respectively. and the total dissolved solids (T.D.S)were between (425 - 555mg/l)for stations water and were between (429 - 554mg/l) for river water. whereas the salinity of both river and stations water did not exceed 0.49mg/l. The dissolved oxygen concentration was 7.4mg/l in Tigris river, which indicate a good aeration condition while the highest concentration for river water recorded to be 10mg/l. The biological oxygen demand for river was between (1.2 - 4.4mg/l) which is within the International allowable levels. On the other hand ,The bacteriological studies indicated a high level of total viable bacterial counts in water of the three stations and were between (1 - 64C.F.U/ml), and these numbers indicate a non - efficient purification procedures in all station studied and was exceeding the International allowable levels especially in the AL - Krama station . while total viable bacterial counts of the Tigris river was between (468 - 9100C.F.U/ml).Total coliform counts and pathogenic E.coli counts were both between(1.1 - 7.1cell/100ml )in all the three stations studied ,again,these numbers exceeded the International allowable levels. In Tigris river water ,on the other hand ,the total coliform counts was exceeded the (1795 - 63000cell/100ml )while the pathogenic E.coli count was between (335 - 39000cell/100ml) .Pseudomonas aeruginosa counts was about (2.2 - 23cell/100ml) in the three station and the highest level recorded was in summer seasons ,whereas its counts was in between (580 - 160000cell/100ml) in Tigris river. The highest number for total coliform and pathogenic E.coli were recorded to be (16 and 9.2cell/100ml) respectively. whereas the lower range were (1.1 and 0.0 cell/100ml) respectively. . The results of the present study also revealed that the faecal samples of the diarrhea cases of children contain the following bacteria ,E.coli 45%,Klebsiella pneumonia 21%.while the numbers of other bacteria ,Citrobacter freundii, Pseudomonas aeruginosa , Serratia ficaria ,Serratia plymuthica and Pseudomonas fluorescens were 15%,11%,2%,4% and 2% respectively. . These proportions are in accordance with the same bacterial species isolated from AL - Shulla houses while were 27%for E.coli ,30%for Klebsiella pneumonia and 14%for Citrobacter freundii 23%for Pseudomonas aeruginosa ,3%for pseudomonas fluoresens and 3% for Serratia plymuthica . Finally ,these results clearly indicate that the tape water consumption by the general public might be the main causative factors for diarrhea cases affecting the people due to its high content on other hand ,will reflect the poor purification procedures employed in these different purification stations at least in Baghdad city

التوصيف المظهري والوراثي للانزيمات المحورة لمضادات الامينوكلايكوسيدية المنتجة من المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثسلين == Phenotypic and genotypic characterization of aminoglycoside modifying enzymes produced by methecillin resistant Staphylococcus aureus

Author name: شيــماء عدنان جبر العبيــــدي
Supervisor name: سوسن ساجد محمد علي الجبوري
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: • جمعت 150عزلة سريرية من المكورات العنقودية من مستشفيي الحبيبية والنعمان في مدينة بغداد خلال الفترة من شهر كانون الثاني وحتى شهر نيسان لعام 2011 من اصابات سريرية متنوعة. توزعت العينات ما بين 30 عزلة من الادرار, 84 من خمجات جروح و36 عزلة من مسحات الاذن . • شخصت العزلات مبدئيا بزراعتها على وسطي اكار الماكونكي واكار الدم, تبع ذلك اجراء عدد من الفحوص الشكلية والكيموحيوية, ثم شخصت العزلات بشكل نهائي ودقيق باستخدام اشرطة نظامي api staph وMast staph kit .لقد تم الحصول على 87 عزلة (58%) على انها Staphylococcus .aureus مقابل 63 عزلة (42%) للانواع الاخرى من هذا الجنس. • بينت نتائج الفحص المسحي المظهري الاولي لمقاومة مضاد المثسلين باستخدام طريقة الانتشاربالاكار ان هنالك 84 عزلة من اصل 87 (%96.5) قد اظهرت مقاومتها لمضاد المثسلين لتكون من المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثسلين((MRSA مقابل 3عزلات فقط (3.5%) مستجيبة للمثسلين (MSSA).• اجري اختبارفحص الحساسية للمضادات الحيوية بطريقة انتشارالاقراص لجميع عزلات MRSA( ,(84 واستخدم لهذا الغرض ستة مضادات حيوية تعود للمجموعة الامينوكلايكوسيدية . اوضحت النتائج وجوداختلافات واضحة في نمط المقاومة المظهري للعزلات قيد الدراسة اذا اظهرت هذه العزلات مستوى عال من المقاومة لهذه المجموعة مع نسبة وصلت الى ( 19٪ ( للستربتوميسين, 38)٪ (للاميكاسين, ( 52٪ ( للجنتاميسين ، 62٪) للكاناميسين ،و (69٪) لكل من مضادي ا لنيومايسين والتوبراميسين. • استخدمت طريقة التراكيز المتضاعفة المتسلسلة لحساب التركيز المثبط الادنى(MIC) لعزلات ال MRSA) (لعدد من مضادات المجموعة الامينوكلايكوسيدية . بينت النتائج وجود اختلافات في قيم MIC المحسوبة لعزلات ال MRSA، اذا اظهرت 16 عزلة مقاومتها للستربتومايسين وبقيم MIC تراوحت ما بين (16 - 1024 ميكروغرام / مل ) , و32 عزلة مقاومة للاميكاسين (64 - 128 ميكروغرام/مل ) ، و44 عزلة للجنتاميسين ( 16 - 64 ميكروغرام/مل ) و38 لو 52عزلة للكانامايسين ( 64 - 128مايكروغرام/ مل) , ، و58 للنيوميسين (16 - 1024 ميكروغرام/مل ). ان هذه النتائج تدل على انتشار صفة مقاومة مضادات المجموعة الامينوكلايكوسايدية بين عزلات المكورات العنقودية المقاومة للمثسيلين .• اعتمدت طريقتان لتحضير الدنا القالب لغرض استخدامها في التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا ( PCR) وهما : طريقة الغليان وطريقة المستعمرة المباشر. اظهرت النتيجة ان طريقة المستعمرة المباشرة كان افضل في اظهار النتائج بالمقارنة مع طريقة الغليان.• اختيرت خمسة وعشرون عزلة من بكتريا MRSA التي اعطت نتائج ايجابية في مجال الكشف المظهري لنمط المقاومة لمضاد المثسلين ولمضادات المجموعة الامينوكلايكوسيدية للكشف عن الجين mecA المشفرلمقاومة المثيسلين بوساطة تقنية التفاعل التضاعفي لسلسلة الدنا (PCR) . اظهرت نتائج احتواء جميع العزلات (100٪) على جين mecA ,وبلغ حجم القطعة المكثرة 314 زوج قاعدة بمقارنتها بدلائل الدنا الحجمية .• اجري الفحص الوراثي بتقنية ال PCR للكشف عن ثلاث جينات مشفرة للانزيمات المحورة لمضادات المجـــموعة الامــينوكلايكوسيـــدية في عــزلات ال MRSA وشـمـــلت aac(6’) - Ie+aph(2’), ant(4’) - Ia, and aph(3’) - IIIa.بينت النتائج ان جين ) ′aac(6’) - Ie+aph(2’ هو الاكثر انتشارا وبنسبة 84٪ (21/25) تلاه جين ant(4’) - Iaو aph(3’) - IIIa بنسبة 76.3٪ (19/25) و44٪ (11/25) على التوالي.• بلغ معدل تواجد aac(6’) - Ie+aph(2’) مع ant(4’) - Ia, مقدار 64٪ (16 / 25) ويمثل اعلى نسبة تواجد في العزلات قيد الدراسة, فيما بلغت نسبة تواجد جيني ant(4’) - Ia وaph(3’) - IIIaمعا 40٪ (10/25) لتحل نسبة تواجد كلا من aac(6’) - Ie+aph(2’) مع aph(3’) - IIIa ثالثا وبمعدل 32٪ (8/25).اما نسبة تواجد هذه الجينات الثلاث معا فقد بلغ 28%(7/21(. • لوحظ ان هنالك ترابط بين الصفة المظهرية لمقاومة المضادرات مع الصفة الوراثية , فقد لوحظ ان العزلات الحاملة لجين aac(6’) - Ie+aph(2’) ذات مقاومة عالية لمضاد الجنتامايسين وايضا مقاومة لاغلب انواع المضادات الامينوكلايكوسيدية الاخرى.بينما كانت العزلات الحاملة للجين ant(4’) - Ia هي عزلات ذات مقاومة عالية لمضادي التوبرامايسين والنيومايسين ,ومن ناحية اخرى كانت العزلات الحاملة للجين aph(3’) - IIIa اظهرت مقاومتها العالية للمضادين الكانامايسين والاميكاسين.• في هذه الدراسة كانتالاربع وعشرين 24 عزلة الحاملة لجين mecA من اصل 25) 96%( كانت على الاقل مترابطة مع احد جينات الانزيمات المحورة AME او اثنان منها او جميعا ,ويعد هذا مؤشرا لوجود ترابط كبير بين مقاومة العزلات لمضادات الامينو كلايكوسايدية وبين مقاومتها للمثسلين في العزلات المحلية .في الوقت نفسة ظهرت ضمن النتائج عزلة MRSA واحدة اتسمت بمقاومتها المظهرية لمضادات هذه المجموعة غير انها خلت من اي جين في الفحص الوراثي مما يدل على امتلاكها نمط اخر من المقاومة تجاه هذة المجموعة . | • A total of 150 Clinical isolates of Staphylococcus species were collected from two hospitals : Al - habibia and Noaman hospitals in Baghdad city during the period from January to April 2011. Types and the numbers of these clinical samples were distributed as (30) isolates from urine, (84) isolates from wound infections and (36) isolates from ear swabs. • The isolates were initially diagnosed by culturing on MacConkey agar and blood agar followed by performing some morphological and biochemical tests . A confirmatory test as final diagnoses were done using api 20 and MAST staph kits. The results have showed that Staphylococcus aureus comprised 87(58%) isolates while other Staphylococcus species represented 63 isolates (42%) .• Results of primary screening test for methicillin resistance using disk diffusion method have revealed that 84 isolates(96.5%) were proved to be methicillin resistant Staphylococcus aureus(MRSA), while only 3 isolates (3.5%)were methicillin sensetive Staphylococcus aureus (MSSA).• Antibiotic susceptibility test for all the 84 MRSA isolates was performed against 6 antibiotic of aminoglycosides group using disc diffusion method. The result have demonstrated clear differences in the phenotypic resistance among isolates of the current study . They showed high - level of resistance to aminoglycosides group, and the percentage of isolates reached to(19%) for streptomycin, (38% ) for amikacin ,(52% ) for gentamicin, (62%) for kanamycin and ( 69%) for each of neomycin and tobramycin . • Two fold was serial dilution agar used to determine the minimum inhibitory concentrations (MIC) for the MRSA isolates against aminoglycosides group. The results have showed that there were differences in the MIC values among MRSA isolates when 16 isolates were resistance streptomycin (MIC ranged 16 - 1024 µg/ ml) , 32 isolates resistance amikacin (64 - 128 µg/ ml), 44 isolates to gentamicin (16 - 64 µg/ ml) , 52 isolates to kanamycin (64 - 128µg /ml), and 58 isolates to neomycin (16 - 1024 µg/ ml). The results indicate the prevalence of aminoglycosides resistance pattern in all the MRSA isolates. • The two different methods boiling method and the direct colony method were used to prepare template DNA in order to be used in the polymerase chain reaction test. The results revealed that the direct colony methode was better in demonstrating the result as comparied with the boiling method . • Twenty five isolates which gave positive results in phenotypic detection for methicillin and aminoglycoside group resistance , were selected to detect mecA gene encoding methicillin resistance using PCR technique.The results showed that all the isolates (100%) harbored merA gene with amplified size 314 bp as compared with DAN ladder . • Genotypic detection was performed to detect three genes encoding aminoglycoside modifying enzymes in MRSA isolates. They were aac(6’) - Ie+aph(2’), ant(4’) - Ia, and aph(3’) - IIIa genes.The results showed that aac(6') - Ie - aph(2") gene was the most prevalent Aminoglycoside modifying enzymes (AME) gene when the rate was 84% (21/25) of the resistant isolates followed by ant(4') - Ia and aph(3') - IIIa when the rates were 76.3% (19/25) and 44% (11/25) of these isolates respectively.• The coexistence rate of aac(6') - Ie - aph(2") with ant(4') - Ia was 68% (16/25) which it represents the most predominant rate in the isolates of the current study followed by the coexistence between of ant(4') - Ia with aph(3') - IIIa which was 40% (10/25) and the third rate for aac(6') - Ie - aph(2") with aph(3') - IIIa by 32% (8/25). The coexistence rate of the three genes in all the isolates was 28% (7/25).• The results of the current study showed that there was a correlation between phenotypic and genotypic resistance pattern.The isolates harboring aac(6’) - Ie+aph(2’) gene are considered to be high resistant to gentamicin and even to all aminoglycosides ,while the isolates harboring this gene were highly resistant to tobramycin and neomycin and the isolates carrying aph(3′) - IIIa gene showed the high resistance to amikacin and kanamycin in MRSA. • In this study, the 24 isolates harboring mecA gene out of 25 ( 96%) were carried either one or more than one aminoglycoside modifying gene and this represents an indicator for high correlation between aminoglycoside and methicillin resistance in our local isolates .From the other hand the results showed that there was a MRSA isolates which confer phenotypic resistance to aminoglycoside group but it not encode for any of AME gene ,this may indicate that such isolates confer another type of resistance toward this group

دراسة جزيئية لعوامل الالتصاق في بكتريا Escherichia coli الممرضة للمسالك البولية وعلاقتها بمقاومة Fluoroquinolones == Molecular Study of Adherence Factors in Uropathogenic Escherichia coli Related to Fluoroquinolones Resistance

Author name: شيماء خضر عباس العلاق
Supervisor name: سوسن حسن عثمان كورجي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت 150عينة ادرار من مرضى خمج المسالك البولية ومن مختلف الاعمار للفترة من تموزالى تشرين الثاني 2011 .اعتمد التشخيص البكتيري على المواصفات الزرعية والمجهرية والفحوصات الكيموحيوية , والتشخيص النهائي والدقيق للعزلات في وقت مبكر للكشف عن الانواع بواسطة استخدام فحص Api20E .تم التشخيص الجزيئي لجينات عوامل الالتصاق وجين مقاومة الفلوروكوينولونات باستخلاص الدنا البكتيري بطريقة الغليان ومن ثم اخضع الى اختبار البلمرة التضاعفي التسلسلي (PCR) . تم اجراء اختبار الحساسية للمضادات الحيوية , فضلا عن تقدير التركيز المثبط الادنى (MIC) لاربع مضادات من الفلوروكوينولونات . اظهرت النتائج ان توزيع اصابات اخماج المسالك البولية في الاناث (99(66%) بينما بلغت في الذكور 51(34%)) وسجلت اعلى نسبة من الاصابة في النساء البالغات المتزوجات 67(44.7%) .اظهرت النتائج ان بكتريا E.coli كانت الاكثر شيوعا في مرضى خمج المسالك البولية 65 عزلة (43.3%). بينت جميع العزلات قدرتها على الالتصاق على الخلايا الطلائية للقناة البولية للانسان (100%) , اذ اظهرت نسب مختلفة من الالتصاق تراوحت بين 8 الى 63 خلية بكتيرية / خلية طلائية .اظهرت عزلات E.coli احتوائها على ثلاثة انواع من عوامل الالتصاق (CAF) وبنسب مختلفة . النوع الاول (CAFl) ووجد في 58 عزلة (89%) , النوع الثاني (CAFΠ) ووجد في 35 عزلة (54%) والثالث (CAFШ) وجد في 36 عزلة (55%) . عند اختبار حساسية العزلات تجاه 12 مضاد جرثومي , اظهرت عزلات E.coli مقاومة تامة (100%) لمضاد Augmentin(Amoxicillin/Clavulanic acid) (99%) بينما كانت اقل مقاومة للمضادات Pefloxacin , Norfloxacin, Nitrofurantoin وبنسبة(34, 35, 22)% على التوالي .اظهرت النتائج ان اعلى نسبة من المقاومة المضاعفة المشتركة (42%) كانت في العزلات التي قاومت خمسة الى ثمانية مضادات . فيما حددت التراكيز المثبطة الدنيا لاربعة مضادات من الفلوروكوينولونات ,فاظهرت النتائج ان هناك اختلافا واضحا في قيمتها . تم اختيار 28 عزلة E.coli من عزلاتنا المحلية بالاعتماد على درجة مقاومتها العالية للمضادات ,اظهر كشف البلمرة التضاعفي التسلسلي (PCR) المفرد (Uniplex PCR) والمشترك (Multiplex PCR) عن وجود جينات الالتصاق الضارية والمتضمنة P (papC), type 1 fambria fimH ,adhesion S (sfaD/E) and afimbrial adhesin (afaB/CШ) حيث تم الكشف عن(22 isolates (79%),20(71%), 6(21%),4(14%)) على التوالي . تم الكشف عن جين مقاومة الكوينولونات gyrA في كل العزلات 28 (100%). في هذه الدراسة تم اعتماد gyrAبديلا عن استخدام 16s rRNA في تشخيص السلالات البكتيرية.اذ اعطت جميع العزلات حزم عند الحجم الجزيئي (518 bp) دلالة على وجود الجين باستخدام تقنية (PCR) .واخيرا .اظهرت النتائج ان عزلات E.coli الممرضة للقناة البولية (UPEC) والمقاومة للكوينولونات تبدي انخفاضا في عوامل ضراوتها عن العزلات الحساسة للكوينولونات ,اظهرت نتائجنا اعلى نسبة لعوامل الضراوة في العزلات التي قاومت ثمانية مضادات اعطت نسبة 18% منها تمتلك عامل الالتصاق الاول (CAFl) , 14%تمتلك (CAFΠ) و12% من هذه العزلات تمتلك (CAFШ) وذلك يشير الى ارتباط مباشر لمقاومة الكوينولونات مع انخفاض وجود جينات الضراوة (تراجع جيني).و اظهرت النتائج ايضا انه جينات الضراوة اقل انتشارا (PapC (86.3%), fimH (68.1%), afaBCIII (13.6%), sfaDE (9%)) في العزلات التي قاومت كل مضادات الفلوروكوينولونات .هذه العلاقة ربما تتاثر بواسطة التراجع الجيني . | One hundred fifty urine samples were collected from urinary tract infection patients from different ages during the period of July 2011 to November 2011. The bacterial diagnosis on cultural and microscopical characteristics of bacterial cell and biochemical tests. The final and accurate diagnoses of the isolates as the early mentioned species were done using the API 20E system. Molecular identification for adhesion factors and fluoroquinolone resistant gene was done by DNA extraction by boiling method, then subjected to conventional PCR .The antibiotic sensitivity test was done, also the minimum inhibitory concentration (MIC) for four Fluoroquinolone antimicrobial agents was studied. The results showed that the distribution of UTI in female were 99(66%), while in male were 51 (34%). However, the high percentages of UTI were observed within the adult married women 67(44.7%). The results showed that E.coli was the most common microorganisms in UTI patients, 65 isolates (43.3%). All the isolates showeded ability of adherence to uroepithelial cells of human's urinary tract (100%) of the isolates presented adherence that mean number of bacteria adhered to uroepithelial cells ranged from 8 to 63. E.coli isolates exhibited the presence of three types of colony adhesion factors (CAF) at different rate. Type one (CAFl) observed in 58 isolates (89%), while type two (CAFΠ) in 35 isolates (54%), and (CAFШ) in 36 isolates (55%). Sensitivity of E.coli local isolates toward 12 antimicrobial agents showed complete resistance (100%) to Augmentin (Amoxicillin/Clavulanic acid), while they were less resistance to Pefloxacin, Norfloxacin, Nitrofurantoin at (34, 35, 22)% respectively. The results showed that the highest rate of multidrug resistance (42%) was observed in isolates were able to resist 5 to 8 antimicrobial agents. The minimum inhibitory concentrations for four Fluoroquinolone antimicrobial agents showed an obvious different between their values.The local isolates of E. coli selection 28 isolates depending upon high degree of multi antibiotic resistance. The PCR assay (Uniplex PCR and Multiplex PCR) showed prevalence of virulent adhesion genes P (papC), type 1 fambria fim H, adhesion S (sfaD/E) and afimbrial adhesin (afaB/CШ), were detected (22 isolates (79%), 20(71%), 6(21%), 4(14%)) respectively. The quinolone resistance gene gyrA detected in all isolates 28 (100%). In the present study depended upon gyrA gene (housekeeping gene) as alternative to 16s rRNA for the identification bacterial strains. All the isolates give bands at the molecular size (518 bp) an indication of a gene by using PCR technique. Finally ,the results have shown that Fluoroquinolone resistant uropathogenic E.coli (UPEC) isolates express fewer virulence factors than Fluoroquinolone susceptible isolates .The persent results showed the highest rates of virulence factors in isolates that resisted eight antibiotics which was obtained to 18% of these isolates have(CAF l ), 14% have(CAFΠ ) and 12% of the isolates have (CAFШ). This finding suggests that fluoroquinolone could be directly associated with decreased prevalence of virulent genes (genetic back) .Also the results showed that all 4 virulent genes under the study were lower prevalent (PapC (86.3%), fimH (68.1%), afaBCIII (13.6%), sfaDE (9%)) in the isolates resistance for all fluoroquinolone and quinolone antimicrobial agents. that the relationship may be influenced by the genetic background.

دراسة بعض الحالات المناعية والدموية في مرضى بهاق عراقيين == Study Some Immunological and Heamatological Status of Iraqi Vitiligo (Bohak) Patients

Author name: شذى فارس طارق
Supervisor name: طالب عبد الله حسين
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: البهاق هو مرض جلدي مكتسب مجهول السبب يتميز بظهور بقع ناقصة الصبغة وهذا يعزى الى فقدان الخلايا الصباغية الجلدية. تشير الدلائل الى ان المناعة الذاتية تلعب دورا في امراضية هذا المرض، لانه من الممكن الكشف عن الاجسام المضادة والخلايا التائية المتكونة ضد الخلايا الصباغية في مرضى البهاق.الدور المحتمل للخلل المناعي في مرض البهاق قد تم اقتراحه لذلك ولاختبار هذه الفرضية تم التحري عن حركيات خلوية معينة (البين ابيضاض17ا وعامل التنخر الورمي الفا ) ، والكلوبيولينات المناعية ( IgA , IgG , IgM وIgE)، والعد الكلي والتفريقي لخلايا الدم البيض ولجميع المشمولين بالدراسة .شملت الدراسة : 60 مريضا (ذكور واناث ) وخلال فترة تراوحت ما بين تشرين الثاني 2014 الى نيسان 2015 وباعمار تراوحت مابين (6 - 55) سنة وكان 30 منهم غير معالجين و30 معالجين بالاشعة فوق البنفسجية نوع B ذات الحزمة الضيقة مرتين في الاسبوع ولمدة ( 4 - 10 ) اسابيع ومجموعة سيطرة باجناس وفئات عمرية مماثلة لاغراض المقارنة مكونة من 30 فرد اصحاء ظاهريا.فصل المصل وتم قياس تركيز الحركيات الخلوية (البين ابيضاض17ا وعامل التنخر الورمي الفا ) والمستوى الكلي للمضاد المناعي نوع IgEفي مصل دم المشتركين باستعمال تقنية الامتزاز المناعي المرتبط بالانزيمELISA)) بينما استخدمت طريقة الانتشار المناعي الشعاعي المفرد (SRID) في قياس مستوى الكلوبيولينات المناعية (IgM, IgG and IgA ) وتم قياس العد الكلي والتفريقي لخلايا الدم البيض بوساطة جهاز ( Hematology auto analyzer 5 - diff). توصلت هذه الدراسة للنتائج الاتية : 1 - اظهرت الاناث ارتفاعا في نسبة الاصابة بالبهاق مقارنة بالذكور وبنسبة (اناث / ذكور) تساوي 1 : 1.6 مع ذلك لا توجد بينهم فروق معنوية عند مستوى (P > 0.05) .2 - متوسط العمر في مرضى البهاق كان (28.55) سنة وان الفئة العمرية (20 - 11) سنة هي اكثر عرضة للاصابة .كشفت نتائج هذه الدراسة بان 48 (80%) من المرضى كان لديهم ظهور مبكر للبهاق (قبل عمر 30 سنة ) في حين 12(20%) من المرضى كان لديهم ظهور متاخر للبهاق (بعد عمر 30 سنة ).3 - وفيما يتعلق بالانواع السريرية للبهاق اظهرت هذه الدراسة بان الغالبية العظمى من الحالات كانت من النوع المنتشر 40 (%66.67) ومن ثم يتبع بالنوع الموضعي 18(30%) والنوع الشامل 2(3.33%). علاوة على ذلك كان النوع الفرعي السريري الاكثر شيوعا والذي لوحظ في هذه الدراسة هو النوع الشائع 30 (50%) ومن ثم يتبع بالنوع البقعي 12(20%) , النوع الذي يصيب الوجه والاطراف 8 (13.33%) ,النوع المقطعي 4 (6.66%) , النوع المختلط 2(3.33%) والنوع المخاطي 2(3.33%).4 - اظهرت نتائج الدراسة الحالية بان 23 (%38.33) من المرضى كان لديهم تاريخ عائلي بالبهاق . كان التاثير على الاقارب من الدرجة الاولى بنسبة 17(% 28.33) , الاقارب من الدرجة الثانية بنسبة 5 (%8.33) والاقارب من الدرجة الثالثة بنسبة 1 ((%1.67.5 - اظهر معدل المستوى المصلي للبين ابيضاض 17ا في كل من مرضى البهاق غير المعالجين ومرضى البهاق المعالجين بالاشعة فوق البنفسجية نوع B ذات الحزمة الضيقة 188.62) و174.03 ) بيكو غرام/ مل ارتفاعا معنويا عند مستوى ( (p ≤ 0.05 بالمقارنة مع مجموعة السيطرة ( 116.07) بيكو غرام/ مل .6 - اظهر معدل المستوى المصلي لعامل التنخر الورمي - الفا ارتفاعا معنويا عند مستوى (p ≤ (0.05 عند مقارنة مرضى البهاق غير المعالجين ومرضى البهاق المعالجين بالاشعة فوق البنفسجية نوع B ذات الحزمة الضيقة (64.68 و61.94) بيكو غرام/ مل على التوالي، مع مجموعة السيطرة (50.64) بيكو غرام/ مل .7 - A/ اظهر معدل المستوى المصلي للكلوبيولين IgG وIgA في مرضى البهاق غير المعالجين (1045.24 و216.40 ±) ملغرام/ديسيلتر على التوالي ،انخفاضا غير معنوي عند مستوى 0.05)<p ( بالمقارنة مع مجموعة السيطرة (1082.02 و239.38) ملغرام/ديسيلتر على التوالي. بينما وجد بان معدل المستوى المصلي للكلوبيولين IgM (121.85 ) ملغرام/ديسيلتر والكلوبيولين IgE 147.01)) وحدة دولية /مل يرتفع ولكن ارتفاع غير معنوي احصائيا عند مستوى0.05) <p ( . B/ اظهر معدل المستوى المصلي للكلوبيولين IgMو IgG في مرضى البهاق المعالجين بالاشعة فوق البنفسجية نوع B ذات الحزمة الضيقة ( 167.69 و1228.38) ملغرام/ديسيلتر على التوالي ، ارتفاعا معنويا عند مستوى ((p ≤ 0.05 مقارنة مع كل من مرضى البهاق غير المعالجين ومجموعة السيطرة ،بينما وجد بان معدل المستوى المصلي للكلوبيولين IgA (233.84) ملغرام/ديسيلتر يرتفع ولكن ارتفاع غير معنوي احصائيا عند مستوى 0.05)<p ( بالمقارنة مع مرضى البهاق غير المعالجين.8 - اظهر معدل خلايا الدم البيض في كل من مرضى البهاق غير المعالجين ومرضى البهاق المعالجين بالاشعة فوق البنفسجية نوع B ذات الحزمة الضيقة (8.80 و8.51) 103xخلية/مل3 على التوالي ، ارتفاعا معنويا عند مستوى (P ≤ 0.05) بالمقارنة مع مجموعة السيطرة ((7.25 103x خلية/مل3.9 - A / لم يظهر معدل كل من الخلايا العدلة ،اللمفية ، وحيدة النواة ,الحمضة والقعدة في مرضى البهاق غير المعالجين (58.37 , 31.57 , 6.58 , 2.64 و1.04 )% على التوالي ، فروقا معنوية وعند مستوى 0.05) < ( P بالمقارنة مع مرضى البهاق المعالجين بالاشعة فوق البنفسجية نوع B ذات الحزمة الضيقة (58.29 , 30.25 , 6.46 , 2.61 و1.03) % على التوالي.B / اظهر معدل كل من الخلايا العدلة, الحمضة والقعدة في مرضى البهاق المعالجين بالاشعة فوق البنفسجية نوع B ذات الحزمة الضيقة ارتفاعا قليلا ولكن غير معنوي عند مستوى (0.05 <P) بالمقارنة مع مجموعة السيطرة , ولكن اظهر معدل الخلايا وحيدة النواة انخفاضا غير معنوي , بينما اظهر معدل الخلايا اللمفية انخفاضا معنويا بالمقارنة مع مجموعة السيطرة. | Vitiligo is an acquired idiopathic skin disorder characterized by depigmented macules due to loss of cutaneous melanocytes. Evidence suggests that autoimmunity plays a role in the pathogenesis of the disease, since antibodies and T cells against melanocytes can be detected in vitiligo patients.A potential role of the immune dysfunction has been suggested in vitiligo so to test this hypothesis, certain cytokines (IL - 17A and TNF - α), immunoglobulins (IgM, IgG, IgA and IgE), total and differential count of WBCs were investigated in all participants.The study included : 60 patients (males and females) during the period from November 2014 to April 2015 with age range between (6 - 55) year; 30 of them were untreated and 30 were treated with Narrow Band Ultraviolet - B twice a week for (4 - 10) weeks with confirmed diagnosis of vitiligo using standard assessment age and gender matched 30 apparently healthy control.Serum was separated and cytokines, total immunoglobulin E (IgE) were detected by using Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA); while immunoglobulins (IgM, IgG and IgA) were detected by using Single Radial Immunodiffusion (SRID) method. Total and differential counts of White Blood Cells (WBCs) were measured by using Hematology auto analyzer 5 - diff. This study has reached the following results : 1 - Females had shown higher incidence of vitiligo as compared with males with a ratio F/M equals to 1.6 : 1 however there were no significant differences (P > 0.05) between them.2 - The mean age of vitiligo patients was (28.55) year and age group (11 - 20) year was more susceptible to affected. Results of this study revealed that 48 (80%) of patients had early onset vitiligo (before 30 years of age); while 12 (20%) had late onset vitiligo (after 30 years of age).3 - Regarding the clinical types of vitiligo; this study showed that the majority of cases were generalized type 40 (66.67%) followed by localized type 18 (30%) and universal type 2 (3.33%). Furthermore the most common clinical subtype observed in this study was vulgaris vitiligo 30 (50%), followed by focal 12 (20%), acrofacial 8 (13.33%), segmental 4 (6.66%), mixed 2 (3.33%) and mucosal 2 (3.33%).4 - Results of the current study showed that 23 (38.33%) of patients had a positive family history of vitiligo. First - degree relatives were affected in 17 (28.33%), second - degree relatives in 5 (8.33%) and third - degree relatives in 1(1.67%).5 - The mean serum level of IL - 17A in both untreated and NB - UVB treated vitiligo patients (188.62 and 174.03) pg/ml showed a significant increase (p ≤ 0.05) as compared with healthy control (116.07) pg/ml. 6 - The mean serum level of TNF - α showed a significant increased (p ≤ 0.05) when untreated and NB - UVB treated vitiligo patients (64.68 and 61.94) pg/ml respectively compared with healthy control (50.64) pg/ml.7 - A / The mean serum levels of IgG and IgA in untreated vitiligo patients (1045.24 and 216.40) mg/dl respectively showed non significantly decreased (P<0.05) as compared to healthy control (1082.02 and 239.38) mg/dl respectively, while the mean serum levels of IgM (121.85) mg/dl and IgE (147.01) IU/ml were found to be increased, but the increase was statistically non significant (P<0.05). B / The mean serum levels of IgM and IgG in NB - UVB treated vitiligo patients (167.69 and 1228.38) mg/dl respectively increased significantly (p ≤ 0.05) as compared to both untreated vitiligo patients and healthy control, while the mean serum level of IgA (233.84 ± 18.88) mg/dl was found to be increased, but the increase was statistically non significant (P<0.05) as compared to untreated vitiligo patients.8 - The mean value of total WBCs of both untreated and NB - UVB treated vitiligo patients (8.80 and 8.51) x103 cell/ml3 respectively showed a significant increased (P ≤ 0.05) as compared with healthy control (7.25) x103 cell/ml3.9 - A / The means value of neutrophil, lymphocyte, monocyte, eosinophil and basophil in untreated vitiligo patients (58.37, 31.57, 6.58, 2.64 and 1.04) % respectively showed non significant differences (P<0.05) as compared with NB - UVB treated vitiligo patients (58.29, 30.25, 6.46, 2.51 and 1.03) % respectively.B / The means value of neutrophil, eosinophil and basophil in NB - UVB treated vitiligo patients showed slightly but non significant increased as compared with healthy control, but the mean value of monocyte showed non significantly decreased ,while the mean value of lymphocyte showed a significant decreased as compared with healthy control

الكشف عن انواع الجنس Fusarium المنتج للفيومنسين ب1 على حبوب الذرة الصفراء باستخدام الطرائق الجزيئية ودراسة تاثيراته المرضية النسيجية على الفئران البيض == Detection of Fusarium Species Producing Fumonisin B1 on Maize Using Molecular Methods and Study Its Histopathological Effects on Albino Mice

Author name: سيناء وليد محمد سعيد
Supervisor name: خالد عبد الرزاق حبيب | سالم رشيد العبيدي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
University: University of Baghdad
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: هدفت الدراسة الى تشخيص انواع الجنس Fusarium المرافقة للذرة وقابليتها على انتاج السم FB1 باستخدام الطرق التقليدية والجزيئية. كما تم دراسة الظروف المثلى لانتاجه فضلا عن تاثيره على انسجة الكبد والكلية والطحال وقياس انزيمات الكبد والطحال في ذكور الفئران المجرعه فمويا بالسم.تم جمع ثمانية وثمانين عينة ذرة للفترة ما بين تشرين الثاني 2013 واذار 2014 من الاسواق المحلية ومخازن الحبوب في بغداد (35 عينة ذرة من مخازن الحبوب و53 عينة من الاسواق المحلية) كما وتم الكشف عن الفطرين المنتجين للفيومينيسين وهما Fusarium verticillioides وF. proliferatum باستخدام تفاعل تضاعف البلمرة (PCR) وتقنية فصل الصفائح الرقيقة (TLC) وتقنية الاليزا.(ELISA) وكانت النتائج كما ياتي : 1. الاجناس الفطرية المعزولة من الذرة هي : الفطر Aspergillus وكان الاكثر سيادة (58.6%) تليه الفطرياتFusarium (17.5%) ثم Rhizopus (6.7%), Alternaria (6.1%), Mucor وPenicillum (3.9%), Bipolaris (1.9%) وTrichthecium (1.2%).2. النوع الاكثر سيادة ضمن جنس Fusarium كان F. verticillioides (70.64%) 3. اظهرت النتائج باستخدام تفاعل تضاعف البلمرة المتسلسلة (species specific PCR) ان من بين سبعة وسبعين عزلة, فقط ثلاثة عشر عزلة تعود للجنس F. verticillioides ومن بين تسع عزلات فقط عزلة واحدة تعود للجنس F. proliferatum.4. تمتلك جميع عزلات F. verticillioides الثلاثة عشر الجين fum1 وبذلك يعد المنتج الرئيسي للسم FB1 مقارنة مع عزلة F. proliferatum التي لم تمتلك الجين.5. من بين العزلاتF. verticillioides الثلاثة عشر, كانت العزلة FV1 هي الاكفا في انتاج FB1 (175.39 جزء في البليون) على وسط فطيرة الذرة بينما تراوح تركيز السم FB1 لبقية العزلات يتراوح بين (21.31 - 170.51 جزء في البليون).6. كانت نتائج الظروف المثلى لانتاج السم FB1 هي وسط فطيرة الذرة وفترة حضانة 21 يوم ودرجة حرارة مثلى 20ºم.7. حددت الجرعة القاتلة المتوسطة (LD50) للسم FB1 لذكور الفئران وهي 1800 جزء في البليون.8. لوحظت زيادة في تركيز انزيمات الكبد والكلى للفئران بعد تجريعها فمويا بالسم FB1 عند التركيزين 800 و1200 جزء في البليون مقارنة مع مجموعة السيطرة.9. كشفت النتائج ان التغيرات في انسجة الكبد والكلى والطحال للفئران المجرعه فمويا بالسم FB1بالتركيزين 800 و1200 جزء في البليون، ظهرت زيادة التغيرات 10. التنكسية والموت المبرمج للخلايا مقارنه مع مجموعة السيطرة. | The study aimed to identify Fusarium species associated with maize grains and their ability to produce Fumonisin B1 using traditional and molecular methods. The optimal conditions of FB1 production were assayed. The effect of FB1 on liver, kidney and spleen tissues of albino mice were studied and measured its effects on enzymes in affected liver and kidney.Eighty - eight maize samples were collected between November 2013 and March 2014 from local markets and silos of Baghdad province (thirty - five from silos and fifty - three from markets). Fusarium verticillioides and F. proliferatum were investigated and their ability to produce Fumonisin B1 was detected using : Polymerase chain reactions (PCR), Thin layer chromatography (TLC) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) techniques. The following results were obtained from the current study : 1. The fungal genera isolated from maize were : Aspergillus (58.6 % ) followed by Fusarium (17.5% ), Rhizopus (6.8 %), Alternaria (6.1 %), Mucor and Penicillium (3.9 %), Bipolaris (1.9 %), and Trichothecium (1.2%).2. The predominant species among Fusarium was F. verticillioides (70.64%).3. The use of species specific PCR reactions for Fusarium species revealed that out of seventy seven isolates, thirteen isolates only belong to F. verticillioides and out of nine isolates, one isolate only belong to F. proliferatum.4. All the thirteen F. verticillioides isolates were shown to possess fum1 gene (FB1 producer), whereas the F. proliferatum isolate was shown not to possess this gene. 5. Among the thirteen isolates of F. verticillioides, FV1was the most efficient one in production of FB1(175.39 ppb) on patty maize medium, while the concentration of FB1 for other isolates ranged between (21.31 - 170.51) ppb. 6. The optimum culture conditions for FB1 production using solid state fermentation included : patty maize medium with incubation period 21 days at 20ºC. 7. The median lethal dose 50 (LD 50) of FB1for male mice was 1800ppb.8. liver enzymes (AST, ALT, ALP) and kidney functions (Creatinine and Blood urea) were increased in male mice which were orally gavaged FB1 at 800 and 1200ppb concentrations comparing with control group.9. The histopathological changes in the liver, kidney and spleen of orally gavaged mice by FB1 at 800 and 1200 ppb, showed a significant increase degenerative changes and apoptotic cells in comparison with control group

دراسة تاثير المحورات المناعية للمستخلص الايثانولي لبذور نبات Azadirachta indica على الاستجابة المناعية للفئران الملقحة ببكتريا Proteus vulgaris == Study the Immunomodulatory Effect of Ethanolic Azadirachta indica Seeds Extract on the Immunologic Response in Mice Vaccinated with Proteus vulgaris

Author name: سيف مزعل عبد
Supervisor name: طارق فعل الجنديل | تركي مفتن سعد
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Muthanna
First pages:
Abstract: جمعت 100 عينة من عينات الادرار من النساء الحوامل الذين اتن الى مستشفى الاطفال والولادة في مدينة السماوة، خلال فترة تمتد من نوفمبر الى يناير 2012. تضمنت الدراسة العزل والتشخيص البكتريلوجي لبكتريا Proteus vulgaris ، واختبار الحساسية للمضادات الحياتية وكذلك تضمنت الدراسة تاثير المحورات المناعية المتمثلة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم على الاستجابة المناعية للفئران الملقحة بمستضد جرثومة P. vulagris. تضمنت الدراسة ثمانية مجموعات ( 40 فار في كل مجموعة) وتمت معاملة المجاميع كما يلي (I : معاملة بالماء المقطر، II : معاملة بمستضد بكتريا p. vulagris فقط ، III : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 600 ملغم لكل كغم ، IV : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 400 ملغم لكل كغم ة ، V : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 600 ملغم لكل كغم ومستضد بكتريا البر وتيس فلكارس معا ، : VI : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 400 ملغم لكل كغم ومستضد بكتريا البر وتيس فلكارس ، : VII معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 600 ملغم لكل كغم ومستضد بكتريا . P .vulagris معا، VIII : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 400 ملغم لكل كغم ومستضد بكتريا . P .vulagris وتم حقن المجموعتين الاخيرتين بمقدار 5 ملغم لكل كغم من وزن الجسم من مادة بردنزولون (Prednisolone) المثبطة للمناعة قبل 5 ايام من اجراء المعاملة . اجريت جميع هذه المعاملات في اليوم الاول في اليوم الرابع وضحي بالحيوانات في اليوم 8 لاختبار Nitro blue tetrazolium NBT) مقاسا بجهاز الاليزا ، في اليوم 14 لاجراء معامل تفاعلات فرط الحساسية المتاخرة ومعامل تحول الخلايا اللمفاوية المقاسة بطريقة الاليزا )في اليوم 21 و28 لقيايس anti - proteus vulgaris antibody titer ولاجل اختبار serum electrophoresis لقياس بروتينات المصل ). اظهرت النتائج تاثيرات واضحة للمحورات المناعية المستخدمة في الدراسة وفي المجاميع الممنعة بمستضد البر وتيس فلكارس ومن خلال تحسن الاستجابة المناعية غير النوعية والمناعة الخلوية الخلطية مقارنة مع المجاميع غير المعاملة بالمحورات المناعية، واشارت النتائج الى ارتفاع ملحوظ في نسبة الخلايا الموجبة لفحص NBT في المجاميع الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية وبفوارق احصائية معنوية بالمقارنة بمجاميع السيطرة السالبة (معاملة بالماء المقطر فقط) والسيطرة الموجبة المعاملة بالمحورات المناعية او اللقاح فقط . وقد ظهر ارتفاع في النسبة المئوية لمعامل الخلايا الموجبة لفحص NBT في كل المجاميع وسجلت المجموعةV اعلى نسبة مئوية للخلايا الموجبة لفحص NBT ( 57% ) وبفوارق احصائية معنوية (P≤ 0.01) وسجلت المجموعة IV ادنى نسبة مئوية (5%) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة 0 ) I% )، كما لوحظ ارتفاع واضح في النسبة المئوية لمعامل التحول للخلايا اللمفية في الدم المحيطي ، حيث اعطت جميع الحيوانات الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية نتائج اعلى من تلك الممنعة وغير معاملة بالمحورات المناعية وبفوارق احصائية معنوية وسجلت المجموعة V اعلى مستوى للنسبة المئوية لمعامل تحول الخلايا اللمفاوي في الدم (264%) ، بينما اعطت المجموعة IV ادنى نسبة وهي ( 17% ) .اما نتائج فحص الحساسية المتاخرة في الجلد فقد سجلت حيوانات المجاميع الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية نتائج اعلى وبفوارق احصائية معنوية ( P≤ 0.01) عن مجاميع السيطرة الموجبة والسالبة واعطت المجموعة V. اعلى قيمة بلغت بعد 24 ساعة من حقن مستضد البر وتيس ، وكانت جميع نتائج فحص الحساسية المتاخرة المسجلة في الحيوانات بعد 24 ساعة افضل منه بعد 48 ساعة. وعند قياس عيارية اضداد anti proteus vulgaris بواسطة الوميض الاشعاعي غير المباشر، اظهرت المجاميع الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية ارتفاع مستوى هذه الاضداد مقارنة بمجاميع السيطرة السالبة والموجبة وبفوارق احصائية معنوية بمستوى P≤ 0.01) ) وسجلت اعلى معيار حجمي لتلك الاضداد بمستوى 512 بعد 21 يوم التمنيع. كذلك سجلت المجاميع الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية ارتفاع ملحوظ في قيمة كاماكلوبيولين والفا - 1 والفا - 2 وبيتا عند تحليل البروتين بجهاز الترحيل الكهربائي وبفوارق احصائية معنوية ( P≤ 0.01) عن مجاميع السيطرة الموجبة والسالبة المعاملة بالمحورات.حيث سجلت المجموعة V (19.24 ± 0.80, 8.68 ± 0.23, 27.31 ± 0.06, 34.02 ± 0.21 ) على التولي بعد 21يوم من التمنيع وكذلك اعلى قيمة كاماكلوبيولين والفا - 1 والفا - 2 وبيتا سجلت في المجموعة 19.26 ± 0.8 )V , 8.17 ± 0.38 , 27.43 ± 0.12 , 34.10 ± 0.06 ) على التوالي بعد 28 يوم من التمنيع . من خلال النتائج اظهر المحلول الايثانولي لنبات النيم تحسنا واضحا على الاستجابة المناعية غير الخصوصية والمناعة الخصوصية بشقيها الخلطي والخلوي. | A total of 100 urine samples were collected from pregnant women who attended to Children and delivery's hospital in Samawah city, during the period extended from November to January 2012. The study is carried out for bacteriological isolation and identification of P. vulagris, antibacterial susceptibility testing and to investigate the immunomodulatory effect of the Ethanolic neem seeds extract on the immune response of mice vaccinated with Proteus vulgaris antigens. The study included eight groups; the first group (I) was treated with distilled water. group II included mice treated with Proteus vulgaris antigens only (III) : injected mice subcutaneously with a dose of (600 µg /Kg) ethanolic neem seed extract, IV group included injected subcutaneously with a dose of (400 µg /Kg) ethanolic neem seed extract only, The V, VI groups mice were treated with combination of p.vulgaris and ethanolic neem seed extract while (VII and VIII) groups mice were injected with the immunosuppressive drug prednisolone prior to the forthcoming treatment 5 days. All these treatments were carried out at day 1, and then the mice were sacrificed at day 8 to estimate phagocytic activity index by ELISA reader and on day I4 for estimation of lymphocyte transformation by MTT index by ELISA reader and for delayed - type hypersensitivity reaction test at 24 , 48 and 72 hours after proteus vulgaris antigens injection, at day 21 and 28 for (anti - proteus vulgaris antibody titer) by indirect immunoflourescent assay and for serum electrophoresis to estimate the serum fraction.In this regard, all groups of mice showed different significant increases(P≤ 0.01) in the NBT index which represent the phagocytic activity% as compared to group I (0%), which was injected with distilled water (negative control group). The best treatment efficiency was recorded in - group V (57%), while the lowest treatment efficiency was recorded in - group IV (5%). The results of lymphocyte transformation index in mice of all groups showed different significant increases by MTT assay which represent the lymphocyte transformation index as compared to group I (0%). The best treatment efficiency was recorded in - group V (264%), while the lowest treatment efficiency was recorded in - group VI (17%).Delayed type hypersensitivity (DTH) index estimated by skin test in footpad of the mice that immunized with P vulgaris antigens and treated with ethanolic neem seed extract and the high value in the group V after 24 hours. The best delayed type hypersensitivity (DTH) index was recorded in group V. The anti - Proteus antibodies assessed by indirect immunoflourescent test also showed a significant increase titer in immunomodulator - treated and - vaccinated mice in comparison with negative and positive groups. At 21, 28 days, and the best treatment efficiency was recorded in - group V after 21 days with titer of 512. In all mice a significant increase in the value of gamma globulin fraction and Alpha - 1 serum fraction and Alpha - 2 Fraction and Beta serum fraction were observed in group V (19.24 ± 0.80, 8.68 ± 0.23, 27.31 ± 0.06, 34.02 ± 0.21) respectively after 21 days of immunization, and also The highest values of gamma globulin fraction and Alpha - 1 serum fraction and Alpha - 2 Fraction and Beta serum fraction were observed in V (19.26 ± 0.8 , 8.17 ± 0.38, 27.43 ± 0.12, 34.10 ± 0.06 ) respectively after 28 days of vaccination of mice. The results demonstrated a clear immunomodulatory effect of the ethanolic neem seed extract (improvement of non - specific, and cellular immune response) of the treated mice immunized with proteus vulgaris .

التنميط والتحليل الجزيئي للمكورات العنقودية الذهبية المعزولة من نماذج سريرية == Molecular Analysis and Typing of Staphylococcus aureus isolated from clinical samples

Author name: سوسن محمد كريم
Supervisor name: سوسن ساجد محمد علي الجبوري | منعم رضوان علي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: • جمعت خلال الدراسة اربعة وثمانون عزلة من بكتريا المكورات العنقودية من عدد من مستشفيات بغداد للفترة الواقعة ما بين تموز - تشرين الثاني عام (2013) موزعة ما بين (43) عزلة من الالتهابات الجلدية , (15) عزلة من التهاب المسالك البولية , (5) عزلات لكل من الدم والتهابات الاذن , (3)عزلات من التهابات الانف ،(2)عزلتين من التهاب العيون وعزلة واحدة من لكل من القشع والسائل المنوي و(9) عزلات اخذت من مواقع بيئية مختلفة للمستشفيات .• تم العزل الاولي لبكتريا المكورات العنقودية الاوساط الزرعية واعتمادا على الصفات المظهرية على الاوساط الزرعية والفحوصات الكيموحيوية فضلا عن التشخيص بنظام (API Staph system) لتكون المحصلة النهائية (74) عزلة تعود لبكتريا المكورات العنقودية الذهبية .• تم التحري عن المكورات العنقودية المقاومه للمثيسلين بعدة طرق منها الطرق المظهرية وباستخدام طريقة الانتشار بالاكار حيث اظهرت النتائج ان هنالك 55 (74.32%)عزلة من المكورات العنقودية الذهبية مقاومة للمثيسلين في حين بلغ عدد العزلات الحساسة 8(10.82%) وقد لوحظ وجود عدد من العزلات التي ابدت مقاومة متوسطة للمثيسيلين 11 (14.86%) كما واستخدمت طريقتين مختلفتين من الطرق الوراثية للتحري عن مقاومه البكتريا للمثيسيلين . وذلك عن طريق التحري عن المورثات المحفوظة تطوريا (femA) المورث المسؤول عن تاكيد تشخيص النوع اضافة الى التحري عن المورث (mecA) المسؤول عن صفة مقاومة البكتريا للمثسيلين وباستخدام تقنية التفاعل التسلسلي المتضاعف (Polymerase Chain Reaction). قد اعتمدت طريقتان لتحضير دنا القالب، طريقة الغليان وقد اظهرت احتواء74 (100%)عزلة من المكورات العنقودية الذهبية في حين احتوت61 / 74عزلة على المورث (mecA) وبالاعتماد على وجود مورث صفة المقاومة للمثيسلين قد بلغت نسبة المكورات العنقودية الذهبية المقاومه للمثسيلين (82.43%) ، كما وبلغ عدد عزلات المكورات العنقودية الحساسة للمثيسلين التي لم تحتوي على مورث (mecA) 13/ 74 (17.57%) . ومن جهة اخرى استخدمت الطريقة المباشرة في تحضير دنا القالب واظهرت النتائج امتلاك فقط 17(22.97%) عزلة على مورث (femA) كما اظهرت 57/74 (77.03%)عدم امتلاكها على المورث، في حين ابدت (7) من العزلات التي ابدت اجابيتها لمورث (femA) امتلاكها على مورث (mecA) ولذلك فان نسبة بكتريا المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثيسلين بلغت (41.17%) في حين المكورات الحساسة للمثيسلين قد بلغت (58.83%). وقد اثبتت طريقة تحضير دنا القالب بالغليان بانها كانت اكثر كفاءة ودقة في الكشف عن المورثات من الطرق الاخرى .• تم استخدام طريقة الانتشارالثنائي في الاكار للكشف عن صفة المظهرية لمقاومة البكتريا تجاه مجموعة الماكروليدات، اللنكوز امايد والستربتوكرامين B وقد اظهرت النتائج (18/74) عزلة تمتلك صفة مقاومة دائمية للارثرومايسين (24.32%) توزعت بين (13/61) عزلة من عزلات المكورات العنقودية الذهبية المقاومه للمثيسلين (21.13%) و(5/13) عزلة من عزلات المكورات العنقودية الذهبية الحساسة للمثيسلين (38.46%) ، كما واظهرت النتائج وجود (4/74) عزلة تمتلك صفة المقاومة المستحثة للاريثرومايسين(6.55%) وكانت كل العزلات مقاومة للمثيسلين واخيرا (29/74) عزلة من العزلات المقاومة والحساسة للمثيسلين ابدت مقاومة متوسطة للاريثرومايسين .• اظهرت النتائج سيادة صفة المقاومة الدائمية للاريثرومايسن بين عزلات المكورات العنقودية الذهبية الحساسة للمثيسلين بالمقارنة مع العزلات المقاومة للمثيسيلين وكذلك لوحظ وجود صفة المقاومة المستحثة للاريثرومايسن بين عزلات البكتريا السريرية المعزولة من الادرار والدم والافرازات العامة.• استخدمت تقنية PCR للكشف عن وجود مورثات مقاومة الاريثرومايسين (erm A, erm B and erm C) وقد اظهرت النتائج تغلب مورث erm A (7.35%) ووجوده في (5/68) عزلة من عزلات المكورات العنقودية الذهبية والتي تمتلك مختلف اشكال الصفات المظهرية لمقاومة المثيسلين وجميع العزلات كانت مقاومة للمثيسلين. في حين تواجد مورث erm C في (4/68) ونسبة (5.88%) اثنان منها كانت عزلة من الدم والقشع وقد كانتا موجبة في فحص التحري عن مقاومة الاريثرومايسين ، كما واظهرت نتائج فحص PCR عدم امتلاك العزلات على مورث erm B . ايضا كشفت النتائج عن سيادة المورثات erm A وerm C في التشفير لصفة المقاومة المستحثة للاريثرومايسين وانه لا دور يذكر لمورث erm B في مقاومة الاريثرومايسين.• تم التحري بتقنية PCR عن انتشار ووبائية مورث pvl بين عزلات المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثيسيلين وقد اظهرت النتائج وجوده في(4/61) ونسبة (6.55%) .• تم استخدام طريقة الانتشار بالاكار للتحري عن حساسية البكتريا اتجاه المضادات الحيوية وقد اظهرت النتائج مقاومة العزلات بشكل كامل (100%) لكل من الكلوكساسيلين والاوكساسيلين والسيفيبيم ،ومقاومة عالية اتجاه كل من امبسلين/ كلافيلونك اسد (98.36%) والسيفتازديم (95.2%) . وكانت هنالك مقاومة متوسطة اتجاه التتراسايكلين (31.14%) ومقاومة قليلة اتجاه كل من الازيثرومايسين (24.6%) والفانكومايسين (16.4%) والجنتامايسين (13.11%) والسبروفلوكساسين (13.11%) واقل مقاومة اتجاة الامبنم (6.55%). • استخدمت طريقة UPGMA المتوسط الحسابي Unweighted Pair - Group Method using arithmetic Average لبناء شجرة تطور السللالات Phylogenetic treeوتحديد العلاقة التطورية dendroram واعتمد model Tamura - Nei لقياس المسافة الوراثية بين انواع المكورات العنقودية للتعبير عن مدى تطور تلك المورثات. اظهرت النتائج للتحليل الشجيري وجود 151 عقدة و76 عقدة طرفية . مما يعكس وجود تنوع عالي في نمط المقاومه لفحص الحساسية للمضادات الحيوية بين العزلات المدروسة, وكذلك تنوع واضح وعالي بين عزلات المكورات العنقودية الذهبية المقاومة والحساسة للمثيسلين .مما يعكس الطبيعه التطورية لتلك العزلات. • تم اخضاع كل عزلات المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثيسلين والحساسة للكشف عن مورث spa بواسطة استعمال بواديء متخصصة لتضخيم المنطقة المتغايرة من المورث وبحجم القطعة المكثره (300bp) وقد اظهرت النتائج (47/74) موجبة لمورث spa حيث كانت المكورات المقاومة للمثيسلين (67.2%) في حين كانت المكورات الحساسة للمثيسلين (46.15%) .• تم اختيار (25) نموذج من نواتج PCR لمورث spa تعود لعزلات ذات مصادر عزل مختلفة وتم ارسالها لغرض تحديد تتابع القواعد النايتروجينية، تم تسجيل كل البيانات التي تم الحصول عليها من تحديد تتابع القواعد النايتروجينه في بنك المورثات العالمي (المركز الوطني لمعلومات التكنلوجيا الحيوية National center for Biotechnology Information ) وكذلك في بنك اليابان ( DNA Data Bank of Japan) وبنك المورثات الاوربي التي تبدا بالتسلسل LC038119 وتنتهي بالتسلسل LC038142 .• اظهرت النتائج ان القطع المكثرة للمناطق المتغايرة كانت مختلفة في الاحجام وتراوحت اطوالها (65 - 335bp) من اصل الجين كذلك اجري تطابق تتابع القواعد النايتروجينة وترجمة البروتين وتحديد العلاقة التطورية وشجيرات تطور السلالات باستعمال (UPGMA) وبرنامج geneious software وقد اظهرت النتائج وجود نوعين من الشجيرات واحدة للتتابعات القصيرة (65 - 190bp) وواحدة للتتابعات الطويلة (190 - 335bp) • تم هظم المورث spa بواسطة انزيمين من الانزيمات القاطعة HinfI وHindIII واظهرت النتائج تنوعا ملحوظا في الطراز الوراثي بين العزلات . | • Eighty four isolates of Staphylococcus spp. were collected from different hospitals in Baghdad province, during the period July 2013 to November 2013, distributed as : 43 isolates from skin infection ; 15 isolates from UTI; 5 isolates from each blood and ear infection; 3 from nasal swab ; two isolate from eye infection ; while one isolate obtained from each sputum and seminal fluid and 9 isolates were taken from various hospitals environments and sites.• For preliminary isolation of Staphylococcus spp. was used culture media, and depending on features on cultures, Biochemical tests and (API Staph system).The final results were (74) isolates belonged to Staphylococcus aureus.• different methods for screening to methicillin resistance S. aureus, it were used phenotypic method (disc diffusion method), the results showed 55(74.32%) MRSA isolates, 8(10.82%) MSSA and 11(14.86%) intermediate resistance to cefoxitin. While in genotypic methods were used PCR technique to detection housekeeping gene (femA) responsible to confirm species and mobile genetic element (mecA) to confirm resistance of isolates to methicillin, PCR technique was done by used two different methods to prepare template DNA.• the results of PCR technique with used template DNA prepared by boiling method have been revealed all S. aureus isolates 74(100%) contained femA gene (100%) while 61/74(82.43%) isolates contained mecA gene (MRSA) and 13/74(17.57%) isolates devoid mecA gene MSSA. On the other hands, The results of PCR technique with used template DNA prepared by direct colony have been revealed only 17(22.97%) isolates contained femA gene and 57(77.03%) isolates was devoid femA gene (77.03%), the positive isolates to femA gene have been revealed contained 7(41.17%) mecA gene while 10(58.83%) isolates devoid mecA gene. So used PCR techniques with template DNA prepared by boiling method was appeared the effective method for screening about MRSA and detection mecA gene reflected on standard methods to confirm S. aureus to be MRSA.• Double diffusion disc was used method to screening about MLSB phenotype and the results showed 18/74(24.32%) S. aureus isolates had constitutive resistance to erythromycin cMLSB phenotype (which is distributed to13/61(21.31%) MRSA and 3/13(38.46%)MSSA, 6/74(9.83%) S. aureus isolates sensitive to erythromycin, all of them was MRSA, 4/74(6.55%) S. aureus isolates had inducible resistance to erythromycin D - shape also all of them was MRSA, 9/74(14.75) S. aureus isolates showed MS phenotype was resistance to erythromycin and sensitive to clindamycin without D - shape and finally 29/74) S. aureus isolates showed intermediate resistance to erythromycin distributed between MRSA and MSSA.• Results showed a higher prevalence of the cMLSB phenotype in the MSSA isolates compared with MRSA isolates, also was observed iMLSB phenotype among clinical samples of S. aureus specially MRSA isolates more frequently in urine, blood and general secretions.• PCR technique was used for screening about ermA, ermB and ermC genes and the results were showed the percentage of ermA gene in S. aureus isolates 5/65(7.35%) with different phenotypic resistance forms to erythromycin all five isolates is MRSA while ermC gene percentage was 4/68(5.88%) S. aureus isolates, two of them showed cMLSB phenotype and harboring with ermA gene and others two isolates recovered from blood and sputum showed inducible MLSB with D - shape phenomenon, none of the S.aureus isolates harboring with ermB gene. The results were also revealed that ermA and ermC predominant erm genes found in S. aureus and the ermC gene the prevalence gene in inducible Macrolides resistant MRSA and no role was found to ermB gene in Macrolides resistant MRSA.• PCR technique was used for screening about prevalence of pvl gene among S. aureus isolates and the results showed 4/61(6.55%) harboring with pvl gene.• Disc diffusion method was used to screening about antibiotics sensitivity and the results showed completely resistance (100%) toward cloxacillin, oxacillin and cefepime while some isolates showed high resistance toward Amoxicillin /Clavulinic acid (98.36%) and Ceftazidime (95.2%). the moderate resistance toward tetracycline (31.14%), the low resistance toward azithromycin (24.6%), vancomycin (16.4%), gentamycin (13.11%), ciprofloxacin (13.11%) and the lowest resistance appeared toward imipenem (6.55%).• unweighted pair group method (UPGMA) was used to build phylogenetic tree and to find dendrogram analysis , Adoption of the Model Tamura - Nei, to measure the genetic distance between the types of Staphylococcus aureus to express the evolution of these genes, the results were showed dendogram and phylogenetic tree have (151) node and (76) tips. also reflected highly diversity resistance antibiogram among isolates and high diversity between MRSA and MSSA isolates still found some similarities in antibiogram pattern. Reflecting the evolutionary nature of these isolates.• all MRSA and MSSA isolates were subjected to screening about spa gene by used specific primers for variable region with PCR product size (300bp), and the results showed (47/74) isolates with positive results and (27/74) with negative results, (67.2%)MRSA isolates showed positive results while(46.15%)MSSA isolates showed positive to spa gene.• the 25 samples of PCR products from spa gene related to different sources of isolation were send for sequencing, then all data obtained from genes sequencing were submitted to gene bank national center for biotechnology information (NCBI), DNA data bank of Japan (DDBJ) and European Bioinformatics Institute (EMBI) under accession number started with (LC038119) and ended with (LC038142). ,The results showed the size of amplified fragments were variable and ranged from (65 - 335bp) in the original gene also pairwise sequence alignment to spa gene fragment, protein translation, Dendogram and phylogenetic tree were built by using (UPGMA) and genetic distance model Tamura - Nei with cost matrix identity (1.0 - 0.0) with geneious software, the results were showed two dendogram and phylogenetic tree first for short sequence (65 - 190bp) have 17 node and 9 tips while second for long sequence (190 - 335bp) have 31 node and 16 tips.• PCR - RFLP for spa gene was done by using two restriction enzyme HindIII and HinfI and the results showed high diversity among MRSA isolates

انتاج الليفان من البكتريا المعزولة من تربة الجذور وتقييم العوامل المؤثرة على انتاجه == Levan Production by Bacteria Isolated from Rhizosphere Soil and Evaluation of Factors Affecting its Production

Author name: سناء بشير كاظم
Supervisor name: صفاء الدين احمد شنتر القيسي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تعتبر منطقة التربة المحيطة بالجذور مصدرا مهما للعديد من الاحياء المجهرية مثل الفطريات والبكتريا والبكتريا الخيطية. في الدراسة الحالية، تم عزل البكتريا المنتجة لليفان من التربة المحيطة بالجذور. حيث تم الحصول على 15 عينة من التربة المحيطة بجذور البقوليات ( الباقلاء واللوبيا ) خلال الفترة بين تشرين الاول 2014 الى كانون الثاني 2015، من ثلاث مزارع للبقوليات في ناحية كنعان، محافظة ديالى. تم عزل 52 عزله من بكتريا الجذور (الرايزوسفير) واختبرت لمعرفة قابليتها لانتاج الليفان وذلك بالاعتماد على نمو المستعمرات المخاطية عند تنمية هذه البكتريا على وسط الاكار المغذي الحاوي على السكروز. وقد اظهرت النتائج مقدرة 36 عزلة بكتيرية جذرية على انتاج الليفان من المجموع الكلي للعزلات. شخصت العزلات الاربع الاكثر كفاءة لانتاج الليفان ووصفت بواسطة الفحوصات المظهرية والبايوكيميائية القياسية والاختبارات على المستوى الجزيئي. تم اجراء التشخيص الجزيئي لهذه العزلات الاربعة باستخدام 16S rDNA والتي اظهرت ان طول تسلسل المنطقة كان (946، 1056، 1064و1154) زوجا قاعديا للعزلات (2، 3، 23 و33) على التوالي. ان محاذات التسلسل في بنك الجينات اظهر ان العزلات الاكثر كفاءة كان لديها نسبة عالية من التشابه (98، 96، 98 و99) % على التوالي وتبعا لاقرب جار تطوري لهذه العزلات, تم التعرف عليها تبعا لتتابع جين (16S rRNA) وتبعا للفحوصات الشكلية والكيموحيوية , وشخصت على انها (Brachybacterium phenoliresistens، Elizabethkingia anophelis، Arthrobacter globiformis، Pseudomonas brassicacearum) على التوالي. تم تشخيص الليفان المنتج من هذه العزلات الاربعة باستخدام تقنية TLC والتي اظهرت تكون الليفان من نوع واحد من السكريات الا وهو الفركتوز. وقد تم تشخيص الليفان المنتج بواسطة بكتريا B. phenoliresistens باستخدام تقنيتي FTIR وتقنية الرنين المغناطيسي النووي NMR. تحليل الليفان بواسطة هاتين التقنيتين اثبتت انتاج الليفان بواسطة هذه العزلة. تم دراسة تاثير العوامل الغذائية والفيزيائية على انتاج الليفان بواسطة العزلات الاكفا. كان مصدر الكاربون الامثل لانتاج الليفان بواسطة هذه العزلات هو السكروز، حيث كان انتاج هذه العزلات هو 7.88، 7.94، 7.8 و7.77 غم/لتر للعزلات B. phenoliresistens، E. anophelis، A. globiformis ، P. brassicacearum على التوالي. تم استخدام اربع مصادر مختلفة للنايتروجين لمعرفة افضل مصدر نيتروجيني لانتاج الليفان. حيث كان الكازائين هو افضل مصادر النيتروجين لانتاج الليفان حيث كان انتاج هذه العزلات 8.12، 8.2، 8.24 و8.56 غم/لتر للعينات الاربعة على التوالي. تم استخدام تراكيز مختلفة للسكروز لانتاج الليفان حيث كان اعلى انتاج لجميع العزلات عند التركيز 300غم/لتر وكان الانتاج بواسطة هذه العزلات 7.97، 7.94، 8.06 و7.95 غم/لتر على التوالي. تم استخدام قيم pH مختلفة لمعرفة افضل اس هيدروجيني لانتاج الليفان حيث كان افضل اس هيدروجيني هو 7.8 لكل العزلات، وكان الانتاج 7.88، 7.94، 7.8، 7.77 غم/لتر على التوالي. فضلا عن ذلك، تم اختبار عدة ظروف مثل فترة الحضن المثلى، درجة الحرارة، معدل الرج. كانت فترة الحضن المثلى للعزلة E. anophelis 48 ساعة حيث انتجت 8.46غم/لتر، في حين كانت 72 ساعة لباقي العزلات حيث انتجت 8.58، 8.53 و8.7 غم/لتر للعزلات B. phenoliresistens ، A. globiformis وP. brassicacearumعلى التوالي. درجة الحرارة المثلى لانتاج الليفان بواسطة العزلة B. phenoliresistens كانت عند 30 درجة مئوية حيث انتجت 7.87 غم/لتر، وكانت درجة الحرارة المثلى هي 33 درجة مئوية للعزلتين E. anophelis وA. globiformisحيث انتجت عندها 8.04 و8.6 غم/لتر على التوالي. في حين كانت درجة الحرارة المثلى للعزلة P. brassicacearum 40 درجة مئوية وكان انتاجها 8.24 غم/لتر. استخدمت ثلاث معدلات رج لمعرفة افضل معدل رج لانتاج الليفان. تم الحصول على اعلى انتاج لليفان عند معدل رج 150 هزه/دقيقه، حيث كان الانتاج للعزلات B. phenoliresistens، E. anophelis وA. globiformis هو 8.12، 8.54 و8.27 غم/لتر على التوالي. | The Rhizosphere zone is a narrow volume of soil which surrounds the plants roots and influenced by the activity and growth of the root. In the present study, Levan producing bacteria were isolated from rhizosphere soil, fifteen rhizosphere soil samples were obtained from the legumes roots cowpea and broad bean (Vinga unguiculata L. and Vicia faba) during the period from October 2014 to January 2015, which were collected from three legumes farms in Kana’an Village, Diyala Governorate. A total of 52 Rhizobacterial colonies were isolated, purified and screened for their ability to produce levan, depending on growing of mucoid colonies on sucrose nutrient agar. The results showed that thirty six isolates out of the total number of the isolates were identified as levan producers. The most efficient four isolates were identified and characterized according to standard biochemical and Molecular tests. The Molecular identification of these four isolates was carried out by using 16S rDNA, which resulted in sequenced region of 946, 1056, 1064 and 1154 base pair in length respectively. The sequence alignment in the gene bank indicated that the most efficient isolates (2, 3, 23 and 33) have high percentage of similarity (98, 96, 98 and 99 % respectively), in comparison with the retrieved consensus sequences. The closest phylogenetic neighbor for these isolates is predicted according to the 16S rRNA gene sequence, morphological and biochemical tests. These isolates were identified as (Brachybacterium phenoliresistens, Elizabethkingia anophelis, Arthrobacter globiformis and Pseudomonas brassicacearum) respectively. Levan production by these four isolates were characterized by using Thin Layer chromatography (TLC) technique, which revealed that levan is composed of only one sugar which is fructose. Levan produced by B. phenoliresistens was characterized by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Spectroscopy techniques. The instrumental analysis indicated that Levan was produced by the selected isolate. The effect of some nutritional and physical factors were investigated on levan production by the highest four isolates. Sucrose was the best carbon source for levan production in all isolates that gave (7.88, 7.94, 7.8 and 7.77) g/l by B. phenoliresistens, E. anophelis, A. globiformis and P. brassicacearum respectively. In addition, four nitrogen sources were used to identify the best nitrogen source for levan production. Casein was the best nitrogen source for all isolates that gave (8.12, 8.20, 8.24 and 8.56) g/l by B. phenoliresistens, E. anophelis, A. globiformis and P. brassicacearum respectively,. Moreover, different sucrose concentrations were used to assess the best concentration for levan production. The highest levan yield by all isolates was at the sucrose concentration of 300 g/l, which gave (7.97, 7.94, 8.06 and 7.95) g/l respectively. Different pH values were also used to determine the best pH value for the levan production. The four isolates gave their highest levan production (7.88, 7.94, 7.80 and 7.77) g/l at pH 7.8. Further, conditions were examined like optimal incubation period, temperature and agitation rate. The optimal incubation period was 48 hs for E. anophelis that gave 8.46 g/l and 72 hs for B. phenoliresistens, A. globiformis and P. brassicacearum which gave (8.58, 8.53 and 8.7) g/l respectively. Whereas, the optimal temperature was 30ºC for B. phenoliresistens that produced 7.87 g/l , 33 ºC for E. anophelis and A. globiformis which gave (8.04 and 8.6) g/l, and 40 ºC for P. brassicacearum that gave 8.24 g/l. Three agitation rates were used to identify the best agitation rate for levan production. The highest levan production yield was obtained at 150 rpm by the isolates B. phenoliresistens, E. anophelis and A. globiformis which gave (8.12, 8.54 and 8.27) g/l respectively.

نزعات مقاومة مكروليد في العقدية المقيحة والرئوية المعزولة من الاطفال العراقيين المصابين بامراض الحلق المعدية == Macrolide Resistance Trends in Streptococcus pyogenes and Streptococcus pneumoniae Isolated from Iraqi children with throat infections

Author name: سعاد عبد الجبار عبد الزهرة الساعدي
Supervisor name: محمد فخري احمد | مروان صالح محمد النمر
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: اجريت هذه الدراسة على مرضى مراجعي العيادة الاستشارية في مستشفى ابن البلدي في مدينة بغداد (العراق) للفترة من تشرين الثاني 2007 الى شباط 2008 . تم تعين المرضى بشكل عشوائي اذ تم اختيار 108 حالة (60 انثى و48 ذكر) تراوحت اعمارهم بين 18 شهر الى 12 سنة والذين يعانون من التهاب الحنجرة والبلعوم .تم جمع مسحات البلعوم من كل مريض بهدف عزل وتشخيص البكتريا . اعتمد كل من فحص D - test وOptochin كفحص اساسي لتميز بكتريا Streptococcus pyogenes المقاومة للمضادات الميكروليدية . اظهرت النتائج ان 94 حالة ظهرت عليهم العلامات السريرية واعراض التهاب اللوزتين والبلعوم ، 7 حالات ظهرت عليهم اعراض الحمى القرمزية (Scarlet fever)، و14 مريض اعتبروا حاملين للمرض .تم تشخيص بكتريا S. pyogenes في 65 عزلة من اصل 73 وكانت 16 منها مقاومة لمضادات الحياة الميكروليدية ، وتم تشخيص 8 عزلات من Streptococcus pneumoniae .توزعت المجاميع المقاومة للمضادات الحياة الميكروليدية الى : مجموعة بكتريا مقاومة من نوع iMLSB بواقع 3 عزلات ، ومن نوع cMLSB بواقع 8 عزلات ومن نوع M - phenotype بواقع 5 عزلات ، واظهرت عزلتين من نوع معكوس D - Shape (Inverted D - Shape) .كانت التراكيز المثبطة الدنيا باستخدام تقنية التخفبف الدقيق Micro - dilution لـ17 مضاد حيوي متفاوتة بالنسبة الى العزلات (حساسة او مقاومة للمضادات الميكروليدية واشكالها المظهرية) . اظهرت بكتريا S. pyogenes الحساسة للـerythromycin والـclindamycin تركيز مثبطا ادنى عند 0.25 مايكروغرام/مليليتر لكل من الـCo - amoxicillin + clavulanic acid وceftriaxone .بكتريا S. pyogenes التي قاومت كل من erythromycin وclindamycin كانت حساسة عند التركيز 0.25 مايكروغرام/مليليتر للـampicillin وamoxicillin وCo - amoxicillin - clavulanic acid وgentamicin وceftriaxone وciprofloxacin وgatifloxacin .كانت عزلات S. pyogenes من نوع M - phenotype حساسة للتركيز 0.25 مايكروغرام/مليليتر من azithromycin وlincomycin وampicillin وCo - ampicillin cloxacillin وCo - amoxicillin - clavulanic acid وgentamicin وcephalothin وcefotaxime . ادنى تركيز مثبط لعزلات S. pyogenes من نوع D - Shape موجب كان 0.25 مايكروغرام/مليليتر لمضادات ampicillin وamoxicillin وCo - amoxicillin - clavulanic acid وgentamicin . كانت عزلات S. pneumoniae حساسة لكل مضادات الحيوية التي تم دراستها وبتراكيز مثبطة ادنى تراوحت بين (1 - 0.25) مايكروغرام/مليليتر .تم تحديد 3 عزلات من S. pyogenes متحملة للبنسلين . يستنتج من ذلك ان عزلات الـS. pyogenes المقاومة لمضادات الميكروليدية كانت تحتل نسبة عالية ، واكثر الاشكال المظهرية شيوعا كان من نوع cMLSB .كل من العزلات المقاومة للـfluoroquinolone والمتحملة للبنسلين penicillin tolerant كانت متواجدة في العزلات المقاومة والحساسة لمضادات الميكروليدية .حساسية عزلات S. pyogenes لمضادات الحيوية كانت متفاوتة بالنسبة الى حساسيتها او مقاومتها لمضادات الحيوية الميكروليدية وكذلك بالنسبة الى التنويع المظهري للعزلات المقاومة . | This study was conducted on patients attending the consultant clinic at Ibn - Al - Balady Hospital in Baghdad, Iraq from November 2007 to February 2008. The patients were allocated randomly, after they examined thoroughly by pediatrician, to be admit in this study. A total number of 108 (60 girls and 48 boys), their ages ranged from 18 months to 12 years, with provisional diagnosis of tonsillo - pharyngitis were enrolled in this study. Throat swab was obtained from each patient for isolation and identification of microorganisms. Double - disk test (D - test) and optochin test, fundamental for discrimination macrolide resistant Streptococcus pyogenes were done. The results showed that 94 patients had clinical signs and symptoms of tonsillo - pharyngitis, 7 patients were diagnosed as scarlet fever and 14 patients were considered as carriers. S. pyogenes was identified in 65 out of 73 isolates; sixteen of them were macrolide - resistant strain, and (8 isolates) of Streptococcus pneumoniae were identified. The phenotypes of macrolide resistant S. pyogenes were distributed as iMLSB (3 isolates), cMLSB (8 isolates) and M phenotype (5 isolates). Two isolates showed inverted D - Shape patterns. The minimum inhibitory concentration (MIC), using microdilution technique, of seventeen antimicrobials were varied with respect to the isolates whether susceptible or resistant to macrolide in addition to their phenotypes. The lowest MIC for susceptible isolates to erythromycin and clindamycin, was 0.25 µg/mL of Co - amoxicillin + clavulanic acid and ceftriaxone. S. pyogenes which resisted to both erythromycin and clindamycin were susceptible to 0.25 µg/mL of ampicillin, amoxicillin, Co - amoxicillin - clavulanic acid, gentamicin, ceftriaxone, ceftazidime, ciprofloxacin and gatifloxacin. M - phenotype of S. pyogenes isolates were susceptible to 0.25 µg/mL of azithromycin, lincomycin, ampicillin, Co - ampicillin - cloxacillin, Co - amoxicillin - clavulanic acid, gentamicin, cephalothin and cefotaxime. The lowest MIC for S. pyogenes characterized by positive D - shape test was 0.25 µg/mL of ampicillin, amoxicillin, Co - amoxicillin - clavulanic acid and gentamicin . S. pneumoniae isolates were susceptible to all tested antimicrobials with MIC range of 0.25 - 1 µg/mL. Penicillin - tolerant S. pyogenes was detected in 3 isolates. It concludes that Macrolide resistant S. pyogenes was found in high percent, and the commonest phenotype was cMLSB. Both fluoroquinolone resistant isolates and penicillin tolerant isolates were detected in both Macrolide resistant and susceptible isolates. The susceptibility of S. pyogenes isolates to antimicrobials was varied in respect to their susceptibility or resistance to macrolide as well as to the phenotypes of resistant isolates.

دراسة تاثير الغشاء الحيوي المنتج بواسطة Klebsiella pneumonia المعزولة سريريا على بعض جوانب الجهاز المناعي == Study the Effects of Biofilm of Klebsiella pneumoniae Isolated Clinically on Some Immune System Aspects

Author name: سرى مؤيد عباس العبيدي
Supervisor name: علي حسين علوان العامري
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تعد بكترياKlebsiella pneumoniae من الممرضات الخطرة التي بامكانها ان تسبب اصابات حادة, شملت الدراسة عزل 50 عزلة من البكتريا من مصادر سريرية مختلفة من مستشفيات مختلفة في مدينة بغداد (مستشفى ابن البلدي, مستشفى الكندي التعليمي والمختبرات التعليمية لمدينة الطب) لغرض دراستها من محاور عدة بعد ان شخصت البكتريا اعتمادا على الطرق التقليدية بالتشخيص من حيث صفاتها الزرعية والكيموحيوية فضلا عن استعمل جهاز vitek2 compact system لتاكيد التشخيص, اظهرت نتائجنا ان عدد ونسبة عزلات بكترياKlebsiella pneumoniae التي تم الحصول عليها وفقا للمصادرالسريرية (الادرار,الدم ,القشع، حروق, مسحة الاذن ، القيح, الجروح والخروج) كانت 22 (44٪)، 11 (22٪)، 4 (8٪),4 (8٪), (3) (6٪)، 3 (6٪)، 2 (4٪) و1 (2٪) على التوالي. المحور الاول ركز على دراسة المقاومة للمضادات المختلفة وتحديد التركيز الادنى للمضادات الحيوية لتثبيط نمو البكتريا, استعملت المضادات الاتية (,amikicin, azteronam cefepime ceftazidime, ciprofloxacin, gentamycin, impenem, meropenem, minocycline, piperacillin, piperacillin/tazobactam, ticracillin, tobaromycin (trimethoprim/ sulfamethoxazole and لوحظ ان المضادات amikicin, impenem meropenem and اكثر فاعلية ضد هذه البكتريا. من جهة اخرى اظهرت العزلات قدرة مختلفة على انتاج الغشاء الحيوي، حيث استخدمت في هذه الدراسة طريقتان لمعرفة قدرة العزلات لتشكيل الغشاء الحيوي، وكالتالي كانت النسبة في طريقة Congo - Red Agar (CRA) 72 % مكونة للغشاء و20 % غير منتجة و8 % غير محددة الانتاجية, في حين طريقة اطباق المعايرة الدقيقة 80 % مكونة و20 % غير قادرة على تكوين الغشاء. العزلات الاقوى لانتاج الغشاء الحيوي اختيرت لمعرفة مقاومتها للمضادين Ciprofloxacin and Meropenem لاجراء مقارنة المضادات بين الخلايا المفردة والخلايا المكونة للغشاء الحيوي, حيث اظهرت النتائج ان المقاومة للمضادات تصبح اكثر بحوالي 10 مرات بالنسبة للخلايا المكونة للغشاء الحيوي مقارنة مع الخلايا المفردة. المحور الثاني تضمن اجراء التجارب المناعية وشملت عملية الطهي وقياس الفاعلية القاتلة وعملية البلعمة, اجريت هذه التجارب على اكفا عزلتين من كل مصدر من ناحية تكوين الغشاء الحيوي والاكثر مقاومة للمضادات الحيوية, من ناحية اخرى عرضت هذه العزلات لمصدر الاشعة فوق البنفسجية بطول موجي 240 نانوميتر ولمدة نصف ساعة وذلك لاجراء مقارنة بين العزلات نفسها قبل وبعد التعرض وتاثير ذلك على استجابة الجهاز المناعي داخل وخارج الجسم الحي. حيث اظهرت التحليلات الاحصائية وجود فروق عند مستوى معنوية (0.001) لعملية الطهي وقياس الفاعلية القاتلة (داخل الجسم الحي) والبلعمة (خارج الجسم الحي) عند المقارنة مابين العزلات قبل وبعد التشعيع ومابين البكتريا في حالة كونها خلايا مفردة وفي حالة تكوينها الغشاء الحيوي, يدلل ذلك ان الجهاز المناعي اكثر فاعلية ضد الخلايا المفردة من الخلايا المكونة للغشاء الحيوي وللعزلات نفسها قبل وبعد التشعيع.اخيرا اجريت دراسة للتحري عن نسبة وجود الجينات التي يعتقد انها مسؤولة عن انتاج الغشاء الحيوي بواساطة جهاز تفاعل البلمرة التسلسلي وكانت النسبة للجين mrkA 92% وللجين mrkD 50% في العزلات الغير مشععة واصبحت النسبة 53% MrkA و23% MrkD للعزلات بعد التشعيع. كخلاصة هذه النتائج تؤيد ان الاستجابة المناعية ضد البكتريا المكونة للاغشية الحيوية هي اقل كفاءة والتي تضمنت في الدراسة عنها للخلايا المفردة ومما يعني نحن بحاجة لاجراء دراسات اخرى تشمل للجوانب المناعية الاخرى المتخصصة في استجابة الجهاز المناعي. | Klebsiella pneumoniae is a dangerous pathogens that can cause severe diseases. This study included the isolation of 50 isolates of bacteria from different clinical sources from different hospitals in Baghdad city (Ibn - albalady hospital, Teaching Al - Kindy hospitals and Teaching laboratory in medical city hospitals through August 2014 to December 2014) for the purpose of examination of several axes after confirmation the diagnosis of bacteria depending on traditional methods of diagnosis in terms of relying on cultural and biochemical characteristics then used vitek2 a compact system. These results showed that the number and percentage of isolate according to the sources (urine, blood, sputum, burns, ear swabs, pus, wounds and stool ) were 22(44%), 11(22%), 4(8%), 4(8%), 3(6%), 3(6%), 2(4%) and 1(2%) respectively. The first axis of this studies focused on the isolates resistance to different antibiotics and determination the minimum inhibitory concentration of antibiotics ( amikicin, azteronam, cefepime, ceftazidime, ciprofloxacin, gentamycin, impenem, meropenem, minocycline, piperacillin, piperacillin/tazobactam, ticracillin, tobaromycin, trimethoprim/ sulfamethoxazole) that inhibits the growth of bacteria, the obtained results showed that the antibiotics amikicin, impenem and meropenem more effective against the isolates. On other hand the isolates showed different ability to produce biofilms, to examine this ability two methods were used (Congo - red agar methods and Tissue culture plate methods), the percentage of isolates formed biofilms in method (CRA) 72% produce biofilm and 20% non productive and 8% non - specific in CRA, while in TCP method 80% composed and 20% are not able to form the membrane. Higher production of biofilms isolates were exposed to Ciprofloxacin and Meropenem to make a comparison the antibiotic resistance between planktonic and biofilms producers isolates, the results showed that resistance to antibiotics became 10 times higher than planktonic. The second axis was the immunological experiment which included opsonization, bactericidal activity and phagosytosis. The strongest isolates that were chosen from each sources depended on biofilms formation, and antibiotic resistance, the same isolates were exposured to radiation by UV light wave length 240nm for 30min to compare between the same isolates after and before radiation to determine the immune response. Statistical analysis showed a significant differences P (0.001) to all immunogical experiments opsonization and bactericidal (preformed in vivo for wild and mutant type) activity phagocytosis (preformed in vitro for bacteria in planktonic and biofilm form). The immune system response was more effective against planktonic than biofilms formation bacteria to phagocytosis and between isolates for bactericidal assay and opsonization after and before radiation. Finally the genetic study used serial polymerase chain reaction to determine the proportion of the presence of genes that are believed to be responsible of biofilm production ratio was mrkA 92% and mrkD 50% of wild isolates that became at ratio 53.8% mrkA and 23% mrkD in isolates after radaiation, as a conclusion these findings support that immune response to bacteria vital constituent of membranes differ from the response in the case of single cells and there is need to make other immunological studies include specialized aspects of the immune system response.

تحضير الدقائق النانوية لاوكسيد واوكزالات النحاس ودراسة فعاليتها ضد بكتريا الزوائف الزنجارية والمكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثيسيلين المعزولة من اصابات الحروق والجروح == Preparation of Copper Oxide and Oxalate Nanoparticles and Their Effects Against P.aeruginosa and Methicillin - Resistant S.aureus from Burn and Wound Infections

Author name: سرمد فاروق هادي
Supervisor name: سوزان سعدي حسين الروزنامجي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت ست وثمانون عينة سريرية (57 من الجروح و29 من الحروق) من مرضى مصابين بانواع مختلفة من الجروح والحروق من ثلاث مستشفيات في مدينة بغداد وهي : مستشفى اليرموك التعليمي ومستشفى بغداد التعليمي ومستشفى الحروق في مدينة الطب خلال الفترة من ايلول الى كانون الاول 2014. العينات المجموعة فحصت باستخدام ملون كرام ثم زرعت على اوساط اكار الدم واكارالماكونكي بالاضافة الى الاوساط التفريقية الانتقائية (وسط اكار السيدوموناس لعزل Pseudomonas aeruginosa ووسط المانيتول الملحي لعزل (Staphylococcus aureusكما اجريت الاختبارات الكيموحيوية التالية : الكاتاليز والاوكسديز والكواوكيوليز واختبار API 20 NE لغرض تشخيص الـ P.aeruginosa بالاضافة الى ذلك، وبالاعتماد على نظام VITEK2 compact تم اجراء الاختبار التاكيدي لتشخيص P.aeruginosa وS.aureus كشف الزرع البكتيري لـ 86 عينة الماخوذة من الجروح والحروق، ان 75 عينة )%87.2 ( وجد فيها نمو بكتيري هوائي (عينات ايجابية)، بينما العينات السلبية كانت (11) ونسبتها 12.8 %. اظهر زرع عينات الحروق والجروح نسبة عالية %)45.3 ( ,34 عزلة من P.aeruginosa وبالتالي اقترح ان يكون هو المسبب المرضي الاكثر شيوعا، بينما S. aureus كانت نسبتها 28.0 % (21 عزلة). تم زرع جميع عزلات S. aureusعلى وسط agar CHROM حيث سجلت 66.6 %منها كانت مقاومة للمثسيلين اي Methicillin Resist Staphylococcus aureus (MRSA) و33.3 % حساسة للمثسيلين ايMethicillin Sensitive Staphylococcus aureus (MSSA) ، نفس النتائج اعلاه تم الحصول عليها باستعمال طريقة Cefoxitin disc diffusion. خضعت 34عزلة عائدة لبكتيريا P.aeruginosa لاختبار فحص الحساسية للمضادات الحياتية قيد الدراسة، واظهرت النتائج ان كل العزلات %100.0كانت مقاومة للمضادات Carbenicillin وDoxycycline في حين اظهرت مقاومة عالية نسبيا للمضادات الاتية Amoxicillin /Clavulanic acid % 85.3% Cefipime , , 82.4 Netilmicin 76.5% واخيرا Azetreonam 61.8% في حين اظهرت مقاومة معتدلة نسبيا لكل من Gentamicin ,35.3% Tobramycin 32.4% واخيرا Ciprofloxacin ,29.4 % بينما اظهرت مقاومة منخفضة نسبيا لمضاد% Imipenem 14.7 . من جهة اخرى, خضعت 21 عزلة عائدة لبكتريا S.aureus لاختبار فحص الحساسية للمضادات الحياتية واظهرت مقاومة عالية نسبيا لكل من Azithromycin ; 76.2% Cefoxitin Clathromycin; 66.7% 62.0% في حين اظهرت مقاومة معتدلة نسبيا لكل من Chloramphenicol ,%47.6 42.9% Ciprofloxacin Doxycycline, 38.0% بينما اظهرت مقاومة منخفضة نسبيا لكل من Gentamycin , 19.0% Tobramycin Vancomycin , 14.3% 9.5% واخيرا Clindamycin . 9.5% تم تحضير دقائق نانوية لاوكسيد النحاس واوكزالات النحاس بنجاح بطريقة كيمياوية مرنة مستندة على التفكك الحراري لمواد اولية من حامض الاوكزاليك. تم تشخيصها باستعمال الطرق التالية : التحليل النمطي من انحراف الاشعة السينية (XRD) ، والمجهر الالكتروني الماسح (SEM) والتحويل الرباعية لامتصاص الاشعة تحت الحمراء(FT - IR) . تم قياس الفعالية المضادة للبكتيريا لاوكسيد النحاس واوكزالات النحاس النانوية المحضرة لكل من P.aeruginosa وMRSA باستعمال طريقة الانتشار في الحفر وطريقة تخفيف المرق. بينت النتائج بان كلا النوعين من الدقائق النانوية لها القدرة على منع نمو عزلات البكتيريا تحت الدراسة. كما تم تحديد التركيز المثبط الادنى MIC والتركيز القاتل الادنى MBC لكلا النوعين من الدقائق النانوية حيث كانت قيم MIC وMBC لاوكسيد النحاس ضد P.aeruginosa في التراكيز 1600 و3200 مايكروغرام/مل على التوالي، في حين كانت قيم MIC وMBC لاوكزالات النحاس في التراكيز 800 و1600 مايكروغرام/ مل على التوالي. اما بالنسبة لـ MRSA فان قيم MIC وMBC للدقائق النانوية لاوكسيد النحاس كانت في التراكيز 800 و1600 مايكروغرام/مل على التوالي، بينما كانت قيم MIC وMBC لاوكزالات النحاس النانوية في التراكيز 200 و400 مايكروغرام/مل على التوالي. | Eighty six clinical samples (57 wounds and 29 burns swabs) were collected from patients with different types of wounds and burns from hospitals in Baghdad City : Al - Yarmuk Teaching Hospital, Baghdad Teaching Hospital and Burn Hospital in Medical City at a period between September to December 2014. The collected samples were examined by Gram stain then cultured on Blood agar and MacConkey agar media, as well as differential selective media including Pseudomonas agar for isolation of Pseudomonas aeruginosa and Mannitol salt agar for isolation of Staphylococcus aureus bacteria. The following biochemical tests were performed : catalase, oxidase, coagulase tests, and API 20 NE in order To diagnose P.aeruginosa. Additional, Confirmatory test was performed by using VITEK2 compact system in order To identify P.aeruginosa and S.aureus. The results of bacterial cultures revealed that out of 86 samples obtained from burns and wounds, 75 samples forming 87.2 % were observed to have an aerobic bacterial growth (positive samples), while negative samples, (11) represented 12.8%. The results of bacterial culture from burn and wound samples revealed high percentage of 45.3% of P.aeruginosa (34 isolates). Hence, it was suggested to be the most common pathogen, while S.aureus represent 28.0% (21 isolates). All isolates of S.aureus were cultured on CHROM agar medium which revealed that 66.6 % of them were Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and 33.3% Methicillin Sensitive Staphylococcus aureus (MSSA), the same results were obtained by using Cefoxitin Disc Diffusion method. The Antibiotic sensitivity test on thirty four isolates of P.aeruginosa showed that all isolates 100.0% were resistant to Carbenicillin and Doxycycline; relatively high resistance to Amoxicillin/Clavulanic acid, 85.3 %; Cefipime, 82.4 %; Netilmicin, 76.5 % and Azetreonam, 61.8 %. These isolates have relatively moderate resistance to Gentamicin, 35.3%; Tobramycin, 32.4%; Ciprofloxacin, 29.4%, and relatively low resistance to Imipenem, 14.7 %. On the other hand, (21) isolates of S.aureus were tested for antibiotics sensitivity, indicating relatively high resistance to Azithromycin, 76.2%; Cefoxitin, 66.7% and Clathromycin, 62.0%. They also have relatively moderate resistance to Chloramphenicol, 47.6%; Ciprofloxacin, 42.9%, Doxycycline, 38.0% and relatively low resistance to Gentamycin, 19.0%; Tobramycin, 14.3%; Vancomycin, 9.5 % and Clindamycin, 9.5%.Copper oxide and oxalate nanoparticles were prepared successfully via soft chemistry route based on the thermal decomposition of oxalic precursors. They were obtained with a well - controlled morphology and particle size. These nanoparticles were characterized by using : X - ray diffraction (XRD) pattern analysis, Scanning Electron Microscope (SEM) and Fourier Transform Infra - Red spectroscopy (FT - IR). The antibacterial activity of the obtained copper oxide and oxalate nanoparticles against P.aeruginosa and MRSA were estimated by using Well Diffusion and Broth Dilution methods. The results showed that both types of nanoparticles have the ability to inhibit growth of the bacteria under study. The Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Bactericidal Concentration (MBC) of copper oxide nanoparticles against P.aeruginosa were found to be 1600 and 3200 µg/mL respectively, while for copper oxalate nanoparticles were at concentrations of 800 and 1600 µg/mL respectively. For MRSA, the MIC and MBC values of copper oxide nanoparticles were at concentrations of 800 and 1600 µg/mL respectively, while for copper oxalate nanoparticles were at concentrations of 200 and 400 µg/mL respectively

دراسة مقارنة لازالة سمية الافلاتوكسين B1 وM1 باستخدام بعض الطرائق البايولوجية والفيزيائية == Comparative Study for Detoxification of Aflatoxins (B1 and M1) by Using Some Biological and Physical Methods

Author name: سجى يحيى عبد الجليل ابراهيم
Supervisor name: منى تركي موسى الموسوي | لبيب احمد الزبيدي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
University: University of Anbar
Language: Arabic
University location: Anbar
First pages:
Abstract: بعد تلوث الاغذية والاعلاف بالافلاتوكسين(AFB1) B1 احد اسباب المشاكل الاقتصادية والصحية الخطيرة . ووجدت الافلاتوكسين (AFM1) M1 في منتجات الالبان عندما تستهلك الحيوانات المرضعة علفا ملوثا بالافلاتوكسين B1 . تهدف الدراسة الحالية الى الكشف عن مستوى AFB1 في عينات اعلاف الحيوانات اللبنية ومستوى AFM1 في عينات منتجات الالبان في الاسواق المحلية باستخدام تقنيات مختلفة (استشراب الطبقة الرقيقة TLC، الاستشراب السائل عالي الاداء HPLC والممتز المناعي المرتبط بالانزيم ELISA). ودراسة الكفاءة الفيزياوية (تطبيق البلازما غير الحرارية)، فضلا عن الازالة السمية الحيوية (biodetoxification) لـسموم الافلاتوكسنات AFB1 وAFM1 من عينات الاعلاف والحليب على التوالي. وشملت الدراسة 275 عينة من اعلاف الحيوانات اللبنية والبان غذائية من مختلف مناطق بغداد خلال الفترة اذار 2014 - مايس 2015. تضمنت عينات اعلاف الحيوانات اللبنية 145 عينة موزعة على 55 عينة مستوردة و90 عينة محلية ، شملت كل منهما الذرة والقمح والشعيرو فول الصويا واعلاف الحيوانات اللبنية الكاملة والقش، بينما تكونت عينات منتجات الالبان من 130 عينة موزعة على 65 عينة مستوردة ومحلية لكل منهما وشملت الحليب السائل ، الحليب المجفف ، الجبن الابيض والناعم ، فضلا عن اللبن. بينت النتائج عدم وجود فرق معنوي (p≤0.05) بين تقنيتي HPLC وELISA %44.8) و41.3% على التوالي( لكشف AFB1 في عينات اعلاف الحيوانات اللبنية وAFM1 ) 50% و53.8% على التوالي) في عينات منتجات الالبان، التي قد تشير الى حساسيتهما وخصوصيتهما. في حين ان هنالك فرق معنوي (p≤0.05) بالمقارنة مع تقنية TLC (%37.9 عن AFB1 و38.5% عن AFM1). اظهرت تقنية ELISA مستوى اعلى اداء من HPLC في النتائج اذ تمكنت من الكشف عن اوطا تركيز 0.001 نانوغرام/غرام من AFB1 في القمح المحلي في حين HPLC تمكنت من الكشف عن اعلى تركيز 817.9 نانوغرام/غرام للــ AFB1 في القش المحلي ، فضلا عن قدرة ELISA في الكشف عن اوطا واعلى تركيز من AFM1 في الجبن المحلي عند (0.3 و939.67) نانوغرام / لتر على التوالي كانت اعلاف الحيوانات اللبنية الكاملة المستوردة ملوثة جميعها بــ AFB1 وبنسبة تلوث اكثر من المحلية. في حين كانت الذرة والقمح والقش المحلية اكثر تلوثا بــ AFB1 من المستوردة، بينما فول الصويا المحلي والشعير اوطا تلوثا. ان اعلى مستوى من التلوث بــ AFM1 في اللبن والحليب والجبن المحلي والمستورد يمكن ان تشكل خطرا على الصحة العامة. اظهرت الازالة السمية الفيزيائية بتطبيق البلازما غير الحرارية بان 10 ثانية كان افضل وقت تعرض لازالة سموم AFB1 وAFM1 من عينات اعلاف الحيوانات اللبنية والحليب الملوث على التوالي، عندما كان زمن التعرض عند (5 و10 و15) ثانية وحدها. تضمنت الازالة السمية الحيوية المعالجة بعترة الخميرة (Saccharomyces cerevisiae) وعترة البكتيريا (Streptococcus salivarius) في تراكيز متسلسل (1.5 × 104 - 1.5 × 108) خلية / مل، واظهرت النتائج ان افضل تركيز للعترتين البكتيرية والخميرة كان 1.5 × 108 خلية / مل لازالة سمية AFB1 وAFM1 من عينات الاعلاف والحليب على التوالي. | Contamination of feed and food by Aflatoxin B1(AFB1) is a cause of serious economic and health problems. Aflatoxin M1(AFM1) is found in dairy products when lactating animals consume feed contaminated with AFB1.The current study aimed to detection of AFB1 level in dairy animal's feed samples and AFM1 level in dairy food samples at the local markets using different techniques : (Thin Layer Chromatography (TLC), High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Enzyme Linked Immune Sorbent Assay (ELISA), also study the efficiency of physical (non - thermal plasma application) , in addition to biodetoxification of AFB1 and AFM1 from feed and milk samples respectively .The study included collection of 275 dairy animal's feed and dairy food sample from different regions of Baghdad during March 2014 - June 2015. The dairy animal's feed samples consists of 145 sample distributed into 55 imported sample and 90 locale sample , each of them included corn, wheat, barley, soybeans, complete dairy animal's feed and straw ,While the dairy food samples consists of 130 sample distributed into 65 imported and local sample, each one of them included liquid milk, powder milks, white and soft cheeses, in addition to yoghurt . There was no significant (p≤0.05) difference in the result between HPLC and ELISA techniques in detection of AFB1 (44.8% and 41.3%, respectively) from dairy animal's feed samples and AFM1 (50% and 53.8%, respectively) from dairy food samples, that may refer to their sensitivity and specificity. While have significance (p≤0.05) difference when compared it with TLC technique (37.9% of AFB1 and 38.5% of AFM1). The ELISA technique has highest performance than HPLC , that can detect lowest concentration of AFB1 at 0.001 ng/g in the local wheat ,but HPLC can detect highest concentration of AFB1 in the local straw at 817.9 ng/g., in addition to ability of ELISA to detect lowest and highest concentration of AFM1 in the local cheese at (0.3 and 939.67) ng/L respectively . All the imported complete dairy animal's feed samples were contaminated with AFB1 more than locally samples . While the local corn, wheat and straw were more contaminated with AFB1 than imported; while local soybean and Barley were less contaminated. The highest level of AFM1 contamination was obsorved in the local and imported yogurt , milk and cheese which could be a serious risk for the public health .The physical detoxification using non - thermal plasma application showed that 10 seconds was the best exposure time for detoxification of AFB1 and AFM1 from contaminated dairy animal's feed and milk samples respectively , when exposure time was at (5, 10 and 15) seconds alone. The biodetoxification include treatment with yeast strain (Saccaromyces cerevisiae) and bacterial strain (Streptococcus salivarius) at alone in serial concentrations (1.5 x 104 - 1.5 x 108) cfu/ml, the results showed that the best concentration of bacterial and yeast strains was 1.5 x 108 cfu/ml for detoxification of AFB1 and AFM1 from feed and milk respectively.

استخلاص وتنقية جزئية للكتينات بكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة من حالات مرضية

Author name: زينب نوري حامد محمد العاني
Supervisor name: عبد الواحد باقر الشيباني | خليل مصطفى خماس
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تم جمع (50) مسحة تعود لمرضى ومراجعين لثلاث مستشفيات عامة في بغداد وذلك للتحري عن عزلات الـ Pseudomonas aeruginosa اخذت من حالات مرضية متعددة شملت الحروق والجروح والتهابات الاذن. وبعد ان اجريت على العزلات التي تم الحصول عليها الاختبارات الكيموحيوية اللازمة لتشخيصها ومنها القابلية على تحليل الدم على وسط الـ Blood agar ، امكن انتقاء (25) عزلة اظهرت قدرتها على انتاج انزيم الـ hemolysinase وتحليل وسط الدم بشكل كامل. اخضعت العزلات بعدها لاختبار القابلية على النمو على وسط السترمايد الانتقائي والقدرة على النمو في 42 م ، اذ انتخبت (18) عزلة منها. ثم تبع ذلك اختبار قابلية العزلات على انتاج اللكتينات من خلال عملية التلازن مع كريات الدم الحمر للانسان بفصائلها (O, B, A) ودم بعض الحيوانات _الماعز ، الدجاج ، الفئران والارانب) حيث تم انتقاء العزلات التي اعطت اعلى عيارية. زرعت العزلات على وسطي الانتاج (GE) Grelets mediumوالمرق المغذي (Nutrient broth) للتحري عن قابليتها على انتاج اللكتينات، ودلت النتائج على انتاجها لنوعين من اللكتينات هما PA - I والـ PA - II ، اذ يتميز الاول بتخصصه تجاه سكر الكالكتوز، فيما يتخصص الثاني بالمانوز. بعد انتهاء فترة التنمية تم استخلاص اللكتينات من اوساط الانتاج لتجري عليها عملية التنقية باستخدام كبريتات الامونيوم ثم التكسير بالموجات فوق الصوتية ، ليتم بعدها انزال الراشح باستخدام طريقة الفصل بكرموتوغرافي عمود الفصل يمكن تلخيص اهم النتائج التي تم الحصول عليها بالاتي : 1 - اظهرت مستخلصات اللكتينات تباينا في الفاعلية التلازنية تجاه كريات الدم الحمر للانسان والحيوان سواء اكانت معاملة بانزيم التربسين ام لم تعامل به، كما تباينت العزلات في انتاجها لانزيم الهيمولايسين وصبغة البايوسين الزرقاء. 2 - تم تحديد درجة الحرارة المثلى لنمو عزلات بكتريا الـ aeruginosa P. وانتاجها للكتينات ب37م عندما بلغ تركيز اللكتين PA - I 95 مايكروغرام / سم3 ، في حين كان تركيزه عند الحرارة 35 م مايكروغرام/ سم3. اما اللكتين PA - II فبلغ تركيزه 40 مايكروغرام / سم3 عند الحرارة 35 م . 3 - وكان لاختلاف الاس الهيدروجيني دور في التاثير على تركيز ونقاوة اللكيتنات المستخلصة. اذ لم يتجاوز تركيز اللكتين PA - II المستخلص من العزلة (Z1) الـ30 مايكروغرام / سم3 عند الاس الهيدروجيني 5.0 في حين بلغ التركيز 105 مايكروغرام / سم3 لنفس اللكتين عند الاس الهيدروجيني الامثل (7.0) . اما اللكتينPA - I فقد انخفض تركيزه من 85 مايكروغرام/ سم3 في الاس الهيدروجيني الامثل ليصل الى35 مايكروغرام / سم3 عند الاس الهيدروجيني 8.0. 4 - تمت تنقية اللكتينات المستخلصة بطريقة الترحيل الكهربائي في هلام متعدد الاكريلامايد بظروف ماسخة ، من خلال تمرير اربعة نماذج مستخلصة (اضافة الى نموذج البروتينات القياسي). 5 - لدى اختبار حساسية العزلات المعزولة من التهابات الاذن لمضادات الحياة ، اظهرت تباين في مقاومتها للمضادات، وكانت جميع العزلات مقاومة لكل من الامبسلين والاموكسيسيلين، فيما كانت حساسة للمضادات توبرومايسين والجنتامايسين والارثرومايسين. 6 - لاختبار قابلية اللكتينات المستخلصة على الارتباط بالسكريات الموجودة في حليب الام وحليب البقر والحليب المصنع، دلت النتائج بانه اضافة عالق الدم صنف O الى اللكتين مع سكريات الحليب تاركا كريات الدم الحمر حرة. 7 - اثبتت تجربة استخدام المرهم الطبي المضافة له بعض السكريات البسيطة كفاءتها، بعد ان تبين قدرة هذه السكريات على تثبيط تلازن اللكتينات مع كريات الدم الحمر للانسان خارج الجسم.8 - بعد ان حقنت فئران التجارب باللكتينات (PAI,PA - II,PAII) المستخلصة من العزلات (Z4,Z1,Z1) ، كان المحتوى الكاربوهيدراتي فيها (95،48، 30) مايكروغرام/سم3 وتركيز البروتينات (1350،860، 590) مايكروغرام / سم3 على التوالي. كما ولوحظ ظهور حالات غريبة على الفئران الثلاثة في المجموعة الاولى والتي حقنت باللكتينات اعلاه وتركت بدون علاج لمدة ساعة، ما بعد قتلها فقد حدث تحلل دم كامل في الفار الاول ومتوسط في الثاني، في حين لم يحدث اي تحلل للدم في الفار الثالث. وبعد استخدام العلاج في فئران المجموعة الثانية، لم يحدث تحلل دم للفار الاول والثالث وكان التحلل ضعيفا في الثاني. اما فئران المجموعة الثالثة والتي حقنت وتركت لمدة ساعتين بدون علاج، فقد نفق الفار الاول وحدث تحلل ضعيف في دم الفار الثاني وتحلل كامل في الفار الثالث. لم يسبب اعطاء العلاج لفئران المجموعة الرابعة وتركهم لمدة ساعتين اي تحلل لدم الفار الاول والثالث فيما كان ضعيفا في الثاني. اما افراد المجموعة الثانية فقدتركت بعد الحقن ثلاث ساعات بدون علاج، وكان تحلل الدم كاملا في الفار الاول ومتوسطا في الثاني والثالث، في حين لم يحدث تحلل للدم بعد اخذ العلاج. | Fifty samples were collected from several pathogenic cases including burns, wounds and ears belonging to patients and individuals referred to three general hospitals in Baghdad. Samples were subjected to the microbiological tests for detecting Pseudomonas aeruginosa, isolales. Among those tests was the ability of blood analysis on blood agar base medium. A total of (25) isolates were selected which showed the ability to produce the hemololysins. Some suspected isolates were also subjected to grow on ctramide agar, and with stand growth at 42c. Out of (25) only (18) isolate selected due to their ability to grow at 42c. The (18) selected isolates were tested for their ability to produce lectins via the heamagglutination with the human red blood cell groups (A, B, O). Isolates showed higher titers were chosen, when ability to produce lectins, two types (PA - I and PA - II) lectins were detected. Lectin PA - ICharacterized by it’s specify toward galactose, while PA - II was specific to mannose. After lectins were extracted from the production media, they were purfeyed by using ammonium sulphate and fractioned by the ultrasonic waves, followed by descending the filtrate by separation, through the chromatographic column.Results obtained could be described briefly as : 1. Obtained lectins showed were differed in their haemagglutination activity toweras human and animals red blood cells whether they were treated by the trypsin enzyme or not. However, isolates were not similar in producing the hemolysin enzyme and pyocine pigment.2. Optimum temperature for growth of P. aeruginosa isolate, and lectins production was 37c when concentration of lectin PA - I reached 95.0 µg/ml, while at 35c was 35 µg/ml - Regarding PA - II reached 40 µg/ml at 35c.3. Variation of pH played a significant effect on the. concentration and purity of the extracted lectins. At pH5.0 lectin PA - II concentration did in exceed 30, µg/ml while at optimum pH (7.0) it reached 105 µg/ml in the optimum pH to only 35 µg/ml at pH 8.0.4. Extracted lectins purified by gel electrophoresis when four extract in addition to the standard proteins sample were passed through it. The molecular weight of the PA - I was lectin from Z1 was 14.000 Dalton, while PA_II was 12.000 Dalton from the same sample.5. When P. aeruginosa isolates of ear infection were tested for their susceptibility to some antibiotics, they differed in their pattern of resistance. However, all isolates were resistant to Ampicilin and Amoxocilin, but sensitive to Tobramycin, Erythromycin and Gentamycin.6. In order to test the ability of the extracted lectin against some sugar which present in the human milk, raw milk and powder milk, red blood cell group were added to the lectin with the milk samples. Results showed that sugars inhibited haemagglutination with the red blood cells. 7. Experiments and application of the prepared ointment containing simple sugar proved its efficiency when sugar were able to prevent lectin agglutination with human red blood cells (invitro).8. After injecting mouse with the lectins (PAI, PAII, PAII) at (Z1, Z1, Z4) isolates, concentration of CHOs were (30, 48, 95) µg/ml and protein were (135, 860, 590) µg/ml respectively. Abnormal cases were also appeared on the three mice at the first group which was injected by the lectin when they were left without treatment for one hour, after they were killed, the first one was showed complete analysis at red blood cells, while it was not complete in the second and no analysis was showed in the third one, after treatment, no analysis of red blood cells was showed in the first and the third one, but it was not complete in the second one.The third group which injected by the same lectins when they were left without treatment for two hours the first mouse was dead, and the hemolysis was not completed in the second one, but completely in the third one, after treatment no hemolysis was showed in the first and the third one, but weakly in the second one. The fourth group, which injected by the lectins when they were left without treatment for three hours, the first mouse, was showed complete hemolysis, but not complete in the second and third one, after treatment, no hemolysis of red blood cells was showed.

تقييم وبائي ومختبري لمرضى التهاب الكبد الفايروسي نمط C (HCV) لحالات الثلاسيميا == Evaluation of HCV infection in Thalassemic patients Epidemiological, Virological, Immunological, Clinical and Biochemical

Author name: زينب ناصر حسين الطرفي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: يتميز التهاب الكبد الفايروسي بقابليته الوبائية على اصابة العديد من الافراد ويطلق مصطلح التهاب الكبد الفايروسي على عدد من الفايروسات المصيبة للكبد التي تم تسميتها حسب اكتشافها الى A,B,C,D,E,F,G ويعتبر التهاب الكبد الفايروسي C وBمشكلة كبيرة وذلك لعدم امكانية تشخيص الاصابة الفايروسية منذ البداية لكون اغلب الاصابات تكون بدون اعراض مرضية او باعراض خفيفة.المواد وطرائق العمل : شملت الدراسة الوبائية 1159عينة لمرضى الثلاسيميا الذين يراجعون مركز الثلاسيميا في الرصافة، والمجموعة الثانية 140915 عينة اخذت لمتبرعي الدم في المركز الوطني لنقل الدم اعتمدت من السجلات. وتم اجراء الفحوص الفايروسية (HCV,HBV,HIV) لهذه المجاميع، واجريت الفحوص الفايروسية التشخيصية الاخرى على مرضى الثلاسيميا، فضلا عن اجراء الفحوص المناعية، فحوص الدم، والفحوص الكيميوحيوية.النتائج : افرزت نتائج مرضى الثلاسيميا عن نسبة 24.76% (70عدد الذكور و110 عدد الاناث) موجبة لفحص anti - HCV، ونسبة 0.77% (7 من الذكور و2 من الاناث) موجبة لفحص HBsAg، وبنسبة 0.34% (2 من الذكور و2 من الاناث) موجبة لكلا الفحصين (علما ان جميع المرضى بدون علاج الانترفيرون) مقارنة مع متبرعي الدم بنسبة 0.4% لـanti - HCV و0.97% لـHBsAg،علما ان جميع نتائج فحص HIV كانت سالبة لمرضى الثلاسيميا ومتبرعي الدم، هذا بالنسبة للدراسة الوبائية. اظهرت الدراسة التحليلية المختبرية ان نسبة الاصابة بفايروس التهاب الكبد HCV اعلى في الذكور بنسبة 27.48% مقارنة مع الاناث بنسبة 21.35% بوجود فرق ذو دلالة احصائية معنوية لارتفاع نسبة الذكور عن الاناث، فيما لوحظ ان النسبة هي ذاتها 0.3% لذكور واناث مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV ولوحظ ارتفاع الاصابة مع ازدياد العمر فاعلى نسبة للاصابة بـ HCV 41.5% هي للاعمار ما بين 21 - 30سنة وللمصابين بـHBV بنسبة 1.7% للاعمار ما بين 1 - 11سنة. ولوحظ ارتفاع نسبة الاصابة بـ HCV بين الاكراد بنسبة 85.7%. اما بالنسبة الى HBV فقد لوحظ ان النسبة هي 5.7% بين الاكراد، اما في العرق العربي فقد لوحظت نسبة HCV 22.83%، وHBV 0.63% وفي الكلدان لوحظ ان نسبة الاصابة بـHCV 20%. اجري فحصPCR على بعض مرضى الثلاسيميا واظهرت الدراسة ان 50% من النتائج موجبة، وباجراء الكشف عن النوع الجيني لفايروس HCV بطريقة RFLP تم الحصول على انماط جينية مختلفة تضمنت 3b,4,6,3a,2b,1b واجريت دراسة مناعية على المرضى الموجبين لفحص PCR، وكشفت النتائج ان 18% من اولئك المرضى قد ابدوا تفاعلات موجبة لاضداد النواة واضداد العضلات الملساء في حين لم يظهر اي نتيجة موجبة لاضداد الدنا، اضداد الميتوكوندريا واضداد الشحوم المفسفرة. اجري الترحيل الكهربائي لبروتينات المصل وتبين وجود ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لبروتين الكلوبيولين مقارنة بالالبومين، بارتفاع معدل بروتين كاما وانخفاض معدل بروتين الالبومين لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص HCV - PCR.اجري على بعض مرضى الثلاسيميا فحوصات عمل الكبد ولوحظ ارتفاع معدل TSB في مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg فضلا عن ارتفاع معدل ALTفي المرضى الموجبين لفحص HBsAg عن المرضى الموجبين لفحص anti - HCV، كذلك لوحظ ارتفاع معدل AST لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg فيما لوحظ ان معدل انزيم الفوسفاتيز القاعدي هو ضمن الحد الطبيعي لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg، وتم اختيار مجموعة من مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg وغير المصابين بـ HCV,HBV واجريت عليهم عدد من الفحوص الكيميوحيوية لمستوى (البروتين الكلي، الالبومين، الكلوبيولين، اليوريا، الكرياتنين، حامض اليورك، البوتاسيوم، الفسفور غير العضوي، الكالسيوم، النحاس، الكلسترول والسكر) في الدم، ولم يلاحظ اي دلالة احصائية معنوية لهذه الاختبارات، عدا اختبار الكولسترول حيث لوحظ انخفاض معدل الكولسترول في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV الى 112.7mmol/L، وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـHBV بمعدل mmol\L93.69 كما لوحظ وجود انخفاض ذو دلالة احصائية معنوية بين مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV,HBV مقارنة مع غير المصابين بـHCV,HBV، كذلك لوحظ وجود دلالة احصائية معنوية لانخفاض معدل حامض اليورك لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV,HBV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا غير المصابين، ووجد ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لمستوى النحاس في الدم لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV وغير المصابين مقارنة مع المصابين بـHBV. ووجد ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لمستوى السكر في الدم لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة بمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV وتبين وجود فرق معنوي لارتفاع معدل الفسفور غير العضوي لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV وغير المصابين بـHCV,HBV مقارنة بالمصابين بـHBV. اجريت الفحوص المناعية على مجموعة من مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg وغير المصابين وتضمنت الدراسة المناعية الكشف عن مستويات الكلوبيولينات المناعية في الدم ومكونات المتممة C3,C4فضلا عن الكشف عن اضداد الذات، ولوحظ ارتفاع نسب اضداد الذات لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة مع غيرهم من مجاميعمرضى الثلاسيميا وتبين ارتفاع نسبة اضداد المايتوكوندريا (43.4%)، اضداد الهستون (40.9%)، اضداد العضلات الملساء (17%)، الاضداد النووية (17%)،اضداد شحم القلب (11.6%)، اضداد الشحوم المفسفرة (17%)، اضداد الدنا المزدوج الشريط (31.8%)، اضداد بروتينات النواة A - Jo - 1 (2.27%)، SS - B (4.5%)، A - Scl (3.4%) في حين ان اضداد الذات من نوع A - RNP/Sm,SS - A,A - Sm,AC - B لم يلاحظ اي نتيجة موجبة لها. اما في مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV فقد تم الحصول على نسبة (15.38%) لكل من اضداد الهستون، اضداد شحم القلب، اضداد الشحوم المفسفرة فيما كانت نسبة اضداد الميتوكوندريا (38.46%). كما لوحظ ارتفاع نسبة المصابين بالعامل الرثوي والبروتين الفعال في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV بنسبة 46%، 68% على التوالي مقارنة مع غير المصابين بـHCV,HBV وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV بنسبة 38.4% لكل من RF,CRP. وتبين وجود فرق معنوي ذو دلالة احصائية لارتفاع الاصابة باضداد الذات ضد الهستون في الاناث مقارنة مع الذكور وارتفاع الذكور عن الاناث في اضداد المايتوكوندريا في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV. كذلك لوحظ ارتفاع بعض الكلوبيولينات المناعية في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV بمستوى 1789 mg/dl للـIgG، ولوحظ مستوى 305.8 mg/dl للـ IgA فيما كان المستوى 203.3 mg/dl للـIgM، وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV لوحظ ارتفاع مستوى IgG الى mg/dl1823.6، اما مستوى IgM وIgA فقد كان بمستوى 229.6 mg/dl، 278.8mg/dl بالتعاقب، وفي بروتينات المتممة C3,C4 لوحظ انخفاض مستوى C3 الى 82.6mg/dl فيما كان مستوى C4 23.7mg/dl وهو ضمن الحد الطبيعي الادنى في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV، اما في مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV فقد لوحظ ان مستوى بروتينات المتممة C3 اقل من المستوى الطبيعي 78.1 mg/dl فيما كان المستوى 20.3mg/dl الى C4.في اختبارات امراض الدم تم الحصول على دلالة احصائية معنوية لارتفاع معدل PT لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة مع غير المصابين ومرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV، كما لوحظ انخفاض معدل تعداد كريات الدم العدلة لمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV ومرضى الثلاسيميا غير المصابين. ولوحظ انخفاض معدل تعداد الصفائح الدموية لمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV ومرضى الثلاسيميا غير المصابين. | Viral Hepatitis characterized by its epidemic ability to infect many people. Viral hepatitis called to many hepatic viral infection that had been classified into A,B,C,D,E,F,G. Hepatitis C infection considered a big problem related to the inability to diagnose the viral infection from the beginning because of mild or no symptoms. Material & Methods : - The epidemic study contains two groups, first group 1159 sample of thalassemic patients in Al - Rusafa Center For Thalassemic Patients. Second group 140915 samples taken from blood donors in the national blood bank from the records.Viral tests had been done for these groups (HCV,HBV,HIV). Diagnostic tests done on thalassemic patients like immunological, hematological, biochemical tests.Results : - For the epidemic study the result shows a 24.76% for thalassemic patients infected with HCV , 0.77% for thalassemic patients infected with HBV, & 0.34% for thalassemic patients infected with both HCV,HBV. 74.89% for non infected thalassemic patients compared with blood donors of 0.4% for HCV infection, and 0.97% for HBV infection.Studies for investigating laboratory tests done on thalassemic patients after confirming HCV,HBV infections through doing diagnostic viral tests.HCV Viral results shows higher percentage of male to female by 27.48% for male, 21.35% for female respectively and it was seen that the same rate of 0.3% for male and female infected with HBV. Higher infection rate with age increasing of 41.5% for age group 21 - 30 years of HCV thalassemic patients, and 1.7% for age group 1 - 11 years for HBV thalassemic patients. Higher HCV infection rate noticed for Kurdish people 85.7% , Christians 20%, and in Al - Sabeaa 40%.while the percentage of HBV in Kurdish people 5.7%, and no one infected with HBV infection in Christian and Al - Sabeaa people. For Arabic patients the percentage of HCV infection is 22.83% and 0.63% for HBV infection.HCV - PCR Thalassemic patient results show that 50% of results are positive and 50% are negative (11 out of 22 patients), doing genotyping of HCV by RFLP test shows different subtypes of HCV (3b, 2b, 1b, 3a, 4, 6).Immunological study done on PCR positive patients’ shows antibodies percentage of 18% to ASMA, ANA and 0% for each of AMA, ADNA, APL. Electroforeces done for protein of these patients show significant statistical increasing values of protein globulin in comparison to albumin decreasing.For liver function tests, applied on thalassemic patients it had been noticed that there is a significant statistical increasing values in the thalassemic patients infected with HCV as compared to other thalassemic patients not infected with HCV. Increasing the level of ALT in HBV patients compression with HCV patients, increasing the level of AST of HBV, HCV thalassemic patients where the level of alkaline phosphates in the upper limit of normal value of HCV, HBV thalassemic patients.No significant statistical values where noticed for the biochemical tests applied on some thalassemic patients infected with HCV, HBV infection except cholesterol where it had been noticed a decrease of level 112.7 mmol/L in thalassemic patients infected with HCV. 93.69 mmol/L in HBV infection patients, a significant statistical decrease value between HBV , HCV thalassemic patients in comparison with non infected patients.There is a decrease level of uric acid for the thalassemic patients infected with HCV compared with non infected patients, significant increase of copper level in the blood of HCV thalassemic patients compared with HBV infected thalassemic patients and not infected thalassemic patients.Significant statistical value increment for the random blood sugar in HCV thalassemic patients compared with HBV infected thalassemic patients.Regarding immunological study, it had been noticed that there is an increasing in autoantibody with significant statistical value for thalassemic patients infected with HCV compared with other thalassemic groups. It had been seen that there is an increasing in the mitochondrial antibodies (AMA - M2) 43.4%, antihiston antibodies (AHA)40.9%, antismooth muscle antibodies (ASMA)17%, antinuclear antibodies (ANA)17%, anticardiolipin antibody antibodies (ACL)11.6%, antiphosphotidel serin antibodies (APL - S)17%, antidouble stranded DNA antibodies (A - ds - DNA) 31.8%, other antinuclear proteins like A - Jo1 2.27%, SS - B 4.5%, A - ScL 3.4%, where the other auto antibodies A - RNP/Sn, SS - A, A - Sm, anticentromer B antibodies (A - C - B) show zero percent for each one of them while in the HBV thalassemic patients a 15.38% was obtained for each APL - S , ACL & AHA.. A 38.46% for AMA - M2.There is an increase in rheumatoid factor (RF), CRP in thalassemic patients infected with HCV compared with non infected thalassemic patients with a ratio of 46%, 68% respectively. In HBV thalassemic patients 38.4% for each RF and CRP. Significant statistical difference for increasing incidence with auto antibodies in the females compared with males of autoantibodies type AHA, AMA - M2 in thalassemic patients infected with HCV noticed.We noticed an increasing in the immunoglobulines IgG 1789 mg/dl, 305.8mg/dl for IgA in thalassemic patients infected with HCV while IgM in the upper normal range 302.3 mg/dl, complimentary portions C3, C4 shows a decrease level in C3 82.6 mg/dl, and the level of C4 is 23.4mg/dl, which is regard as the lower normal limit. While in the HBV thalassemic patients we obtain a level 1515.3mg/dl for IgG, 204.8 mg/dl for IgM and for IgA 233.3mg/dl.In the hematological tests of thalassemic patients infected with HCV shows significant increment in the level of PT test was obtained as compared with other groups of thalassemic patients. Percentage decrement in neutrophil of WBC cells in HCV thalassemic patients as compared with HBV and non infected thalassemic patients. There is a decrement in platelets count in HBV thalassemic patients compared with HCV and non infected thalassemic patients.

الكشف عن جينات البيتالاكتاميز واسعة الطيف لبكتريا الكلبسيلا المعزولة من عينات سريرية وبيئية في محافظة ذي - قار == Detection of ESBLs in Klebsiella spp. Isolated from Clinical and Environmental Samples at Thi - Qar Province

Author name: زينب محمد عيدي اللامي
Supervisor name: يحيى عبد الرضا عباس
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Dhi Qar
First pages:
Abstract: This study aimed for isolation and identification of Klebsiella spp.from clinical and environmental samples and detection the prevalence of some extended spectrum β - lactamases (ESBLs) genes (bla CTX - M, bla CTXM1) in Klebsiella spp. Samples collected were included clinical samples ( Burns , wounds , urinary tract infections, respiratory tract infections, otitis media and vaginal infections ) and hospitals environments. A total of 554 (468 clinical and 86 environmental samples) during the period from October 2013 to March 2014 were collected. Growth on blood agar, MacConkey agar and E.M.B agar was identified by cultural, morphological and biochemical tests and confermated by API 20 E system which revealed that : 45 ∕ 554 ( 8,1%) gave positive growth for Klebsiella spp. as following : 2 ∕ 48 (4.1 %) fromburns , 7∕ 40 (17.5 %) from wounds, 29 ∕315 ( 9.2%) from urinary tract infections, 4 ∕ 25 (16%) from respiratory tract infections, 3 ∕86 (3,4%) from hospitals environments.All the 45 isolates of Klebsiella spp. were screened for their antibiotic resistance against 15 antibiotics of different classes using Kirby - Bauer disk diffusion method. The results showed that all the tested isolates were resistant to at least 6 antibiotics of which they were tested, hence the isolates were considered to be multidrug resistant.The results showed that all of the isolates were found to be resistant to β - lactam antibiotic (ampicillin and amoxicillin) Disk approximation test and not production of ESBLs by these isolates.Combined disk diffusion method was used for detection of metallo - β - lactamase - producing isolates , it was emplace each of imipenem and antibiotic with and without EDTA on Mueller - Hinton agar , because EDTA working to inhibit of metallo - β - lactamase . The results showed that there was no effect for EDTA on the diameter of inhibition zone in all isolates.All the 45 isolates were submitted to molecular detection of some ESBLs genes (bla CTX - M , bla CTX - M1) using PCR technique. The results showed that only 28 ( 62,2%) isolates were carried ) blaCTX - M or blaCTXM1) and 21 isolates were carried both genes (blaCTX - M and blaCTXM1).

تاثير المعززات الحيوية على الفئران المثبطة مناعيا بالبردنيزولون == Effect of Probiotics on Prednisolone Immunosuppressed Mice

Author name: زينب كاظم عبد
Supervisor name: امنة نصيف جاسم
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: اجريت الدراسة لمعرفة دور FOXP3 في الفئران المثبطة مناعيا بالردنيزولون اضافة الى دور المعززات الحيوية في الجهاز المناعي للفئران البيضاء. البردنيزولون هو عقار مثبط مناعيا يستخدم لعلاج حالات الحساسية وامراض المناعة الذاتية. المعززات الحيوية هي كائنات حية تستعمل لتعديل الجهاز المناعي في الانسان والفئران. FOXP3 هو دليل للخلية التائية المنظمة وله دور في الاستجابة المناعية.لذلك استخدمنا في التجربة 30 فار مختبري ابيض ذكر قسمت الى 6 مجاميع كل مجموعة تضم 5 حيوانات والتي جرعت يوميا لمدة 14 يوم : المجموعة 1 : جرعت فمويا ب0.4 مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من خميرة Sb لمدة 7 ايام ثم حقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone لمدة 7 ايام ومجموعه السيطرة جرعت بالخميرة فقط. المجموعه 2 : حقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone لمدة 7 ايام ثم جرعت فمويا ب0.4 مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من خميرة Sb لمدة 7 ايام مجموعه السيطرة حقنت بالدواء فقط.المجموعة 3 : جرعت فمويا ب0.4مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من خميرة Sb وحقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone معا في نفس الوقت لمدة 14 يوم ومجموعه السيطرة جرعت بالماء المقطر فقط. المجموعه 4 : جرعت فمويا ب0.6مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من بكتريا Ss لمدة 7 ايام ثم حقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone لمدة 7 ايام ومجموعه السيطرة جرعت بالبكتريا فقط. المجموعه 5 : حقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone لمدة 7 ايام ثم جرعت فمويا ب0.6مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من بكتريا Ss لمدة 7 ايام ومجموعه السيطرة حقنت بالدواء فقط.المجموعه 6 : جرعت فمويا ب0.6مل من بكتريا Ss والتي تحوي (108×1) خلية\مل وحقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone معا في نفس الوقت لمدة 14 يوم ومجموعه السيطرة جرعت بالماء المقطر فقط . اوضحت نتائج الدراسة الحالية ارتفاع معنوي في العدد الكلي لخلايا الدم البيضاء(10000.0 ± 275.4) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة(7000 ± 145.07), واظهر العد التفريقي لها انخفاض معنوي في الخلايا اللمفية(23.0 ± 1.51) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة ((30.0 ± 1.65 وارتفاع معنوي في الخلايا العدلة(75.00 ± 3.59)مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة (65.00 ± 2.31) وانخفاض معنوي في الخلايا الوحيدة(( 1.0 ± 0.06مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة ±0.06) 3.0) وليس لها تاثير على الخلايا العقدة والحمضة مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة , حصل انخفاض معنوي في عملية البلعمه(15.0 ± 0.82) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة(20.0 ± 1.4), وارتفاع غير معنوي في نسبة خلايا الدم الحمراء المضغوطة(40.0 ± 2.03) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة (36.0 ± 1.1), وزيادة غير معنوية في تركيز خضاب الدم(13.3 ± 0.76) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة ((11.6 ± (0.54 وكذلك زيادة غير معنوية في الوزن الكلي للحيوانات المعامله بالعقار فقط (31.0 ± 1.2) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة(30.0 ± 1.1) .واظهرت نتائج التجريع بالمعززات الحيوية (الخميرة والبكتريا) ارتفاع العدد الكلي لخلايا الدم البيضاء ,واظهر العد التفريقي لها ارتفاع الخلايا اللمفية والوحيدة وانخفاض الخلايا العدلة وليس لها تاثير على الخلايا العقدة والحمضة ,كذلك حصل ارتفاع في عملية البلعمة وارتفاع بسيط في نسبة خلايا الدم الحمراء المضغوطة . بينت نتائج الفحص النسيجي للطحال والعقدة اللمفاوية في المجموعه المعاملة بالعقار فقط حصول فقدان بالشكل العام للعضو وعدم ظهور الحويصلات اللمفاوية وحصول تنخر في الطحال .واوضحت نتائج الفحص النسيجي للطحال والعقدة اللمفاوية للمجموعه المعامله بالمعززات الحيوية احتفاظ العضو بالشكل العام وحصول ارتشاح للخلايا اللمفية وتحفيز الحويصلات المفاوية داخل العضو.كما اظهرت نتائج التجريع الفموي للمعززات الحيوية بعد وقبل ومع حقن الدواء حدوث حالة تحسسن بالمؤشرات المناعية وكذلك حدوث حالة تحسن وتنشيط مناعي للحويصلات اللمفاوية للطحال والعقدة اللمفاوية. واظهرت نتائج الفحص النسيجي الكيميائي المناعي للطحال والعقدة اللمفاوية للمجاميع المجرعه بالمعززات الحيوية والعقار ان لها نفس التعبير لل.FOXP3 اعتمادا على نتائج التجربة الحالية نستنتج ان المعززات الحيوية (الخميرة والبكتيريا) تمتلك قابلية على تعديل وتحسين تاثيرات العقار الجانبية على الاعظاء والمؤشرات المناعية وكذلك لها نفس التعبير لل.FOXP3 | Study have been done to see the role of FOXP3 in immunosuppressed mice using prednisolone in addition to the role of probiotic on immune system of albino mice. Prednisolone is immunosuppressive drug used to treat several allergic and autoimmune conditions. Probiotic is a live microorganisms used to modulate human and mice immune system.FOXP3 is Treg marker and have a role in immune system responses. Therefore we took 30 male albino mice were divided into 6 groups (five mice in each group) and treated daily for 14 days : Group 1 : was administrated orally with (0.4) ml S.boulardii for 7 days then injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 7 days, control : was administrated orally with (0.4) ml S.boulardii for 14 days. Group 2 : was injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 7 days then administrated orally with (0.4) ml S.boulardii for 7 days, control : was injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 14days. Group 3 : was administrated orally with (0.4) ml S.boulardii and injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 14 days, control : was administrated orally with normal saline only for 14 days.Group 4 : was administrated orally with (0.6) ml S.salivarius for 7 days then injected intraperitoneally with(0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 7 days, control : was administrated orally with (0.6) ml S.salivarius for 14 days. Group 5 : was injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 7 days then administrated orally with (0.6) ml S.salivarius for 7 days, control : was injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 14 days. Group 6 : was administrated orally with (0.6) ml S.salivarius for 7 days and injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 14 days, control : was administrated orally with normal saline only for 14 days. Mice treated with prednisolone drug showed a significant increase in total leukocytes count (10000±275.4)cells\1ml.blood as compared with negative control (7000±45.07)cells\1ml.blood, and differential count of leukocytes showed non - significant decrease in lymphocytes(23.0±1.51)cells\1ml.blood as compared with negative control (30.0 ±1.65)cells\1ml.blood, a significant increase in neutrophils(75.00±3.59) as compared with negative control(65.00 ± 2.31), a significant decrease in monocytes (1.0±0.06)cells\1ml.blood as compared with negative control(3.0 ± 0.06)cells\1ml.blood and have no effect on basophils and eosinphils, a significant decreased in phagocytosis(15.0 ± 0.82) as compared with negative control (20.0 ±1.4) , no significant increased Pcv (40.0±2.03) as compared with negative control (36.0±1.1) ,no significant increased Hb (13.3±0.76) as compared with negative control(11.6 ± 0.54) , and no significant increase in total body weight (31.0 ± 1.2)g as compared with negative control (30.0 ±1.1)g. The result of group treated with probiotic show a significant increase in total leukocytes, lymphocytes count, phagocytosis and Hb & Pcv as compared with control group administrated by normal saline only. The histological sections of spleen and lymph node which was treated with prednisolone drug revealed lose the architecture, no lymphoid follicles and necrosis. While the section of spleen and lymph node treated with probiotic showed preservation architecture which contain lymphoid follicles and hyperplasia of lymphocytes. The result of groups treated with probiotic pre, post, together with prednisolone drug showed normalized the immunological and histological parameters to the normal condition as compared with group treated with prednisolone only. The immunohistochemical section for spleen and lymph node show the same expression of FOXP3 in mice treated with probiotic (yeast & bacteria) and prednisolone drug. According to the results obtained from this study it is concluded that probiotic (yeast and bacteria) have immunomodulatory effect against prednisolone in immune system of male albino mice and have the same expression of FOXP3

استخلاص ، تنقية وتوصيف انزيم اللكنين بيروكسيديز المنتج من العزلة الفطرية المحلية Aspergillus terreus == Extraction, purification and characterization of lignin peroxidase enzyme produced from local fungal isolate Aspergillus terreus

Author name: سحر غازي عمران عبد الواحد التميمي
Supervisor name: ندى صباح رزوقي | غازي منعم عزيز
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تم عزل وتشخيص 18 عزلة فطرية محلية من 75 عينة روث خيول جمعت من نادي الجادرية ونادي العامرية للفروسية في بغداد خلال 8 اشهر للفترة من تموز 2013 الى اذار 2014 . سجلت العزلة A. niger اعلى نسبة ظهور بين العزلات واعلى تكرار % 80 %9.8, على التوالي تبعتها العزلة A.fumigatus (%9.8 , % 48) ثم العزلة A.terreus (% 8.2 , % 46.66) ، بينما سجلت العزلة Absidia cerymbifera اقل ظهور واقل تكرار(%3.28 , % 5.33) تبعتها العزلة Syncephalstrum racemosum ( % 2.67 و( %1.64 على التوالي. اختيرت العزلة A.terreus SG777 كافضل عزلة لانتاج هذه الانزيمات اذ سجلت اعلى فاعلية نوعية لانتاج الانزيمات المحللة للكنين ( لكنين بيروكسيديز 11.828 ، منغنيز بيروكسيديز1.131 واللاكيز 0.527) وحدة /ملغم . ثبتت الظروف المثلى لانتاج الانزيمات المحللة لللكنين من العزلة الفطرية A. terreus SG 777 باستخدام تخمرات الحالة الصلبة ( سيقان الموز كمادة اساس ، فترة الحضن 8 ايام ،حجم اللقاح1 × 105 بوغ / مل ، برقم هيدروجيني 4.5 وبدرجة حرارة 35م°). رسب انزيم اللكنين بيروكسيديز باستخدام كبريتات الامونيوم بنسبة اشباع %80 ثم ازيل الملح من الانزيم المنتج من عفن777 Aspergillus terreus SG باستخدام طريقة النضح الغشائيDialysis تجاه المحلول الدارئ (Tris buffer) ونقي جزئيا بواسطة كروماتوغرافيا التبادل الايونيIon exchange chromatography باستخدام المبادل الايوني DEAE - cellulose بعدد مرات للتنقية بلغ 5.4 مرة وبحصيلة انزيمية مقدارها %13.7اظهر الانزيم اعلى فغالية وثباتية عند الرقم الهيدروجيني 3.0 ,في حين اقصى فاعلية للانزيم ظهرت عند درجة حرارة 40 م° مع احتفاظ الانزيم بفاعليته عند درجات حرارة تراوحت بين 25) - 35 ) م°. درست قابلية انزيم اللكنين بيروكسيديز في ازالة عدة صبغات واظهرت النتائج اعلى نسبة ازالة ( 83.61 %) للانزيم تجاه صبغة الكونغو الحمراء باستخدام 65.51 وحدة / مل منه وبفترة حضن 4 ساعات وتبعتها صبغة المثيلين الزرقاء بنسية تحطيم %58.6 ثم صبغة المثيل الحمراء بنسبة ازالة بلغت % 49.9.بينما سجلت الصبغات الملاكايت الخضراء ، الالورا الحمراء والتارترازين % 24.87 ,% 28.8 , %26 على التوالي كادنى نسبة تحطيم بوساطة الانزيم قيد الدراسة . درست قابلية انزيم اللكنين بيروكسيديز في ازالة المركبات الحلقية المتعددة التي تم الكشف عنها وذلك لمقارنة فاعلية الانزيم مع نتائج المعالجات في مصفى الدورة والتي تضمنت (المعالجة الميكانيكية، المعالجة الكيميوفيزيائية والمعالجة البايولوجية ) . اظهرت النتائج ازالة 97.54 % للمركب Di benzo (a ,h) anthrancene باستخدام 65.51 وحدة / مل من الانزيم قيد الدراسة وبفترة حضن 4 ساعات وبدرجة حرارة 40 م° في حين بلغت نسبة الازالة بوساطة معالجات المصفى % 54.37 كما بلغت نسبة الازالة لكل من Floureneو anthrancene قد بلغت % 95.98 و% 83.51 على التوالي مقارنة بنسبة الازالة %84.51 , % 46.83 بوساطة معالجات المصفى . قيد انزيم اللكنين بيروكسيديز باستخدام %2 وزن / حجم من الجينات الصوديوم و200 ملي مولار و50 من مل كلوريد الكالسيوم . بينت النتائج ان % 99 من فاعلية الانزيم الحر تم تقييدها .اجريت عملية خزن انزيم اللكنين بيروكسيديز المقيد والحر لمدة اربعة اسابيع عند درجة حرارة 4 م° لمعرفة مدى احتفاظ الانزيم المقيد بفاعليته الانزيمية مقارنة بالانزيم الحر، اذ لوحظ ان الانزيم المقيد قد احتفظ % 88.29 من فاعليته الاصلية بينما احتفظ الانزيم الحر حوالي 66. 02 % من فاعليته الاصلية. استخدم انزيم اللكنين بيروكسيديز المقيد والحر في تحطيم صبغة المثيلين الزرقاء ، اذ اظهرت النتائج ان نسبة التحطيم بالانزيم المقيد بلغت حوالي % 40.1 لفترة حضن 4 ساعات بينما بلغت نسبة تحطيم الصبغة حوالي % 25.79 باستخدام الانزيم الحر وبنفس فترة الحضن .حطم انزيم اللكنين بيروكسيديز المقيد حوالي% 57.89 من صبغة الكونغو الحمراء عند استخدامه لاول مرة ، وانخفضت قابلية الانزيم المقيد على تحطيم الصبغة الى 16.11% عند استعماله للمرة الرابعة. | Eighteen local isolates were collected from seventy five horse manure samples taken from horses in the Equestrian Club in Jadriya and Al - Amrya / Baghdad that were investigated during the 8 months; the period isolation was started from July 2013 to march 2014. Aspergillus niger was the highest occurrence and frequency (80% and 9.8 %) respectively, followed by A . fumigatus (48 % and 9.8 %) and A. terreus (46.66 % and 8.2 % ) occurrence and frequency respectively , whereas Syncephalstrum racemosum (2.67 % and 1.64%) respectively . The isolate A. terreus had the higher specific activity of ligninolytic enzymes (lignin peroxidase 11.828, manganese peroxidase 1.13 and laccase 0.53) U/mg. The optimum conditions of ligninolytic enzymes produced from A. terreus SG777 were estimated using solid state fermentation : banana stalks as a substrate, period incubation 8 days, moisture level 1 : 5 w/v inoculum size 1x105 spores /ml, pH 4.5 and temperature 35 °C. Lignin peroxidase produced from A. terreus SG777 precipitated with 80% ammonium sulfate saturation then desalting by dialysis against Tris buffer solution and partially purified by ion exchange chromatography using DEAE - cellulose. The specific activity reached 56.67U/mg with purification fold was 5.4 times and 13.7% recovery. The optimum pH for activity and stability was 3. The maximum activity was observed at 40°C and the enzyme maintained the activity when it was incubated at 25 - 35˚C. Lignin peroxidase removal the dyes during 4hr. Congo red was decolorized to the maximum extent of 83.61% in 4 hr by 65. 51 U/ml of the pure lignin peroxidase, methylene blue decolorized 58.6% and methyl red azo dye was decolorized to the extent of 49.9% ,while Malachite green triarylmethane dye, allura red and tartarazine showed minimum extent decolorized 26, 28.8 and 24.87% respectively. Degradation of poly aromatic hydrocarbons when incubated with 65.51 U/ml lignin peroxidase at 40 °C for 4 hr compared with the Refinery treatment . Results showed (97.54%) removal efficiency of Di benzo (a ,h) anthrancene by lignin peroxidase, while only 54.37% was treated by Refinery treatment. Flourene and anthrancene degradation 95.98% and 83.51% respectively, while the flourene and anthrancene degradation treated by Refinery treatment only 84.51% and 46.83% respectively. Lignin peroxidase immobilization by 2% (w/v) sodium alginate and 200 mM of calcium chloride. Results showed that 99 % from free lignin peroxidase was immobilized. The stability of immobilized and free Lip enzyme was studied during four weeks; remaining activity for immobilized Lip was 88.29 % from its original activity 76 U/ml during four weeks while free Lip remaining activity was 66. 02 % from its original activity (76.04 U/ml). Methylene blue dye degraded about 40.1% by immobilized Lip during four hr compared with free Lip which has removal only 25.79% from dye concentration. The immobilization lignin peroxidase removal 57.89 % from congo red in first use and then the immobilized lignin peroxidase ability reduced to 16.11% dye removal after four uses.

استخلاص وتنقية انزيم اللايبيز من عفن Aspergillus niger 11414 (ATCC) واستخدامه في تحسين نوعية الدهن الحر == Extraction and purification of Lipase from Aspergillus niger 11414 ( ATCC) to improve the butter oil

Author name: سحر غازي عمران عبد الواحد التميمي
Supervisor name: سوسن ساجد محمد علي الجبوري | سعود رشيد العاني
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تضمنت هذه الد راسة عزل وتنقية انزيم اللايبيز من العزلة القياسية Aspergillus niger 11414 ( ATCC) ثم تطبيقه عمليا في مجال الصناعات الغذائية . • تم تــنمية العزلة وتنشـــيطها على وسط اجار البطاطا والدكستروز Potato dextrose Agar PDA . • تم التحري الاولي عن انتاج انزيم اللايبيز من العزلة A. niger 11414 بطريقة الاطباق باستخدام وسط ( Tween 80 ) ، وظهرت النتيجة موجبة بشكل هالة معتمة تحيط المستعمرة الفطـرية . استخدم وسط Tween 80 واضيف زيت الزيــــتون بـــدل الـ (Tween 80) الى وسط التحري وكانت النتيجة موجبة اذ ظهرت الهالة المعتمة حول المستعمرة لكن بمساحة اكبر مما سبق . • درست عدة معايير ( تركيز زيت الزيتون ، مدة التخمر ، الاس الهيدروجيني الابتدائي ، حجم اللقاح ، درجة الحرارة ) لايجاد الظروف المثلى لانتاج انزيم اللايـــبيز وكانــــت افضل الظروف لانتاج الانزيم هي ( تركيز زيت الزيتون 1 % ، مدة التخمر 168 ساعة ، واس هــــيدروجيني ابـــتدائي 6 وحجم لقاح 10 × 1 ( بوغ / مل ) ودرجة حرارة 30 م ، اذ سجلت عند هذه الظروف اعلى فعالية للانزيم المنتج . • اظهر الانزيم الخام بعد حضنه باسس هيدروجينية مختلفة لمدة 30 دقيقة ثباتا عند قيم الاسس الهيدروجينية بين ( 5.0 - 4.0 ) ، فيــــما اظهر الانـــــزيم الخام بعد حضنه في درجات حرارة مختلفة لمدة 60 دقيقة ثباتا حراريا عند ( 40 - 50 ) م , احتفظ الانزيم بكامل فعاليته.• استخدمـــت خطوات متسلسلة لغرض تنقية انزيم اللايبيز شـملت اولا التركيز بكبريتات الامونيوم وكان افضلها 30 % حين بلغت اعلى فعالية نوعية عندها بمقدار 3.8 وحدة / ملغم برويتن ، استخدمت خطوة الديلزة للتخلص من الاملاح . لقد اظهرت النتائج ارتفاع الفعالية والفعالية النوعية للانزيم اذ اصبحت 8.64 وحدة / ملغم بروتين وبلغ عدد مرات التنقية 8.73 . بعدها مرر الانزيم المنقى جزئيا على عمود هلام Sephadex G - 75 مرتين وجمعت الاجزاء التي اظهرت فعالية انزيمية ، مرر بعدها خلال عمود هلام Sephadex G - 100 ازدادت خلالها نقاوة الانزيم اذ ارتفــعت الفعالية النوعية الى 142.8 وحدة / ملغم بروتين وبلغ عدد مرات التنقية 143.19 وبحصيلة انزيمية 87.5 % .• درست بعض الخصائص المهمة للانزيم المنقى جزئيا اذ اظهر الانزيم المنقى جزئيا ثباتا تجاه قيم من الاس الهيدروجيني بين ( 5 - 6 ) ، وكان الاس الهيدروجيني الامثل 5.6 واحتفظ الانزيم المنقى جزئيا بـكامل فعاليته عند درجتي حرارة 30 و40 م على التوالي ولمدة 30 دقيقة وفقد 95 % من فعاليته عند درجة حرارة 80 م وللمدة نفسها ، اما درجة الحرارة المثلى فكانت 35 م . • استعمل اللايبيز المنقى جزئيا في تحسين نكهة الدهن الحر الذي تم معاملته بالانزيم ، اما السيطرة Control فتمثلت باضافة محلول دارىء فوسفات السترات ذي الاس الهيدروجيني 6.0 فقط الى الدهن الحر . اجري تقييس الفعالية على المعاملتين واظهرت النتائج ان هناك تغيرا محسوسا في الدهن المعامل بالانزيم في حين بقيت السيطرة دون تغيير . • استـخدم الدهن الحر المعامل بالانــــزيم والسيطرة Control في صنــع بعض انـــواع الحلويات ( البرمة ). عمل تقييم حسي للمنتوج من خلال 31 عينة للصــــفات ( اللون ، النسجة ، الرطوبة ، الرائحة ، النكهة " الطعم " ) . حللت النتائج احصائيا ووجد فرق معنوي ملحوظ بين الدهن الحر المعامل بالانزيم والسيطرة ، عدا صفة اللون فكان الفرق غير معنوي لكلتا المعاملتين . | In this study the extraction and purification of Lipase from isolated A. niger was studied. The ability of A. niger to produce Lipase was tested on Tween 80 media , indicate the positive result. Better result was obtained by added olive oil instead of Tween 80 media Several culture conditions were studied to determine the optimum conditions for Lipase producing , and the optimum conditions were : Concentration of Olive oil 1 % , period of fermentation 168 hour, initial pH 6 , inoculums size 1×10⁵ ( Spore / ml ) and the temperature 30 ℃ higher activity of produced enzyme was recorded in this conditions. The crude enzyme was stable after incubation at different pH (4 - 5 ) for 30 min., the enzyme was stable after incubation at different temperature (40 - 50) ℃ for 60 min., the enzyme retained all activity . Sequent steps used to purify Lipase. These included the concentration in ammonium sulfate the optimum saturation rate was 30 % , while the enzyme specific activity was 3.8 Unit / mg protein . Dialysis of enzyme resulted in increase of specific activity, which became 8.64 Unit / mg protein. Partially purified enzyme to the gel column sephadex G - 75 twice, the parts which show enzyme activity collected and added to the gel column sephadex G - 100, this increased the enzyme purification and a specific activity increased to 141.76 Unit / mg protein , while the number of purification was 193.19 and 82.46 % yield. Properties of the partially purified Lipase were investigated. Its showed stability against the values of pH (5.0 - 6.0) and the optimum pH was ( 5.6 ). The partially purified Lipase retained all activity 1n the temperature ( 30,40 )℃, for ( 30 ) minutes , and lost 95 % of its original activity at ( 80) ℃ , for the same time , while the optimum temperature was 35 The partially purified enzyme is used for improvement the flavor of butter oil which was treated with the enzyme , while the control was treated by addition phosphate citrate buffer solution ( pH = 6.0) only to the butter oil , the results showed that was sensible changes in the butter oil treated with enzyme while the control remain without any changes. The animal fat which treated with enzyme and the control was used in some kinds of sweets ( Al - Burma ) , making sensible evaluating for the product by (31) samples for characterization (color, texture, moisture, odor and flavor " tastes "). The results were analyzed statistically , and the noticed incorporeal comparison was found between the butter oil treated with enzyme and control , except the properties of color , it was non incorporeal comparison for both samples

الكشف الجزيئي والبكتريولوجي لبكتريا Group B Streptococci (GBS) المحلية في بعض النساء العراقيات الحوامل

Author name: زينب عدي حامد
Supervisor name: نهاية حكمت زكي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: • تم جمع مائة وتسعة وثمانين مسحة مهبلية من النساء الحوامل من مستشفى ابن البلدي ومختبر الصحة المركزي ومستشفى كمال السامرائي. حيث تم الحصول على ستة واربعين عزلة من بكتريا Streptococcus agalactiae خلال الفترة من شهر تشرين الاول 2013 الى شهر شباط 2014.• كانت الفئة العمرية للنساء المصابة ببكتريا S. agalactiae تتراوح بين (35 - 37) سنة حيث كانت نسبة الاصابة تصل الى 76.08%.• تم تشخيص جميع العينات مبدئيا بواسطة الطرق المظهرية من خلال الاوساط الزرعية blood agar وchromogenic agar واجري تاكيد التشخيص بواسطة VITEK SYSTEM 2 Identification وكذلك تم تشخيصها بالطريقة الجزيئية PCR للكشف عن جين 16S rRNA.• اجريت دراسة تحليلية مقارنة بين الطرق الثلاثة المظهرية والطريقة الجزيئية المستخدمة في الكشف عن البكتريا، وكانت طريقة التفاعل التضاعفي) (PCR افضل وسيلة للكشف عن S. agalactiae حيث تم تشخيص 46 عينة بواسطته بينما تم الكشف عن 30، 36، 37 عينة من قبل blood agar وchromogenic agar وsystem 2 VITEK على التوالي.• اجري فحص VITEK Antibiotic Sensitivity Test للكشف عن حساسية البكتريا للمضادات الحيوية المختلفة لجميع العزلات المشخصة، وكان اعلى معدل انتشار مقاومة لمضاد tetracycline بنسبة 65.2% وتليها 58.6% و45.6% لمضاداتerythromycin وclindamycin على التوالي.• تم فحص ثلاثة من الجينات التي تشفر لعوامل الفوعمة (sip، scpB، cfb) في جميع العزلات المشخصة، وكانت نسبة 97.8% من اجمالي العزلات تحتوي على الجينات الثلاثة المذكورة.• تم الكشف عن خمسة جينات لمقاومة مضادات Macrolide وكان معدل المقاومة 69.5% من اجمالي العزلات.• تم التحري عن جينات مقاومة لمثيلة الرايبوسوم (ermB، ermA\TR، ermC) في جميع العزلات المشخصة وكان جين ermB الاكثر وفرة بين العزلات بنسبة 64.04% ثم يليه جين ermA\TR بنسبة 23.09% وعلى الرغم من تغيير الظروف المستخدمة في تقنية التفاعل السلسلي للبوليميريز PCR)) لكن هذه الدراسة فشلت في تحديد جين مثيلة الرايبوسوم (ermC) • بينت نتائج التحري عن اثنين من الجينات المشفرة لنظام الدفق efflux pumps وهي (mefA، mreA) ان معدل انتشار الجينين بين العزلات هو 8.69% و69.5% على التوالي.• اظهرت نتائج الدراسة ان 14(% 30.4) من اجمالي العزلات لا يمتلك اي جين من جينات مقاومة الاريثرومايسين الخمسة.• بينت نتائج الدراسة ان عزلة واحدة من بكتريا S. agalactiae رقم) (V12 حاملة لاربعة انواع من جينات مقاومة الاريثرومايسين عدا الجين (ermC). | • One hundred and eighty nine vaginal swabs were collected from Ibn - Albalady Hospital, Central health Laboratory and Kammal Alsamaraie Hospital. Forty - six Streptococcus agalactiae isolates were obtained during October 2013 to February 2014.• The isolates were initially identified phenotypically by blood agar culture media and chromogenic culture media and further identification was performed by Vitek and by molecular methods by 16srRNA - based PCR. • A comparative analysis were performed between three phenotypic detection methods and molecular method by PCR were best tool for S. agalactiae detection which 46 isolates were identified while 37, 36, 30 isolates were detected by Vitek system, chromogenic agar and blood agar respectively.• Vitek Antibiotic susceptibility for different antibiotics were performed to all detected isolates, the highest prevalence of resistance was 65.2% toward tetracycline and followed by 58.6% and 45.6% for erythromycin and clindamycin respectively.• Three virulence - encoding genes (sip, scpB and cfb) were screened in all detected isolates, 97.8% of total isolates were contain the three mentioned genes.• Five macrolide resistance genes were screened and the resistant rate in total isolates was 69.5%.• Three ribosome methylation genes (ermB, ermA/TR, ermC) were screened in all examined isolates; the most prevalence gene was ermB with 63.04%, whereas 23.9% was the prevalence of ermA\TR gene and ermC not detected in any of examined isolates.• Two efflux pump genes (mefA and mreA) were screened and the prevalence rate was 8.69% and 69.5% respectively

تاثير بعض المواد الكيميائية في انتاجية وفعالية ذيفان الفا - هيمولايسين المنتج من المكورات العنقودية الذهبية المعزولة من مصادر سريرية مختلفة == Effect of some chemical materials on productivity and activity of ? - hemolysin which produced from Staphylococcus aureus Isolated from clinical samples

Author name: زينب فرحان علي الزهيري
Supervisor name: خولة جبر خلف
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تضمنت الدراسة عزل بكتيريا المكورات العنقودية من بعض مستشفيات بغداد، والتي شملت : مستشفى بغداد التعليمي، ومستشفى ابن البلدي، والمختبرات التعليمية،و مستشفى حماية الطفولة التعليمي، ومستشفى الكندي حيث امكن الحصول على (110) عزلة، توزعت بواقع (15) عزلة من عينات التهاب المجاري البولية، و(20) عزلة من الحروق، و(46) عزلة من الجروح ،و (17)عزلة من عينات الدم، و(12) عزلة من مسحات الاذن والفم والعيون.شخصت الدراسة (77) عزلة بكتيرية على انها مكورات عنقودية ذهبية من خلال اعطائها نتائج ايجابية في فحص الكاتليز وفحص انزيم مخثر البلازما ، وبقية الفحوص البايوكيمياوية مثل تخمير المانيتول في وسط ملحي تحت ظروف هوائية وقابلية العزلات على تحلل الدم وكانت عزلات Staphylococcus aureus قد توزعت على النحو الاتي (9) عزلات من عينات الدم، و(36) عزلة من الجروح، و(13) عزلة من الحروق، و(9) عزلات من مسحات الاذن والفم والعيون، و(10) عزلات من التهابات المجاري البولية.وقد اظهرت العزلات قدرتها على تكوين الغشاء الحيوي(Biofilm) اذا استطاعت (35) عزلة (45.45)% من اصل 77 عزلة ان تكون الغشاء الحيوي فيما لم تستطع (42) عزلة (54.54)% المتبقية من تكوين الغشاء الحيوي.اظهرت النتائج ان نسبة العزلات المنتجة لذيفان الفا - هيمولايسين كانت (32) عزلة (41.55)% اما العزلات غير المنتجة للذيفان ، فقد كانت (45)عزلة.اختبرت حساسية العزلات تجاه المضادات الحيوية، وقد كانت نسبة مقاومة العزلات تجاه مضاد Oxacillin هي 100%، اما مضاد Methicillin وCloxacillin ، فقد كانت نسبة المقاومة 98.7 % و97.4 % على التوالي. وكانت نسبة مقاومة مضاد Cephalexin وCefixim هي 93.5 % و76.6 % على التوالي، اما مضاد Rifampicin وVancomcin فقد كانت نسبة مقاومتها 67.5 % فيما كانت نسبة مقاومة Azithromycin وLevofloxacin وBacitracin هي 49.3%، 70.1 %، 93.5 % على التوالي.اختيرت العزلة الكفؤة رقم (19)، وحدد التركيز المثبط الادنىminimum inhibitory concentration (MIC) لمضاد المثيسلين والذي كان تركيزه (32) مايكروغرام / مل.اختبر تاثير مادة CD - Cholesterol، وCholesterol ، وCD ، وMethicillin ، وPbs في فعالية ذيفان الهيمولايسين وكان معيار التحلل Hemolytic Titer هو : 8، 32.768، 65.536، 140.737.488.355.32، E+254.961408 على التوالي.واختبر تاثير المواد نفسها في انتاجية ذيفان الهيمولايسين وكانت النتائج على الاتي : 67.108.864، 549.755.813.888، 274.877.906.944، 576.460.752.303.360، 3.96140812E+25 على التوالي.وقد نقي الذيفان جزئيا بطريقة الترسيب باستخدام كبريتات الامونيوم، واختبرت فعالية الذيفان في حل كريات الدم الحمراء بطريقة الانتشار في الحفر.واختبرت التجربة فعالية الذيفان المنقى جزئيا داخل الجسم الحي في قرنية عين الارانب المختبرية اذ تكونت مناطق تاكل في القرنية بقطر 7.70 ملم بعد 8 ساعات من الحقن وثبطت فعالية هذا الذيفان داخل الجسم الحي باستخدام مادة CD - Cholesterol مع الذيفان حيث اصبح قطر تاكل القرنية 3.95 ملم.استخدمت مادة CD - Cholesterol بوصفها مادة علاجية من خلال استخدامها على هياة قطرات اضيفت الى العين المصابة بالذيفان وادت الى تناقص منطقة التاكل في القرنية من 7.70 الى 3.95.ويستنتج من الدراسة الحالية : اهمية استخدام CD - Cholesterol في تثبيط ذيفان الفا - هيمولايسين في داخل وخارج الجسم الحي وما لهذه المادة من اهمية في المجالات التطبيقية وفي الوقاية من تاثيرات الذيفان وقدرته التحللية للخلايا | In this study, one hundred and ten clinical samples were obtained from hospitals patient at many hospitals of Baghdad governorate : Baghdad teaching hospital, , Ibn - EL Balady hospital, educational laboratories, Protect child teaching hospital, Al - kendi hospital . The types and the numbers of clinical samples were distributed as (15) samples from urinary tract infect , (20) samples from burns infection , (46) samples from wounds, (17) samples from blood, (12) samples from ear, mouth and eyes infections . In this study (77) isolates were diagnosed as cocci cluster gold by giving positive result for catalase test and coagulase enzyme test and the other biochemical tests such as fermentation of mannitol under aerobic conditions and the ability of some isolates to hemolysis blood . S. aureus isolates distributed as follows : (9) isolates from blood samples, (36) isolated from wounds, (13) isolates from burns, (9) isolates from ear, mouth and eyes infection, (10) isolates from urinary tract infections.The isolates showed the ability to form biofilm (35) isolates (45.45%) out of 77 isolates and the other isolates could not form biofilm were : (42) isolation (54.54%),. The results showed that the proportion of isolates producing α - hemolysin was (32) (41.55%) isolates were either non - producing toxin : (45) isolates. The isolates were tested sensitivity to antibiotics and showed proportion of resistant toward Oxacillin which was 100% , Methicillin and Cloxacillin resistance ratio was 98.7% and 97.4%, respectively.The proportion of resistant to Cephalexin and Cefixim were 93.5% and 76.6%, respectively, while the Rifampicin and Vancomcin resistance ratio were 67.5%, while the proportion of resistant to Azithromycin and Levofloxacin and Bacitracin were 49.3%, 70.1%, 93.5%, respectively. The chosen isolate was ( number 19), select the minimum inhibitory concentration (MIC) of methicillin which were (32) micrograms \ ml. Tested the effect of CD - Cholesterol ,Cholesterol ,CD ,Methicillin and Pbs on the activity of toxin α - hemolysin and the hemolytic Titer is : 8 ( line A, well 3), 32.768 (line B, well 4), 65.536 (line B, well 5), 140.737.488.355.32 (line D, well 12) , 4.961408E + 25 (line G, well 12) respectively. It also has been testing the effect of the same material on the productivity of toxin α - hemolysin and the results were respectively : 67.108.864 (line : C well : 3), 549.755.813.888 (line : D ,well : 4), 274.877.906.944 (line : D, well : 3) , 576.460.752.303.360 (line : E, well : 12) , 3.96140812E + 25(line : H, well : 12) respectively.The toxin α - hemolysin was purified by using ammonium sulfate precipitation, and tested the effectiveness of the toxin on the red blood cells by using wells diffusion method . purified toxin was injected inside the living body in the cornea of rabbits eye, and the erosion of cornea where formed with diameter : 7.70 mm after 8 hours of injection but the other eye that injected with CD - Cholesterol that mix with toxin where the erosion diameter was3.95mm.CD - Cholesterol was used in treatment as a drops which added to the affected eye and led to a decrease in corneal erosion area from7.70 mm to3.95.mm We follows from the present study : The importance of using CD - Cholesterol in the inhibition of alpha - toxin inside and outside the living body and the importance of this study in applied medical fields and in the prevention the effects of the toxin on the cells.

انتاج وتوصيف Protease من بكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة من بعض الحالات السريرية وعلاقته ببعض المضادات الحيوية == Production and Characterization of Protease from Pseudomonas aeruginosa Isolated from Some Clinical Cases and its Relation with some Antibiotic Agent

Author name: رنا مجاهد عبد الله الشويخ
Supervisor name: سمير فتح الله سمعان | سعود رشيد العاني
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت (170) عينة من حالات مرضية مختلفة التي تضمنت (35) مسحة من الجروح و(47) مسحة من الحروق و(25) مسحة من حالات التهابات الاذن الوسطى فضلا عن عينات الادرار التي تضمنت (63) عينة وجمعت العينات من مستشفى الكاظمية التعليمي للمدة من 1 - 5 - 2005 ولغاية 1 - 8 - 2005 .  تم تشخيص (50) عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa اذ زرعت على اوساط اغنائية وتفريقية لغرض العزل الاولي ثم اخضعت المزارع البكتيرية للفحوصات المجهرية والبايوكيميائية لغرض تشخيصها ، ثم استخدمت عدة الفحصapi20E للتشخيص النهائي لهذه العزلات ، اذ تضمنت (8)عزلات من بكتريا Pseudomonas aeruginosa (16%) من حالات التهاب الجروح ، (16) عزلة (32%) من التهابات الحروق ، (20) عزلة (40%) من حالات التهاب المجاري البولية و(6) عزلات (12%) من حالات التهاب الاذن الوسطى .  اختبرت حساسية بكتريا Pseudomonas aeruginosa ضد (20) مضادا حيويا وقد اظهرت العزلات تباينا واضحا وبنسب مختلفة في مقاومتها للمضادات الحيوية . اذ اظهرت بكتريا Pseudomonas aeruginosa نسبة المقاومة(100%) تجاه مضادات الامبسلين ، الاموكسسلين ، الاموكسسلين / حامض كلافيولونك ،الكلوكساسلين والسيفازولين . بينما بلغت نسبة المقاومة لمضادات السيفاكسيم ، الكاربنسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم (98%) ، (84%) ، (80%) و(78%) على التوالي. وبلغت نسبة المقاومة لمضادات الجنتاميسين ، التوبرامايسين ، الببراسيلين ، النورفلوكساسين ، الاميكاسين والسبروفلوكساسين (52%)، (26%) ، (24%) ،(14%) ،(6%) و(4% )على التوالي . في حين اظهرت جميع العزلات لبكتريا Pseudomonas aeruginosa حساسية عالية (100%) تجاه مضادات الازترونام ، امبينيم والسيفابيم البيفلوكساسين والافلوكساسين .  قدرت التراكيز المثبطة الدنيا (MICs ) للمضادات الحيوية وكانت اعلى نسبة مقاومة لمضادات الاموكسسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم . اما نسبة المقاومة لمضادات الامينوكلايكوسايد فكانت تتراوح (4 - 128) مايكرو غرام / مل للتوبرامايسين ، (4 - 256) مايكرو غرام / مل للجنتاميسين اما لمضاد الاميكاسين فكانت (4 - 128) مايكرو غرام / مل. في حين اظهرت قيم MIC حساسية عالية (100%) لمضادي السبروفلوكساسين والسيفابيم.  اظهرت نتائج خلط مضادات السبروفلوكساسين مع كل من الجنتاميسين والسيفتازديم والببراسيلين نتائج مهمة في تخفيف التراكيز المثبطة الدنيا لكلا المضادين المستخدمين لوحدهما ضد هذه البكتريا . كذلك اظهرت نتائج خلط مضادي التوبرامايسين مع السيفتازديم فعالية عالية عند خلطهما معا واستعمالهما ضد بكتريا Pseudomonas aeruginosa . اظهرت (86%) من عزلات بكتريا Pseudomonas aeruginosa قابليتها على انتاج انزيم البروتييز . اظهرت النتائج تاثر انزيم البروتييز الخام ببعض المضادات الحيوية التي ادت الى انخفاض في فعالية الانزيم عند زيادة تركيز هذه المضادات .  كانت الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتييز عند استخدام وسط لوريا عند رقم هيدروجيني(8) ولمدة(48) ساعة من الحضن بدرجة حرارة(35) م º . نقي انزيم البروتييز من العزلة Pseudomonas aeruginosa PsaW2 باستخدام كروماتوغرافيا التبادل الايوني DEAE - celluloseوكروماتوغرافيا الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100. قدر الوزن الجزيئي للانزيم المنقى بطريقة الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100 وكان (21379 ) دالتون ، وبلغت درجة الحرارة المثلى لفعالية البروتييز (35) م º والرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية وثبات الانزيم كانت (8) . اوضحت نتائج تاثير بعض المثبطات والعوامل المختزلة والكلابية في فعالية الانزيم ، ان فعالية الانزيم قد ازدادت عند معاملته بايونات Ca++ وZn ++ مما يدل انها تلعب دورا في تحفيز وثبات الانزيم ، ولم تثبط فاعلية الانزيم بوجود العوامل المختزلة مثل السستين ، بينما تثبط فعالية الانزيم بوجود العوامل الكلابية EDTA .  اظهر انزيم البروتييز المنقى من بكتريا Pseudomonas aeruginosa فعالية عالية عند خلطه مع مضادي الفانكومايسين والسيفازولين في علاج التهابات العيون في الارانب والمتسبب عنها بكتريا Staphylococcus aureus . |  One - hundred and seventy swab samples were collected from different cases including (35) wound and (47) burn infection , (25) otitis media and (63) samples from urinary tract infections from Al - Kadhymia Teaching Hospital in Baghdad city . The study period was from 1 - 5 - 2005 to 1 - 8 - 2005 .  Fifty isolates of Pseudomonas aeruginosa were identified using different microscopical , cultural characteristics and biochemical tests . Final identification of bacteria were performed by using api20E system. The isolates were 8(16%) from burn infections , 20(40%) isolates from urinary tract infections , 16(32%) isolates from burn infections and 6(12%) isolates from otitis media . The sensitivity of Pseudomonas aeruginosa isolates was been tested against (20) antibiotics showed isolates version resistance with different percentage against antibiotics .Pseudomonas aeruginosa exhibited (100%) resistance to Ampicillin , Amoxycillin , Amoxycillin / clavulanic acid, cloxacillin and cefazolin .While percentages of resistance to cefixime , carbencillin, cefotaxime and ceftazidime were (98%) ,(84%) ,(80%) and ( 78%) respectively .Resistance percentages to Gentamicin ,Tobramycin , Piperacillin , Norfloxacillin , Amikacin and Ciprofloxacine were (52%),(26%),(24%),(16%),(14%)and(4%) respectively. All isolates of Pseudomonas aeruginosa were highly sensitive (100%) to Aztronam , imipenem , cefepime , P - ofloxacin and ofloxacin .  Minimum inhibitory concentrations of Amoxycillin , cefotaxime , ceftazidime and piperacillin showed higher percentage of resistance . While resistance to aminoglycoside antibiotics including Tobramycin was (4 - 128) μ g / ml , Gentamicin was (4 - 256) μ g / ml and Amikacin was (4 - 128) μ g / ml . On the other hand , all bacterial isolates were susceptible (100%) to Ciprofloxacine and Cefepime .  Combinations of Ciprofloxacine with Gentamicin , ceftazidime and piperacillin gave interesting results against the local bacterial isolates in reducing their MIC values . Tobramycin and ceftazidime gave an obvious decrease in MIC values after combination of these drugs and used against Pseudomonas aeruginosa . A (86%) of the isolates of Pseudomonas aeruginosa have ability to produce protease enzyme . Enzyme activity was affected by some antibiotics . This activity was reduced with increasing the concentrations of these antibiotics . The optimum conditions for protease production were in LB medium with a pH (8) after (48) hrs of incubation at (35) C .  Purification of the protease was done using ion exchange chromatography DEAE - cellulose and gel filtration with sephadex G - 100 .  Molecular weight of the purified protease was measured by sephadex G - 100 and it was found to be around (21379 ) Dalton . The optimum temperature of enzyme activity was (35) C . However , the pH (8) was for activity and stability of this enzyme .  Zn++ and Ca++ ions may play a role in the enhancement and stability of the enzyme . Enzyme activity was not inhibited in the presence of reducing agent such as Cysteine , but it was inhibited in the presence of EDTA .  Pseudomonas aeruginosa purified enzyme shows a high activity when combined with Vancomycin and cefazoline and used for the treatment of the eye infection in rabbits caused by Staphylococcus aureus .

دراسة تاثير بعض الاحماض الدهنية على فعالية انزيمات المكورات العنقودية الذهبية المعزولة من حالات الحروق == Study the effect of some fatty acids on the enzymes activity of Staphylococcus aureus isolated from burns

Author name: رنا عبد الكريم رشيد
Supervisor name: سوسن حسن عثمان كورجي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت 157 عينة مسحة من المرضى المصابين بالحروق من ثلاث مستشفيات في مدينة بغداد للفترة من شهر تشرين الثاني 2006 ولغاية اذار 2007 . زرعت هذه المسحات على اوساط مناسبة لعزل البكتريا . • اظهرت النتائج ايجابية 144 مسحة لتلوثها بالبكتريا ، وبنسبة 91.7% ، فيما كانت 13 مسحة منها سالبة ، وبنسبة 8.3% .• عزلت 50 عزلة من بكتريا المكورات العنقودية الذهبية Staphylococcus aureus بنسبة عزل 31.8% ، وشخصت باستخدام الاختبارات المظهرية والكيميائية الحياتية الخاصة بها .• قاومت جميع العزلات (50 عزلة) مضاد الاوكساسلين ، فضلا عن قدرتها على النمو في وسط اكار الاوكساسلين (Oxacillin agar) ، وبذلك كانت مقاومة للمثسلين (Methicillin resistant Staphylococcus aureus) (MRSA) وبنسبة 100% .• تم التحري عن حساسية العزلات تجاه 21 مضادا حيويا ضمن مجاميع مختلفة ، اذ اظهرت النتائج مقاومة عالية للعزلات البكتيرية لمعظم المضادات الحيوية قيد الدراسة ، في حين كان المضاد الجرثومي الفانكومايسين اكثر المضادات فاعلية ضد بكتريا المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثسلين ، اذ لم تظهر اي عزلة من العزلات مقاومة له ، وكانت العزلتان R120 وR148 الاكثر مقاومة ، اذ قاومتا عشرين مضادا ، فيما كانتا حساستين للفانكومايسين فقط .• اوضح اختبار Minimum inhibitory concentration (MIC) للاحماض الدهنية ضد العزلتين R120 وR148 ان حامض اللاورك هو الاكفا في تثبيط نمو البكتريا ، اذ بلغت قيمة MIC 0.4 ملغم / مل ، في حين بلغت قيم MIC لكل من حامض المايرستك واللينوليك والبالمتك والاوليك ( 1.6، 1.6، 6.4، 25.6) ملغم/ مل على التوالي .• اختبرت قابلية العزلتين R120 وR148 على انتاج انزيم البروتييز باستخدام وسط غراء كولومبيا الحاوي على الحليب الفرز ، واعتمادا على ظهور هالة شفافة حول المستعمرات كانت نسبة التحلل للعزلتين المدروستين 2.5 ، 2.7 وعلى التوالي . ولذا فقد انتخبت العزلة R148 لاختبار تاثير الحامض الدهني في فعالية انزيم البروتييز فيها . • حضرت تراكيز متعددة من حامض اللاورك (0.0125 ، 0.025 ، 0.05 ، 0.1 ، 0.2 ، 0.4 ، 0.8 ، 1.6) ملغم / مل ، واختبر تاثيرها على فعالية انزيم البروتييز ولوحظ انخفاض الفعالية عند التراكيز المدروسة ،اذ بلغت الفعالية معدل 2.36 وحدة / مللتر وبنسبة مئوية تبلغ 79.73% عند تركيز 0.0125 ملغم/ مل من الحامض لتنخفض الى معدل 0.69 وحدة/ مللتر ، ونسبة 23.31% عند تركيز 1.6 ملغم / مل من الحامض .• اختبر تاثير التراكيز المختلفة من حامض اللاورك على وقت تكون الخثرة بوساطة انزيم مخثر البلازما (Coagulase) ، اذ تاخر تكون الخثرة الى الساعة الثانية من اجراء الاختبار عند التركيز 0.05 ملغم/ مل ، في حين كان التاثير الاكبر عند التراكيز ( 0.4، 0.8 ، 1.6) ملغم / مل ، اذ تكونت الخثرة بعد مرور 18 ساعة من اجراء التجربة .• تم تقييم تاثير التراكيز المختلفة لحامض اللاورك على فعالية انزيم الهيمولايسين ، اذ لوحظ انخفاض الفعالية عند التراكيز المدروسة ، فعند تركيز 0.0125 ملغم/ مل من الحامض وتخفيف 1/2 بلغت النسبة المئوية للفعالية 52.9% ، لتنخفض هذه النسبة عند تركيز 0.2 ملغم/مل من الحامض ، وتخفيف 1/2 الى 5.9%. | A total of 157 samples of burn swabs were collected from three hospitals in Baghdad during November 2006 to March 2007. Culturing of the samples was done on suitable media to isolate the bacteria.• The results showed that 144 swabs were positive for bacterial contamination (91.7%), while 13 swabs were negative ( 8.3%).• Fifty isolates of Staphylococcus aureus were isolated (31.8 %), the identification was accomplished using morphological and biochemical tests.• All isolates (50 isolates) were resistant to oxacillin and could grow on oxacillin agar , thus they were resistant to methicillin (Methicillin resistant Staphylococcus aureus ) (MRSA) at 100%.• The sensitivity of the isolates against (21) antibiotics was investigated using different groups of antibiotics , the results showed high resistance of isolates to many antibiotics which have been used in the study , while they were sensitive to vancomycin and the two selected isolates - R120, R148 were sensitive to vancomycin only and resistant to all 20 antibiotics .• The minimum inhibitory concentration (MIC) test for fatty acids to the two isolates R120, R148 showed that lauric acid was the best fatty acid in inhibiting bacterial growth when the MIC reached 0.4 mg/ ml while the other fatty acids (Myristic, Linoleic, Palmitic and Oleic ) MIC reached to (1.6, 1.6, 6.4, 25.6) mg/ml respectively .• The ability of the two isolates (R120, R148 ) to produce protease was detected on solid media ( Skim milk Columbia agar) and depending on the development of clear zone the lysis ratio was 2.5 , 2.7 respectively , therefore the R148 isolate was chosen to detect the fatty acid effect on its protease activity .• Multiple concentrations of lauric acid have been prepared (0.0125, 0.025 , 0.05 , 0.1 , 0.2 , 0.4 , 0.8 , 1.6 ) mg/ml and tested for its effect on protease activity . The obtained results showed that the activity decreased at the concentrations studied. The activity reached an average of 2.36 unit/ ml and a percentage of 79.73% at the concentration 0.0125 mg/ ml of the acid , and then reached an average of 0.69 unit/ ml and a percentage of 23.31% at the concentration 1.6 mg/ ml of the acid.• The effect of different concentrations of lauric acid on the time of clot formation by coagulase have been tested . The clot was formed at the 2nd hour of the test at the concentration 0.05 mg/ml while the highest effect was at the concentrations (0.4 ,0.8 ,1.6) mg/ml as the clot was formed after 18 hours from the beginning of the test .• The effect of the different concentrations of lauric acid on the activity of haemolysin was evaluated . A decrease in activity at the concentrations studied was noticed. The activity reached to 52.9% at the concentration 0.0125 mg /ml of acid and the dilution 1/2 then the activity decreased to 5.9% at the concentration 0.2 mg/ml and dilution 1/2
1 ... 74 75 76 77 78 ... 129