Show: 25 50 75 100 Results

Search results: 25 out of 1,997

تاثير المعززات الحيوية على الفئران المثبطة مناعيا بالبردنيزولون == Effect of Probiotics on Prednisolone Immunosuppressed Mice

Author name: زينب كاظم عبد
Supervisor name: امنة نصيف جاسم
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: اجريت الدراسة لمعرفة دور FOXP3 في الفئران المثبطة مناعيا بالردنيزولون اضافة الى دور المعززات الحيوية في الجهاز المناعي للفئران البيضاء. البردنيزولون هو عقار مثبط مناعيا يستخدم لعلاج حالات الحساسية وامراض المناعة الذاتية. المعززات الحيوية هي كائنات حية تستعمل لتعديل الجهاز المناعي في الانسان والفئران. FOXP3 هو دليل للخلية التائية المنظمة وله دور في الاستجابة المناعية.لذلك استخدمنا في التجربة 30 فار مختبري ابيض ذكر قسمت الى 6 مجاميع كل مجموعة تضم 5 حيوانات والتي جرعت يوميا لمدة 14 يوم : المجموعة 1 : جرعت فمويا ب0.4 مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من خميرة Sb لمدة 7 ايام ثم حقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone لمدة 7 ايام ومجموعه السيطرة جرعت بالخميرة فقط. المجموعه 2 : حقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone لمدة 7 ايام ثم جرعت فمويا ب0.4 مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من خميرة Sb لمدة 7 ايام مجموعه السيطرة حقنت بالدواء فقط.المجموعة 3 : جرعت فمويا ب0.4مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من خميرة Sb وحقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone معا في نفس الوقت لمدة 14 يوم ومجموعه السيطرة جرعت بالماء المقطر فقط. المجموعه 4 : جرعت فمويا ب0.6مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من بكتريا Ss لمدة 7 ايام ثم حقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone لمدة 7 ايام ومجموعه السيطرة جرعت بالبكتريا فقط. المجموعه 5 : حقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone لمدة 7 ايام ثم جرعت فمويا ب0.6مل والتي تحوي (108×1) خلية\مل من بكتريا Ss لمدة 7 ايام ومجموعه السيطرة حقنت بالدواء فقط.المجموعه 6 : جرعت فمويا ب0.6مل من بكتريا Ss والتي تحوي (108×1) خلية\مل وحقنت تحت البريتون ب0.1 مل من 2.5غم\كغم عقار prednisolone معا في نفس الوقت لمدة 14 يوم ومجموعه السيطرة جرعت بالماء المقطر فقط . اوضحت نتائج الدراسة الحالية ارتفاع معنوي في العدد الكلي لخلايا الدم البيضاء(10000.0 ± 275.4) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة(7000 ± 145.07), واظهر العد التفريقي لها انخفاض معنوي في الخلايا اللمفية(23.0 ± 1.51) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة ((30.0 ± 1.65 وارتفاع معنوي في الخلايا العدلة(75.00 ± 3.59)مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة (65.00 ± 2.31) وانخفاض معنوي في الخلايا الوحيدة(( 1.0 ± 0.06مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة ±0.06) 3.0) وليس لها تاثير على الخلايا العقدة والحمضة مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة , حصل انخفاض معنوي في عملية البلعمه(15.0 ± 0.82) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة(20.0 ± 1.4), وارتفاع غير معنوي في نسبة خلايا الدم الحمراء المضغوطة(40.0 ± 2.03) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة (36.0 ± 1.1), وزيادة غير معنوية في تركيز خضاب الدم(13.3 ± 0.76) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة ((11.6 ± (0.54 وكذلك زيادة غير معنوية في الوزن الكلي للحيوانات المعامله بالعقار فقط (31.0 ± 1.2) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة(30.0 ± 1.1) .واظهرت نتائج التجريع بالمعززات الحيوية (الخميرة والبكتريا) ارتفاع العدد الكلي لخلايا الدم البيضاء ,واظهر العد التفريقي لها ارتفاع الخلايا اللمفية والوحيدة وانخفاض الخلايا العدلة وليس لها تاثير على الخلايا العقدة والحمضة ,كذلك حصل ارتفاع في عملية البلعمة وارتفاع بسيط في نسبة خلايا الدم الحمراء المضغوطة . بينت نتائج الفحص النسيجي للطحال والعقدة اللمفاوية في المجموعه المعاملة بالعقار فقط حصول فقدان بالشكل العام للعضو وعدم ظهور الحويصلات اللمفاوية وحصول تنخر في الطحال .واوضحت نتائج الفحص النسيجي للطحال والعقدة اللمفاوية للمجموعه المعامله بالمعززات الحيوية احتفاظ العضو بالشكل العام وحصول ارتشاح للخلايا اللمفية وتحفيز الحويصلات المفاوية داخل العضو.كما اظهرت نتائج التجريع الفموي للمعززات الحيوية بعد وقبل ومع حقن الدواء حدوث حالة تحسسن بالمؤشرات المناعية وكذلك حدوث حالة تحسن وتنشيط مناعي للحويصلات اللمفاوية للطحال والعقدة اللمفاوية. واظهرت نتائج الفحص النسيجي الكيميائي المناعي للطحال والعقدة اللمفاوية للمجاميع المجرعه بالمعززات الحيوية والعقار ان لها نفس التعبير لل.FOXP3 اعتمادا على نتائج التجربة الحالية نستنتج ان المعززات الحيوية (الخميرة والبكتيريا) تمتلك قابلية على تعديل وتحسين تاثيرات العقار الجانبية على الاعظاء والمؤشرات المناعية وكذلك لها نفس التعبير لل.FOXP3 | Study have been done to see the role of FOXP3 in immunosuppressed mice using prednisolone in addition to the role of probiotic on immune system of albino mice. Prednisolone is immunosuppressive drug used to treat several allergic and autoimmune conditions. Probiotic is a live microorganisms used to modulate human and mice immune system.FOXP3 is Treg marker and have a role in immune system responses. Therefore we took 30 male albino mice were divided into 6 groups (five mice in each group) and treated daily for 14 days : Group 1 : was administrated orally with (0.4) ml S.boulardii for 7 days then injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 7 days, control : was administrated orally with (0.4) ml S.boulardii for 14 days. Group 2 : was injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 7 days then administrated orally with (0.4) ml S.boulardii for 7 days, control : was injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 14days. Group 3 : was administrated orally with (0.4) ml S.boulardii and injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 14 days, control : was administrated orally with normal saline only for 14 days.Group 4 : was administrated orally with (0.6) ml S.salivarius for 7 days then injected intraperitoneally with(0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 7 days, control : was administrated orally with (0.6) ml S.salivarius for 14 days. Group 5 : was injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 7 days then administrated orally with (0.6) ml S.salivarius for 7 days, control : was injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 14 days. Group 6 : was administrated orally with (0.6) ml S.salivarius for 7 days and injected intraperitoneally with (0.1) ml of 2.5mg\kg prednisolone drug for 14 days, control : was administrated orally with normal saline only for 14 days. Mice treated with prednisolone drug showed a significant increase in total leukocytes count (10000±275.4)cells\1ml.blood as compared with negative control (7000±45.07)cells\1ml.blood, and differential count of leukocytes showed non - significant decrease in lymphocytes(23.0±1.51)cells\1ml.blood as compared with negative control (30.0 ±1.65)cells\1ml.blood, a significant increase in neutrophils(75.00±3.59) as compared with negative control(65.00 ± 2.31), a significant decrease in monocytes (1.0±0.06)cells\1ml.blood as compared with negative control(3.0 ± 0.06)cells\1ml.blood and have no effect on basophils and eosinphils, a significant decreased in phagocytosis(15.0 ± 0.82) as compared with negative control (20.0 ±1.4) , no significant increased Pcv (40.0±2.03) as compared with negative control (36.0±1.1) ,no significant increased Hb (13.3±0.76) as compared with negative control(11.6 ± 0.54) , and no significant increase in total body weight (31.0 ± 1.2)g as compared with negative control (30.0 ±1.1)g. The result of group treated with probiotic show a significant increase in total leukocytes, lymphocytes count, phagocytosis and Hb & Pcv as compared with control group administrated by normal saline only. The histological sections of spleen and lymph node which was treated with prednisolone drug revealed lose the architecture, no lymphoid follicles and necrosis. While the section of spleen and lymph node treated with probiotic showed preservation architecture which contain lymphoid follicles and hyperplasia of lymphocytes. The result of groups treated with probiotic pre, post, together with prednisolone drug showed normalized the immunological and histological parameters to the normal condition as compared with group treated with prednisolone only. The immunohistochemical section for spleen and lymph node show the same expression of FOXP3 in mice treated with probiotic (yeast & bacteria) and prednisolone drug. According to the results obtained from this study it is concluded that probiotic (yeast and bacteria) have immunomodulatory effect against prednisolone in immune system of male albino mice and have the same expression of FOXP3

استخلاص ، تنقية وتوصيف انزيم اللكنين بيروكسيديز المنتج من العزلة الفطرية المحلية Aspergillus terreus == Extraction, purification and characterization of lignin peroxidase enzyme produced from local fungal isolate Aspergillus terreus

Author name: سحر غازي عمران عبد الواحد التميمي
Supervisor name: ندى صباح رزوقي | غازي منعم عزيز
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تم عزل وتشخيص 18 عزلة فطرية محلية من 75 عينة روث خيول جمعت من نادي الجادرية ونادي العامرية للفروسية في بغداد خلال 8 اشهر للفترة من تموز 2013 الى اذار 2014 . سجلت العزلة A. niger اعلى نسبة ظهور بين العزلات واعلى تكرار % 80 %9.8, على التوالي تبعتها العزلة A.fumigatus (%9.8 , % 48) ثم العزلة A.terreus (% 8.2 , % 46.66) ، بينما سجلت العزلة Absidia cerymbifera اقل ظهور واقل تكرار(%3.28 , % 5.33) تبعتها العزلة Syncephalstrum racemosum ( % 2.67 و( %1.64 على التوالي. اختيرت العزلة A.terreus SG777 كافضل عزلة لانتاج هذه الانزيمات اذ سجلت اعلى فاعلية نوعية لانتاج الانزيمات المحللة للكنين ( لكنين بيروكسيديز 11.828 ، منغنيز بيروكسيديز1.131 واللاكيز 0.527) وحدة /ملغم . ثبتت الظروف المثلى لانتاج الانزيمات المحللة لللكنين من العزلة الفطرية A. terreus SG 777 باستخدام تخمرات الحالة الصلبة ( سيقان الموز كمادة اساس ، فترة الحضن 8 ايام ،حجم اللقاح1 × 105 بوغ / مل ، برقم هيدروجيني 4.5 وبدرجة حرارة 35م°). رسب انزيم اللكنين بيروكسيديز باستخدام كبريتات الامونيوم بنسبة اشباع %80 ثم ازيل الملح من الانزيم المنتج من عفن777 Aspergillus terreus SG باستخدام طريقة النضح الغشائيDialysis تجاه المحلول الدارئ (Tris buffer) ونقي جزئيا بواسطة كروماتوغرافيا التبادل الايونيIon exchange chromatography باستخدام المبادل الايوني DEAE - cellulose بعدد مرات للتنقية بلغ 5.4 مرة وبحصيلة انزيمية مقدارها %13.7اظهر الانزيم اعلى فغالية وثباتية عند الرقم الهيدروجيني 3.0 ,في حين اقصى فاعلية للانزيم ظهرت عند درجة حرارة 40 م° مع احتفاظ الانزيم بفاعليته عند درجات حرارة تراوحت بين 25) - 35 ) م°. درست قابلية انزيم اللكنين بيروكسيديز في ازالة عدة صبغات واظهرت النتائج اعلى نسبة ازالة ( 83.61 %) للانزيم تجاه صبغة الكونغو الحمراء باستخدام 65.51 وحدة / مل منه وبفترة حضن 4 ساعات وتبعتها صبغة المثيلين الزرقاء بنسية تحطيم %58.6 ثم صبغة المثيل الحمراء بنسبة ازالة بلغت % 49.9.بينما سجلت الصبغات الملاكايت الخضراء ، الالورا الحمراء والتارترازين % 24.87 ,% 28.8 , %26 على التوالي كادنى نسبة تحطيم بوساطة الانزيم قيد الدراسة . درست قابلية انزيم اللكنين بيروكسيديز في ازالة المركبات الحلقية المتعددة التي تم الكشف عنها وذلك لمقارنة فاعلية الانزيم مع نتائج المعالجات في مصفى الدورة والتي تضمنت (المعالجة الميكانيكية، المعالجة الكيميوفيزيائية والمعالجة البايولوجية ) . اظهرت النتائج ازالة 97.54 % للمركب Di benzo (a ,h) anthrancene باستخدام 65.51 وحدة / مل من الانزيم قيد الدراسة وبفترة حضن 4 ساعات وبدرجة حرارة 40 م° في حين بلغت نسبة الازالة بوساطة معالجات المصفى % 54.37 كما بلغت نسبة الازالة لكل من Floureneو anthrancene قد بلغت % 95.98 و% 83.51 على التوالي مقارنة بنسبة الازالة %84.51 , % 46.83 بوساطة معالجات المصفى . قيد انزيم اللكنين بيروكسيديز باستخدام %2 وزن / حجم من الجينات الصوديوم و200 ملي مولار و50 من مل كلوريد الكالسيوم . بينت النتائج ان % 99 من فاعلية الانزيم الحر تم تقييدها .اجريت عملية خزن انزيم اللكنين بيروكسيديز المقيد والحر لمدة اربعة اسابيع عند درجة حرارة 4 م° لمعرفة مدى احتفاظ الانزيم المقيد بفاعليته الانزيمية مقارنة بالانزيم الحر، اذ لوحظ ان الانزيم المقيد قد احتفظ % 88.29 من فاعليته الاصلية بينما احتفظ الانزيم الحر حوالي 66. 02 % من فاعليته الاصلية. استخدم انزيم اللكنين بيروكسيديز المقيد والحر في تحطيم صبغة المثيلين الزرقاء ، اذ اظهرت النتائج ان نسبة التحطيم بالانزيم المقيد بلغت حوالي % 40.1 لفترة حضن 4 ساعات بينما بلغت نسبة تحطيم الصبغة حوالي % 25.79 باستخدام الانزيم الحر وبنفس فترة الحضن .حطم انزيم اللكنين بيروكسيديز المقيد حوالي% 57.89 من صبغة الكونغو الحمراء عند استخدامه لاول مرة ، وانخفضت قابلية الانزيم المقيد على تحطيم الصبغة الى 16.11% عند استعماله للمرة الرابعة. | Eighteen local isolates were collected from seventy five horse manure samples taken from horses in the Equestrian Club in Jadriya and Al - Amrya / Baghdad that were investigated during the 8 months; the period isolation was started from July 2013 to march 2014. Aspergillus niger was the highest occurrence and frequency (80% and 9.8 %) respectively, followed by A . fumigatus (48 % and 9.8 %) and A. terreus (46.66 % and 8.2 % ) occurrence and frequency respectively , whereas Syncephalstrum racemosum (2.67 % and 1.64%) respectively . The isolate A. terreus had the higher specific activity of ligninolytic enzymes (lignin peroxidase 11.828, manganese peroxidase 1.13 and laccase 0.53) U/mg. The optimum conditions of ligninolytic enzymes produced from A. terreus SG777 were estimated using solid state fermentation : banana stalks as a substrate, period incubation 8 days, moisture level 1 : 5 w/v inoculum size 1x105 spores /ml, pH 4.5 and temperature 35 °C. Lignin peroxidase produced from A. terreus SG777 precipitated with 80% ammonium sulfate saturation then desalting by dialysis against Tris buffer solution and partially purified by ion exchange chromatography using DEAE - cellulose. The specific activity reached 56.67U/mg with purification fold was 5.4 times and 13.7% recovery. The optimum pH for activity and stability was 3. The maximum activity was observed at 40°C and the enzyme maintained the activity when it was incubated at 25 - 35˚C. Lignin peroxidase removal the dyes during 4hr. Congo red was decolorized to the maximum extent of 83.61% in 4 hr by 65. 51 U/ml of the pure lignin peroxidase, methylene blue decolorized 58.6% and methyl red azo dye was decolorized to the extent of 49.9% ,while Malachite green triarylmethane dye, allura red and tartarazine showed minimum extent decolorized 26, 28.8 and 24.87% respectively. Degradation of poly aromatic hydrocarbons when incubated with 65.51 U/ml lignin peroxidase at 40 °C for 4 hr compared with the Refinery treatment . Results showed (97.54%) removal efficiency of Di benzo (a ,h) anthrancene by lignin peroxidase, while only 54.37% was treated by Refinery treatment. Flourene and anthrancene degradation 95.98% and 83.51% respectively, while the flourene and anthrancene degradation treated by Refinery treatment only 84.51% and 46.83% respectively. Lignin peroxidase immobilization by 2% (w/v) sodium alginate and 200 mM of calcium chloride. Results showed that 99 % from free lignin peroxidase was immobilized. The stability of immobilized and free Lip enzyme was studied during four weeks; remaining activity for immobilized Lip was 88.29 % from its original activity 76 U/ml during four weeks while free Lip remaining activity was 66. 02 % from its original activity (76.04 U/ml). Methylene blue dye degraded about 40.1% by immobilized Lip during four hr compared with free Lip which has removal only 25.79% from dye concentration. The immobilization lignin peroxidase removal 57.89 % from congo red in first use and then the immobilized lignin peroxidase ability reduced to 16.11% dye removal after four uses.

استخلاص وتنقية انزيم اللايبيز من عفن Aspergillus niger 11414 (ATCC) واستخدامه في تحسين نوعية الدهن الحر == Extraction and purification of Lipase from Aspergillus niger 11414 ( ATCC) to improve the butter oil

Author name: سحر غازي عمران عبد الواحد التميمي
Supervisor name: سوسن ساجد محمد علي الجبوري | سعود رشيد العاني
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تضمنت هذه الد راسة عزل وتنقية انزيم اللايبيز من العزلة القياسية Aspergillus niger 11414 ( ATCC) ثم تطبيقه عمليا في مجال الصناعات الغذائية . • تم تــنمية العزلة وتنشـــيطها على وسط اجار البطاطا والدكستروز Potato dextrose Agar PDA . • تم التحري الاولي عن انتاج انزيم اللايبيز من العزلة A. niger 11414 بطريقة الاطباق باستخدام وسط ( Tween 80 ) ، وظهرت النتيجة موجبة بشكل هالة معتمة تحيط المستعمرة الفطـرية . استخدم وسط Tween 80 واضيف زيت الزيــــتون بـــدل الـ (Tween 80) الى وسط التحري وكانت النتيجة موجبة اذ ظهرت الهالة المعتمة حول المستعمرة لكن بمساحة اكبر مما سبق . • درست عدة معايير ( تركيز زيت الزيتون ، مدة التخمر ، الاس الهيدروجيني الابتدائي ، حجم اللقاح ، درجة الحرارة ) لايجاد الظروف المثلى لانتاج انزيم اللايـــبيز وكانــــت افضل الظروف لانتاج الانزيم هي ( تركيز زيت الزيتون 1 % ، مدة التخمر 168 ساعة ، واس هــــيدروجيني ابـــتدائي 6 وحجم لقاح 10 × 1 ( بوغ / مل ) ودرجة حرارة 30 م ، اذ سجلت عند هذه الظروف اعلى فعالية للانزيم المنتج . • اظهر الانزيم الخام بعد حضنه باسس هيدروجينية مختلفة لمدة 30 دقيقة ثباتا عند قيم الاسس الهيدروجينية بين ( 5.0 - 4.0 ) ، فيــــما اظهر الانـــــزيم الخام بعد حضنه في درجات حرارة مختلفة لمدة 60 دقيقة ثباتا حراريا عند ( 40 - 50 ) م , احتفظ الانزيم بكامل فعاليته.• استخدمـــت خطوات متسلسلة لغرض تنقية انزيم اللايبيز شـملت اولا التركيز بكبريتات الامونيوم وكان افضلها 30 % حين بلغت اعلى فعالية نوعية عندها بمقدار 3.8 وحدة / ملغم برويتن ، استخدمت خطوة الديلزة للتخلص من الاملاح . لقد اظهرت النتائج ارتفاع الفعالية والفعالية النوعية للانزيم اذ اصبحت 8.64 وحدة / ملغم بروتين وبلغ عدد مرات التنقية 8.73 . بعدها مرر الانزيم المنقى جزئيا على عمود هلام Sephadex G - 75 مرتين وجمعت الاجزاء التي اظهرت فعالية انزيمية ، مرر بعدها خلال عمود هلام Sephadex G - 100 ازدادت خلالها نقاوة الانزيم اذ ارتفــعت الفعالية النوعية الى 142.8 وحدة / ملغم بروتين وبلغ عدد مرات التنقية 143.19 وبحصيلة انزيمية 87.5 % .• درست بعض الخصائص المهمة للانزيم المنقى جزئيا اذ اظهر الانزيم المنقى جزئيا ثباتا تجاه قيم من الاس الهيدروجيني بين ( 5 - 6 ) ، وكان الاس الهيدروجيني الامثل 5.6 واحتفظ الانزيم المنقى جزئيا بـكامل فعاليته عند درجتي حرارة 30 و40 م على التوالي ولمدة 30 دقيقة وفقد 95 % من فعاليته عند درجة حرارة 80 م وللمدة نفسها ، اما درجة الحرارة المثلى فكانت 35 م . • استعمل اللايبيز المنقى جزئيا في تحسين نكهة الدهن الحر الذي تم معاملته بالانزيم ، اما السيطرة Control فتمثلت باضافة محلول دارىء فوسفات السترات ذي الاس الهيدروجيني 6.0 فقط الى الدهن الحر . اجري تقييس الفعالية على المعاملتين واظهرت النتائج ان هناك تغيرا محسوسا في الدهن المعامل بالانزيم في حين بقيت السيطرة دون تغيير . • استـخدم الدهن الحر المعامل بالانــــزيم والسيطرة Control في صنــع بعض انـــواع الحلويات ( البرمة ). عمل تقييم حسي للمنتوج من خلال 31 عينة للصــــفات ( اللون ، النسجة ، الرطوبة ، الرائحة ، النكهة " الطعم " ) . حللت النتائج احصائيا ووجد فرق معنوي ملحوظ بين الدهن الحر المعامل بالانزيم والسيطرة ، عدا صفة اللون فكان الفرق غير معنوي لكلتا المعاملتين . | In this study the extraction and purification of Lipase from isolated A. niger was studied. The ability of A. niger to produce Lipase was tested on Tween 80 media , indicate the positive result. Better result was obtained by added olive oil instead of Tween 80 media Several culture conditions were studied to determine the optimum conditions for Lipase producing , and the optimum conditions were : Concentration of Olive oil 1 % , period of fermentation 168 hour, initial pH 6 , inoculums size 1×10⁵ ( Spore / ml ) and the temperature 30 ℃ higher activity of produced enzyme was recorded in this conditions. The crude enzyme was stable after incubation at different pH (4 - 5 ) for 30 min., the enzyme was stable after incubation at different temperature (40 - 50) ℃ for 60 min., the enzyme retained all activity . Sequent steps used to purify Lipase. These included the concentration in ammonium sulfate the optimum saturation rate was 30 % , while the enzyme specific activity was 3.8 Unit / mg protein . Dialysis of enzyme resulted in increase of specific activity, which became 8.64 Unit / mg protein. Partially purified enzyme to the gel column sephadex G - 75 twice, the parts which show enzyme activity collected and added to the gel column sephadex G - 100, this increased the enzyme purification and a specific activity increased to 141.76 Unit / mg protein , while the number of purification was 193.19 and 82.46 % yield. Properties of the partially purified Lipase were investigated. Its showed stability against the values of pH (5.0 - 6.0) and the optimum pH was ( 5.6 ). The partially purified Lipase retained all activity 1n the temperature ( 30,40 )℃, for ( 30 ) minutes , and lost 95 % of its original activity at ( 80) ℃ , for the same time , while the optimum temperature was 35 The partially purified enzyme is used for improvement the flavor of butter oil which was treated with the enzyme , while the control was treated by addition phosphate citrate buffer solution ( pH = 6.0) only to the butter oil , the results showed that was sensible changes in the butter oil treated with enzyme while the control remain without any changes. The animal fat which treated with enzyme and the control was used in some kinds of sweets ( Al - Burma ) , making sensible evaluating for the product by (31) samples for characterization (color, texture, moisture, odor and flavor " tastes "). The results were analyzed statistically , and the noticed incorporeal comparison was found between the butter oil treated with enzyme and control , except the properties of color , it was non incorporeal comparison for both samples

الكشف الجزيئي والبكتريولوجي لبكتريا Group B Streptococci (GBS) المحلية في بعض النساء العراقيات الحوامل

Author name: زينب عدي حامد
Supervisor name: نهاية حكمت زكي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: • تم جمع مائة وتسعة وثمانين مسحة مهبلية من النساء الحوامل من مستشفى ابن البلدي ومختبر الصحة المركزي ومستشفى كمال السامرائي. حيث تم الحصول على ستة واربعين عزلة من بكتريا Streptococcus agalactiae خلال الفترة من شهر تشرين الاول 2013 الى شهر شباط 2014.• كانت الفئة العمرية للنساء المصابة ببكتريا S. agalactiae تتراوح بين (35 - 37) سنة حيث كانت نسبة الاصابة تصل الى 76.08%.• تم تشخيص جميع العينات مبدئيا بواسطة الطرق المظهرية من خلال الاوساط الزرعية blood agar وchromogenic agar واجري تاكيد التشخيص بواسطة VITEK SYSTEM 2 Identification وكذلك تم تشخيصها بالطريقة الجزيئية PCR للكشف عن جين 16S rRNA.• اجريت دراسة تحليلية مقارنة بين الطرق الثلاثة المظهرية والطريقة الجزيئية المستخدمة في الكشف عن البكتريا، وكانت طريقة التفاعل التضاعفي) (PCR افضل وسيلة للكشف عن S. agalactiae حيث تم تشخيص 46 عينة بواسطته بينما تم الكشف عن 30، 36، 37 عينة من قبل blood agar وchromogenic agar وsystem 2 VITEK على التوالي.• اجري فحص VITEK Antibiotic Sensitivity Test للكشف عن حساسية البكتريا للمضادات الحيوية المختلفة لجميع العزلات المشخصة، وكان اعلى معدل انتشار مقاومة لمضاد tetracycline بنسبة 65.2% وتليها 58.6% و45.6% لمضاداتerythromycin وclindamycin على التوالي.• تم فحص ثلاثة من الجينات التي تشفر لعوامل الفوعمة (sip، scpB، cfb) في جميع العزلات المشخصة، وكانت نسبة 97.8% من اجمالي العزلات تحتوي على الجينات الثلاثة المذكورة.• تم الكشف عن خمسة جينات لمقاومة مضادات Macrolide وكان معدل المقاومة 69.5% من اجمالي العزلات.• تم التحري عن جينات مقاومة لمثيلة الرايبوسوم (ermB، ermA\TR، ermC) في جميع العزلات المشخصة وكان جين ermB الاكثر وفرة بين العزلات بنسبة 64.04% ثم يليه جين ermA\TR بنسبة 23.09% وعلى الرغم من تغيير الظروف المستخدمة في تقنية التفاعل السلسلي للبوليميريز PCR)) لكن هذه الدراسة فشلت في تحديد جين مثيلة الرايبوسوم (ermC) • بينت نتائج التحري عن اثنين من الجينات المشفرة لنظام الدفق efflux pumps وهي (mefA، mreA) ان معدل انتشار الجينين بين العزلات هو 8.69% و69.5% على التوالي.• اظهرت نتائج الدراسة ان 14(% 30.4) من اجمالي العزلات لا يمتلك اي جين من جينات مقاومة الاريثرومايسين الخمسة.• بينت نتائج الدراسة ان عزلة واحدة من بكتريا S. agalactiae رقم) (V12 حاملة لاربعة انواع من جينات مقاومة الاريثرومايسين عدا الجين (ermC). | • One hundred and eighty nine vaginal swabs were collected from Ibn - Albalady Hospital, Central health Laboratory and Kammal Alsamaraie Hospital. Forty - six Streptococcus agalactiae isolates were obtained during October 2013 to February 2014.• The isolates were initially identified phenotypically by blood agar culture media and chromogenic culture media and further identification was performed by Vitek and by molecular methods by 16srRNA - based PCR. • A comparative analysis were performed between three phenotypic detection methods and molecular method by PCR were best tool for S. agalactiae detection which 46 isolates were identified while 37, 36, 30 isolates were detected by Vitek system, chromogenic agar and blood agar respectively.• Vitek Antibiotic susceptibility for different antibiotics were performed to all detected isolates, the highest prevalence of resistance was 65.2% toward tetracycline and followed by 58.6% and 45.6% for erythromycin and clindamycin respectively.• Three virulence - encoding genes (sip, scpB and cfb) were screened in all detected isolates, 97.8% of total isolates were contain the three mentioned genes.• Five macrolide resistance genes were screened and the resistant rate in total isolates was 69.5%.• Three ribosome methylation genes (ermB, ermA/TR, ermC) were screened in all examined isolates; the most prevalence gene was ermB with 63.04%, whereas 23.9% was the prevalence of ermA\TR gene and ermC not detected in any of examined isolates.• Two efflux pump genes (mefA and mreA) were screened and the prevalence rate was 8.69% and 69.5% respectively

تاثير بعض المواد الكيميائية في انتاجية وفعالية ذيفان الفا - هيمولايسين المنتج من المكورات العنقودية الذهبية المعزولة من مصادر سريرية مختلفة == Effect of some chemical materials on productivity and activity of ? - hemolysin which produced from Staphylococcus aureus Isolated from clinical samples

Author name: زينب فرحان علي الزهيري
Supervisor name: خولة جبر خلف
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تضمنت الدراسة عزل بكتيريا المكورات العنقودية من بعض مستشفيات بغداد، والتي شملت : مستشفى بغداد التعليمي، ومستشفى ابن البلدي، والمختبرات التعليمية،و مستشفى حماية الطفولة التعليمي، ومستشفى الكندي حيث امكن الحصول على (110) عزلة، توزعت بواقع (15) عزلة من عينات التهاب المجاري البولية، و(20) عزلة من الحروق، و(46) عزلة من الجروح ،و (17)عزلة من عينات الدم، و(12) عزلة من مسحات الاذن والفم والعيون.شخصت الدراسة (77) عزلة بكتيرية على انها مكورات عنقودية ذهبية من خلال اعطائها نتائج ايجابية في فحص الكاتليز وفحص انزيم مخثر البلازما ، وبقية الفحوص البايوكيمياوية مثل تخمير المانيتول في وسط ملحي تحت ظروف هوائية وقابلية العزلات على تحلل الدم وكانت عزلات Staphylococcus aureus قد توزعت على النحو الاتي (9) عزلات من عينات الدم، و(36) عزلة من الجروح، و(13) عزلة من الحروق، و(9) عزلات من مسحات الاذن والفم والعيون، و(10) عزلات من التهابات المجاري البولية.وقد اظهرت العزلات قدرتها على تكوين الغشاء الحيوي(Biofilm) اذا استطاعت (35) عزلة (45.45)% من اصل 77 عزلة ان تكون الغشاء الحيوي فيما لم تستطع (42) عزلة (54.54)% المتبقية من تكوين الغشاء الحيوي.اظهرت النتائج ان نسبة العزلات المنتجة لذيفان الفا - هيمولايسين كانت (32) عزلة (41.55)% اما العزلات غير المنتجة للذيفان ، فقد كانت (45)عزلة.اختبرت حساسية العزلات تجاه المضادات الحيوية، وقد كانت نسبة مقاومة العزلات تجاه مضاد Oxacillin هي 100%، اما مضاد Methicillin وCloxacillin ، فقد كانت نسبة المقاومة 98.7 % و97.4 % على التوالي. وكانت نسبة مقاومة مضاد Cephalexin وCefixim هي 93.5 % و76.6 % على التوالي، اما مضاد Rifampicin وVancomcin فقد كانت نسبة مقاومتها 67.5 % فيما كانت نسبة مقاومة Azithromycin وLevofloxacin وBacitracin هي 49.3%، 70.1 %، 93.5 % على التوالي.اختيرت العزلة الكفؤة رقم (19)، وحدد التركيز المثبط الادنىminimum inhibitory concentration (MIC) لمضاد المثيسلين والذي كان تركيزه (32) مايكروغرام / مل.اختبر تاثير مادة CD - Cholesterol، وCholesterol ، وCD ، وMethicillin ، وPbs في فعالية ذيفان الهيمولايسين وكان معيار التحلل Hemolytic Titer هو : 8، 32.768، 65.536، 140.737.488.355.32، E+254.961408 على التوالي.واختبر تاثير المواد نفسها في انتاجية ذيفان الهيمولايسين وكانت النتائج على الاتي : 67.108.864، 549.755.813.888، 274.877.906.944، 576.460.752.303.360، 3.96140812E+25 على التوالي.وقد نقي الذيفان جزئيا بطريقة الترسيب باستخدام كبريتات الامونيوم، واختبرت فعالية الذيفان في حل كريات الدم الحمراء بطريقة الانتشار في الحفر.واختبرت التجربة فعالية الذيفان المنقى جزئيا داخل الجسم الحي في قرنية عين الارانب المختبرية اذ تكونت مناطق تاكل في القرنية بقطر 7.70 ملم بعد 8 ساعات من الحقن وثبطت فعالية هذا الذيفان داخل الجسم الحي باستخدام مادة CD - Cholesterol مع الذيفان حيث اصبح قطر تاكل القرنية 3.95 ملم.استخدمت مادة CD - Cholesterol بوصفها مادة علاجية من خلال استخدامها على هياة قطرات اضيفت الى العين المصابة بالذيفان وادت الى تناقص منطقة التاكل في القرنية من 7.70 الى 3.95.ويستنتج من الدراسة الحالية : اهمية استخدام CD - Cholesterol في تثبيط ذيفان الفا - هيمولايسين في داخل وخارج الجسم الحي وما لهذه المادة من اهمية في المجالات التطبيقية وفي الوقاية من تاثيرات الذيفان وقدرته التحللية للخلايا | In this study, one hundred and ten clinical samples were obtained from hospitals patient at many hospitals of Baghdad governorate : Baghdad teaching hospital, , Ibn - EL Balady hospital, educational laboratories, Protect child teaching hospital, Al - kendi hospital . The types and the numbers of clinical samples were distributed as (15) samples from urinary tract infect , (20) samples from burns infection , (46) samples from wounds, (17) samples from blood, (12) samples from ear, mouth and eyes infections . In this study (77) isolates were diagnosed as cocci cluster gold by giving positive result for catalase test and coagulase enzyme test and the other biochemical tests such as fermentation of mannitol under aerobic conditions and the ability of some isolates to hemolysis blood . S. aureus isolates distributed as follows : (9) isolates from blood samples, (36) isolated from wounds, (13) isolates from burns, (9) isolates from ear, mouth and eyes infection, (10) isolates from urinary tract infections.The isolates showed the ability to form biofilm (35) isolates (45.45%) out of 77 isolates and the other isolates could not form biofilm were : (42) isolation (54.54%),. The results showed that the proportion of isolates producing α - hemolysin was (32) (41.55%) isolates were either non - producing toxin : (45) isolates. The isolates were tested sensitivity to antibiotics and showed proportion of resistant toward Oxacillin which was 100% , Methicillin and Cloxacillin resistance ratio was 98.7% and 97.4%, respectively.The proportion of resistant to Cephalexin and Cefixim were 93.5% and 76.6%, respectively, while the Rifampicin and Vancomcin resistance ratio were 67.5%, while the proportion of resistant to Azithromycin and Levofloxacin and Bacitracin were 49.3%, 70.1%, 93.5%, respectively. The chosen isolate was ( number 19), select the minimum inhibitory concentration (MIC) of methicillin which were (32) micrograms \ ml. Tested the effect of CD - Cholesterol ,Cholesterol ,CD ,Methicillin and Pbs on the activity of toxin α - hemolysin and the hemolytic Titer is : 8 ( line A, well 3), 32.768 (line B, well 4), 65.536 (line B, well 5), 140.737.488.355.32 (line D, well 12) , 4.961408E + 25 (line G, well 12) respectively. It also has been testing the effect of the same material on the productivity of toxin α - hemolysin and the results were respectively : 67.108.864 (line : C well : 3), 549.755.813.888 (line : D ,well : 4), 274.877.906.944 (line : D, well : 3) , 576.460.752.303.360 (line : E, well : 12) , 3.96140812E + 25(line : H, well : 12) respectively.The toxin α - hemolysin was purified by using ammonium sulfate precipitation, and tested the effectiveness of the toxin on the red blood cells by using wells diffusion method . purified toxin was injected inside the living body in the cornea of rabbits eye, and the erosion of cornea where formed with diameter : 7.70 mm after 8 hours of injection but the other eye that injected with CD - Cholesterol that mix with toxin where the erosion diameter was3.95mm.CD - Cholesterol was used in treatment as a drops which added to the affected eye and led to a decrease in corneal erosion area from7.70 mm to3.95.mm We follows from the present study : The importance of using CD - Cholesterol in the inhibition of alpha - toxin inside and outside the living body and the importance of this study in applied medical fields and in the prevention the effects of the toxin on the cells.

انتاج وتوصيف Protease من بكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة من بعض الحالات السريرية وعلاقته ببعض المضادات الحيوية == Production and Characterization of Protease from Pseudomonas aeruginosa Isolated from Some Clinical Cases and its Relation with some Antibiotic Agent

Author name: رنا مجاهد عبد الله الشويخ
Supervisor name: سمير فتح الله سمعان | سعود رشيد العاني
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت (170) عينة من حالات مرضية مختلفة التي تضمنت (35) مسحة من الجروح و(47) مسحة من الحروق و(25) مسحة من حالات التهابات الاذن الوسطى فضلا عن عينات الادرار التي تضمنت (63) عينة وجمعت العينات من مستشفى الكاظمية التعليمي للمدة من 1 - 5 - 2005 ولغاية 1 - 8 - 2005 .  تم تشخيص (50) عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa اذ زرعت على اوساط اغنائية وتفريقية لغرض العزل الاولي ثم اخضعت المزارع البكتيرية للفحوصات المجهرية والبايوكيميائية لغرض تشخيصها ، ثم استخدمت عدة الفحصapi20E للتشخيص النهائي لهذه العزلات ، اذ تضمنت (8)عزلات من بكتريا Pseudomonas aeruginosa (16%) من حالات التهاب الجروح ، (16) عزلة (32%) من التهابات الحروق ، (20) عزلة (40%) من حالات التهاب المجاري البولية و(6) عزلات (12%) من حالات التهاب الاذن الوسطى .  اختبرت حساسية بكتريا Pseudomonas aeruginosa ضد (20) مضادا حيويا وقد اظهرت العزلات تباينا واضحا وبنسب مختلفة في مقاومتها للمضادات الحيوية . اذ اظهرت بكتريا Pseudomonas aeruginosa نسبة المقاومة(100%) تجاه مضادات الامبسلين ، الاموكسسلين ، الاموكسسلين / حامض كلافيولونك ،الكلوكساسلين والسيفازولين . بينما بلغت نسبة المقاومة لمضادات السيفاكسيم ، الكاربنسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم (98%) ، (84%) ، (80%) و(78%) على التوالي. وبلغت نسبة المقاومة لمضادات الجنتاميسين ، التوبرامايسين ، الببراسيلين ، النورفلوكساسين ، الاميكاسين والسبروفلوكساسين (52%)، (26%) ، (24%) ،(14%) ،(6%) و(4% )على التوالي . في حين اظهرت جميع العزلات لبكتريا Pseudomonas aeruginosa حساسية عالية (100%) تجاه مضادات الازترونام ، امبينيم والسيفابيم البيفلوكساسين والافلوكساسين .  قدرت التراكيز المثبطة الدنيا (MICs ) للمضادات الحيوية وكانت اعلى نسبة مقاومة لمضادات الاموكسسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم . اما نسبة المقاومة لمضادات الامينوكلايكوسايد فكانت تتراوح (4 - 128) مايكرو غرام / مل للتوبرامايسين ، (4 - 256) مايكرو غرام / مل للجنتاميسين اما لمضاد الاميكاسين فكانت (4 - 128) مايكرو غرام / مل. في حين اظهرت قيم MIC حساسية عالية (100%) لمضادي السبروفلوكساسين والسيفابيم.  اظهرت نتائج خلط مضادات السبروفلوكساسين مع كل من الجنتاميسين والسيفتازديم والببراسيلين نتائج مهمة في تخفيف التراكيز المثبطة الدنيا لكلا المضادين المستخدمين لوحدهما ضد هذه البكتريا . كذلك اظهرت نتائج خلط مضادي التوبرامايسين مع السيفتازديم فعالية عالية عند خلطهما معا واستعمالهما ضد بكتريا Pseudomonas aeruginosa . اظهرت (86%) من عزلات بكتريا Pseudomonas aeruginosa قابليتها على انتاج انزيم البروتييز . اظهرت النتائج تاثر انزيم البروتييز الخام ببعض المضادات الحيوية التي ادت الى انخفاض في فعالية الانزيم عند زيادة تركيز هذه المضادات .  كانت الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتييز عند استخدام وسط لوريا عند رقم هيدروجيني(8) ولمدة(48) ساعة من الحضن بدرجة حرارة(35) م º . نقي انزيم البروتييز من العزلة Pseudomonas aeruginosa PsaW2 باستخدام كروماتوغرافيا التبادل الايوني DEAE - celluloseوكروماتوغرافيا الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100. قدر الوزن الجزيئي للانزيم المنقى بطريقة الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100 وكان (21379 ) دالتون ، وبلغت درجة الحرارة المثلى لفعالية البروتييز (35) م º والرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية وثبات الانزيم كانت (8) . اوضحت نتائج تاثير بعض المثبطات والعوامل المختزلة والكلابية في فعالية الانزيم ، ان فعالية الانزيم قد ازدادت عند معاملته بايونات Ca++ وZn ++ مما يدل انها تلعب دورا في تحفيز وثبات الانزيم ، ولم تثبط فاعلية الانزيم بوجود العوامل المختزلة مثل السستين ، بينما تثبط فعالية الانزيم بوجود العوامل الكلابية EDTA .  اظهر انزيم البروتييز المنقى من بكتريا Pseudomonas aeruginosa فعالية عالية عند خلطه مع مضادي الفانكومايسين والسيفازولين في علاج التهابات العيون في الارانب والمتسبب عنها بكتريا Staphylococcus aureus . |  One - hundred and seventy swab samples were collected from different cases including (35) wound and (47) burn infection , (25) otitis media and (63) samples from urinary tract infections from Al - Kadhymia Teaching Hospital in Baghdad city . The study period was from 1 - 5 - 2005 to 1 - 8 - 2005 .  Fifty isolates of Pseudomonas aeruginosa were identified using different microscopical , cultural characteristics and biochemical tests . Final identification of bacteria were performed by using api20E system. The isolates were 8(16%) from burn infections , 20(40%) isolates from urinary tract infections , 16(32%) isolates from burn infections and 6(12%) isolates from otitis media . The sensitivity of Pseudomonas aeruginosa isolates was been tested against (20) antibiotics showed isolates version resistance with different percentage against antibiotics .Pseudomonas aeruginosa exhibited (100%) resistance to Ampicillin , Amoxycillin , Amoxycillin / clavulanic acid, cloxacillin and cefazolin .While percentages of resistance to cefixime , carbencillin, cefotaxime and ceftazidime were (98%) ,(84%) ,(80%) and ( 78%) respectively .Resistance percentages to Gentamicin ,Tobramycin , Piperacillin , Norfloxacillin , Amikacin and Ciprofloxacine were (52%),(26%),(24%),(16%),(14%)and(4%) respectively. All isolates of Pseudomonas aeruginosa were highly sensitive (100%) to Aztronam , imipenem , cefepime , P - ofloxacin and ofloxacin .  Minimum inhibitory concentrations of Amoxycillin , cefotaxime , ceftazidime and piperacillin showed higher percentage of resistance . While resistance to aminoglycoside antibiotics including Tobramycin was (4 - 128) μ g / ml , Gentamicin was (4 - 256) μ g / ml and Amikacin was (4 - 128) μ g / ml . On the other hand , all bacterial isolates were susceptible (100%) to Ciprofloxacine and Cefepime .  Combinations of Ciprofloxacine with Gentamicin , ceftazidime and piperacillin gave interesting results against the local bacterial isolates in reducing their MIC values . Tobramycin and ceftazidime gave an obvious decrease in MIC values after combination of these drugs and used against Pseudomonas aeruginosa . A (86%) of the isolates of Pseudomonas aeruginosa have ability to produce protease enzyme . Enzyme activity was affected by some antibiotics . This activity was reduced with increasing the concentrations of these antibiotics . The optimum conditions for protease production were in LB medium with a pH (8) after (48) hrs of incubation at (35) C .  Purification of the protease was done using ion exchange chromatography DEAE - cellulose and gel filtration with sephadex G - 100 .  Molecular weight of the purified protease was measured by sephadex G - 100 and it was found to be around (21379 ) Dalton . The optimum temperature of enzyme activity was (35) C . However , the pH (8) was for activity and stability of this enzyme .  Zn++ and Ca++ ions may play a role in the enhancement and stability of the enzyme . Enzyme activity was not inhibited in the presence of reducing agent such as Cysteine , but it was inhibited in the presence of EDTA .  Pseudomonas aeruginosa purified enzyme shows a high activity when combined with Vancomycin and cefazoline and used for the treatment of the eye infection in rabbits caused by Staphylococcus aureus .

دراسة تاثير بعض الاحماض الدهنية على فعالية انزيمات المكورات العنقودية الذهبية المعزولة من حالات الحروق == Study the effect of some fatty acids on the enzymes activity of Staphylococcus aureus isolated from burns

Author name: رنا عبد الكريم رشيد
Supervisor name: سوسن حسن عثمان كورجي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت 157 عينة مسحة من المرضى المصابين بالحروق من ثلاث مستشفيات في مدينة بغداد للفترة من شهر تشرين الثاني 2006 ولغاية اذار 2007 . زرعت هذه المسحات على اوساط مناسبة لعزل البكتريا . • اظهرت النتائج ايجابية 144 مسحة لتلوثها بالبكتريا ، وبنسبة 91.7% ، فيما كانت 13 مسحة منها سالبة ، وبنسبة 8.3% .• عزلت 50 عزلة من بكتريا المكورات العنقودية الذهبية Staphylococcus aureus بنسبة عزل 31.8% ، وشخصت باستخدام الاختبارات المظهرية والكيميائية الحياتية الخاصة بها .• قاومت جميع العزلات (50 عزلة) مضاد الاوكساسلين ، فضلا عن قدرتها على النمو في وسط اكار الاوكساسلين (Oxacillin agar) ، وبذلك كانت مقاومة للمثسلين (Methicillin resistant Staphylococcus aureus) (MRSA) وبنسبة 100% .• تم التحري عن حساسية العزلات تجاه 21 مضادا حيويا ضمن مجاميع مختلفة ، اذ اظهرت النتائج مقاومة عالية للعزلات البكتيرية لمعظم المضادات الحيوية قيد الدراسة ، في حين كان المضاد الجرثومي الفانكومايسين اكثر المضادات فاعلية ضد بكتريا المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثسلين ، اذ لم تظهر اي عزلة من العزلات مقاومة له ، وكانت العزلتان R120 وR148 الاكثر مقاومة ، اذ قاومتا عشرين مضادا ، فيما كانتا حساستين للفانكومايسين فقط .• اوضح اختبار Minimum inhibitory concentration (MIC) للاحماض الدهنية ضد العزلتين R120 وR148 ان حامض اللاورك هو الاكفا في تثبيط نمو البكتريا ، اذ بلغت قيمة MIC 0.4 ملغم / مل ، في حين بلغت قيم MIC لكل من حامض المايرستك واللينوليك والبالمتك والاوليك ( 1.6، 1.6، 6.4، 25.6) ملغم/ مل على التوالي .• اختبرت قابلية العزلتين R120 وR148 على انتاج انزيم البروتييز باستخدام وسط غراء كولومبيا الحاوي على الحليب الفرز ، واعتمادا على ظهور هالة شفافة حول المستعمرات كانت نسبة التحلل للعزلتين المدروستين 2.5 ، 2.7 وعلى التوالي . ولذا فقد انتخبت العزلة R148 لاختبار تاثير الحامض الدهني في فعالية انزيم البروتييز فيها . • حضرت تراكيز متعددة من حامض اللاورك (0.0125 ، 0.025 ، 0.05 ، 0.1 ، 0.2 ، 0.4 ، 0.8 ، 1.6) ملغم / مل ، واختبر تاثيرها على فعالية انزيم البروتييز ولوحظ انخفاض الفعالية عند التراكيز المدروسة ،اذ بلغت الفعالية معدل 2.36 وحدة / مللتر وبنسبة مئوية تبلغ 79.73% عند تركيز 0.0125 ملغم/ مل من الحامض لتنخفض الى معدل 0.69 وحدة/ مللتر ، ونسبة 23.31% عند تركيز 1.6 ملغم / مل من الحامض .• اختبر تاثير التراكيز المختلفة من حامض اللاورك على وقت تكون الخثرة بوساطة انزيم مخثر البلازما (Coagulase) ، اذ تاخر تكون الخثرة الى الساعة الثانية من اجراء الاختبار عند التركيز 0.05 ملغم/ مل ، في حين كان التاثير الاكبر عند التراكيز ( 0.4، 0.8 ، 1.6) ملغم / مل ، اذ تكونت الخثرة بعد مرور 18 ساعة من اجراء التجربة .• تم تقييم تاثير التراكيز المختلفة لحامض اللاورك على فعالية انزيم الهيمولايسين ، اذ لوحظ انخفاض الفعالية عند التراكيز المدروسة ، فعند تركيز 0.0125 ملغم/ مل من الحامض وتخفيف 1/2 بلغت النسبة المئوية للفعالية 52.9% ، لتنخفض هذه النسبة عند تركيز 0.2 ملغم/مل من الحامض ، وتخفيف 1/2 الى 5.9%. | A total of 157 samples of burn swabs were collected from three hospitals in Baghdad during November 2006 to March 2007. Culturing of the samples was done on suitable media to isolate the bacteria.• The results showed that 144 swabs were positive for bacterial contamination (91.7%), while 13 swabs were negative ( 8.3%).• Fifty isolates of Staphylococcus aureus were isolated (31.8 %), the identification was accomplished using morphological and biochemical tests.• All isolates (50 isolates) were resistant to oxacillin and could grow on oxacillin agar , thus they were resistant to methicillin (Methicillin resistant Staphylococcus aureus ) (MRSA) at 100%.• The sensitivity of the isolates against (21) antibiotics was investigated using different groups of antibiotics , the results showed high resistance of isolates to many antibiotics which have been used in the study , while they were sensitive to vancomycin and the two selected isolates - R120, R148 were sensitive to vancomycin only and resistant to all 20 antibiotics .• The minimum inhibitory concentration (MIC) test for fatty acids to the two isolates R120, R148 showed that lauric acid was the best fatty acid in inhibiting bacterial growth when the MIC reached 0.4 mg/ ml while the other fatty acids (Myristic, Linoleic, Palmitic and Oleic ) MIC reached to (1.6, 1.6, 6.4, 25.6) mg/ml respectively .• The ability of the two isolates (R120, R148 ) to produce protease was detected on solid media ( Skim milk Columbia agar) and depending on the development of clear zone the lysis ratio was 2.5 , 2.7 respectively , therefore the R148 isolate was chosen to detect the fatty acid effect on its protease activity .• Multiple concentrations of lauric acid have been prepared (0.0125, 0.025 , 0.05 , 0.1 , 0.2 , 0.4 , 0.8 , 1.6 ) mg/ml and tested for its effect on protease activity . The obtained results showed that the activity decreased at the concentrations studied. The activity reached an average of 2.36 unit/ ml and a percentage of 79.73% at the concentration 0.0125 mg/ ml of the acid , and then reached an average of 0.69 unit/ ml and a percentage of 23.31% at the concentration 1.6 mg/ ml of the acid.• The effect of different concentrations of lauric acid on the time of clot formation by coagulase have been tested . The clot was formed at the 2nd hour of the test at the concentration 0.05 mg/ml while the highest effect was at the concentrations (0.4 ,0.8 ,1.6) mg/ml as the clot was formed after 18 hours from the beginning of the test .• The effect of the different concentrations of lauric acid on the activity of haemolysin was evaluated . A decrease in activity at the concentrations studied was noticed. The activity reached to 52.9% at the concentration 0.0125 mg /ml of acid and the dilution 1/2 then the activity decreased to 5.9% at the concentration 0.2 mg/ml and dilution 1/2

مسح لمسببات التلوث البكتيري في وحدة الكلية الصناعية وحساسيتها للمضادات الحيوية في بعض مستشفيات مدينة بغداد == Survey of Bacterial contamination in Dialysis Unit and antibiotics susceptibility in some hospitals in Baghdad

Author name: زياد طارق نعمان شهاب
Supervisor name: نزار ادور ناصر
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تـم في هذه الدراسة جمع (204) عينة من مستشفيات مدينة بغداد ، وهي كـل مـن ( مستشفى بغداد التعليمــي/ وحدة الكلية الصناعية. ومستشـفى الكرامة التعليمـي / وحدة الكلية الصـناعية ) ، للفـترة مـن كانون الاول 2009 لغاية منتصف اذار 2010 .شملت العينات مسحات من بيئة وحدة الكلية الصناعية التي تضمنت 12 موقـعا وهي كـل من ( الاسرة والمفروشات والارضـية والجـدران والسـطح الخارجي لجـهاز الديـلـزة وجلد المرضى الراقـدين والادوات الطـبية ذات الاسـتخدام الــيدوي وملابـس الكادر الطـبـي وانابيـب دخول وخـروج الماء داخـل جـهاز الديـلزة وفتحات جـهاز الـتبريد والــتدفئـة وادوات الطـعام والاثاث الخشبي والمغاسـل فضلا عن عـينات من هـواء الصالـة وتم الحصول على النتائج الاتية : 1 - كان عدد المسحات والعينات الموجبة (95) عينة من ( 204 ) عينة وبنسبة (%46.56) واحتوت بعـض المسحات على اكثر من عزلة بكتيرية واحدة .2 - تم الحصول على (139) عزلة اجمالية من مجـموع العـينات الموجـبة كان مـنها (122) عزلة بكتيرية نقية مشخصة . شملت هذه العزلات كل من بكتريا Staphylococcus spp. وAcinetobacter spp. وPseudomonas spp. وKlebsiella spp. وCitrobacter freundii وEscherichia coli وEnterobacter spp. وAlcaligens spp. وStenotrophomonas maltophilia وBordettella spp. وOchrobacter anthropi وProteus spp. وShigella spp. وFlavomonas oryzihabitans وPasturella pneumotropica وChrysemonas lutula وBacillus spp. وNocardia spp. وEnterococcus spp. . فقد تم تشخيص هذه الـعزلات عن طريق الصـفات المظهرية والمزرعـية للمستعمرات وكـذلك عن طريـق الفحص المجهري للخلايا وباستخدام الفحوصات الكيموحياتية فضلا عن استخدام فحص API test لغرض التشخيص الدقيق للعزلات .3 - اظهرت العينات الماخوذة من هـواء الصالة والمغاسل نسبة عالية من الثلوث فقد كانت نسبة التلوث لكل منهما (%81.8) بعـدها جاءت الارضية والجـدران تلـيها الاسرة والمفروشات وبنسبة تلوث للعينات الماخوذة بلغت (%58) و(%53) على التوالي .4 - كانت بكتريا المكورات العنقودية الاكثر انتشارا في بيئة وحدة الكـلية الصناعية حيث تم الحصول على (47) عـزلة منها وبنسبة (%38.5) من اجمالي العزلات والتي كانت (122) عـزلة مشخصة . 5 - كانت بكتريا Acinetobacter spp. الاكثر انتشارا من بين العصيات السالبة لصـبغة كرام بعدد عزلات بلغ (15) عزلة من اصـل (65) عزلة سالبة لصبغة كرام وبنسـبة مئوية بلغت (%23.07) من مجموع العـزلات السالبة لصبغة كـرام ونسبة (%12.2) من مجموع العزلات الكلية، تليها كل من بكتريا Pseudomonas spp. وKlebsiella spp. وبنسب مئـوية بلغت (%10.6) و(%4.9) على التوالي من مجموع العزلات الكلية6 - تم التحري عن حساسية (70) عزلة بكتيرية مختلفة لاثني عشر مضادﴽ حيويا وهي كـل Amikacin وAmoxicillin / clavulanic acid وCiprofloxacin وCefotaxim وCefexime وChloramphenicol وGentamycin وPiperacillin وTrimethoprime وOfloxacin وVancomycin وNalidixic acid .7 - اظهرت بكتريا Staphylococcus aureus مقاومة عالية جدا تجاه المضاد الحيوي Cefexime فقد بلغت نسبة مقاومة هذا المضاد (%100) ، كما اظهرت العزلات مقاومة مرتفعة تجاه كل من المضادات الحيوية Cefotaxime وGentamycin وNalidixic acid حيث بلغت نسبة المقاومة لهذه المضادات (%60) . في حـين اظهـرت هذه العـزلات مقاومة منخفـضة تجاه كـل مـن المضادات Chloramphenicol وCiprofloxacin وOfloxacin وبنسبة مئوية بلغت (%10) لكل مضاد. 8 - اظهرت بكتريا Staphylococcus epidermidis مقاومة بنسبة (%100) للمضاد الحيوي Cefexime ، في حـين كانت نسـبة مقاومة البـكتريا للمـضاد الحـيوي Cefotaxime هـي (%58) كـما كانت نسـبة مقاومتها للمـضادات الحـيوية Nalidixic acid وTrimethoprime (%50) لكـل مـن هذه المـضادات. 9 - كانت بكتريا المكورات العنقودية جميعها حساسة بنسبة (%100) للمـضاد الحيوي Amikacin .10 - اظهرت بكتريا Pseudomonas spp. مقاومة عالية تجاه المضادين Cefotaxime وNalidixic acid وبنسبة مقاومة بلغت (%66) كما كانت نسـبة مقاومة كـل من المضادين Trimethoprim وVancomycin (%55.5) و(%44.4) على التوالـي في حين لم تظهر مقاومة للبكتريا تجاه المضاد الحيوي Amikacin وPiperacillin وOfloxacin وAmoxicillin/ Clavulanic acid .11 - كانت عزلات بكتريا Klebsiella spp. مقاومة بنسبة (%100) لكل من المضادات الحيوية Cefixime وTrimethoprim وVancomycin ، كما اظهرت البكتريا نسـبة مقاومة للمضادات الحـيوية Cefotaxime وPiperacillin وAmoxicillin/Clavulanic acid بلـغت (%66.6) ، يلـيها المضاد الحـيوي entamycin بنسبة مقاومة بلغت (%50) . وكانت بكتريا Klebsiella spp. البكتريا الوحيدة التي اظهرت نسبة مقاومة للمـضاد الحيوي Amikacin بلـغت (%16.6) .12 - تم اجراء فحص MICs لخمسة من المضادات الحيوية المستخدمة في الدراسة وهي Amikacin وAmoxicillin / Clavulanic acid وCefotaxime وGentamycin وCiprofloxacin . على البكتريا الاكثر حساسية او الاكثر مقاومة واظهرت العزلات جميعها التي اجري لها الاختـبار نسبة MICs واطـئة تجاه المضاد الحيوي Amikacin حيث تراوحت بين (8 - 1) مايكروغرام/مليلتر حيث كانت العزلات حساسة بشكل كبير للمضاد الحيوي المذكور.13 - اظهرت العزلات قيم MICs مرتفعة للمضاد الحيوي Cefotaxime حيث تراوحت القيم ما بين (128 - 2) مايكروغـرام/ مليلتر بالنـسبة لبكـتريا S. aureus في حين تراوحت القيم مابين (512 - 8) مايكروغرام/مليلتر بالنسبة لباقي المكورات العنقودية السالبة لفحص Coagulase ، اما بالنسبة لعزلات كل من بكتريا Klebsiella spp. وAcinetobacter spp. فـقد كانت قـيم MICs لها للمضاد المذكور تتراوح مابين (512 - 2) مايكروكرام / مليلتر . في حين اظـهرت عزلات بكتريا Pseudomonas spp. قيمMICs منخفضة للمضاد نفسـه حيث تراوحت القيم بين (2.0 - 0.25) مايكروكرام / مليلتر . | In this study has collected (204) samples from the hospitals of Baghdad, these are (Baghdad teaching hospital/Dialysis unit & AL karama teaching hospital/ Dialysis unit), for the period of December 2009 to March 2010.The samples included swabs ofartificial kidney unit environment that has 12 positions these are (beds, furniture, ground, walls, external surface of dialysis, skin of asleep patients, medical instruments - use manual, clothes of medical stuff, tubes of enter and out water inside of dialysis, slots cooling and heating device, Eating utensils, wooden furniture &sinks as well as samples of hall air and it has obtained the following results : 1 - The number of swabs & positive samples was (95) sample from (204) sample in the rate of (46.56%) some of swabs contain more than one bacterial isolate.2 - It has obtained (139) total isolate from the positive samples amount (122) of that were bacterial pure diagnostic isolates all of these isolates included the following kinds of bacteria : Staphylococcus spp., Acinetobacter spp., Pseudomonas spp., Klebsiella spp., Citrobacter freundii, Escherichia coli, Enterobacter spp., Alcaligens spp., Stenotrophomonas maltophilia, Bordettella spp., Ochrobacter anthropi, Proteus spp., Bacillus spp., Chrysemonas lutula, Pasturella pneumotropica, Nocardia spp. and Enterococcus spp. They have diagnosed these isolates by Phenotypic & farming characteristics of colonies & by Microscopic examination for cells by using bio - chemical tests as well as using API test for the purpose of accurate diagnosisfor isolates.3 - The samples taken from the hall air and sinks showed a high rate of pollution that were (81.8%) for every sample after that they were ground followed by beds, furniture, And by contamination of the samples taken at (58%) and (53%) respectively.4 - Staph bacteria were most prevalent in the environment of artificial kidney unit was obtained (47) isolate of them at (38.5%) of the total isolates, which was (122) diagnosed isolate.5 - Acinetobacter spp. were most prevalent among the negative bacilli of gram stain in the number of isolates was 15 out of 65 negative isolate of gram stain and a percentage amounted to 23.07% of the total isolate Followed by Pseudomonas spp. & Klebsiella spp. at (10.6%) & (4.9%) of the total isolates respectively.6 - It was investigated for sensitivity (70) bacterial isolates of twelve different antibiotics and are all of the : Amikacin, Amoxicillin /clavulanic acid, Ciprofloxacin, Cefotaxim, Cefexime, Chloramphenicol, Gentamycin, Piperacillin, Trimthoprime, Ofloxacin, Vancomycin and Nalidixic acid.7 - Staphylococcus aureus showed very high resistance to the antibiotic Cefaxime The ratio of this counter - resistance (100%), isolates also showed high resistance to both antibiotics Cefotaxime, Gentamycin & nalidixic acid Where the percentage of resistance to these antibiotics (60%).While these isolates showed low resistance to both antibiotics Chloramphenicol, Ciprofloxacin & Ofloxacin at (10%) to both antibiotic.8 - Staphylococcus epidermidis showed resistance by (100%) to antibiotic Cefexime, while the ratio of bacteria resistance to antibiotic Cefotaxime is (58%) also it was the resistance ratio to the antibiotics Nalidixic acid & Trimethoprime (50%) to both of these antibiotics.9 - Staphylococcus bacteria were all sensitive (100%) for antibiotic Amikacin.10 - Pseudomonas spp. Showed high resistance to both antibiotics Cefotaxime & Nalidixic acid by resistance reached (66%) it was also the resistance ratio of both antibiotics Trimethoprim & Vancomycin (55.5%) & (44.4%) respectively While did not show resistance to the bacteria to the antibiotic Amikacin, piperacillin, Ofloxacin & Amoxicillin/Clavulanic acid.11 - Bacteria isolates Klebsiella spp. Were resistant to every antibiotics Cefixime, Trimethoprim & Vancomycin by (100%), bacteria also showed resistant ratio for antibiotics Cefotaxime, Piperacillin & Amoxicillin/Clavulanic reached (66.6%), followed by antibiotic Gentamycin by resistant reached (50%). Klebsiella spp. Were the only bacteria that showed resistant ratio for antibiotic Amikacin reached (16.6%).12 - It has measured MICs test for five antibiotics that used in in the study these are : Amikacin & Clavulanic acid/ Cefotaxime, Amoxicillin, Gentamycin & Ciprofloxacin. on the bacteria most sensitive or most resistant and all isolates that tested showed low MICs ratio to antibiotic Amikacin where ranged between (1 - 8) microgram/milliliter where the isolates were sensitive to mentioned antibiotic geatly.13 - The isolates showed MICs values increased to antibiotic Cefotaxime where the values ranged between (2 - 128)microgram/milliliter to S. aureus while the values ranged between (8 - 512) microgram/milliliter to the remain negative Staphylococcus bacteria of Coagulase test, as for isolates of Klebsiella spp. & Acinetobacter spp. The values of their MICs for the mentioned antibiotic ranged between (2 - 512) microgram/milliliter. While the bacteria isolates Pseudomonas spp. MICs values were low for the same antibiotic where values ranged between (0.25 - 2.0)microgram/milliliter.

التحري عن بعض جينات عوامل الضراوة لبكتريا Cronobacter sakazakii المعزولة من حليب الاطفال الرضع المجفف وعينات سريرية == Detection of some virulence factors genes of Cronobacter sakazakii isolated from Powder infant formula and clinical samples

Author name: ذاريات عبد الرحمن مطلك الجبوري
Supervisor name: لمى عبد الهادي زوين
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: اجريت هذه الدراسة لعزل وتشخيص بكتريا Cronobacter sakazakii من حليب الاطفال المجفف ومن الحالات السريرية لاطفال دون عمر السنتين . اذ جمعت230) ) عينة، شملت (30) عينة حليب اطفال لاعمار مختلفة دون عمــــــــــر السنتين من الاسواق المحلية في بغداد, و(200) عينة سريرية، تضمنت 50 عينة من كل من (سائل النخاع الشوكي ودم وخروج وبول) من مستشــــــــفى مدينة الطب (حماية الاطفال ) ومستشفى الطفل المركزي، للمدة من الاول من ايلول 2015الـــــى الاول من كانون الثاني 2016م. زرعت العينات على اوساط زرعية خاصة، اذ زرعــــــــــت عينات (الحليب) على وسط Violet red bile glucose agar وزرعت العينات (السريرية) على وســــــــــــــــــــــــــــط MacConkey agar، وزرعت جميع العينات (الحليب والسريرية ) علــــــــــــــــــى وسط Tryptone soy agar ، ثم زرعت على وسط Biriiltent Enterobacter sakazakii agar. شخصت العزلات بالفحوصات المجهرية والمزرعية والكيموحيوية ، فضلا عن التشخيص باستعمال جهاز Vitek - 2 اذ امكن الحصول على 19 عزلة، وكانت جميعها تعود لبكتيريا Cronobacter sakazakii، وتضمنت 6 عزلات بنسبة تلوث 9.09 % (اذا كانت عزلة واحدة من عينات حليب Novolac Allernova وعزلتين من عينات حليب Novolac AD وثلاث عزلات من عينات حليــــب Dialak1) و13 عزلة بنسبة تلوث 6.5 % (موزعة بواقع 6 (%12) عزلات من عينات سائل النخاع الشوكي و7 ( %14) عزلات من عينات الدم) ولم يتم الحصول على البكتريا من عينات الخروج والبول. بينت نتائج التحري عن بعض عوامل الضراوة مظهريا بان جميع العزلات البكتيرية كانت قادرة على احداث حركة Swimming بقطر يتراوح بين ( 9 - 1ملم ) وSwariming بقطر يتراوح بين 40 - 1)ملم) , وقدرتها ايضا على تكوين الغشاء الحيوي Biofilm باستخدام ثلاث طرائــــــــــق، اذ بينت النتائـــج قدرة العزلات البكتيرية علـــــــى تكويــــــــن الغشاء الحيوي بطريقــــــــــــــة التخطيط على وسط احمر الكونغو الصلب Congo red agar اذ ان 16 عزلة من اصل 19 عزلة تعود لبكتريا C.sakazakii بنسبة 84.21% قادرة على تكوين الغشاء الحيوي على وسط احمر الكونغو الصلب التي هي 4 عزلات بكتيرية بنسبة 21.05% كانت منتجة للغشاء الحيوي وبشكل قوي 10 عزلات بكتيرية بنسبة 52.63% كانت منتجة للغشاء الحيوي وبشكل متوسط وعزلتين بكتيريتين بنسبة 10.52% كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف، في حين كانت 3 عزلات بكتيرية بنسبة 15.79% غير قادرة على تكوين الغشاء الحيوي ، اما طريقة Tubes method كانت جميع العزلات قادرة على تكوين الغشاء الحيوي، فقد وجد ان 4 عزلات بكتيرية بنسبة %21.05 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل قوي، و13 عزلة بكتيرية بنسبة 68.42 % كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل متوسط ، وعزلتين بكتيرية بنسبة 10.53 % كانت منتجة للغش اء الحي وي بشكل ضعيف ، وطريقة Microtiter plate method اذ ان 9 عزلات بكتيرية بنسبة %47.37 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل قوي و8 عزلات بكتيرية بنسبة 42.11 % كانت منتجة للغشاء الحيـــــــــوي بشكل متوسط وعزلتين بكتيرية بنسبة %10.53 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف . اظهرت نتائج فحص الحساسية باستعمال جهاز Vitek - 2 كونه اكثر كفاءة مقارنـــــــــــــــة بالطريقة التقليدية اتجاه 18 مضــــ ادا حيويــــ ا لتحديد التركـــــ يز المثبـــــــــــــــــط الادنـــ ـى( MICs) Minimum Inhibitory Concentration, وبينت النتائج ان جميع العزلات البكتيرية كانت حساسة Sensitive بنسبة 100% لعدد من المضادات الحيوية المستعملة في الـــدراسة وهـــــــــــي Ampicillin - Sulbactam وCefotaxim وCefpodoxime وCeftazidime وCiprofloxacim وGentamicin وImipenumو Levofloxacin وMeropenem وTazobactam - Piperacillin وTrimethoprim - Sulfamethoxaole وTigecyclin. بينما اختلفت العزلات البكتيرية فكانت مقاومة Resistance او متوسطة المقاومة، اذ كانت نسبة المقاومة اتجاه المضاد الحيوي Cefuroxim وCefuroxim Axetil بنسبة 5.26 % على التوالي، في حين كانت متوسطة الحساسية اتجاه المضاد الحيوي Ampicillin بنسبة %5.26 وللمضاد Cefuroxim بنسبة %15.79, وللمضاد Cefuroxim Axetilبنسبة 52.63% وللمضاد Nitrofurontion بنسبة %15.79 . تم التحري عن بعض جينات الضراوة لبكترياC.sakazakii وتضمنت هذه الجينات كلا من ompA( الذي يشفر عن بروتين A للـ Outer membrane ) وzpx (الذي يشفر عن انزيم Proteases) وfliD ( الذي يشفر عن (Flagella (D)واظهرت النتائج وجود هذه الجينات بنسبة 100% في جميع العزلات. | This study was conducted to isolate and identification of Cronobacter sakazakii from children milk powder and clinical cases of children under two years . It collected (230) samples , included (30) sample children's milk for various ages under two years from the local markets in Baghdad, and (200) from clinical cases , which included (50) samples from each of the (Cerebrospinal Fluid and blood and stool and urine) of the Medical City Hospital ( the protection of children) from Central Children Hospital and Children's Protection Educational Hospital during the period between 1/9/2015 to 1/1/2016. Specimens planted among agricultural private, as planted specimens (milk) to the center of Violet red bile glucose Agar and planted specimens (clinical) at the center of MacConkey agar and planted all samples (milk and clinical) on the central Tryptone soy agar, then planted on the central Biriiltent Enterobacter sakazakii agar. Diagnosed isolates tests microscopic farm and biochemical, as well as diagnostics using Vitek - 2 device as possible to get 19 in isolation, they were all returned to the Cronobacter sakazakii, included (6 (9.09%) isolates included isolation of one isolate from Novolac Allernova and two isolate from Novolac AD and three isolates from Dialak1 ) and 13 isolated (6.5%) included ( 6 (12%) isolates from CSF and 7 (14%) isolates from blood) don't found in stool and urine samples. The results of the investigation of some virulence factors shoewd that all bacteria isolates were able to Swimming motility with a diameter ranging (9 - 1 mm) and Swariming motility with a diameter ranging (40 - 1 mm) and so their ability form biofilm by using three methods. The results show the ability of isolates to form biofilm by using Congo red media methods where it 16 out of 19 isolated bacteria belonging to C.sakazakii increased by (84.21%) able to form biofilm on the central Congo red steel which is 4 (21.05%) were strong production biofilm , 10 (52.63%) were intermediate production biofilm and 2 (10.52% ) were weak biofilm formation , while the 3 (15.79%) unable to form biofilm, The tubes method were all isolates were able to form biofilm, it were found that 4 (21.05%) isolates strong, and 13 (68.42%) intermediate and 2( 10.53%) weak biofilm formation , Microtiter plate method gave 9 (47.37%) isolates strong and 8 (42.11%) intermediate and 2 (10.53%)weak biofilm formation. The susceptibility measured by Vitek - 2 was its more efficient than the traditional methods towards the direction of 18 antibiotic to determine the Minimum Inhibitory Concentrations (MICs) Minimum. The results showed that all bacterial isolates were sensitive 100% for a number of antibiotics used in the study, a Ampicillin - Sulbactam and Cefotaxim and Cefpodoxime and Ceftazidime and Ciprofloxacim and Gentamicin and Imipenum and Levofloxacin and Meropenem and Tazobactam - Piperacillin and Trimethoprim - Sulfamethoxaole and Tigecyclin. While different bacterial isolates were resistant Resistance or medium resistance, as the proportion of the resistance counter direction vital Cefuroxim and Cefuroxim Axetil was (5.26%) respectively. Whereas , the isolates show intermidate sensitivity towards the Ampicillin with ratio ( 5.26%) Cefuroxim (15.79%), Cefuroxim Axetil (52.63%) and Nitrofurontion (15.79%). Has been investigating some of the genes of pathogenic bacterium C.sakazakii These included genes both ompA (which encodes for Outer membrane protein A) and zpx (which encodes for an enzyme Proteases) and fliD which encodes for (Flagella (D) and the results showed the presence of these genes by 100% in all isolates.

جينات تحسس الزحام وعلاقتها مع بعض عوامل الضراوه في بكتريا الزوائف الزنجاريه == Correlation of Quorum Sensing Genes with Some Virulence Factors in Pseudomonas aeruginosa

Author name: دعاء كاظم منصورالموسوي
Supervisor name: منعم رضوان علي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت 60 عزله من البكتريا السالبه لصبغه كرام مشخصه مبدئيا بانها بكتريا الزوائف الزنجاريه من عده مستشفيات في بغداد ومنها مستشفى ابن البلدي ومستشفى الحروق ومستشفى بغداد التعليمي وكذلك من المختبرات التعليميه في مدينه الطب خلال الفتره من بدايه شهر ايلول لغايه نهايه شهر كانون الاول لسنه 2013 تضمنت هذه العزلات22 عزله من خمجات الحروق و18 عزله من خمجات الجروح و9عزلات من عينات القشع لمرضى مصابين باصابات الجهاز التنفسي و6 عزلات من الدم وعزلتين من خمجات المجاري البوليه و3عزلات من مسحات الاذن. شخصت العزلات مبدئيا بزراعتها على وسط الماكونكي الصلب ووسط الدم الصلب وكذلك وسط السيدوموناس الصلب بعد ذلك تم اجراء بعض الفحوصات البايوكيميائيه مثل فحص الكاتليز والاوكسيديز تبع ذلك تشخيص العزلات جينيا باستخدام تفاعل البلمره التسلسلي باعتماد جين .rpsL اكدت النتائج ان جميع العزلات قيد الدراسه هي بكتريا الزوائف الزنجاريه . خضعت 60 عزله عائده لبكتريا الزوائف الزنجاريه لاختبارفحص الحساسيه تجاه 12 مضادا حيويا بطريقه الانتشار واظهرت النتائج وجود مقاومه عاليه بين عزلات الدراسه لـــمضادات Tetracycline (100%) ,Ceftazidime (100%) ,Cefoxitin (100%) , Ceftriaxone (85 %) , Cefepeme (83.3%), Amoxillin/Clavulanic acid (81.6 %),Chloramphenicol (78.3 %) وانها كانت ذات مقاومه متوسطه لمضاد51.6%) Pipracillin ) وذات مقاومه واطئه لمضادات Tobramycin(33.3%), Norfloxacin (31.6%), Azithromycin (31.6%),Ciprofloxacin (28.3%). اختبرت قابليه العزلات على انتاج الغشاء الحيوي باستخدام طريقه احمر - الكونغو وطريقه اطباق المعايره الدقيقه وتم قياس قيم الكثافه الضوئيه باستخدام قارىء منظومة الاليزا, اظهرت النتائج ان طريقه اطباق المعايره الدقيقه اكثر كفاءه وحساسيه من طريقه احمر الكونغو للكشف عن الغشاء الحيوي اذ اظهرت نتائجها ان 4 عزلات فقط غير منتجه للغشاء الحيوي اما العزلات الاخرى فقد كانت منتجه بدرجات متفاوته . اظهرت نتائج التحري عن جينات تحسس الزحام باستخدام تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي المتعدد وباستخدام بادئات خاصه بتسلسلات معينه لجينات الكوارم اظهرت النتائج ان 81,6% من هذه العزلات تمتلك واحد او اكثر من هذه الجينات بينما كانت 18.4% من هذه العزلات لا تمتلك الجينات اعلاه . تقنيه تفاعل البلمره التسلسلي استخدمت في التحري عن خمس من جينات عوامل الضراوه العائده لبكتريا الزوائف الزنجاريه وهي ((exoU,proteaseIV,exoS,pilB,plcH, اظهرت النتائج وجود هذه الجينات بنسبة (0% , 21.6 % ,26.6 % , 46.6% ,53.3% ) تباعا وكانت هذه العزلات تمتلك exoU وبعظها exoS وعلى اساسها صنفت العزلات على انها اما سامه او ضاريه . بينت الدراسة ان هناك بعض الطفرات قد حدثت في تسلسل القواعد النتروجينية للعزلات قيد الدراسة وكانت من نوع طفرات الاستبدال والادخال, كذلك تبين من مطابقة تسلسل القواعد النتروجينية المترجم مع تسلسل الاحماض الامينية الاصلي للجين لم يكن للطفرات تاثير على ناتج الترجمة . | A total of (60) clinical isolates of gram negative bacteria primary identified as Pseudomonas aeruginosa were obtained from different teaching hospitals in Baghdad ; Ibn - El Balady , Baghdad teaching hospital , Burn hospital and Teaching laboratory in Medical city. During the period between July 2013 till December 2013. The source of these isolates were as follows : (22) isolates collected from burn infections ,(18) isolates from wound infections, (9) isolates from sputum taken from patients suffering from respiratory tract infection,(6) isolates from blood,(2) isolates from urinary tract infections(UTI), and the last (3) isolates from ear swab. The isolates were initially identified by culturing on MacConkey agar,Blood agar, Pseudomonas agar then diagnosed by performing some biochemical tests (catalase and oxidase) followed by Genotypic diagnoses by PCR Which was performed by housekeeping gene (rpsL gene). The results confirm that all the 60 isolates were P.aeruginosa. Sixty P.aeruginosa isolates were tested for 12 antibiotics by using agar diffusion method , the results showed high resistance against Tetracycline 100%, Ceftazidime100%,Cefoxitin100%,Ceftriaxone85%,Cefepime,83.3%,Amoxicillin/Clavulanic acid 81.6%, and Chloramphinicol 78.3% moderate resistance against ,Pipracillin 51.6% , and low resistance against Tobramycin 33.3% , Norfloxacin 31.6%,Azithromycin 31.6% and Ciprofloxacin 28.3%. The ability of the isolates to produce biofilm were tested using congo red plate method and Tissue culture plate method(TCP). Results showed that TCP method is a more quantitative and reliable method for the detection of biofilm this method show that 6.6% isolates were not biofilm producers while other isolates produce it in different degrees . Multiplex polymerase chain reaction (PCR) technique was performed using specific primers targeting the specific sequences of Quorum sensing genes (lasR,lasI , rhlR,rhlI) .The results showed that 81.6% positive for one or more QS genes while only 18.3% were negative for all these genes. Polymerase chain reaction (PCR) technique was used to screened five virulence factors (exoU,proteaseIV,exoS, PilB , PlcH) results showed percentage were (53.3% , 46.6% , 26,6 % , 21,6 % , 0% ,) positive isolates respectively and these isolates contain either exoU or exoS and according to this have been classified into cytotoxic and invasive. Determination of nucleotides sequence for QS genes was revealed there was some mutations occurred which included substitution and insertion. From the other side results of identities of translated - nucleotides sequence with original sequence of amino acids revealed that there were no effect of mutations on translation product.

تاثـير الاس الهيـدروجيني على التركيز المثبط الادنى للمضادات الحيوية ضد Escherichia coli == Effect of pH on minimum inhibitory concentration of antibiotics against Escherichia coli

Author name: داليا سـلمان عــبد ســبع
Supervisor name: محمد فخري احمد | مروان صالح محمد النمر
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تهدف هذه الدراسة الى معرفة تاثير الاس الهيدروجيني وتاثير تحمل الجهد على بكتريا الايشريشيا القولونية ( Escherichia coli ) بوجود وبغياب مجموعة من المضادات الميكروبية .امكن الحصول على ( 10) عزلات من بكتريا الايشريشيا القولونية ، من عينات الادرار والخروج لمرضى ارتادوا وحدة المايكروبايولوجي للعناية الطبية في مستشفى اليرموك التعليمي وشخصت مجهريا" وكيموحيويا" قبل زرعها في وسط نقيع الصويا الثلاثي بوجود وبغياب كل من المضادات الثمانية الاتية : ampicillin ,amoxicillin , gentamicin , amikacin ,cefotaxime , ceftriaxone , cefepime , and ciprofloxacin.تم التحري عن حساسية العزلات تجاه تلك المضادات بقيم مختلفة للاس الهيدروجيني وبوجود تراكيز مختلفة من مادتي المانيتول والبيروكسي نتريت ، اذ اظهرت النتائج مقاومة عزلات البكتيريا العالية لمعظم المضادات قيد الدراسة ، وان وسط النمو ذا الاس الهيدروجيني 5.1 ادى الى تثبيط نمو البكتريا بشكل كامل ، في حين ادى وسط النمو القاعدي الى استقرارية المضادات .اظهرت جميع العزلات مقاومتها لمضاد السبروفلوكساسين عند اسهيدروجيني ≥ 8.4 , كما وادى اي تغيير في قيمة الاس الهيدروجيني للمحلول الى فقدان هذا المضاد لفعاليته في الوقت الذي لم تفقد مجموعتي السيفالوسبورينات والامينوكلايكوسيدات فعاليتهما بالوسط القاعدي , ولوحظ ذلك من خلال اختبار حساسية العزلات تجاه هاتين المجموعتين في اس هيدروجيني يصل الى 9.9 , ولوحظ ايضا"ان السيفالوسبورينات كانت مستقرة عند اس هيدروجيني تراوح ما بين ( 4 - 8.8 ) .بالنسبة لتاثير المانيتول على البكتريا المعزولة ، اظهرت نتائج الدراسة ان البكتريا لا تستطيع تحمل وجوده بتركيز ≥ 2% في الوسط , كما ان مجموعتي السيفالوسبورينات والامينوكلايكوسيدات كانت مستقرة بوجود المانيتول بتركيز < 2% ، وبالنسبة لتاثير البيروكسي نتريت على نمو البكتريا المعزولة وجد انه ادى الى تثبيط نمو البكتريا بنمط يعتمد على تركيزه بالوسط كما ووجد ان هناك تازرا" بينه وبين المضادات المستخدمة عندما كان بتركيز (89.8) مايكرومول .اظهرت نتائج هذه الدراسة اهمية الاس الهيدروجيني لوسط النمو بالنسبة لمضادات ميكروبية معينة، كما وادت اضافة مواد معينة مثل المانيتول او البيروكسي نتريت الى تحفيز قابلية الكائن المجهري على المقاومة او تثبيط النمو، وبذلك يمكن ان تكون هذه المواد مؤازرة اوذات تاثير مضاد. | This study was designed to investigate the effect of pH and stress tolerance on the susceptibility of E. coli to eight antibiotics. A total of 10 isolates were recovered from urine and stool samples of patients who sake Al - Yarmouk Teaching Hospital, Unit of microbiology for a medical management. The isolated microorganisms were identified, microscopically and biochemically. The colonies of cultured microorganism were then sub - cultured in tryptic soy broth in microtitre plate in the presence or absence of each of the following antibiotics; ampicillin, amoxicillin, cefotaxime, ceftriaxone, cefepime gentamicin, amikacin, and ciprofloxacin. The susceptibility of E.coli towards these antimicrobials was examined at different pHs ; and concentrations of mannitol or peroxynitrite. The results showed that E.coli whether isolated from urine or stool, was multi - drug resistant. Growth of E.coli was completely inhibited in the tryptic soy broth at pH 5.1 in presence or absence of the antibiotics. The alkaline growth medium interferes with stability of the drugs incubated with E.coli. Ciprofloxacin lost its antibacterial activity at pH ≥ 8.4 and allowed E. coli to be a resistant . On the other hand, the cephalosporins and aminoglycosides were not degrade by the alkaline medium. This was evident through observation of the susceptibility of E. coli to these antibacterial agents at pHs up to 9.9. E.coli cannot tolerate presence of mannitol in the growth medium at concentrations of ≥2%. Cephalosporins and aminoglycosides were stable in presence of mannitol at concentrations of less than < 2%. Cephalosporins were stable at a wide range of pH (4.0 - 8.8), while ciprofloxacin had lost its stability at any changes in pH of the medium. Peroxynitrite inhibited the growth of E. coli in a concentration dependent manner rather than it induced stress and allowed the E. coli to tolerate. Furthermore, a concentration of 89.8 µM peroxynitrite produced synergism effect to all antibiotics applied in this work.Results of study explored importance of adjusting pH of growth media for specific antibiotics. Also, the addition of certain substances, like mannitol or peroxynitrite, that induced stress in microorganism may suppress the growth, rather than rendering the microorganisms, to be antimicrobial resistant. Moreover, these substances exert synergism rather than antagonism effect

دراسـة مقاومة انواع من البكتريا المعزولة من المرضى لبعض المضادات الحياتية والمركبات الكيمياوية الجديدة == STUDY THE RESISTANCE OF BACTERIAL SPECIES ISOLATED FROM PATIENTS TO THE SOME ANTIBIOTICS AND NEW CHEMICAL COMPOUNDS

Author name: خانزاد خضر جرجيس
Supervisor name: عادل كمال خضر | سوزان سعدي حسين
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت 488 عينة ماخوذة من مختلف انواع الاصابات من مختبر الصحة العامة المركزي ومستشفيات محافظة اربيل . اخذت 100 عينة من اشخاص لهم التهابات المجاري البولية، وجمعت 388 مسـحة من التهاب الجروح، الحروق، الاذن، اللوزتين، ملتحمة العين، المهبل والانف . استنبتت هذه العينات على وسطي اكار الدم وماكونكي اكار للتحري عن وجود البكتريا المسـببة للاصابات المتنوعة وتشخيصها . بلغ عدد العينات الموجبة للزرع البكتيري 321 (% 65.77)، فيما كان عدد العينات السالبة 167 (% 34.22)، شــخصت العزلات النامية مظهريا وزرعيا وخواصها الكيموحيوية اذ اهملت جميع انواع البكتريا النامية باســـتثناء S. aureus ، S. epidermidis ، P .aeruginosa ، E. coli . اظهرت نتائج التشخيص البايوكيميائي وجود 67 عزلة (% 20.87) منها تعود الى نوع S. aureus من خلال ايجابيتها لفحص الكاتليز وفحص انتاج انزيم مجلط البلازما، وتخمير سـكر المانيتول، اختزال التليورايت وانتاج انزيم محلل الدنا DNase المقاوم للحرارة كما واظهرت نتائج التشـــخيص وجود 59 عزلة (% 18.38) منها تعود الى E. coli اذ تميزت هذه البكتريا عند تنميتها على وسط EMB (Eosin - methylene blue agar) بمستعمراتها ذات بريق معدني اخضر وتنمو على اكار الماكونكي بشكل مستعمرات وردية لكونها مخمرة لسكر لاكتوز اضافة الى اختبار IMVC كانت موجبة لاختبار الاندول واحمر المثيل فيما كانت سالبة لفحص الفوكس بروسكاور ولم تتمكن بكتريا E. coli من اسـتهلاك السترات فقد اعطت فحصا سالبا لليوريز والاوكســيديز وكذلك وجود 50 عزلة (% 15.57) P. aeruginosa الموجبة لفحص الاوكسيديز والكاتليز واختبار استهلاك السترات وسالبة لاختبار انتاج اليوريز.واظهرت وجود 21 عزلة (% 6.54) تعود الى S. epidermidis منتجة لانزيم الكاتليز وغير منتجة لانزيم مجلط البلازما وانزيم تحلل الدنا DNase وغير مخمرة لســكر مانيتول، ، واستعمل نظام ابي API STAPH ، API 20E لدعم هذه النتائج .شملت الدراسة فحص حساسية العزلات تجاه 33 مضادا حياتيا و9 مركبات كيمياوية . اظهرت بكتريا S. aureus مقاومة عالية للمضادات Penicillin ، Ampicillin، Piperacillin ،Carbenicillin ، Augmentin ، Tetracycline اذ بلغت نسبتها (,90, 100 ,90 80 , 6050 ,) %على التوالي واظهرت هذه العزلات مقاومة اقل للمضاد Rifampicin اذ بلغت نسبتها 5% واظهرت هذه البكتريا مقاومة منخفضة للمضادات Oxacillin ، Cloxacillin ، Imipenem , Amikacin , Ciprofloxacillin , Pefloxacillin , Sulphamethoxazole Trimethoprim اذ بلغت نســـــبتها % 15 على التوالي في حين حصلت استجابة مختلفة للمضادات الحيوية الاخرى . بينت النتائج ان جميع العزلات S. aureus كانت % 100 حساسة لمضاد Vancomycin ، Novobiocin ، Fusidic acid .اظهرت بكتريا S. epidermidis مقاومة عالية للمضادات Piperacillin, Penicillin G , Doxycycline hydrochloride, Ampicillin Carbenicillin ,Tetracycline, Augmentin, اذ بلغت نسبتها % (50,60,70,70,80,90, 100) .اظهرت هذه العزلات مقاومة اقل للمضادات Imipenem Ciprofoxacillin,Rifampicin , ,Pefloxacillin, Fusidic acid , اذ بلغت نســـبتها % (5,10,10,10,10) على التوالي واظهرت جميع عزلات بكتريا S. epidermidis حساسيتها للمضادات Vancomycin , Novobiocin والتي بلغت نســـبتها % 100. اظهرت عزلات P. aeruginosa مقاومة عالية بلغت نسبتها % 100 للمضادات Penicillin G , Ampicillin , Augmentin , Oxacillin , Cloxacillin , Cephalothin , Cephalexin , Cefoxitin , Streptomycin ,Tetracyclin , Doxycycline hydrochloride , Chloramphenicol , Erythromycin , Rifampicin , Nitrofurantoin وSulphamethoxazole Trimethoprim.اظهرت عزلات هذه البكتريا مقاومة اقل للمضادات Amikacin Ciprofloxacillin, Pefloxacillin, Imipenem, Aztreonam,, اذ بلغت نسبتها % (15,20,20,20,25) , بينما اختلفت العزلات في نسبة مقاومتها للمضادات الحيوية الاخرى . اظهرت عزلات E. coli مقاومة عالية للمضادات Penicillin G , Cloxacillin,Oxacillin , Ampicillin Erythromycin, Augmentin, اذ بلغت نسبتها % (90,95,95, 100, 100,100) , اظهرت عزلات هذه البكتريا مقاومة اقل للمضادات ,Gentamicin Ciprofoxacillin , Imipenem Aztreonam , , ,Amikacin,Nitrofurantoin,Pefloxacillin اذ بلغت نسبتها%(5,10,10,10,10,15,15) على التوالي في حين اختلفت العزلات في نسبة مقاومتها للمضادات الحيوية الاخرى . تم دراسة مركبات مشتقة من - 5,5 ثنائي فنيل - 4,2 - ايميدازوليدين دايون (فنتيون) من خلال اجراء تفاعلات قواعد مانيخ مع البارافورمالديهايد والامينات الاولية المعروفة باستخداماتها الدوائية . واختبرت هذه المركبات الكيميائية الجديدة التســعة كمواد مضادة للبكتريا Antibacterial agent باستخدام خمسة تراكيز (0.2,0.1,0.08,0.06, 0.04 ml) . بينت نتائج التحليل الاحصائي ان افضل طريقة هي طريقة التخفيف بالمرق broth dilution وتليها طريقة تخفيف بالاكار . فقد تم التوصل الى وجود فروقات معنوية (P< 0.05) ، بين طريقة التخفيف بالمرق وكل من الطريقتين انتشار القرص والحفرة .جميع المركبات الكيمياوية المحضرة لها تاثيرات قاتلة على كل من S. aureus وS. epidermidis باســـتثناء V,VII حيث وجد ان لهما تاثيرا مثبطا وليـس قاتلا في التراكيز (0.2,0.1,0.08,0.06,0.04ml) في حين اظهرت المركبات I، IV، V، VIII،IX تاثيرات قاتلة على بكتريا P. aeruginosa ، كما وجد ان المركبات II،III، VI، VII لهم تاثيرات مثبطة على هذه البكتريا في التراكيز المذكورة نفسها، كانت جميع المركبات الكيمياوية لهم تاثيرات قاتلة على بكتريا E. coli وفي جميع التراكيز المستخدمة .

الخصائص الحيوية والجزيئية والفعالية ضد الميكروبية للنايسين المنتج من قبل بكتريا subsp. lactis Lactococcus lactis المعزولة من الحليب الخام == Biological, Molecular characteristics and antimicrobial activity of Nisin produced by Lactococcus lactis subsp. lactis Isolated from Raw Milk

Author name: خالد اسماعيل عزيز
Supervisor name: رجوة حسن عيسى الربيعي | زيرك فقى احمد عبد الرحمن
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تمت جمع مائة وخمسة واربعون نموذجا من الحليب الخام خلال فترة ما بين تموز الى التشرين الثانى لعام 2013 فى مزارع تربية المواشي لمحافظة اربيل ودهوك .اسفرت النتائج عن الحصول على 45 عزلة من بكتريا L. lactis subsp. lactis تمت تشخيص هذه العزلات باستخدام الصفات المجهرية , المظهرية , البايوكيميائية ,API 20E SYSTEM بالاضافة الى تقنية الـ PCR . اختبرت فعالية العزلات لبكتريا L. lactis subsp. lactis تجاه ثلاثه عشر نوعا من المضادات الحيويه وتباينت العزلات فيما بينهما من حيث استجابتها لاختبار الحساسية وعدد منها مقاومة كالاتي : Cephalothin, Ampicillin, Amoxicillin/ Clavulanic acid, Sulfamethoxazole/Trimethoprim, Cefotaxime, Clindamycin, Ceftriaxone, Nitrofurantoin, Gentamycin, Vancomycin, Ciprofloxacin, Chloramphenicol, and Imipenem.، ونسبة المقاومة كالاتي : 95.55%, 93.33%, 93.33%, 91.11%, 84.44%, 77.77%, 71.11%, 62.22%, 53.33%, 40%, 35.55, 24.44%, 2.22%. على التوالي.اظهرت نتائج جميع العزلات فعالية عالية ضد خمسة انواع من البكتريا المرضية وهى : E. coli, B. subtilis, P. aeruginosa, C. perfringes and S. aureus باستعمال تقنية طريقة الانتشار بالحفر. اظهرت العزلة 41 و15 فعالية عظمى (16mm) (20mm) ضد بكتريا S. aureus وB. subtilis بينما اظهرت العزلة 20 فعالية كبيرة (13mm) ضد بكتريا aeruginosa P.. عموما فان البكتريوسين لجميع العزلات المذكورة كانت فعالة ضد البكتريا الموجبة والسالبة لصبغة كرام .ايضا تم استخدام النايسين النقي ضد خمسة انواع من البكتريا المرضية واظهرت النتائج بان مناطق التثبيط كانت 18، 22، 14، 13 و15 ملم ضد كل من S. aureus، B. subtilis، C. perfringens، E. coli وP. aeruginosa على التوالي.درست تاثير الاس الهايدروجينى،الحرارة والاشعة الفوق بنفسجية على فعالية نايسين للعزلات 10، 26 و42. اظهرت النتائج بان مستخلص نايسين لعزلة L42 كانت اكثر فعالية عند الاس الهايدروجينى 2.5 والحرارة - 4 م ضد البكتريا المرضية. لم يظهر مستخلص النايسين اى فعالية ضد البكتريا المرضية عند تعريضه للاشعة الفوق بنفسجية مبينا التاثير السلبى لهذه الاشعة على فعالية البكتريوسين.تم اختيار العزلة اكثر مقاومة للمضادات الحيوية (L42) لاجراء عملية التحول وذلك لتحديد مواقع الجينات مانحة المقاومة للمضادات الحيوية باستخدام عملية التحول الوراثي باستعمال بكتريا coli DH5 - α E. الخالية من البلازميدات مع البلازميد المنقى من العزلة L42. تم اجراء عملية التحول بنجاح واظهرت النتائج بان جينات : Chloramphenicol, Nitrofurantoin, Cefotaxime, and Vancomycin كانت واقعة على البلازميد بينما البقية كانت واقعة على الكروموسوم. تم تحديد التركيز المثبط الادنى للنايسين واظهرت النتائج بان MIC للنايسين بالنسبة لبكتريا aureus S. كانت 400µg/ml بينما لبكتريا coli E. كانت 500µg/ml. استخدمت MIC للنايسين كعامل تحييد للسيطرة على جينات مانحة المقاومة للمضادات الحيوية لنوعين من البكتريا المرضية وهى aureus S. وcoli E.. كشفت النتائج بان الجينات منحت المقاومة لـ AMP, OXA, TET, C, CTX, SXT, AK, CFM, تم تحييدها بنسبة 61.5% بينما فى بكتريا coli E. تم تحييد الجينات لـLEV, MEL, NOR, and SXTبنسبة 31%. تم دعم النتائج عمليتي التحول والتحييد باستخدام تقنية الترحيل الكهربائى للهلام. | In this study a total of one hundred forty five raw milk samples were collected during the period of (July to November, 2013) from different fields in Erbil and Duhok province. Screening revealed that 45 out of 145 samples of raw cow milk (31%) were L. lactis subsp. lactis. Characterization of these selected isolates were carried out using morphological, microscopical, biochemical characteristics, API 20 system and further confirmation were achieved by PCR assay.Antibiotic sensitivity test performed for L. lactis subsp. lactis against thirteen antibiotics which include Ampicillin (AMP), Amoxicillin/ Clavulanic acid (AMC), Imipenem (IMP), Gentamycin (GM), Sulfamethoxazole/Trimethoprim (SXT), Cephalothin (CEP), Clindamycin (CLIN), Nitrofurantoin (F), Ciprofloxacin (CIP), Ceftriaxone (CRO), Chloramphenicol (C), Cefotaxime (CTX), and Vancomycin (VAN). The isolates appeared to be varied in their resistance, the number and resistance percent for antibiotics used CEP, AMP, AMC, SXT, CTX, CLIN, CRO, F, GM, VAN, CIP, C, and IMP were as follow 95.55%, 93.33%, 93.33%, 91.11%, 84.44%, 77.77%, 71.11%, 62.22%, 53.33%, 40%, 35.55%, 24.44%, and 2.22% respectively.All supernatants were isolates exhibited marked activity against five pathogenic bacteria includes S. aureus, B. subtilis, C. perfringens, P. aeruginosa, and E. coli using agar well diffusion method. Isolate 15 and 41 exert maximum activity (20 mm) and (16 mm) against B. subtilis and S. aureus. Whereas isolate 20 showed highest activity (13 mm) against P. aeroginosa. Generally, all aforementioned isolates were active against gram positive and Gram negative bacteria. In addition, the effect of pH, temperature and UV light were studied on nisin activities of L10, L26 and L42 against some pathogenic bacteria. The results showed that nisin extract of L42 displayed highest activity at pH 2.5 and temperature at - 4 °C against pathogenic bacteria under study. Under UV light wavelength all nisin showed low or no activity against different pathogenic bacteria selected in this study.Also a pure nisin was used against five pathogenic bacteria and the results shows that the inhibition zones were 18, 22, 14, 13 and 15 mm against each of S. aureus, B. subtilis, C. perfringens, E. coli and P. aeruginosa respectively.One highly resistance isolate was chosen (L42) for transformation test to determine the location of the antibiotic resistance genes by genetic transformation process using the laboratory strain E. coli DH5 - α with plasmid DNA purified from this isolates. The transformation process conducted successfully and the results showed that the resistance genes for F, C, CTX, and VAN were located on plasmid DNA. While for others were located on chromosomal DNA.Minimum inhibitory concentrations were tested for nisin and the results revealed the MIC of nisin for S. aureus was 400 µg/ml while for E. coli was 500 µg /ml. MIC of nisin was used as curing against to control the antibiotic resistance genes in two pathogenic bacteria represented by E. coli and S. aureus. The results showed that the genes encoding resistance to AMP, OXA, TET, C, CTX, SXT, AM, and CFM were cured and the percentage of curing was 61.5%. Whereas for E. coli the gene of LEV, MEL, NOR, and SXT were cured with 31%. The above results of both transformation and curing process were supported with gel electrophoresis.

تثبيط تكوين biofilm لبكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة من سرطان القولون والمستقيم والتهاب القولون التقرحي باستخدام جسيمات النانو لاكسيد الحديد المتراكبه

Author name: حنان طارق صبحي
Supervisor name: خضر حسن علي الجوراني
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تعد بكتريا Pseudomoas aeruginosa ممرضة انتهازية تنتشر الاصابة بها في المرضى الذين يعانون تدهورا مناعيا ان دور هذه البكتريا في التهاب القولون التقرحي وسرطان القولون - المستقيم لم يتم التطرق اليه.وهذا ماتتطرق اليه هذه الدراسة في جزء منها يعاني مرضى التهاب القولون التقرحي وسرطان القولون - المستقيم تغير في التعبير عن مستضدات مجموعة الدم ABO ومجموعة دم لويسLewis في ميوسين الخلايا الظهارية القولونية وهذا ما يوفر بيئة لالتصاق البكتريا . تؤشر الدراسة الحالية دور الاستيطان البكتيري لهذه البكتريا لنسيج القولون في كلا المرضين وارتباط ذلك بمجموعة الدم ومجموعة دم لويس اضافة الى دور مجموعة دم لويس في المشاركة في انشاء الغشاء الحيوي البايوفيلم biofilm لهذه البكتريا .تشير نتائج عزل بكتريا Pseudomoas aeruginosa انه من بين 38 اصابة تم عزل البكتريا بنسبة 23% p=2.6×10 - 6 , من مرضى السرطان اضافة الى عزلها بنسبة p=7.35 ×10 - 5 , 25% من مرضى التهاب القولون التقرحي. اظهرت نتائج تنميط مجموعة لويس بوجود عالي لمجموعة دم لويس بي Leb (78.9%) p=3.45×10 - 12 في المرضى مقارنة بالسيطرة من جانب اخر اثر ارتفاع نسبة مجموعة الدم Aفي المرضى الا ان التحليل الاحصائي لم يظهر تغيرا معنويا .P=0.1 (×̅=45%)وفي جانب دراسة تكوين العزلات للغشاء الحيوي بارتباطها في الميوسينات اللعابية المغطية لحفر الاطباق فقد اكدت النتائج ان جميع العزلات كانت لها القدرة على تكوين البيوفلم مع زيادة كتلة بيوفيلم على لعاب مجموعة الدم لويس للافراد الاصحاء المغطية ل 96 حفرة .microtitration plate وتغاير تكوين العزل للرقيق الحيوي اعتمادا على نوع الضرب المعزول وقد اثر التركيز المثالي المغطي coating concentration للميوسينات اللعابية بان تخفيف1\16للعاب.وفي جانب اخر من الدراسة فقد تم تحضير الجسيمات النانوية وتم ربطها بنضائد واستعملت تلك في مسح قابلية تلك التحضيرات على تثبيطها للغشاء الحيوي حيث جرى تحضير الجسيمات النانوية لاوكسيد الحديد (IONP) باستخدام طريقة coprecipitation وفي هذا الجانب فقد تم تقدير حجم الجسيمات النانوية naked iron oxide باستعمال مجهرالقوة الذرية (Atomic Force Microscope) AFMوالتحليل الكيميائي للجسيمات النانوية باستخدام جهاز التحليل الطيفي بالاشعة تحت الحمراء FTIR) ) Fourier Transform Infrared Spectroscopy واتضح ان معدل قطرحجم الجسيمات لاكسيد الحديد النانوية 85.09 نانومتر في حين اظهرت التحضيرات النانوية - المنضدة Liganded - nanoparticles مايلي اكسيد الحديد النانوية المغلفة بالجتوسان (chitosan) متوسط قطر85.14 نانومتر. اكسيد الحديد النانوية المغلفة بالكلوكوزامين(glucosamine) متوسط قطر 89.71 نانوميتر بينما اعطت اكسيد الحديد النانوية المغلفة بعديد السكرايد البكتيري (polysaccharide) 107.20 نانومتر. تم تحديد احجام للجسيمات النانوية - الميوسين ايضا.حيث اظهرت الجسيمات النانوية - الميوسين Lewis a بمتوسط قطر 91.46 نانوميتر ، الجسيمات النانوية - الميوسين Lewis b 93.18 نانوميتر بينما الجسيمات النانوية - الميوسين - b - Lewis a الفارزة كان متوسط قطرها 80.23نانوميتراما الجسيمات النانوية - الميوسين - b - Lewis a الغير فارزة كان متوسط قطرها 103.46نانوميتر.وقد اظهرت نتائج التحليل الطيفي بالاشعة تحت الحمراء (FTIR) على قابلية ارتباط النضائد بالجسيمات النانوية بين اكسيد الحديد والجتوسان، الكلوكوزامين، عديد السكرايد البكتيري والميوسين اللعابي لمجموعة الدم لويس. حيث اظهرت الجسيمات النانوية لاكسيد الحديد ارقام موجية منخفضة بين 850 و400 سم - 1 قادمة من الاهتزازات للاصرة Fe - O بينما اعطى اكسيد الحديد النانوية المغلفة بالجتوسان امتصاص عند 1111 سم - 1 (COC) ، اختفاء الاصرة C - N وتغير الاصرة C - H من الموقع 2839 سم - 1 الى 3196 سم - 1, تغير الاصرة H - N من 1616 سم - 1 الى 1614 سم - 1.اما اكسيد الحديد النانوية المغلفة بالكلوكوزامين اظهرت اختفاء الاصرة C - N , تغير الاصرة C - O - C من الموقع1031سم - 1 الى1099 سم - 1 وتغير الاصرة H - N من 1616 سم - 1 الى 1541 سم - 1 وظهور مجموعة OH في الموقع 3377 سم - 1.وفي جانب اخر اظهرت اكسيد الحديد النانوية المغلفة بعديد السكرايد البكتيري ظهور الاصرة C - ONH2 في الموقع 1649 سم - 1 والاصرة N - H 1543 سم - 1. في حين اكسيد الحديد النانوية المغلفة بالميوسين اظهرت الجسيمات النانوية - الميوسين لويس Lewis a ظهور الاصرتين C= N,C= C في الموقع 1622 سم - 1, 1649 سم - 1 اما بالنسبة للجسيمات النانوية - الميوسين لويس Lewis b ظهور الاصرتين C= N, C=C في الموقعين 1612 سم - 1 , 1649 سم - 1 بينما الجسيمات النانوية - الميوسين لويس Lewis a - b - non secretor اظهرت الاصرتين C= N, C= C في الموقعين 1670 سم - 1 , 1647 سم - 1. الجسيمات النانوية - الميوسين لويس Lewis a - b - secretor اظهرت الاصرتين C= N,C= C في الموقعين 1627 سم - 1, 1651 سم - 1. وفي نتائج التثبيط للغشاء الحيوي للبكتريا فقد اوضحت النتائج ان النضائد النانوية لها فعل مثبط لتكوين الغشاء الحيوي . ففي هذا الجانب فان تعرض البكتريا لاكسيد الحديد النانوية ، اكسيد الحديد النانوية المغلفة بالجيتوسان ، اكسيد الحديد النانوية المغلفة بالكلوكوزامين ,اكسيد الحديد النانوية المغلفة بالميوسين بتركيز 100 ملغم \سنتيمتر مكعب لمدة 24 ساعة خفض انتاج الغشاء الحيوي وكالاتي : الجسيمات النانوية لاوكسيد الحديد اعطت اعلى نسبة تثبيط 52% بينما الجسيمات النانوية لاوكسيد الحديد - الجتوسان اعطت اعلى نسبة تثبيط 58%(p=0.5) , الجسيمات النانوية لاوكسيد الحديد - الكلكوزامين اعطت اعلى نسبة تثبيط 39%(p=0.1). الجسيمات النانوية لاوكسيد الحديد - الميوسين الغير فارزa - b - اعطت اعلى نسبة تثبيط 74% (p=6.8×10 - 3) وفي جانب اخر اعطت اكسيد الحديد النانوية المغلفة بعديد السكرايد البكتيري اعلى نسبة تشجيع بناء 75% (p=0.3).ان النتائج الاصلية المؤثرة في هذه الدراسة والمسجلة لاول مرة اظهرت ان التطبيقات المستقبلية للجسيمات النانوية المغطاة بالنضائد المحضرة في علاج الغشاء الحيوي لبكتريا P. aeruginosa يمكن اعتمادها كطريقة للقضاء على استيطان البكتريا في مرضى التقرح القولوني وسرطان القولون - المستقيم | Pseudomoas aeruginosa is an opportunistic pathogenic bacterium. The infection with the microorganism prevail in immunocompromised patients. The role of P. aeruginosa in ulcerative colitis and colorectal cancer is not studied and this part is dealt with this study. In this regard, Ulcerative colitis (UC) and colorectal cancer (CRC) patient change the expression of ABO and Lewis blood groups antigens in colon epithelial mucin structure and might furnish an environment for bacterial attachment. The present study aimed to pinpoint a role for P. aeruginosa in colonization of colon tissue in both diseases in relation to ABO and Lewis blood groups. In addition the involvement of Lewis blood group molecule in biofilm formation was investigated. In an another part of the study a specific liganded - nanoparticles prepared were screened for inhibition of such biofilm. Isolation of the bacteria from direct biopsy samples of UC and CRC indicated that, out of 38 cases collected, 9 isolates were found to be P. aeruginosa 6 (23%) p= 2.6×10 - 5 in colorectal cancer cases and 3 (25%) p= 7.35×10 - 6 in ulcerative colitis. Patient Lewis typing revealed that Leb prevailed among patient giving a (78.9%) results and was highly significantly (p=3.45˟ 10 - 12) compared with control (29.7%). Blood group (A) seem to be highly prevalent but not significant (p=0.193) in colorectal cancer and ulcerative colitis patients. All isolates from patients were able to form biofilm with increased biofilm mass on Lewis group saliva of normal individual coated on 96 - wells microtitration plate. The results were variable depending on bacterial strain. An iron oxide nanoparticle (IONP) was prepared using the method of coprecipitation and was used as carrier of different ligands. The naked and coated iron oxide nanoparticles were characterized using Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) and Atomic Force Microscope (AFM). Particle size for naked iron oxide (IONP) was 85.09 nm and for chitosan coated iron oxide nanoparticles the average diameter was 85.14 nm while glucosamine coated iron oxide nanoparticles was in 89.71nm. Bacterial polysaccharide coated iron oxide nanoparticles gave a size of 107.20 nm. Particle sizes for mucin - IONP composite were also determined. Lea - IONP was an average diameter 91.46nm, Leb - IONP was 93.18nm, Lea - b - secretor - IONP was 80.23nm and Lea - b - nonsecretor was in 103.46nm determined by AFM. The Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) analysis indicated successful binding between iron oxide and chitosan, glucosamine, polysaccharide and mucin Lewis groups glycans. Iron oxide nanoparticle showed low wave numbers between 850 and 400 cm - 1 coming from vibrations of Fe - O bonds.Chitosan coated iron oxide gave an absorption line at 1111 cm−1 (C - O - C) bond, and N - H bond at 1614 cm - 1, 1410 cm - 1, C - H bond and 3589 cm - 1 for O - H bond. Glucosamine coated iron oxide demonstrated a characteristic bands such as OH group at 3377 cm−1, C O at 1618 cm−1 and C - O - C at 1099 cm−1 and 1031cm−1 stretching vibration of C - O - C. Polysaccharide appeared to have 1649 cm - 1 (CONH2) and 1543 cm - 1 (N - H) band. While mucin Lea coated iron oxide demonstrated 1622 cm - 1 1649 cm - 1 C= N, C= C and mucin Leb coated iron oxide gave 1612 cm - 1 1649 cm - 1 C= N, C= C on the other hand, mucin Lea - b - secretor coated iron oxide showed 1627 cm - 1 1651 cm - 1 C= N, C= C and mucin Lea - b - non secretor coated iron oxide gave1647 cm - 1 1670 cm - 1 C= N, C= C The Fourier transform infrared spectroscopy study analyses confirmed the successful attachment different ligands to the surface of magnetic nanoparticles. In experiments of P. aeruginosa biofilms inhibition by liganded nanoparticles, it was seen that exposure of cells to naked iron oxide, chitosan coated iron oxide , glucosamine coated iron oxide and mucin coated iron oxide at concentrations of 100mg/ml resulted in reduced biofilm biomass in a 24h exposure time. In contrast, polysaccharide coated iron oxide nanoparticle showed increased biofilm formation (75%). Naked nanoparticles resulted in 52% inhibition in biofilm formation, chitosan coated nanoparticles resulted in (58%) inhibition p=0.5, glucosamine coated nanoparticles resulted in (39%) inhibition p=0.1, while mucin coated nanoparticles gave (74%) inhibition p=6.8×10 - 3 especially in non secretor Lea - b - coated nanoparticles and was the best liganded nanoparticles biofilm. Polysaccharide ̶ nanoparticle gave (75%) augmentation p=0.3. The inhibition was seems to be variable between saliva Lewis group tested. The novel findings presented in this study demonstrated the futuristic application of ligands coated iron oxide nanoparticles in treating P. aeruginosa biofilm formation could be an approach to eradicate P. aeruginosa infection which may lead to ulcerative colitis and colorectal cancer patients.

كشف عن الجينات المشفرة لانتاج البايوسين من بكتريا Pseudomonas aeruginosa ومقارنة الانتاج مع تكوين الغشاء الحيوي == Detection of Genes Encoding Pyocin Production of Pseudomonas aeruginosa and Comparison the Production with Biofilm Formation

Author name: حسين ظاهر عليوي التميمي
Supervisor name: رجوة حسن عيسى الربيعي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت50)) عزلة تابعة لبكتريا Pseudomonas aeruginosa من مستشفيات مختلفة في بغداد وخلال شهر ايلول لغاية شهر الكانون الاول لسنة (2014). تم اخذ هذه العزلات من مصادر مختلفة ثم شخصت بالاعتماد على الصفات المظهرية والمجهرية عند تنميتها على الاوساط التفريقية والاختيارية فضلا عن الفحوصات الكيموحيوية ولتاكيد نتائج الفحوصات الكيموحيوية استعمل نظام VITEK2 Compact كخطوة تكميلية. كما تضمنت الدراسة التصنيف المصلي لاجناس P. aeruginosa حيث تتعدد الانماط المصلية لهذه البكتريا حيث كانت ( : 11, O : 9, O : 8 and O : 7) بعد فحص العزلات. كان النمط المصلي (O : 11) الاكثر شيوعا وانتشارا من الانماط الباقية .كانت الانماطO : 8) وO : 9) اقل انتشارا ويعد النمط المصلي (O : 7)من الانماط حديثة الظهور. استعملت في هذه الدراسة طريقة Cross Streaking Method للكشف عن قدرة البكتريا على انتاج البايوسين حيث استخدم الوسط trypticase soy agar في هذه الطريقة, كانت العزلات المنتجة للبايوسين (P) قادرة على انتاج البايوسين عندمزارعت بشكل خط مستقيم وذلك بعد ان حضنت لمدة 24 ساعة وبدرجة37 مئوية, العزلة الدالة(I) فقد زرعت بشكل خط عمودي على العزلة المنتجة (P). ان غياب النمو البكتيري في الوسط الزرعي وعند نقطة التقاء الخطين دلالة على انتاج البكتريا للبايوسين, اذ لوحظ ان (16) عزلة من اصل (50)عزلة لها القدرة على انتاج البايوسين.واستعملت في هذه الدراسة طريقتين للتحري عن تكوين الغشاء الحيوي وهي طريقة Congo Red Method (CRA) وطريقة اطباق المعايرة Micro Titration Plate Method (MTP). اظهرت النتائج ان طريقة (MTP) كانت اكثر حساسية في التحري عن تكوين الغشاء الحيوي ، اذ لوحظ ان (19) عزلة من اصل (50) عزلة وبنسبة (38%) كانت مكونة للغشاء الحيوي وبشكل قوي ، في حين كانت (13) عزلة وبنسبة (26%) مكونة للغشاء الحيوي وبشكل ضعيف ، لكن كانت هنالك (18) عزلة وبنسبة (36%) غير مكونة للغشاء الحيوي. في حين بينت النتائج الخاصة بطريقة ال (CRA) ان (33)عزلة وبنسبة (66%) كانت قادرة على انتاج الغشاء الحيوي ، بينما كان عدد العزلات غير المكونة للغشاء الحيوي (17) عزلة وبنسبة (34%).اخضعت جميع العزلات (50 عزلة) للفحص بواسطة تقنية Polymerase Chain Reaction(PCR) لتشخيص الجينات المسؤولة عن انتاج البايوسين من نوع S باستخدام برايمرات خاصة لكل من (S1S2 pyocin) و(S3 pyocin). اظهرت نتائج تقنية الPCR بان (24) عزلة من اصل (50) عزلة وبنسبة تقدر ب (48%) تمتلك جين S1S2 (اذ كان ناتج تقنية البلمرة لهذا الجين بالحجم 287bp), لكن هنالك (21) عزلة وبنسبة (42%) تمتلك جين S3 (اذ كان ناتج تقنية البلمرة لهذا الجين بالحجم 451bp). | Fifty bacterial isolates of Pseudomonas aeruginosa have been collected from many hospitals in Baghdad include : Al - Kindy hospital, Ibn Al - baladi hospital, wound and burn hospital and Baghdad hospital in medical city during the period from Sep. to Dec. (2014). These isolates were collected from different sources. Then, they were diagnosed depending on morphological and microscopic properties when they were cultured on selective and differential culture media as well as by using biochemical tests, then in order to confirm the results of biochemical test VITEK2 compact have been used as a confirmatory step. Serotype classification of P. aeruginosa isolates showed multiple serotypes were existed (O : 11, O : 10, O : 9, O : 8, O : 7 and O : 5) for isolates which tested and (O : 11) serotype consider as more frequent serotype as (48%) whereas (O : 9, O : 5 and O : 8) are low spreading serotypes as (8%, 10% and 12%) respectively, while (O : 7) serotype as (4%) represent appearance of new serotype in comparison with local studies. In this study, pyocin production was detected by using cross streaking method, it was applied by using trypticas soy agar media. In this method producer isolates (P) which were able to produce pyocin were cultured as straight line and after incubation at 37Co for 24h., inducer isolates (I) were cultured on media as a vertical on the first line (producer isolates).Absence of bacterial growth on the media which were cultured by vertical line on producer bacteria leads to pyocin that produce by producer isolate prevent growth of inducer isolates, where it had been noted that (16) isolates out of (50) isolates have the ability to produce pyocin.Ability of bacterial isolates to produce biofilm was detected by two methods : these methods are Congo Red Agar method (CRA) and micro titration plates method (MTP). Results have been showed that (MTP) method was more sensitive to determine biofilm producers. It was noted that (19) isolates from (50) isolates as a (38%) were powerful biofilm producers while (13) isolates as a (26%) were weak biofilm formation, but there were (18) isolates as a (36%) were non - biofilm producers. On the other hand the (CRA) method appeared that (33) isolates as a (66%) were able to produce biofilm while non - biofilm formation isolates were (17) isolates as (34%).All fifty isolates were tested by Polymerase Chain Reaction (PCR) technique to detect gene responsible for S type pyocin by using primers specific for S1S2 pyocin and S3 pyocin. Results appear that there were (24) isolates from all (50) isolates (48%) contained the S1S2 gene, but there are (21) isolates also from (50) isolates as a (42%) contained S3 gene. The total number of isolates which contain genes encoding of S - type pyocin production (both S1S2 and S3 genes) were (31) isolates as (62%).The results have shown that there were (39) isolates as (78%) have the ability to produce pyocin by both phenotypic and genotypic methods (cross - streaking and PCR technique), while there were (43) isolates as (86%) able to produce biofilm by both CRA and MTP methods. Relationship between pyocin production and biofilm production were shown that all isolates have the ability to produce pyocin at least by one method were able to produce biofilm and at least by one method too

دراسة بكتيرية ومناعية للانظيم الحال للبروتين نوع - ا - المستخلص من بكتيريا Proteus mirabilis المعزولة من خمج السبل البولية == Bacteriological and Immunological Study of IgA - Protease Enzyme Extracted from Proteus mirabilis Isolated from Urinary tract infection

Author name: حسن علي حسين السعدي
Supervisor name: رجوه حسن عيسى الربيعي | جاسم طعمه حسين الخفاجي
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تضمنت هذه الدراسة اربعة محاور : 1 - العزل والتشخيص : تم عزل وتشخيص (40 ) عزلة من بكتيريا Proteus spp. من مجموع ( 200 ) عزلة بكتيرية من عينات اخماج مرضى السبل البولية في مستشفيي مدينة الطب والكندي للفترة بين 1/3/2004 لغاية 30/10/2004.اظهرت الفحوصات الكيميائية الحيوية ان 40 عزلة بكتيرية (20% ) من العزلات البكتيرية كانت تنتمي الى جنس Proteus والتي اشتملت على ( 37 ) عزلة تعود الى بكتيريا)P. mirabilis18.5%) ثلاث عزلات من بكتيريا Proteus vulgaris. عشر عزلات من بكتيريا P. mirabilis كانت منتجة للانظيم الحال للبروتين (IgA Protease)، بينما كانت عزلات بكتيريا Proteus vulgaris غير منتجة للانظيم المذكور ،واختيرت العزلة (Pm5)P.mirabilis كعزلة منتجة للانظيم.2 - تنقية وتوصيف الانظيم : اختير الوسط مرق ( Cysteine lactose electrolyte deficient ) كافضل وسط زرعي لانتاج الانظيم من بكتيريا Proteus mirabilis وتم تنمية العــــزلة البكتيريـــة( Pm5) في درجة حرارة( 37 )م باستخدام الحاضنة الهزازة وثم نقي الانظيم باستخدام الترسيب ملح كبريتات الامونيوم بتشبع(60%) وديلزته واستخدام هلام السيفادكس G - 100 Sephadex وكذلك المبادل الايوني DEAE - Cellulose، قيست الفعالية الانظيمية وتركيز البروتين للانظيم في كل مرحلة من مراحل التنقية ظهر منحني تنقية الانظيم باستخدام هلام السيفادكس وجود اربعة قمم بروتينية منها قمة واحدة للانظيم الحال للبروتين بينما اظهرت طريقة استخدام المبادل الايوني قمة واحدة فقط، تم حساب الفعالية الانظيمية وتركيز البروتين والفعالية النوعية والفعالية الكلية وعدد مرات التنقية والحصيلة الانظيمية فكانت على التوالي : (28.7)وحدة/مل،(0.15)ملغم/مل، (191.3)وحدة/ملغم، (258.3)، (5.5)،(9.9%) عند التنقية باستخدام المبادل الايوني وحسب الوزن الجزيئي للانظيم اذ كان (50)كيلودالتون باستخدام طريقة الترشيح الهلامي وكانت الفعالية المثلى للانظيم عند الاس الهيدروجيني 8 ودرجة الحرارة المثلى لانتاج الانظيم هي (37)م ودرجة الحرارة الملائمة لخزن الانظيم هي (4)م مقدارها وكان للايون (Ca+2) تاثير واضح في زيادة فعالية الانظيم بينما كان للـEDTA تاثير مثبط على فعالية الانظيم. 3 - الدراسة المناعية : - استعملت ثلاث مجاميع من الارانب لغرض التمنيع (ارنبين لكل مجموعة) حقنت داخل العضلة باستعمال تراكيز مختلفة من الانظيم(0.2،0.5،1)ملغم/مل فضلا عن ارنبين ضمن مجموعة السيطرة. اتبعت طريقتين (الاوكترلوني والترسيب باستعمال الانابيب) لغرض التحري عن الاضداد المتخصصة للانضيم الحال للبروتين في مصل الارنب، اظهرت النتائج عدم تكون الخط الترسيبي عند استعمال طريقة الاوكترلوني بينما تكونت حلقة ترسيبية واضحة باستعمال طريقة الترسيب بالانابيب. تم فصل امينوكلوبيولينات الارنب باستعمال المبادل الايوني DEAE - Cellulose بعد عملية الفصل ظهرت ثلاث قمم بروتينية على الطول الموجي 280 نانوميتر تم اختبار فعالية الانظيم في كل قمة مقارنة بالقمم المؤشرة في الادبيات، اظهرت القمة الثالثة حلقة ترسيبية واضحة باستعمال طريقة الترسيب بالانابيب بينما لم تظهر خط ترسيبي باستعمال اختبار الاوكترلوني وهذا قد يدلل على وجود تحت الانواع IgG المقاومة لفعالية الانظيم الحال للبروتين ضمن هذه القمة. تم دراسة تاثير التراكيز المختلفة للانظيم الحال للبروتين (0.2، 0.5، 1)ملغم/مل على بعض الخلايا المناعية وفق المعايير التالية : اذ ادى تركيز الانظيم(0.2)ملغم/مل الى زيادة في عيوشية الخلايا اللمفاوية وخلايا متعددة النوى (PMNs) وعلى التشكل الزهري التائي والبائي وعملية التهام الخميرة المقتولة في الزجاج واختزال صبغة النايتروبلوتترازوليم (NBT) ومعامل الانقسام الخيطي في الفئران. 4 - الدراسة النسجية : - درست التغيرات النسجية المختلفة في الارانب الممنعة بالانظيم الحال للبروتين بتركيز((0.2 ملغم/مل فكان له تاثيرا واضحا على انسجة الكبد، الرئة، الكلية والطحال،اذ لوحظ وجود مناطق تنكس استسقائي شديد في هيولي خلايا الكبد مع احتقان الوريد المركزي في نسيج الكبد، كمالوحظ وجود خلايا التهابية في جدران الاسناخ وضمور تجويف الاسناخ في الرئة، بينما توسعت محفظة بومان مع ارتشاح بعض الخلايا الالتهابية وخاصة حول الكبيبات في الكلية، اما في الطحال ازداد عدد الخلايا التائية حول الشرين المركزي كذلك الخلايا البائية في باقي اللب الابيض في الطحال نتيجة لتكاثرها وفرط نموها. | This study was included four aspects : - 1 - Isolation and ldentifcation : Forty isolates of Proteus spp were isolated and identified among (200) bacterial isolates from patients samples with urinary tracts infection in two hospitals (Baghdad and Al - Kindy). Biochemical tests were showed (20 %) from bacterial isolates were belonged for genus Proteus (37) isolates replied to Proteus mirabilis with (18.5 %) and (3) isolates were for Proteus vulgaris. Ten isolates from Proteus mirabilis were producing for IgA protease while P.vulgaris isolates were non - producing for this enzyme. Proteus mirabilis (Pm5 ) was selected among isolates efficient producing isolate(Pm5). 2 - Purification and characterization of the enzyme : Cysteine lactose electrolyte deficient medium was selected as the best medium for culturing for production the enzyme by P. mirabilis. Bacterial isolate (Pm5) to produce protease, then protease was purified by application Ammonium sulfate with (60 %) saturated, dialysis, Sephadex G - 100 filtration, and Ion exchange with DEAE. Cellulose. The enzymatic activity and protein concentration were measured in every stage of purification. Four peaks were appeared one of them belong to IgA - protease activity, while by using Ionic exchange method was appeared only one peak. Enzymatic activity, protein concentration, specific activity, total activity, no. of purification, and enzymatic yield were determined in Ionic exchange technique were : ( 28.7) U/ml,(0.15)mg/ml,(191.3)U/ml,(258.3),(5.5),(9.9%) respectively, molecular weight of the enzyme was performed by using gel filtration was (50)Kd. The optimum activity was at pH (8), the optimum temperature with the enzymatic activity was at (37) ˚C, the suitable temperature for storage with enzymatic activity was at (4) ˚C, the (Ca+2) Ion has on effect on increasing the enzymatic activity, while the EDTA was suppressed activity. 3 - Immunological study : Three groups of rabbits were used for immunization (two rabbits for each group in addition to control were injected intramuscular by different enzyme concentrations (0.2, 0.5, 1) mg/ml. Two methods (Ouchterlony and tube precipitation are used for checking up specific protease antibody in rabbit serum. Results showed no precipitin line between enzyme as antigen and serum in (Ouchterlony) while there was clear ring of precipitin was formed in the second method. Rabbit immunoglobulines were separated by using DEAE - Cellulose results showed three peaks protein at (280) nm wave length absorbency, enzyme activity of each peak was tested. In comparing these peaks with standard rabbit immunoglobulines. The third peak was tested against IgA - protease by using tube precipitation test result showed precipitation ring. This result indicated that this peak may include IgG subclasses which are resist protease activity while other peaks were opsonized by the enzyme. The effects of the IgA protease concentration (0.2, 0.5,1) mg/ml on immune cells were studied according the following parameters : the effect of the enzyme on immune and (PMNs) cells, T, B - rosette, phagocytosis in vitro, reduction of Nitroblue tetrazolium, and Mitotic index in Mice, (0.2) mg/ml of the enzyme has an effect on induction activity of T, B - rosette, phagocytosis in vitro, reduction of Nitroblue tetrazolium, and Mitotic index in Mice. 4 - Histological aspect : Different pathological changes were shown on rabbit’s tissues (liver, lung, kidney and spleen) which were immunized with IgA protease (0.2)mg/ml. In liver great hydropic degeneration was noticed in the cytoplasm in addition to present an with congestion of central venule, inflammatory cells in the alveolar walls and alveolar cavity atrophy in lung, enlargement of Bouman s capsule with infiltration of phagocytes around glomerulus was shown in kidney, while in spleen T cells around central arteriole as well as B cells in other white pulp were increased as a result of proliferation .

تاثـيــر فعالية الانتيروسين المنتج من بكتريا faecium Enterococcus على بعض البكتريا المرضية المعزولة من مصادر مختلفة == Activity effect of enterocin produced from Enterococcus faecium on some pathogenic bacteria isolated from different sources

Author name: حسام سامي عويد الشمري
Supervisor name: خليل مصطفى خماس
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تـتـناول هــذه الـــدراســة تاثـيـر الانتيـروســـين المنتــج بــواســطــة بكــتــريا E.faecium ضـــد بــعــض البكتــريا الــمـمـرضــة المـتـواجـــدة بكثرة في الحـليب ومشتقاته. فقد تم لهذا الغـرض جمع 382عينة من اطفال يعانون حالات اسهال والتهاب السبيل البولي والحليب الخام لعـزل بكتريا E.faecium وتم تشخيص العزلات بالفحوصات الكيموحيوية وتاكيد تشخيصها باستعمال منظومة فايتك 2 . فضلا عن ذلك فقـد تم جمع 50 عينة لعـزل بكتريا Listeria monocytogenes و66 عينة لعزل بكتريا Salmonella typhimurium من الحليب الخام ومشتقاته وتم تشخيصهما باتباع الفحوصات الكيموحيوية وتاكيد التشخيص باستعمال Api Listeria وApi - 20Eاضافة الى التنميط المصلي لبكتريا Salmonella typhimurium . تم تقصي انتاج الانتيروسين المنتج بواسطةE. faecium باستعمال طريقتي اقراص الاكار والانتشار في الحفر , ونقي الانتيروسين باستعمال الترسيب بسلفات الامونيوم والفصل بكحول البيوتانول , كما تم الكشف عن حساسية البكتريوسين المنتج لمجموعة واسعة من الانزيمات الحالة للبروتين والدهون وبعض الانزيمات الاخرى .فضلا عن ذلك فقد تمت دراسة تاثير الحرارة والرقم الهيدروجيني على البكتريوسين المنتج , وتم اختبار تراكيز مختلفة من المايتومايسين - سي لحث الانتيروسين .اختبرت الحساسية للمضادات الحيوية لعزلات بكتريا اللستيريا والسالمونيلا والمكورات المعوية باستخدام طريقة كيربي - باور .يمكن تلخيص النتائج التي تم الحصول عليها بالاتي : كانت نسبة عـزل E. faecium 7.59)%) من مجموع 382 عينة , اما نسبـة عـزل Listeria monocytogenes 10)%) من مجموع 50 عينة , اما نـسبـة عـزل Salmonella typhimurium فقد كانت .06)6%) من مجموع 66 عينة . اظهـر الانتيروســين المنتـج بواســطة E. faecium طـيفا واسعا من التاثير ضـد البكتريا الاختبار المـوجبة والسالبة لصبغـة غــرام التي عددها 8 وبضمـنها Listeria monocytogenes وSalmonella typhimurium . اظهر الحث بالمايتومايسين - سي )بتركيزي 1.5 و2 مكغم/ مل( انتاجا عاليا للانتيروسين . ادت تنقية الانتيروسين جزئيا باستعمال الترسيب بنسبة 80 % الى اعطاء اعلى نتيجة عندما بلغت 2.225 وحدة / مكغم بروتين , اما الفصل بكحـول البيوتانول فقد اعطى محصولا وصــل الى 0.57 وحدة / مكغم بروتين . ادت معاملة الانتيروسين بالانزيمات وتلك الحالة للبروتين حساسية الانتيروسين تجاه هذه الانزيمات باستثناء انزيمات Lipase وCatalase وα - amylaseو Lysozyme . اظهـرت تجارب المعاملة بالحرارة مقاومة الانتيروسين للحرارة وحتى عند121ºC لمدة 20 دقيقة , في حين كان مدى الاس الهيدروجيني له 4 - 9 .اظهرت تجارب الحساسية للمضادات الحيوية ان Enterococcus faecium كانت حساسة الى 7 مضادات حيوية . وكانت بكتريا Listeria monocytogenes مقاومة الى 9 مضادات حيوية وبكتريا Salmonella typhimurium مقاومة الى 4 مضادات حيوية .امكن الحصول على النتائج وكما يلي : انتجت عزلات Enterococcus faecium الانتيروسين بكميات واطئه فيما امكن حثه باستعمال المادة الحاثة المايتومايسين - سي , وامكن تنقيتها جزئيا باستعمال مرسبات البروتين . اتصف الانتيروسين المنتج من هذه البكتريا بطيف واسع النطاق من التاثير ضد البكتريا الموجبة والسالبة لصبغة غرام ولاسيما تلك التي تلوث الحليب ومشتقاته . | This study investigate the effect of bacteriocin by Enterococcus faecium against some pathogenic bacteria frequently found in milk and dairy product. Three hundred eighty two sample collected from patients and raw milk were used for isolation of E.faecium the isolates were diagnostic by biochemical tests and confirmed using Vitek 2 system . In addition Listeria monocytogenes , Salmonella typhimurium were isolated from milk and dairy products these were diagnostic by biochemical tests and confirmed using Api Listeria and Api - 20E system in addition to serotyping to bacteria Salmonella typhimurium . Enterocin produced by E.faecium detected using tow methods Cup agar and Well diffusion and partially - purified using ammonium sulfate precipitation and n - butanol partition , the sensitivity of the material was tested against diverse group of proteolytic , lipolytic and some other enzymes. In addition the effect of temperature as well as pH an the bacteriocin were tested . and used different concentration of Mitomycin - C to induce enterocin . Antibiotic sensitivity of Listeria and Salmonella and Enterococcus isolates were tested using Kirby - Bauer method. The results showed the followings : The isolation rate of E . faecium was (7.59%) from 382 sample , L. monocytogenes isolation rate approach (10%) from 50 sample , S.typhimurium isolation rate reached (6.06%) from 66 sample .Enterocin produce by E . faecium demonstrated a broad - spectrum effect against both gram positive and gram negative bacteria including Listeria monocytogenes and Salmonella typhimurium . Mitomycin - C induction was used to induce a high level production of Enterocin the concentration of optimum inducing agent was 1.5 - 2 mg /ml. The enterocin was partially purified eighty percent of Ammonium sulfate give the highest yield reaching 2.225 Unit /mg protein , n - butanol partition yield 0.57 Unit/mg protein. Enzymatic effect on enterocin demonstrated that proteolytic enzymes completely inactivated the bacteriocin , other enzymes including Lipases Catalase demonstrated no effect. α - amylase , Lysozyme ,The Enterocin was heat - resistance at even 121º C for 20 minute , the optimum pH was shown to be 4 - 9 .Enterococcus faecium was highly sensitive to 7 antibiotic used .and Listeria monocytogenes was highly resistance to 9 antibiotic and Salmonella typhimurium was resistance to 4 antibiotic . In results E . faecium produce enterocin at low level which was induced to high level yield using Mitomycin - C , the enterocin could be partially purified using precipitators protein, That enterocin product of this bacteria characterized a broad spectrum against positive and negative gram bacteria including contaminate milk and its products

دراسة مقارنة للمحتوى البلازميدي للبكتريا المخمرة لسكر اللاكتوز للعائلة المعوية والمعزولة من عينات بيئية وسريرية == Comparative Study of Plasmid Content of Lactose Ferment Enterobacteriaceae Isolated From Environmental and Clinical Samples

Author name: تقي عبد الكريم حميد
Supervisor name: اسراء عبد الجبار ابراهيم
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: 183 bacterial isolate from clinical and environmental samples are collected during the 5 months from 1/9/2014 to 1/2/2015.Which 98 clinical bacterial isolates were isolated from patients (urine, blood, sputum and swabs) from different hospitals in Baghdad city, and also 85 environmental bacterial isolates were isolated from Tigris river water samples which are collected from Al - Shawaka area , soil samples of eastern Baghdad collected from Jadied Shat area , and poultry feces which are collected from poultry farm in Al - Sadar city.All clinical and environmental bacterial isolates were identified on the basis of morphology and biochemical tests.Further Confirmative tests were used to confirm the identification of bacterial isolates by using Vitek - 2 compact system and specific primer to detect 16S rRNA gene. Results of bacteria identification showed the following species : Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella.oxytoca Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii, Serratia marcescens, Raoultella planticola, Chryseomonas luteola, Burkholderia cepacia, Aeromonas, Hydrophis , Streptococcus feacalisThe antibiotic resistance patterns showed that all bacterial species were multidrug resistant.Most clinical E.coli (45isolates) revealed high levels resistance against most antibiotics : (100%) amikacin and ampicillin, (97%) cefepime and ceftazidime, (95%) cetriaxone,(86%) tobramycin, (82%) amoxicillin, (77%) gentamicin, (73%) aztreonam. Also environmental E. coli (28isolates) showed high levels resistance, (100%) ampicillin, ceftazidime, cefepime and tobramycine, (96%) nitrofurantion, (92%) Ceftriaxone, (89%) amoxicillin, (82%) amikacin, (60%) levofloxacin and impenem. All K.pneumoniae showed high levels resistance against most antibiotics, ampicillin, amoxicillin, cefepime and ceftazidime (100%).While 30% resistance in ciprofloxacinAbstractfor clinical K.pneumoniae isolates and 8% resistance was shown in each meropenem and levofloxacin.Results of molecular identification of E.coli isolates by using the specific primer for 16S rRNA gene showed that all isolates of Lactose fermenter contained this gene (100%). Also the same 16S rRNA gene was found in the bacteria Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes, Serratia marcescens, Raoultella planticola with the same molecular weight (544 base pair) that found in E. coli isolates. While K.pneumoniae isolates showed two bands for the same 16S rRNA gene with molecular weight of 544 and > 1500 bp.The plasmid DNA analysis by using alkaline lysis method showed that 35/48 (75%) clinical and environmental bacterial isolates contained multiple plasmids their size 1oooo bp, and 15/48 (31.25 %) isolates contained plasmids with molecular weight more than 10000 bp.The leaf extracts of medical plants, Eucalyptus incrassate, Olea eurepea, and Trigonella foenum - graecum L. used as agents to cure the plasmid via adding the plant extract to the culture media or with mixing it with the plasmid DNA. Results showed that both two methods give clear effect

تاثير مستخلصات قشور البرتقال على نشاط بكتريا Pseudomonas aeruginosa المقاومة للمضادات الحيوية والمعزولة من التهابات جروح الحروق وجروح ما بعد العمليات في مدينة بغداد == Effect of Citrus sinensis peels extracts on the viability of antibiotics resistant Pseudomonas aeruginosa isolated from burn and post - operative wound infections in Baghdad City

Author name: بتول عبد الامير باقر الصفار
Supervisor name: محمد فخري احمد | صفاء عبد الكريم عبد الرزاق
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: • تم جمع 175 مسحة من المرضى الذين يعانون من خمجات الحروق والجروح مابعد العمليات الجراحية ,الراقدين في مستشفيات بغداد المختلفة ,والمتضمنة مستشفى الكندي التعليمي, مستشفى الكرخ العام ومستشفى بغداد التعليمي اثناء الفترة من ايلول 2008 الى كانون الثاني 2009. • زرعت المسحات على وسطي غراء الدم والماكونكي وحضنت هوائيا بحرارة 37 م لمدة 24 ساعة وشخصت العزلات منPseudomonas aeruginosa باستخدام التشخيص الكيموحيوي والفسلجي والصفات ﺍ ﻠﻤﻈهرية واكد باستخدام نظام عدة api 20E .• تشير النتائج الى 114عزلة اعطت زرع بكتيرولوجي موجب بمعدل65.14% هذه تضمنت 51 (%60 ) عزلة من 85 مسحة من اصابات جروح مابعد العمليات و63 (%70 ) عزلة من 90 مسحة من اصابات الحروق.• اجري فحص الحساسية على هذه العزلات باستعمال 10 مضادات حيوية شائعة الاستعمال من مجاميع مختلفة ,اظهرت النتائج مقاومة عالية الىCephalothin, Carbenicillin, Tetracycline, Ceftriaxone, Chloramphenicol, Cefotaxime and Ceftazidime وبنسبة مقاومة (100, 92.98, 88.59, 78.94, 69.29, 67.54, 65.78)% على التوالي. بينما اظهرت العزلات حساسية عالية الى المضادات Amikacin, Ciprofloxacin and Meropenem وبنسبة مقاومة ( 28.94, 23.68, 15.78 )% على التوالي. • اربع مستخلصات المائي الحار٬ المائي البارد ٬ الكحولي الحار والكحولي البارد طبقت لاستخلاص قشـــورالبـــرتقال. ووجدت من خلال الكشف النوعي للمستخلصات بان المستخلصات المائية الحارة والباردة لقشور البرتقال احتوت على المركبات التالية : كلايكوسيدات٬ فينولات٬ قلويدات٬ صابونيات وتانينات، بينما احتوت المستخلصات الكحولية الحارة والباردة (اضافة الى ما ذكر) على مركبات : راتنجات٬ تربينات٬ فلافونات٬ كومارينات وزيوت طيارة. • استخدمت المستخلصات لدراســـة تاثيرها على نمــو العــزلات المقاومة فقــط والمعزولة من اصابات الجروح مابعد العمليات الجراحية والحروق بطريقة الانتشار بالحفر. مستخلصات قشورالبرتقال في التراكيز) 25 ,50, 75 ,100, 200 ,300 ,400 و500 )ملغم/مل اظهرت فعالية ضد العزلات البكتيرية. • كشف التحليل الاحصائي وجود اقل فروق معنوية عند مستوى احتمالية P<0.05)) لاربع مستخلصات.• المستخلص الكحولي الحار من قشور البرتقال كان اكثر كفاءة من المستخلصات الاخرى ضد عزلات الجروح مابعد العمليات وجروح الحروق. المستخلص المائي البارد ياتي بالمرتبة الثانية بعد المستخلص الكحولي الحار. معدلات اقطار مناطق التثبيط لهذه المستخلصات ضد P. aeruginosa عند التركيز العالي 500 ملغم/مل كانت 22.78ملم لمستخلص الكحولي الحار، بينما كانت 71.15ملم لمستخلص المائي البارد. اما النتائج كانت متغايرة بالنسبة لتاثير مستخلصي الكحولي البارد والماء الحار وبشكل عام اظهرت تاثيرات منخفضة على العزلات البكتيرية. بينما عند التركيز 25 ملغم/مل لمستخلص الكحولي الحار معدلات اقطار التثبيط تناقص الى 64.1 ملم. • اختبر تاثير التراكيز المختلفة لمستخلص الكحولي الحار على نشاط انتاج الانزيمات : اليوريز ، جيلاتينيز ، اوكسيديز والكاتاليز، اظهرت النتائج ان المستخلصات الكحولية الحارة في التراكيز (75, 100, 200) ملغم/ مل تاثيرا جدير بالملاحظة على نشاط انتاج اليوريز، يعزى ذلك الى ظهور اللون الاصفر(كنتيجة سالبة) بعد ساعتين من الاختبار. بينما عند تراكيز(25 ,50) ملغم/مل من المستخلص حصول نتيجة سالبة لانتاج اليوريز بعد الساعة الرابعة من الحضن. • المستخلص الكحولي الحار اثبط انتاج الجيلاتينيزعند التراكيز( 50 ,75 ,100 ,200) ملغم/ مل بعد الساعة الثانية من فترة الحضن. بينما عند التركيز 25 ملغم/مل اظهرت النتيجة سالبة للجيلاتينيز بعد الساعة الرابعة حضانة. المستخلص الكحولي الحار اثبط انتاج الاوكسيديز والكاتاليز بالتراكيز(25 ,50 ,75, 100 ) ملغم/مل واظهرت نتيجة سالبة بعد الساعة الثانية من الحضن. • اظهرت نتيجة دراسات ميكانيكيات النمو بتركيز 500 ملغم \مل من المستخلص الكحولي الحار قتل كامل لعزلات اصابات الحروق والجروح مابعد العمليات الجراحية التي يتطلب وقت حضانة بين الساعة 6 - 8 ساعة. علاوة على ذلك المستخلص بتركيز 400 ملغم/ مل تطلب القتل الكامل للعزلات 8 ساعات حضانة لكل العزلات. بينما عند التركيز( 200 ,300 ) ملغم/ مل اظهر قتل كامل على جميع الخلايا بعد مرور 24 ساعة حضانة. اما التركيز 100 ملغم/ مل اظهر معدل قتل جزئي للعزلات (حتى بعد 24 ساعة حضانة). ﺗﻡ اﯿﻀﺎ ﻤﻨﺎﻗﺷﺔ ﻮﺘﺤﻠﻴﻞ ﻤﻧﺤﺪﺮﺍﺖ اﻠﻴﺔ ﺍﻠﻧﻤﻮ ﻠﻠﺒﻜﺘﺮﻴﺎ. | Hundred and seventy five swab samples were collected from patients suffering from burns and post - operative infections who admitted to different hospitals in Baghdad for medical care, these included : Al - Kindy Teaching Hospital, Al - Karkh General Hospital and Baghdad Teaching Hospital, during the periods from October 2008 to January 2009. The swabs were cultured on blood agar base and macConky's agar then incubated at 37˚C for 24hrs . Isolates of P. aeruginosa were isolated and identified using morphological, physiological and biochemical diagnosis and confirmed by api 20 E kit . The results indicated that 114 (65.14%) have given positive bacteriological cultures, this included 51(60%) isolates out of 85 swabs of post - operative wound infections, while 63(70%) isolates out of 90 swabs of burns infections. Sensitivity test was performed for these isolates using 10 commonly used antibiotics. The result indicated that a higher resistance to Cephalothin, Carbenicillin, Tetracycline, Ceftriaxone, Chloramphenicol, Cefotaxime and Ceftazidime whith the percentages of 100, 92.98, 88.59, 78.94, 69.29, 67.54, 65.78 % respectively , while the isolates showed a higher sensitivity to Amikacin, Ciprofloxacin and Meropenem with the percentages of resistance of 28.94, 23.68, 15.78 % respectively. Four extraction methods, i.e. hot water, cold water, hot alcoholic and cold alcoholic, were applied for the extraction of Citrus sinensis peels . Hot and cold watery extracts of Citrus sinensis peels contained the following compounds : Glycosides, phenols, alkaloids, saponins, and tannins. While hot and cold alcoholic extracts contained, in addition to above, resins, terpins, flavones, coumarins, and volatile oils. The extracts were used to study their effects on growth of P. aeruginosa resistant isolates of post operative wound and burn isolates by using agar diffusion method. Extracts of Citrus sinensis peels at concentrations of 500, 400, 300, 200, 100, 75, 50, 25mg/ml showed activity against bacterial isolates. The statistical analysis revealed the presence of significant differences (P<0.05) for four extracts. The hot alcoholic extract of Citrus sinensis peels were more efficient than the other extracts against post - operative wounds and burn wounds isolates. Cold water extract came next to hot alcoholic extract. The inhibition zone diameters for these extracts were 22.78mm (for hot alcoholic extract) and 15.71mm (for cold water extract). Variable results were obtained with respect to the effects of cold alcoholic extract and hot watery extract, and generally, of low effects on bacterial isolates. At a concentration of 25mg/ml of hot alcoholic extract, the rate of inhibition zone diameters decreased to 1.64mm. The effect of different concentrations of hot alcoholic extract on the activity of enzymes production of urease, gelatinase, oxidase and catalase have been tested. The results showed that hot alcoholic extracts at concentrations of 75, 100, and 200mg/ml, demonstrated an observable effect on the activity of urease production due to observation of yellow - orange color (i.e. negative result), after 2hrs . While at extract concentrations of 25 and 50mg/ml, negative urease test was obtained after 4hrs incubation. Hot alcoholic extract has inhibited gelatinase production at a concentration of 50, 75, 100, and 200mg/ml after 2hrs incubation. While at a concentration of 25mg/ml, negative gelatinase result is obtained after 4hrs incubation. Hot alcoholic extract affects the inhibition of oxidase and catalase production at concentration of 25, 50, 75, and 100mg/ml, which showed negative results after 2hrs incubation. The result of Kinetics of growth studies demonstrated that the concentration of 500mg/ml of hot alcoholic extract was enough for complete killing the isolates from burn and post - operative wound infections. Moreover, this killing required incubation time between 6 - 8 hrs . At extract concentration of 400 mg/ml a complete killing required 8hrs incubation. While for complete killing upon application of 200 and 300mg/ml of the extract required 24hrs incubation. Partial kill occurs after 24hrs when 100 mg/ml of extract was used. Analysis of the slopes of growth kinetics was also discussed.

التداخل البكتيري مع عوامل ضراوة خميرة الكانديدا المسببة لحالات التهاب الفرج والمهبل == Bacterial Interference In The Virulence Factors Of The Yeast Candida Causing Vulvovaginal Candidiasis

Author name: ايمان ناطق ناجي البياتي
Supervisor name: احسان شفيق توفيق دميرداغ | سناء مسلم الصفار
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: جمعت 200 عينة من اعالي المهبل ( H.V.S ) High Vaginal Swab من نساء متزوجات توزعت بين 130 امراة غير حامل ( Non Pregnant Women ) ( NPW ) منهـن 90 كن مصابات بالتهاب الفرج والمهبل Vaginitis و( 40 ) منهن كن سليمات لغرض السيطرة (H ) Healthy Control والباقــي ( 70 ) عينة من نساءحوامل ( P.W. ) Pregnant Women ، منهـن( 40 ) امراة مصابة بالتهاب الفرج والمهبل و( 30 ) اخرى سليمـة سيطرة . استمرت فترة جمع العينات من 1/6/2002 الى 1/2/2003 تحت اشراف الكادر الطبي المتخصص في قسم النسائية والتوليد في مستشفى النعمان العام في الا عظمية / بغداد . كما تم تخصيص استمارة استبيان لكل مريضة دون فيها كل ما يخص المريضة من اعراض سريريه ونتائج التشخيص والفحص المختبري والملاحظات العامة .اعتمادا على الاعراض المرضية والفحوصات المختبرية التشخيصية تم تحديد ثلاث انواع من الالتهابات المهبلية وهي : ا - التهاب الفرج والمهبل اللانوعيBacterial Vaginosis (BV.) ..ظهرت الحالة في (23) مريضة من مجموع (70) امراة حامل [ فيهن (40) مريضة و( 30) اخرى سليمة ] بنسبة (33%) من الحوامل ، كما ظهرت في ( 25) امراة غير حامل من مجموع ( 130) امراة [فيهـن ( 90 ) مريضة ] بنسبة ( 19% ) من النساء غير الحوامل .ب - التهاب الفرج والمهبل الكانديدي Volvavagianal Candidiasis (VVC) .. ظـهرت الحالة في ( 13) مريضة من مجموع ( 70) امراة حامل بنسبة ( 18%) [فيهن ( 30) امراة سليمة و( 40) اخرى مريضة ] كما ظهرت في ( 43) مريضة من مجموع ( 130) امراة غير حامل بنسبة (33%) [فيهن ( 40) امراة سليمة و(90) اخرى مريضة جـ - التهاب ناتج من اصابة مختلطة Mixed Infection (MI) ظهرت الحالة في ( 4) مريضات من مجموع ( 70) امراة حامل بنسبة (6% ) [ فيهن ( 30) امراة سليمة و(40) اخرى مريضة] كما ظهرت في (22) مريضة من مجموع (130) امراة غير حامل بنسبة ( 17) [ فيهن (30) امراة سليمة و(40) امراة اخرى مريضة] . وقد تم عزل 74 عزلة من خميرة الكانديدا عزلت ( 38 ) عزلة منهـن( 43 ) امراة مصابة بالكانديـدا ( VVC ) عزلت ( 16 ) عزلة من (22) مريضة مصابة باصابة مختلطة (M.I ) وعـزلت ( 5 ) عزلات من مجمـوعة السيطرة من النساء غير الحبلى ومن جانب اخـر عزلت ( 11 ) عزلة من ( 13 ) امراة مصابة بالكانديدا ( VVC ) و( 3 ) عزلات من 4 نساء مصابات اصابة مختلطة ( M.I ) وعزلة واحدة من مجموعة السيطرة للنساء الحوامل. وهذه النتائج تدل على سيادة خميرة الكانديدا في التهاب الفرج والمهبل لدى مجموعتي النساء الحوامل وغير الحوامل.و تم تشخيص الانواع التالية من خميرة الكانديدا وهي : Candida albicans ( 37 عزلة ) ، C. tropicalis ( 20 عزلة ) C. glabrata ( 7 عزلات) C.dubliniensis ( 7 عزلات ) وC.parapsilosis عزلة واحدة وC. krusei عزلتين. امكن الحصول على 588 عزلة بكتيرية من مجموع عدد الحالات الموجبة للزرع البكتيريولوجي لمجموعتي المرضى والسيطرة البالغ عددهم ( 140 ) امراة شخصت فيها سبعة اجناس من البكتيريا اللاهوائية والانواع التابعة لها وهي : Peptostreptococcus spp, Peptococcus spp, Prevotella spp , Streptococcus spp, Bacceroides spp, Propionibacterium spp, Lactobacillus spp, كما تم تشخيص انواع من البكتريا المتحملة لوجود كميات قليلة من الاوكسجين وهي : Strept . mitis , Entero , faecalis , Gardnerella vaginalis اضافة الى اربع اجناس وبعض انواعها من البكتريا الهوائية وهي Proteus spp , Staphylococcus spp , Escherichia spp, Pseudomonas spp .ولقـد كان النوعان G.vaginalis , Bacteroides fragilis من اكثر الانواع عزلا في مجموعتي النساء الحوامل وغير الحوامل المصابات بالتهاب الفرج والمهـبل اللانوعي B.V . وفيما يخص عوامل الضراوة لخميرة الكانديدا والانواع التابعـــة لها وجد ان 28 عزلة ( 76 % ) منتجة للانزيم الحال للشحوم المفسفرة Phospholipase و6 عزلات ( 16 % ) ضعـيفة الانتاجية لهـذا الانـزيم و( 3 ) عزلات ( 8 % ) غير منتجة من اصل ( 37 ) عزلة للنوع C. albicans اماعزلات C. tropicalis فكانت 15 عزلة ( 75 % ) منتجة للانزيم و3 عزلات ( 15 % ) ضـعيفة الانتاجية وعزلتان ( 10 % ) غير منتجة من اصل 20 عزلة . اما عزلات النوع C.dubliniensis فكانت منـها ( 5 ) عزلات ( 71% ) منتجة من اصل (7) عزلات فى حين انتجت عزلة واحدة للنوع C.glabrata هذا الانزيم .وعند دراسة انتاج الانزيم الهاضم للبروتينات Proteinases كعامل اخر من عوامل الضراوة فقد تباينت قدرة الانزيمات المنتجة مـن عزلات الكانديدا على هظم البروتيــن بين ( 175 - 30 ) مكغم / مل وتفاوتت العزلات في قابليتها على انتاج الانزيم فكانت هناك 29 عزلة منتجة من اصل 74 عزلة كانديدا وكانت ( 7 ) منـها مـن النوعC.albicans و( 8 ) منها للنـوع C. tropicalis , وثلاث منها للنوع C. dubliniesis وعـزلة واحـدة للنـوع C. glabrata ولم تتمكن عزلات النوعين الاخرين من انتاج الانزيم وهما C.parapsilsosis وC. krusei . ومن حيث عامل الضراوة الثالث وهو قدرة الخميرة على الالتصاق بالخلايا الطلائية فقد تفاوتت ايضا عزلات الخميــرة فـــي اظهار هـــذه القدرة وكان النوعان C. albicansوC. dubliniensis هما الاكثر كفاءة في الالتصاق من بين الانواع الاخرى وكانت نسبة خلايا الخميرة الملتصقة بالخلايا الطلائية في درجة الحرارة 25 م اعلى من التي حصلت عند درجة 37 م للعزلة نفسها ولكن التحليل الاحصائي لم يظهر فروقا معنوية عالية .كانت جميع عزلات خميرة الكانديدا مقاومة لمادة النستاتين وبتراكيز عالية جدا بلغت 256 مكغم / مل في حين كان المستحضر Clotrimazole هـو الافضل مـن بين مشتقات الازول الاخرى اذ كانت جميع العزلات حساسة له فقـد تراوحت قيـم (MIC ) بيـن ( 2 - 125, 0) مكغم / مل للنوعين C.albicans , C.tropicalis و( 0.5 - 0,125) للنوعين C.dubliniensis وC.glabrata وكانت قيم MFC اكبر او تساوي 4 مكغم / مل . بينـما تفاوتت حساسية عزلات الخميرة اتجاه مشتقات الازول الاخرى اذا اظهرت ثلاثة انواع من الخميرة مقاومة لمضاد Ketoconazule وهي C. albicans , C.dubliniensis , C. glabrata اذ تراوحت قيم MIC ( 0.5 - 32 )،( 0.25 - 16 ) , 160.25 - - مكغم / مل على التوالي بينما كانت الانواع الثلاثة الاخرى حساسة له . وكانت قيم MFC على العموم اكبر ويساوي 32 مكغم / مل . وكانت جميع العزلات حساسـة لمضاد Miconazole اذ تراوحت قيم ( MIC ) مـن ( 4 - 8 ) مكغم / مـل ضد النوع C. albicans واقلها هـــي للنوع C.dubliniensis وهي (0.125 - 1.0) مكغم / مـل بينما كانت قيمة MFC تتراوح بين اكبر او يساوي 4 الى اكبر او تساوي 16 حسب نوع العزلة . وكانت قيم MIC للمضاد Fluconazole مرتفعة لكنها لم تتجاوز 32 مكغم / مل ولذا اعتبرت العزلات حساسة ولكن بتراكيز عالية بينما كان MFC له اكبر او يساوي 64 .كانت قيم MIC لمضاد Amphotericin B هــي الافضل اذا بلغت (0,125 - 0,5 ) مكغم / مل اما MFC فكان يساوي 1 مكغم / مل لقد اظهرت النتائج ان طريقة التخافيق باستعمال الوسط الزرعي السائل لتحديد MIC هي الافضل مقارنة باستعمال الوسط الزرعي الصلب اذ كانت قيم MIC مرتفعة مقارنة بقيم MIC بالطريقة الاولى .ولدراسة الفعالية التضادية لبعض انواع البكتريا المعزولة من اعالي المهبل على عوامل الضراوة وحيوية خميرة الكانديدا ، انتخبت 32 عزلة بكتيرية تابعة لاجناس مختلفة على اساس ما اظهرته من تاثير تضادي في التجارب الاولية على عوامل الضراوة او الحيوية او كلاهما وهذه العزلات هي ثلاث عزلات تابعة للنوع Peptostreptococcus prevotii ، ثلاث عزلات تابعة للنوع propianibacterium granulosum، وست عزلات تابعة للنوع Lactobacillus acidophilus وخمس عزلات تابعة للنوع L. gensenii وثلاث عزلات لكل من النوعين Streptococcus mitis وEnterococcus faecalis كما وانتخبت عزلات الخميرة الاكثر كفاءة في التجارب قيد الدراسة واعتمادا على نتائج الجزء السابق .بعد ان نميت العزلات البكتيرية السابقة الذكر في اوساط زرعية مناسبة لكل منها تم الحصول على رواشح مزارعها السائلة وتم تركيز الرواشح الــى نصف الحجم ( رم 1) والى ربع الحجم ( رم 2 ) مع الاحتفاظ بجزء من الراشح غير المركز . لم تظهر الرواشح غير المركزة تاثيرا على هذه العوامل ولقد بدا واضحا تاثير الراشح المركز لمرة واحدة او لمرتين وبدرجات متفاوته وذلك لاختلاف الاجناس البكتيريا والانواع التابعة لها . كانت اكـثر الـرواشح تاثيرا هـي الـرواشح المركزة م1 وم 2 لكـل مـن العزلات Sm3 , Ef3 , Lj5 , La5 , La6 على فعالية الخميرة في انتاج الانزيمات الهاضمة للبروتين والانزيمات الحالة للشحوم المفسفره وكان النوع C. albicans اكثر حساسية اتجاه المعاملة بهذه الرواشح مقارنة مع الانواع الاخرى ، كما اثرت هذه الرواشح على خفض نسبة الانبات في المصل وبفرو قات معنوية كبيـرة وصلت الى >0.001 P . واظهر ( رم1 ) ( رم2 ) للعزلة La 6 تاثيرا في خفض حيوية الخميرة مقدرة بوحدة مستعمرة لكل مل ( CFU/ml ) وتبين ان لحموضة هذه الرواشح تاثيرا في عملية التثبيط ولكن لا يعزى له التاثير الكلي. فعند مقارنة تاثير الحموضة فقط فـــي اوساط زرعيه سائلة ذات pH محدد ومماثل الى pH الرواشح مما يشير الى ان هذه الرواشح تحتوي مركبات ذات تاثير مثبط ، كما لم تظهر رواشح العزلات الاخرى تاثيرا واضحا او كان بعضها غير مؤثر . ولمحاولة فهم طبيعة تاثير خلايا العزلات البكتيرية السابقة على عملية التصاق خميرة الكانديدا بسطوح الخلايا الطلائية وجدنا ان العزلات Lj5 , La5 , Pp3 , Pg3 , Sm3 , Ef3 , La6 هي الاكثر تاثيرا في خفض نسبة الالتصاق وعلى التوالي وقد اظهرت العزلات طرقا مختلفة في طبيعة منع الالتصاق اما باحاطة خلايا الخميرة بغلاف من خلايا البكتريا او باحاطة الخلية الطلائية بغلاف من خلايا البكتريا او كلاهما مما يمنع التصاق الخميرة بسطح الخلية الطلائية وذلك من خلال غلق المستقبلات على سطوح الخلايا. | 200 high vaginal swabs were taken from 200 married women, 130 of them were non - pregnant (N.P) and 70 were pregnant (P.) women. Of the 130 N.P : 90 were suffering from vaginitis and 40 were healthy controls. Of the pregnant group 40 were suffering from vaginitis and the rest 30 were healthy controls. Thus there were a total of 130 infected and 70 healthy. Sample were taken during the period of first of June 2002 till the end of Feb. 2003, under the supervision of specialized gynecologist in the general No’man hospital in Adhamia , Baghdad . A special questionnaire was prepared for each individual. As result of cultural and microbiological examinations of the sample and depending on the clinical and microbiological features of the 130 infected pregnant (90) and non - pregnant (40) women their vaginitis were devided into three groups, namely : (a) : Bacterial vagnosis (B.V) : Appeared in (23) out of (70) pregnant women [ including (30) healthy and (40) infected i.e. 33% ]B.V. also appeared in 25 non - pregnant women out of 130 [ including (40) healthy and (90) infected i.e. 19% ](B) : Volavaginal condidiasis (V.V.C).Appeared in 13 women out of (70) pregnant women ( 18%) [including 30 healthy and (40) sick] it V.V.C also appeared in (43) infected non - pregnant women out of 130 ( 33%)[ including (40) healthy and (90) sick](C ) : Volvavaginosis due to mixed bacterial and fungal infection. I.e. mixed infection (M.I) : Appeared in (4) patient out of (70) pregnant women (6%) [including 30 healthy and (40) sick women ] . It also appeared in (22) patients out of (130) non - present women [including (40) healthy and (90) sick pregnant women] A total of (74) isolates of candida SPP were isolate from non pregnant and pregnant women of this number 38 isolates from (43) VVC non pregnant cases, (16) isolates from 22 MI non pregnant cases, 5 isolates from 40 healthy non pregnant group, 11 isolates from 13 VVC pregnant women, 3 isolates from 4 MI pregnant women, and one isolates from 30 healthy.The following species of Candida were identified : C. albicans 37 isolates , C. tropicalis 20 isolates , C. glabrata 7 isolates , C. dubliniensis 7 isolates , C. parapsilosis one isolate , and C. kursei 2 isolates .Bacteriologically 588 isolates of bacteria were obtianed form 140 women positive for bacterial cultural ; these include several species of 7 anaerobic bacterial genera ; peptostreptococcus, peptococcus , Streptococcu spp, prevotella spp, Bacteroides spp, lactobacillus spp and propionibacterium spp. Similarly the following microaerophilliic bacteria were isolated; Gardnnerella vaginalis, Enterococuus faecalis , and Streptococcus mitis . The following aerophilic were also isolated, staphyllococcus spp, proteus spp Escherichia spp and pseudomonas spp. the most frequently isolated species a mong infected women group with ( B.V) were Bacteriodes fragilis and G. vaginals . Concerned the virulence factors of the yeast candida spp like production of phospholipases and proteinasas, besides the adherence on epithelial cells ( from human mouth ) and drug tolerance. Phpspholipase was produced by 28 isolates (76 %) out of 37 of C. albicans whereas the rest 6 isolates (16 %) were weak producers and 3 isolates (8 %) did not produce this enzyme. On the other hand out of 20 isolates of C. tropicalis 15 (75 %) were weak producer and 2 isolates (10 %) were not producers of the enzyme . Of The 7 isolates of C. dubliniesis 5 (71% ) could produce the phospholipase also one ( 14 % ) of the 7 isolated of C.glabrata could produce theis enzyme . The enzyme proteinase was produced by 29 out of 74 (39 %) isolated of candida spp out these 17 were C.albicans 8 were C. tropicalis , 3 were C. dubliniesis , one was C. glabrata the other species did not produce the enzyme. Ability of the isolates for attachment onto the surface of epithelial cells varied according to the species. Both C.albicans , C. dubliniesis were more efficient than other species . The percentage of epithelial cells attached by yeast cells were higher at 25C than at 37 C for the same isolate of the yeast, though this difference was not significant. As the resistance to antifungals concerned, we found that all isolates of candida were resistant to nystatin . The measured minimum inhibitory concentration (MIC) reached 256 g/ml . On the other hand , all isolates of candida were much more susceptible to clotrimazole with MIC ranging ( 0,125 - 2 ) g/ml for C.albicans and C. tropicalis and about ( 0,5 - 0.125 ) g / ml for C.dubliniesis and C.glabrata . The minimum fungicidal concentration (MFC) was 4 ug/ml or more for these Candida spp .The (MIC) for ketocanazole against C. albicans , C.dubliniesis , C.glabrata ranges were [0.5 - 32, 0.25 - 16 and 0.25 - 16] g / ml respectively, whereas the other species of candida were more sensitive to ketaconzole , and the ( MFC ) generally was equal to or higher than 32 ug / ml .The (MFC) for Miconzole was (4 - 8) g / ml against C. albicans an (1 - 0.125) g / ml agianst C.dubliniesis , the ( MFC ) ranged between equal to or higher than 4 and 16 g / ml . Fluconzole was less effctive than the others as the (MIC) values agianst all species were 32 g / ml or les. While the (MFC) was equal to or higher than 64 g / ml. Amphoterricin B was the most effective as the (MIC) values against all isolates of candida were (0.125 - 0.5) g / ml and MFC was 1 g/ ml.For the determination of (MIC) we found that using serial dilution of liquid cultures was better than using solid agar media. The recorded (MIC) result using agar media were higher than those obtained in liquid media.We studied the antagonistic effect against virulence factors of Candida spp by (23) isolates of bacteria isolated from healthy vagina. The selection of the candida and the bacterial isolates based on preliminary tests. So three isolates of peptostreptococuus prevotii, three isolates of propionibacteriume granulosum, six isolates of lactobacillus acidophilus , five isolates of lactobacillus jensenii , three isolates of each of streptococcus mitis , and Enterococcus feacalis were used in such tests as culture filtrates and / or as bacterial cells.The cultural filtrates were concentrated to the half or to the quarter volume of the original, as the non - concentrated culture filtrates did not show any effect. Different filtrates showed different levels of effect, the more effective were the double or quadruple concentrates of the culture filtrates of L.acidophilus isolates no 5 and 6, L.jensenii isolates No. 5, Enter.faecalis isolates No. 3 and strep.mitis isolates No. 3 . These filtrates adversely affected the phospholipase and proteinase enzymes, C.albicans being more affected than other species. Also these filtrates reduced significantly (P < 0.001) the percentage of germ forming cells of C.albicans . The culture filtrate (conc. to half or to quarter volume) of isolate No. 6 of L.acidophilus greatly reduced the viability (CFU /ml) of C.albicans and other species. This effect was not totally due to the acidity (low pH) since similar pH values in control tests did not reduce viability to the same level and did not effect the yeast cells. We found that adhesion of candida cells to epithelial cells was reduced in the presence of bacterial cells. The following bacteria were effective and they are listed below starting from the most to the less effective in reducing the number of adhering yeast cells (the number refers to the isolate number L.acidophilus 6, Enter. feacalis 3, Strep. mitis 3, P.granulosum3 peptost. prevotii 3 , L.acidophilus 5 and L.jensenii 5 .Some species of bacteria prevented adhesion by surrounding the yeast cells while other species surrounded the epithelial cells some did both

The Role of Interleukin - 8 Associated with Peptic Ulcer Disease Induced by Helicobacter pylori == The Role of Interleukin - 8 Associated with Peptic Ulcer Disease Induced by Helicobacter pylori

Author name: ايمان عبد الجبار محمد العاني
Supervisor name: Nazar E. Naser | Abdul Wahab Al - Shaikhly
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: اجريت الدراسة لتوضيح تاثير الشذوذ المناعي حول الكشف السريري لدى مرضى مصابون بقرحة المعدة والاثني عشري في بغداد, بالاضافة الى تهيئة معالم اوضح لدور الانترلوكين - 8 في الامراضية المناعية عند هؤلاء المرضى والتي سببها بكتريا Helicobacter pylori. كذلك شملت الدراسة استخدام مختلف الفحوصات المناعية والبكتريولوجية في الكشف عن وجود بكتريا H.pylori المسببة لمرض قرحة المعدة والاثنى عشري . تم شمول (48) مريضا (31 من الذكور و17 من الاناث) وباعمار تراوحت ما بين ال30 - 50 سنة مصابين بمرض قرحة المعدة والاثني عشري ومجموعة من الافراد الاصحاء كمجموعة سيطرة ملونة من 62 شخصا منهم( 26 من الذكور و36 من الاناث ) باستخدام طرائق تحري بكتريولوجية شائعة وحديثة , مناعية وتشريح انسجة مرضية للتحري عن وجود الاصابة ببكتريا Helicobacter pylori.اعتمد التشخيص النهائي على ايجابية اي من الاوساط الثلاثة او بمصاحبة فحص اليورييز الايجابي وفحص النسيج المرضي, اذ اثبتت النتائج ان من بين اوساط الزرع الثلاثة المختلفة , كان HP agar هو الوسط الاكفا في عزل البكتريا H.pylori عندما حقق على معدل عزل قياسا بكل من وسطي اكار خلاصة الدماغ / القلب واكار كولومبيا ( 79.2% , 35.4% , 25% على التوالي). اظهر تقدير اداء الاختبارات المصلية في التنبؤ بالاصابة ببكترياH.pylori لدى مرضى قرحة المعدة والاثني عشري وتمييزهم عن مجموعة الاصحاء , ان تحديد وجود H.pylori specific IgG باتباع طرائق حديثة مختلفة قد يحسن من عملية التنبوء بالاصابة بالبكتريا اكثر من علاقتها بمرض قرحة المعدة والاثني عشري نفسه.كما وتضمنت الدراسة اتباع طريقتين لتشخيص وجود مضادات H.pylori specific IgG حيث اظهرت النتائج ان طريقة الاليزا (ELISA) اعطت معدل ايجابية اعلى لدى مجموعة المرضى مقارنة بطريقة miniVidas (95.8% , 89,6% على التوالي). ومن الجدير بالملاحظة ان مجموعة السيطرة H.pylori specific IgG بلغت نسبة ( 42.2% او 46.8% عند القياس بطريقة miniVidas او ELISA على التوالي). لم تظهر فوارق معنوية لمستوى وسط H.pylori specific IgG عند قياسه بالطريقتين , اية فروق معنوية بشكل واضح بين مجموعة المرضى ومجموعة السيطرة , في حين ظهرت فروق معنوية بين وجود من عدم وجود H.pylori في مجموعة المرضى باستخدام طريقة miniVidas فقط ) وسط الزرع =3 ng/ ملي لتر و1.15 ng / ملي لتر على التوالي). لم يكن كلا من فحص H.pylori specific IgG واختبارات ال Helicogen ذات كفاءة جيدة في التنبؤ بمرض قرحة المعدة والاثني عشر للتفريق بين مجموعتي المرضى والاصحاء , اذ كان الPPV قريبا جدا من احتمال وجود المرض دون اجراء اي اختبار. ومن جهة اخرى فان اجراء الفحص السيرولوجي في التنبؤ بالاصابة ببكتريا H.pylori لدى المرضى المصابين بقرحة المعدة والاثني عشري اظهر بان طريقة اليزا قد تعتبر فحصا حساسا جدا (درجة الحساسية 100%) في التحري عن وجود H.Pylori التي نتج عنها PPV , NPVتاما لدى 87%. كما وتم الحصول على اعلى محدودية للاختبار الايجابي ( 97.5%) باتباع طريقة miniVidas رغم ان حساسية الاختبار كانت اقل بقليل من طريقة ELISA (97.5%). واستنادا الى النتائج فان H.pylori specific IgG الذي تم تقديره بطريقةminiVidas كان افضل خيار للتميز بين H.pylori السالبة والموجبة حيث اظهر القياس نسبة حساسية عالية وPPV تتجاوز 90.7% والتي كانت مساوية لمعيار النفاذ الذي تم الحصول علية باستخدام الطريقتين. اثبتت الدراسة الحالية وجود فوارق معنوية في المستوى الكلي لمصل IgG بين المجموعات الموجبة والسالبة لدى المصابين ببكتريا H.pylori (المتوسط الحسابي 1531.2 ملي غرام/ملي لتر و917.7 ملي غرام/ملي لتر على التوالي ) في حين لم تظهر فروقات معنوية تتعلق ب IgM, IgA, C3 & C4 بين هاتين المجموعتين. ومن ناحية اخرى تميز IgG وC4 لدى المقارنة بين مجموعة المرضى ومجموعة السيطرة (المتوسط الحسابي ل IgG كان مساويا الى 1397 ملي غرام / ملي لتر و1067.4 ملي غرام / ملي لتر والمتوسط الحسابي لC4 كان 49.8 ملي غرام / ملي لتر و29 ملي غرام / ملي لتر على التوالي). تشير البيانات المستخرجة من الدراسة الى ان مستوى IL - 8 في مرض التهاب المعدة لم يكن يعتمد على الاصابة ببكتريا H.pylori ولكن زيادة ال IL - 8 في مستوى المصل بين حالات الاصابة بقرحة المعدة والاثني عشري قد تعزى الى التهاب النسيج الذي يصاحب المرض ما دام هناك فارق معنوي بين مجموعة المرضى ومجموعة السيطرة, في حين لم تكن تلاحظ اية فروق معنوية بين المجموعات الموجبة والسالبة لبكتريا H.pylori . وقد تكون لهذه النتائج مضامين هامة للتوصل الى تبصر اعمق في تفهم اليات البكتريا المسببة للمرض فيما يتعلق بالاستجابة المناعية ضد الاصابة ببكتريا H.pylori | This study was conducted to obtain more clarification about the impact of immunological abnormalities on the clinical expression of peptic ulcer among Iraqi patients, in addition to provide further insights into the role of some interleukins in immunopathogenesis of patients with peptic ulcer disease induced by Helicobacter pylori. The study also included various immunological and bacteriological investigations in detecting the presence of H. pylori associated with peptic ulcer disease.Forty eight (31 males and 17 females) patients suffering from peptic ulcer, and sixty two (26 males and 36 females) apparently healthy individuals (as control) , were subjected to different recent and common bacteriological, immunological and histopathological evaluations regarding the ages of the patients and healthy individuals included between 30 - 50 years which were done for detecting Helicobacter pylori infection.Final diagnosis was completely established when any of the three culture media showed the evidence or a combination of positive urease test and histological evidence. The results documented that among different types of cultures media, Helicobacter pylori agar was the most superior medium for the recovery of H. pylori 79.2 %, which provided the highest isolation rate compared with Brain Heart Infusion agar and Colombia agar (35.4 %, and 25 % respectively).Assessing the performance of serology in predicting H. pylori infection associating with peptic ulcer patients and / or distinguishing them from healthy controls, demonstrated that determination of H. pylori specific IgG using recent different methods may improve predicting the infection of H. pylori rather than relating to peptic ulcer disease itself.In the present study, two methods were used for detecting presence of H. pylori specific IgG antibodies. The results showed that ELISA method gave a higher cases positivity rate compared to miniVidas method (95.8%, 89.6% ,respectively) .It is worth noting that a good proportion of healthy controls had positive H. pylori specific IgG (45.2 % or 46.8 % measured by miniVidas or ELISA method respectively). The medium level of H.pylori specific IgG measured by both methods did not significantly differ between patients and control groups, while the differences observed for the presence of H. pylori compared with its absence among cases were statistically significant only by using the miniVidas method (Medium = 3 ng/ml, and 1.15 ng/ml respectively). The present study showed that both H. pylori specific IgG antibodies test and Helicogen tests were not so useful in predicting peptic ulcer disease distinguishing them from healthy control since the PPV was nearly close to the prior probability of having the disease without doing any test. On the other hand, assessing the performance of serology in predicting H.pylori infection in patients with peptic ulcer disease demonstrated that ELISA method would be a very sensitive test (sensitivity = 100 %) in detecting the presence of H. pylori, that resulted in a complete NPV and PPV of 87%.The highest specificity of positive test (97.5%) was obtained by using miniVidas method. Its sensitivity, however, was slightly lower than ELISA method (97.5 %). According to the results, H. pylori specific IgG measured by miniVidas method seems to be the best choice to differentiate between positivity and negativity of H. pylori since it offered a high sensitivity and a PPV exceeding 90.7% which was equal to the validity of parameter obtained by using both methods. The present study documented a significant variation in total serum IgG level between positive and negative groups of H. pylori infection,(mean 1531.2 mg/ml and 917.7 mg/ml ,respectively), while no significant variations were reported in IgM, IgA, C3 and C4 between these two groups. On the other hand, only IgG and C4 varied significantly regarding cases and control groups (mean of IgG = 1397 mg/ml and 1067.4 mg/ml, mean of C4= 49.8 mg/ml and 29 mg/ml, respectively). Data from the study indicated that IL - 8 level in gastritis was independent of H. pylori infection, but one would attribute the increase in IL - 8 serum level among cases with peptic ulcer to the tissue inflammation related to the disease since there was a significant variation between cases and controls, while no differences were observed between positive and negative groups of H. pylori infection. These findings might be of important implications for having further insights into understanding the pathogenic mechanisms of bacteria in relation with immunologic response against H. pylori infection.

دراسة بيئية وامراضية على جرثومة كليبسيلا في عينات سريرية ونهر دجلة في بغداد == Environmental and Pathogenic Study on Klebsiella Spp. in Samples Collected from Patients and Tigris River at Baghdad

Author name: افراح فهد عبد الكريم
Supervisor name: كاظم هاشم ياسين الاعرجي | كفاح احمد جاسم
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Doctorate
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: تفرعت الدراسه الحاليه خطين رئيسيين.تضمن الخط الاول تقييم نهر دجله ضمن محافظة بغداد من خلال دراسة العوامل الفيزيائيه والكيميائيه والبايولوجيه والتي لها تاثير على نوعية مياه نهر دجله بينما تضمن الخط الثاني دراسه جزيئيه لبعض عوامل الضراوه، المقاومه للمضادات الحيويه وانتاج الغشاء الحيوي لبكتريا K. pneumoniae والمعزوله من مصادر سريريه وبيئيه. محطات الدراسه تضمنت ثلاثة مواقع على نهر دجله ضمن مدينة بغداد، الموقع الاول يقع شمال مدينة بغداد والتي تقع شمال منطقة الكريعات بالقرب من جسر المثنى، والموقع الثاني يقع قرب مدينة بغداد الطبيه قرب جسر باب المعظم بينما يقع الموقع الثالث الى الجنوب بالقرب من جسر الجادريه. جمعت عينات شهريه من المواقع المذكوره انفا والواقعه على نهر دجله ابتداءا من تشرين الثاني/2013 ولغاية تشرين الاول/2014 . فضلا عن ذلك جمعت عينات سريريه من عدة مستشفيات في بغداد وباستخدام حاويات معقمه. اظهرت النتائج ان قيم درجات الحراره لمياه نهر دجله تراوحت بين (9 - 31 م◦) وهذا من صفات جو العراق والذي يتميز بتقلبات موسميه بدرجات الحراره من جهه وبتغيرات يوميه من جهه اخرى، كانت دالة الحامضيه لمياه النهر تميل للقاعديه الخفيفه وتراوحت بين (6.1 - 8.7) مع ظهور حامضيه خفيفه في الموقع الثاني وقد يعود السبب في ذلك الى مخلفات مدينة الطب والتي تدل على وجود تلوث. تراوح تركيز الاوكسجين المذاب بين (6.6 - 9.9 ملغم/لتر) وهذا يظهر ان مياه نهر دجله جيدة التهويه وكذالك اظهرت النتائج ان المتطلب الحيوي للاوكسجين كان ضمن الحدود المسموح بها دوليا ومحليا حيث تراوحت قيمته بين (0.8 - 3.5 ملغم/لتر). العكوره تظهر مدى شفافية المياه وقد تراوحت قيم العكوره لمياه النهر مابين (16 - 102 نفلوميتر) وسجلت الدراسه ارتفاع ملحوظ في قيم التوصيليه الكهربائيه (651 - 1170 ملغم/لتر). كذلك وجد ان قيم المواد الصلبه الذائبه تراوحت بين (406 - 751 ملغم/لتر) وكان لتاثير الفصول عليها اكثر من تاثير المواقع. بينما سجلت الملوحه تركيز (0.72 - 0.39ملغم/لتر). سجلت النتائج لتركيز المعادن الثقيله ما بين (0.001 - 0.6 ملغم/لتر)،(0.00 - 0.25 ملغم/لتر) لكل من الحديد والزنك على التوالي، معدل التراكيز لهذه المعادن اظهر تغايرا شهريا خلال مدة الدراسه حيث كانت معدلات الحديد متجاوزه الحدود المسموح بها دوليا بينما معدلات الزنك ضمن الحدود المسموح بها. تراوحت قيم الفوسفات لنهر دجله مابين (0.11 - 0.37). من جهه اخرى كانت نتائج الدراسه البكتريولوجيه قد سجلت معدلات مرتفعه لكل من العدد الكلي الحي للبكتريا واعداد بكتريا القولون الكليه واعداد بكتريا القولون البرازيه والتي تجاوزت الحدود المسموح بها دوليا ومحليا والتي كانت دليل على وجود تلوث احيائي وقد سجلت القيم ما بين (195 - 8200CFU/ml ) ، (3625 - 160000 cell/100ml ) ، (24000 - 142500 cell/100ml ) على التوالي. جمعت 75 عزله بكتيريه تابعه للجنس Klebsiella spp. وتوزعت مابين 40 عزله بيئيه و35 عزله مرضيه، شخصت العزلات بانها : K. pneumoniae (40), K. oxytoca (8), K. terrigena (7), K. ornitholytica (5) اعتمادا على الخواص الزرعيه، المجهريه والكيموحيويه وقد تم تاكيد التشخيص باستخدام نظام API - 20E وVITEC2 systemقد تم عد البكتريا باستخدام طريقة الترشيح الغشائي وباستخدام وسط انتقائي.تم تحديد حساسية العزلات تجاه (23) مضاد حيوي واظهرت النتائج بصوره عامه مقاومه العزلات لاغلب المضادات المستخدمه كما اظهر التحليل الجزيئي ان عزلات K. pneumoniae كانت حامله لجين CTX - M gene والذي له علاقه بمقاومة مضادات البيتالاكتام حيث اظهر تفاعل تضخيم السلسله PCR حزمه واضحه وبحجم (551 bp) فضلا عن ذلك تم دراسة جين aac(3) - II والذي يتعلق بمقاومة مضادات الامينوكلايكوسايد وباستخدام PCR حيث ظهرت حزمه واضحه بحجم (877 bp) . درست قدرة البكتريا على تكوين الغشاء الحيوي باستخدام ثلاثه طرق مختلفه وقد اظهرت النتائج ايجابيه الفحص وكذلك تم تضخيم جين mrkD والذي يعتبر تحت الوحدة المسؤله عن الاتصاق للنوع الثالث من الاهداب واظهر PCR حزمه بحجم (966 bp). عوامل ضراوه اخرى درست جزيئيا لهذه البكتريا وذلك باستخدام تفاعل تضخيم السلسله تضمنت rmpA , magA وkfu وهي جينات مسؤله عن تكوين الكبسوله وحوامل الحديد وكذلك تم تضخيم جين 16SrRNA وذلك باستخدام conventional and real time PCR وذلك من اجل تشخيصها جزيئيا واظهرت النتائج حزم واضحه بحجم (535 bp) لجين rmpA، (797bp) لجين kfu و(160 bp)عند استخدام برايمر متخصص لجين 16SrRNA بينما لم تظهر اي حزمه عند تضخيم جين magA. | The present work was branched into two line first line aim to study Tigris River within Baghdad City to assess Physical, chemical and biological characteristics of water river that influence water quality of the Tigris River. The second line conducted to study molecular characterization of virulence factor, antibiotic resistance genes and biofilm formation of K. pneumoniae isolated from clinical and environmental sources. The study area included three stations on Tigris River Within Baghdad city, the first was located at North of Baghdad in the northern area of Ghera'att City, and the second at middle part in the area Baghdad medical city, whereas the third station located at South part in the area near Al - Jadiriah Bridge. Monthly samples were collected from three station located on Tigris river, from November 2013 to October 2014. In addition Samples were collected from different Hospital’s Environment and patients by using sterile containers.Results obtained showed that temperature value of Tigris water has ranged between (9 - 31 Cº) the climate of Iraq recognized with seasonal fluctuation from one side and day and night fluctuation from other side. The degree of pH in Tigris River tend to be light alkalinity as it ranged between (6.1 - 8.7) with slightly acidic at station2 and this may be due to the effect of medical city discharge that indicate presences of pollution. The concentration of dissolved oxygen was ranged between (6.6 - 9.9) mg/l and it seems that the water of Tigris is ventilated well. The results showed that values of BOD5 ranged between (0.8 - 3.5 mg/l.) which is within the International allowable levels. The Turbidity reflects the transparency in water, the Turbidity's values ranged between (16 - 102) NTU. The results showed that there is a noticeable raise in value the electrical conductivity that recorded between (651 - 1170) mg/l. It is found that the total dissolved solids values were affected by its seasons more than by its locations, It was recorded higher and lower values of (TDS) (406 - 751) mg/l. whereas the salinity recorded (0.72 - 0.39 ppm) .The results showed that concentrations of heavy metals iron and zinc were varied between 0.001 - 0.6 mg/l and 0.00 - 0.25 mg/l respectively. Mean concentrations of these metals in Tigris River showed monthly variations during the study period and the Fe values exceeded the International allowable levels while Zn within permissible limit for Iraqi and WHO standards for river system maintains. Phosphate values ranged between (0.37 - 0.11). On the other side, The bacteriological studies indicated a high level of total viable bacterial counts in water of the three stations and were between (195 - 8200 C.F.U/ml), While the total coliform and faecal coliform counts exceeding acceptable limits are indicative of pollution that recorded (3625 - 160000 cell/100ml ) and (2400 - 142500 cell/100ml) respectively.A total of 75 klebsiella spp. isolates had been collected and distributed between 40 environmental isolates and 35 clinical isolates. Isolates were identified as K. pneumoniae (40), K. oxytoca (8), K. terrigena (7) and K. ornitholytica (5) depending on cultural, microscopical, biochemical characteristics, API 20E and VITEK 2 system. Enumeration of klebsiella sp from water samples had been made by using membrane filtration technique with selective media. The results of Antibiotic susceptibility of K. pneumoniae isolates against (23) antibiotic declared that, generally, the isolates were resistant to the most antibiotics used and molecular analysis showed that all isolates were carrying CTX - M gene concern β - lactam group with PCR product band of molecular size 551 bp and aac(3) - II gene which concern with aminoglycosids group resulting in PCR product with band of molecular size 877 bp.Biofilm formation assay was determined through three different methods and the results showed the ability of K. pneumoniae isolates to produce biofilm, also mrkD gene which is adhesive subunit of type3 fimbriae that play important role and mediated biofilm formation had been amplified and results PCR product with band of molecular size 966 bp. Another virulence factor of K. pneumoniae isolates was studied molecularly by using (PCR), magA, rmpA, kfu and for further diagnosed molecularly 16S rRNA genes were amplified using conventional and real time PCR, the results showed that the isolates of K. pneumoniae gave a clear band with a molecular size 535bp for rmpA, 797bp for kfu and160 bp when PCR was performed with the primer that target the 16S rRNA.while no bind had been obtained for magA

مستوى البين ابيضاض 17A و33 وبروتين الصدمة الحرارية 70 في بعض امراض الحساسية == Levels of Interleukin IL - 17A, IL - 33 and Heat Shock Protein 70 in Some Allergic Diseases

Author name: ابرار جاسم حسن
Supervisor name: امنة نصيف جاسم
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: اجريت هذه الدراسة بهدف تسليط الضوء على دور بعض الحركيات الخلوية IL - 33, IL - 17A)) وبروتين الصدمة الحرارية 70 (HSP70) والكلوبيولين المناعي الكلي T - IgE)) ومعدل النسبة المئوية للخلايا الحمضة في بعض امراض الحساسية النوع الاول. شملت الدراسة 210 مريض (110 انثى، 100 ذكر) تتراوح اعمارهم ما بين (10 - 70) سنة يعانون من امراض الحساسية ، جمعت من المركز التخصصي للحساسية في بغداد / الرصافه للفترة من نيسان الى ايلول 2014 .تم قياس مستوى الكلوبيولين المناعي الكلي (T - IgE) لجميع المرضى والاصحاء كذلك تم قياس النسبة المئوية للخلايا الحمضة للمجاميع المدروسة. قسم المرضى الى ثلاث مجاميع ، المجموعة الاولى 77 مريض ربو تحسسي (34 ذكر،43 انثى) تتراوح اعمارهم مابين (10 - 60) عام ، المجموعة الثانية 48 مريض التهاب الجيوب الانفية التحسسي (19 ذكر، 29 انثى) تتراوح اعمارهم مابين (10 - 66) عام ، المجموعة الثالثة 85 مريض شرى ( 47 ذكر ، 38 انثى) تتراوح اعمارهم مابين (10 - 70) عام . جمعت خمسين عينه لاشخاص اصحاء (25 ذكر ، 25 انثى) تتراوح اعمارهم مابين ( 23 - 53) عام . في حين تم تقدير البين ابيضاض 17A (IL - 17A) والبين ابيضاض 33 (IL - 33) وبروتين الصدمة الحرارية 70 (HSP70) ل 73 مريض باستخدام اختبار اليزا ( المقايسة المناعية المرتبط بالانزيم) كان منهم 28 مريض ربو تحسسي ، 20 مريض التهاب جيوب انفية تحسسي ، 25 مريض شرى و15 شخص من الاصحاء. توصلت الدراسة الى النتائج الاتية : 1. اظهرت الدراسة فروقا معنوية (P<0.01) في معدل مستوى IL - 17A في مصل مرضى الربو (33.61 ± 4.61 بيكوغرام/مل) ، التهاب الجيوب الانفية التحسسي (49.29 ± 5.76 بيكوغرام/مل) والشرى (41.93 ± 5.81 بيكوغرام/مل) مقارنة مع مجموعة السيطرة (10.21 ± 0.82 بيكوغرام/مل).2. اظهرت الدراسة فروقا معنوية (P<0.01) في معدل مستوىIL - 33 في مصل مرضى الربو (42.01 ± 4.67 بيكوغرام/مل) ، التهاب الجيوب الانفية التحسسي (39.94 ± 6.07 بيكوغرام/مل) والشرى (27.49 ± 2.90 بيكوغرام/مل) مقارنة مع مجموعة السيطرة (18.73 ± 2.73 بيكوغرام/مل).3. لوحظ وجود ارتفاع معنوي (P<0.05) في تركيز المستوى المصلي لبروتين الصدمة الحرارية 70(HSP70) في مرضى الربو (32.51±3.85 نانوغرام/مل) بالمقارنة مع قيم السيطرة (15.94 ± 4.27 نانوغرام/مل) بينما لم يظهر اي فرقا معنويا في مرضى التهاب الجيوب الانفية التحسسي (19.51 2.19± نانوغرام/مل) والشرى ( 19.63 ± 3.76 نانوغرام/مل) عند مقارنتها مع قيم السيطرة ( 15.94 ± 4.27 نانوغرام/مل).4. ارتفعت معدلات مستويات T - IgE معنويا (5P<0.0) في مصل مرضى الربو (503.54 ± 63.49) وحدة دولية/ مل ، التهاب الجيوب الانفية التحسسي (442.77 ± 95.76 وحدة دولية/ مل) والشرى (489.53 ± 69.68 وحدة دولية/ مل) مقارنة مع مجموعة السيطرة (23.67 ± 5.81 وحدة دولية/ مل). 5. ظهرت زيادة معنوية (5P<0.0) في معدل النسبة المئوية للخلايا الحمضة في مرضى الربو (4.37 ± 0.52%)، التهاب الجيوب الانفية التحسسي (4.38 ± 0.50%) والشرى (4.12 ± 0.43%) مقارنة مع مجموعة السيطرة (1.57 ± 0.15%).6. في مرضى حساسية الربو هناك ارتباط ايجابي وعالي المعنوية (P<0.01) بين مستويات IL - 33 وT - IgE كذلك يوجد ارتباط ايجابي ومعنوي (P<0.05) بين مستويات IL - 33 وHSP70 بينما هناك ارتباط سلبي معنوي (P<0.05) بين مستويات IL - 17A وHSP707. في مرضى التهاب الجيوب الانفية التحسسي كان هناك ارتباط ايجابي معنوي P<0.05)) بين مستويات T - IgE وIL - 33 كذلك بين مستويات T - IgE وIL - 17A ، بينما يوجد ارتباط سلبي معنوي P<0.05)) بين مستويات IL - 17A وHSP70 8. في مرضى الشرى يلاحظ ان هناك ارتباط ايجابي معنوي (P<0.05) بين مستويات T - IgE وIL - 33 وايضا هناك ارتباط ايجابي عالي المعنوية (P<0.01) بين مستويات T - IgE وIL - 17A بينما نجد ان هناك ارتباط سلبي معنوي P<0.05)) بين مستويات IL - 17A وHSP70 | The present study was designed to focus on the levels of IL - 17A, IL - 33, HSP70, T - IgE and eosinophil count in some of type I allergic disease. All samples included 210 patients (110 females and 100 males), their ages between 10 - 70 years, suffering from allergic disease collected from specialized center of allergy in Baghdad / Al - Resafa, during the period from April, 2014 to September, 2014.Total IgE was measured for all patients and healthy control by using enzyme - linked immunosorbent assay (ELISA). Also eosinophil count was carried out for the study groups. The patient groups were divided into three groups. The first group (77) allergic asthma patients (34 males and 43 females), their age ranged between10 - 60 years. The second group (48) allergic rhinitis patients (19 males and 29 females), their age ranged between10 - 66 years, and the third group (85) urticaria patients (47 males and 38 females), their age ranged between10 - 70 years. Fifty healthy control have been collected and included in the study (25 males and 25 females), their age ranged between 23 - 52 years. Interleukin - 17A (IL - 17A), interleukin - 33(IL - 33) and Heat shock protein 70 (HSP70) have been estimated by ELISA for (73) allergic disease patients 28 allergic asthma, 20 allergic rhinitis, 25 urticaria and 15 healthy control. The study has reached the following results : 1. A highly significant (P<0.01) increase in mean serum IL - 17A in patients with allergic asthma (33.61 ± 4.61 pg/ml), allergic rhinitis (49.29 ± 5.76 pg/ml), and urticaria (41.93 ± 5.81 pg/ml) when compared with healthy controls (10.21 ± 0.82 pg/ml).2. A highly significant (P<0.01) increases in mean serum IL - 33 in patients with allergic asthma, allergic rhinitis, and urticaria (42.01 ± 4.67, 39.94 ± 6.07, 27.49 ± 2.90 pg/ml) respectively as compared with healthy control (18.73 ± 2.73 pg/ml). 3. A significant (P>0.05) increase mean levels of HSP70 (32.51± 3.85ng /ml) in patients with allergic asthma as compared with healthy control (15.94 ± 4.27ng /ml). No significant difference were recorded between patient with allergic rhinitis (19.51± 2.19 ng/ml) and urticaria (19.63 ± 3.76ng /ml) as compared with healthy control (15.94 ± 4.27ng /ml).4. A highly significant (P<0.01) increases in the levels of T - IgE in the mean serum of allergic asthma (503.54 ± 63.49 IU/ml), Allergic rhinitis (442.77 ± 95.76 IU/ml) and urticaria (489.53 ± 69.68 IU/ml) as compared with healthy controls (23.67 ± 5.81 IU/ml).5. A significant(P<0.05) difference in percentage count of eosinophil in allergic asthma (4.37 ± 0.52)%, allergic rhinitis (4.38 ± 0.50)%, and urticaria 4.12± 0.43% as compared with healthy controls (1.57 ± 0.15)%. 6. In allergic asthma, there was a highly significant (p<0.01) positive correlation between T - IgE & IL - 33 levels. A significant (p<0.05) positive correlation between IL - 33&HSP70 levels. A significant (p<0.05) negative correlation between IL - 17A&HSP70 levels.7. There was a significant ( p<0.05) positive correlation between T - IgE& IL - 33 levels,T - IgE&IL - 17A levels in patients with rhinitis. A significant (p<0.05) negative correlation between IL - 17A&HSP70 levels in the same patients.8. In urticaria, there was a significant (p<0.05) positive correlation between T - IgE&IL - 33 levels. A highly significant (p<0.01) positive correlation between T - IgE&IL - 17A levels. A significant (p<0.05) negative correlation between IL - 17A&HSP70 levels

دراسة لبعض عوامل الفوعة للعنقوديات السالبة لمخثر البلازما المعزولة من خمج الجلد من مستشفيات السليمانية == A study on some virulence factors of coagulase negative staphylococci isolated from skin infection in sullaimaniya hospitals

Author name: نرمين نصر الدين فتحي
Supervisor name: ﻤﻲ ﻁﺎﻟﺏ فليح
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: English
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: Out of 110 clinical samples taken from different sources of burn and wound infections, 22 isolates (20%) of coagulase negative staphylococci (CNS) were isolated. The most common isolated species among CNS was S. epidermidis which was accounted for 11 isolates (50%), S. haemolyticus was the second with 3 isolates (13.64%), followed by S. hominis and S. sciuri with two isolates for each species (9.1%) and one isolate (4.54%) for each species including S. cohnii, S. lugdunensis, S. saprophyticus, S. xylosus. Some virulence factors of CNS were detected including the hemolysins, which were determined in 10 isolates (45.4%), lipase production in 15 isolates (68.1%), 9 isolates (81.8%) of S. epidermidis were positive for lipase activity, and the proteolytic isolates of CNS were 11 isolates (50%). The production of slime layer by Congo red agar method revealed 7 isolates (31.8%) of CNS and 3 isolates (27.2%) of slime layer - producing S. epidermidis, while production of this layer by tube method was determined in 2 isolates (18.18%) of 11 isolates of S. epidermidis. The ability of S. epidermidis to adhere to abiotic materials and biofilm formation in vitro was done by using polystyrene microtitre plates which appeared in 2 isolates (18.1%). Sensitivity test of the isolates using 18 antimicrobial agents showed that the vancomycin was the more effective on CNS which was susceptible to this antibiotic and reached to (90.9%), and the incidence resistance to β - lactams antibiotics was very obvious in cefotaxim (100%), penicillin (95.5%) and in amoxycillin (72%). The effect of subinhibitory concentration of antibiotics on the adherence ability of S. epidermidis was done and the results revealed that the clindamycin was the best antibiotic, while the vancomycin was the lees affecting on the adhering of S. epidermidis.

مقارنة التاثيرات المرضية للببتيدوكلايكان المستخلص من Staphylococcus xylosus وعديد السكريد الشحمي للـ E. Coli == Comparative Pathogenicity of Peptidoglycan Extracted from Staphylococcus xylosus and Lipopolysaccharide Extracted E. coli

Author name: هبة خليل توفيق
Supervisor name: مي طالب فليح | حارث جبار فهد
General topic: Biology
Specific topic: Microbiology
Degree: Master
University: University of Baghdad
Language: Arabic
University location: Baghdad
First pages:
Abstract: من مجموع 150 عينة ادرار تم الحصول على 61 عزلة عائدة للجنس Staphylococcus , جمعت من مرضى مصابين بخمج المجاري البولية من مستشفيات الزعفرانية واليرموك للمدة من الاول من ايلول 2005 - الاول من كانون الثاني 2005 . تم التاكد من عائدية 10 عزلات للنوع S. xylosus وبنسبة عزل 16.3% من مجموع العنقوديات ، وقد تم تشخيصها بوساطة الاختبارات الكيموحيوية كما تم اختبار حساسيتها للمضادات الحيوية وتبين ان 8 عزلات كانت مقاومة للمضاد Erythromycin ، والعزلات جميعها حساسة للمضاد Ciprofloxacin . تم استخلاص الجدار الخلوي باستخدام طريقة التكسير بالحبيبات الزجاجية (Glass beads) وتم اجراء تنقية جزئية للببتيدوكلايكان من الجدار باستعمال مواد كيميائية مثل : SDS , EDTA , LiCL2 , CaCL2 والهضم بالانزيمات DNase , RNase , Trypsin , Pronase . ولغرض التاكد من جودة طريقة التنقية تم اجراء الرحلان الكهربائي بهلام متعدد الاكريل امايد تحت ظروف غير ماسخة فقد انخفض عدد الحزم البروتينية من 6 حزم في الجدار الخلوي الخام الى 4 حزم بعد التنقية . لقد اظهرت الدراسة الحالية التاثيرات الكيموحيوية السريرية للببتيدوكلايكان في مصل الارانب المحقونة عن طريق الزيادة الحاصلة في انزيمات الكبد والكلية ؛ اذ لوحظ زيادة معتدلة في كل من انزيمات : GoT وGpT وAlkaline phosphatase وكذلك Bilirubin ، والـ Urea ، والـ Creatinine ؛ مما يدل على حدوث خلل وظيفي في الكبد والكلية . تم دراسة امراضية مستخلص الببتيدوكلايكان للعزلة S.xylosus S24 (المقاومة لاكثر عدد من مضادات الحياة قيد الدراسة ) في الجهاز البولي للفئران البيض السويسرية الاناث اذ حقنت خمس مجاميع من الفئران بواقع ثلاثة مكررات لكل مجموعة عبر الاحليل باستخدام القثطرة بالتراكيز 1000000 ، 2000000 ، 3000000 ، 4000000 ، 5000000 نانوغرام / 1 مليلتر ، وحقنت خمس مجاميع اخرى بمستخلص قياسي للـ LPS من بكتريا E.coli بالتراكيز 10, 25, 50, 75, 100 نانوغرام/مليليتر ، وبعد مرور يومين من الحقن تم تشريح الفئران حيث اظهرت الاعضاء (الكلية) تغييرات نسيجية تمثلت : بانكماش الكبيبة الكلوية ، واحتقان الاوعية الدموية ، وارتشاح الخلايا الالتهابية وفي المثانة فقدان طبقة الكيراتين وحدوث التنكس الاستسقائي لخلايا الطبقة الظهارية في كلا المستخلصين ومن خلال موازنة هذه التغييرات المرضية النسيجية لكل من مستخلص الببتيدوكلايكان وعديد السكريد الشحمي اتضح ان مستخلص عديد السكريد الشحمي اكثر شدة وامراضية اذ بدات التاثيرات بتراكيز (50, 75, 100) نانوغرام/مليليتر اقل من تراكيز مستخلص الببتيدوكلايكان 3000000 ، 4000000 ، 5000000 نانوغرام / 1 مليلتر ، فضلا عن وجود تغييرات نسيجية اخرى حدثت في مستخلص عديد السكريد الشحمي وغير موجودة في مستخلص الببتيدوكلايكان. | Our of 150 urine specimens collected from patients presented with urinary tract infections attending Alza’farania and Alyarmoouk hospitals in Baghdad for the period of September , 1st 2005 to December, 1st 2005 , 61 staphylococci were obtained. Ten isolates (16 , 3%) were confirmed to be Staphylococcus xylosus identified by using of biochemical tests. Antibiotic susceptibility tests . however , 8 of them were resistant to erythromycin while all of them were sensitive to ciprofloxacin.The Crude cell wall was extracted by mechanical disintegration using glass beads and a partial purification was done to the peptidoglycan by means of chemicals such as SDS , EDTA , LiCl2 and CaCl2 in addition to enzymes like DNase , RNase , trypsin and pronase.In order to prove the efficiency of the purification method , polyacrylamide gel electrophoresis was achieved under undenaturing conditions as the proteins bands number was reduced from 8 in the crude extract to 4 bands at the final stage.The present study showed clinical biochemical effects of the peptidoglycan in sera of injected rabbits through the increase resulted in liver enzymes ad renal function tests represented by GOT , GPT , alkaline phosphatase , total serum bilirubin , urea and creatinin , an indication to a malfunction of liver and kidney.The pathogenicity of peptidoglycan extracted from S. xulosus S24 (the isolate that resist highest number of studied antibiotics) was studied in urinary tract of female Swiss mice by injecting five animal groups , as triplicates catheter at concentrations reached 1000000 , 2000000 , 3000000 , 4000000 and 5000000 ng / 1 ml , plus another five groups with 10 , 25 , 50 , 75 and 100 ng / ml of E. coli LPS. Two days later , animals were killed ; kidneys and urinary bladder were taken for histopathological study as they showed different pathological changes included shrinkage of glomerulus , congestion of blood vessels and infiltration of inflammatory cells in kidney , whereas dekeratinization and edematous dehydration of the epithelium were seen in urinary bladder.Passing through a comparison between these pathological changes in both extracts , LPS developed the highest severity and pathogenecity since the effects started with concentration (50 , 75 and 100 ng / ml) less than those was withpeptidoglycan (3000000 , 4000000 and 5000000 ng / 1 ml) in addition to the presence of some changes developed by LPS rather than peptidoglycan
1 ... 44 45 46 47 48 ... 80