Author name: زينب ناصر حسين الطرفي

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: يتميز التهاب الكبد الفايروسي بقابليته الوبائية على اصابة العديد من الافراد ويطلق مصطلح التهاب الكبد الفايروسي على عدد من الفايروسات المصيبة للكبد التي تم تسميتها حسب اكتشافها الى A,B,C,D,E,F,G ويعتبر التهاب الكبد الفايروسي C وBمشكلة كبيرة وذلك لعدم امكانية تشخيص الاصابة الفايروسية منذ البداية لكون اغلب الاصابات تكون بدون اعراض مرضية او باعراض خفيفة.المواد وطرائق العمل : شملت الدراسة الوبائية 1159عينة لمرضى الثلاسيميا الذين يراجعون مركز الثلاسيميا في الرصافة، والمجموعة الثانية 140915 عينة اخذت لمتبرعي الدم في المركز الوطني لنقل الدم اعتمدت من السجلات. وتم اجراء الفحوص الفايروسية (HCV,HBV,HIV) لهذه المجاميع، واجريت الفحوص الفايروسية التشخيصية الاخرى على مرضى الثلاسيميا، فضلا عن اجراء الفحوص المناعية، فحوص الدم، والفحوص الكيميوحيوية.النتائج : افرزت نتائج مرضى الثلاسيميا عن نسبة 24.76% (70عدد الذكور و110 عدد الاناث) موجبة لفحص anti - HCV، ونسبة 0.77% (7 من الذكور و2 من الاناث) موجبة لفحص HBsAg، وبنسبة 0.34% (2 من الذكور و2 من الاناث) موجبة لكلا الفحصين (علما ان جميع المرضى بدون علاج الانترفيرون) مقارنة مع متبرعي الدم بنسبة 0.4% لـanti - HCV و0.97% لـHBsAg،علما ان جميع نتائج فحص HIV كانت سالبة لمرضى الثلاسيميا ومتبرعي الدم، هذا بالنسبة للدراسة الوبائية. اظهرت الدراسة التحليلية المختبرية ان نسبة الاصابة بفايروس التهاب الكبد HCV اعلى في الذكور بنسبة 27.48% مقارنة مع الاناث بنسبة 21.35% بوجود فرق ذو دلالة احصائية معنوية لارتفاع نسبة الذكور عن الاناث، فيما لوحظ ان النسبة هي ذاتها 0.3% لذكور واناث مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV ولوحظ ارتفاع الاصابة مع ازدياد العمر فاعلى نسبة للاصابة بـ HCV 41.5% هي للاعمار ما بين 21 - 30سنة وللمصابين بـHBV بنسبة 1.7% للاعمار ما بين 1 - 11سنة. ولوحظ ارتفاع نسبة الاصابة بـ HCV بين الاكراد بنسبة 85.7%. اما بالنسبة الى HBV فقد لوحظ ان النسبة هي 5.7% بين الاكراد، اما في العرق العربي فقد لوحظت نسبة HCV 22.83%، وHBV 0.63% وفي الكلدان لوحظ ان نسبة الاصابة بـHCV 20%. اجري فحصPCR على بعض مرضى الثلاسيميا واظهرت الدراسة ان 50% من النتائج موجبة، وباجراء الكشف عن النوع الجيني لفايروس HCV بطريقة RFLP تم الحصول على انماط جينية مختلفة تضمنت 3b,4,6,3a,2b,1b واجريت دراسة مناعية على المرضى الموجبين لفحص PCR، وكشفت النتائج ان 18% من اولئك المرضى قد ابدوا تفاعلات موجبة لاضداد النواة واضداد العضلات الملساء في حين لم يظهر اي نتيجة موجبة لاضداد الدنا، اضداد الميتوكوندريا واضداد الشحوم المفسفرة. اجري الترحيل الكهربائي لبروتينات المصل وتبين وجود ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لبروتين الكلوبيولين مقارنة بالالبومين، بارتفاع معدل بروتين كاما وانخفاض معدل بروتين الالبومين لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص HCV - PCR.اجري على بعض مرضى الثلاسيميا فحوصات عمل الكبد ولوحظ ارتفاع معدل TSB في مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg فضلا عن ارتفاع معدل ALTفي المرضى الموجبين لفحص HBsAg عن المرضى الموجبين لفحص anti - HCV، كذلك لوحظ ارتفاع معدل AST لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg فيما لوحظ ان معدل انزيم الفوسفاتيز القاعدي هو ضمن الحد الطبيعي لمرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg، وتم اختيار مجموعة من مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg وغير المصابين بـ HCV,HBV واجريت عليهم عدد من الفحوص الكيميوحيوية لمستوى (البروتين الكلي، الالبومين، الكلوبيولين، اليوريا، الكرياتنين، حامض اليورك، البوتاسيوم، الفسفور غير العضوي، الكالسيوم، النحاس، الكلسترول والسكر) في الدم، ولم يلاحظ اي دلالة احصائية معنوية لهذه الاختبارات، عدا اختبار الكولسترول حيث لوحظ انخفاض معدل الكولسترول في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV الى 112.7mmol/L، وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـHBV بمعدل mmol\L93.69 كما لوحظ وجود انخفاض ذو دلالة احصائية معنوية بين مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV,HBV مقارنة مع غير المصابين بـHCV,HBV، كذلك لوحظ وجود دلالة احصائية معنوية لانخفاض معدل حامض اليورك لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV,HBV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا غير المصابين، ووجد ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لمستوى النحاس في الدم لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV وغير المصابين مقارنة مع المصابين بـHBV. ووجد ارتفاع ذو دلالة احصائية معنوية لمستوى السكر في الدم لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة بمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV وتبين وجود فرق معنوي لارتفاع معدل الفسفور غير العضوي لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV وغير المصابين بـHCV,HBV مقارنة بالمصابين بـHBV. اجريت الفحوص المناعية على مجموعة من مرضى الثلاسيميا الموجبين لفحص anti - HCV,HBsAg وغير المصابين وتضمنت الدراسة المناعية الكشف عن مستويات الكلوبيولينات المناعية في الدم ومكونات المتممة C3,C4فضلا عن الكشف عن اضداد الذات، ولوحظ ارتفاع نسب اضداد الذات لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة مع غيرهم من مجاميعمرضى الثلاسيميا وتبين ارتفاع نسبة اضداد المايتوكوندريا (43.4%)، اضداد الهستون (40.9%)، اضداد العضلات الملساء (17%)، الاضداد النووية (17%)،اضداد شحم القلب (11.6%)، اضداد الشحوم المفسفرة (17%)، اضداد الدنا المزدوج الشريط (31.8%)، اضداد بروتينات النواة A - Jo - 1 (2.27%)، SS - B (4.5%)، A - Scl (3.4%) في حين ان اضداد الذات من نوع A - RNP/Sm,SS - A,A - Sm,AC - B لم يلاحظ اي نتيجة موجبة لها. اما في مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV فقد تم الحصول على نسبة (15.38%) لكل من اضداد الهستون، اضداد شحم القلب، اضداد الشحوم المفسفرة فيما كانت نسبة اضداد الميتوكوندريا (38.46%). كما لوحظ ارتفاع نسبة المصابين بالعامل الرثوي والبروتين الفعال في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV بنسبة 46%، 68% على التوالي مقارنة مع غير المصابين بـHCV,HBV وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV بنسبة 38.4% لكل من RF,CRP. وتبين وجود فرق معنوي ذو دلالة احصائية لارتفاع الاصابة باضداد الذات ضد الهستون في الاناث مقارنة مع الذكور وارتفاع الذكور عن الاناث في اضداد المايتوكوندريا في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV. كذلك لوحظ ارتفاع بعض الكلوبيولينات المناعية في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV بمستوى 1789 mg/dl للـIgG، ولوحظ مستوى 305.8 mg/dl للـ IgA فيما كان المستوى 203.3 mg/dl للـIgM، وفي مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV لوحظ ارتفاع مستوى IgG الى mg/dl1823.6، اما مستوى IgM وIgA فقد كان بمستوى 229.6 mg/dl، 278.8mg/dl بالتعاقب، وفي بروتينات المتممة C3,C4 لوحظ انخفاض مستوى C3 الى 82.6mg/dl فيما كان مستوى C4 23.7mg/dl وهو ضمن الحد الطبيعي الادنى في مرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV، اما في مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV فقد لوحظ ان مستوى بروتينات المتممة C3 اقل من المستوى الطبيعي 78.1 mg/dl فيما كان المستوى 20.3mg/dl الى C4.في اختبارات امراض الدم تم الحصول على دلالة احصائية معنوية لارتفاع معدل PT لمرضى الثلاسيميا المصابين بـHCV مقارنة مع غير المصابين ومرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV، كما لوحظ انخفاض معدل تعداد كريات الدم العدلة لمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV ومرضى الثلاسيميا غير المصابين. ولوحظ انخفاض معدل تعداد الصفائح الدموية لمرضى الثلاسيميا المصابين بـ HBV مقارنة مع مرضى الثلاسيميا المصابين بـ HCV ومرضى الثلاسيميا غير المصابين. | Viral Hepatitis characterized by its epidemic ability to infect many people. Viral hepatitis called to many hepatic viral infection that had been classified into A,B,C,D,E,F,G. Hepatitis C infection considered a big problem related to the inability to diagnose the viral infection from the beginning because of mild or no symptoms. Material & Methods : - The epidemic study contains two groups, first group 1159 sample of thalassemic patients in Al - Rusafa Center For Thalassemic Patients. Second group 140915 samples taken from blood donors in the national blood bank from the records.Viral tests had been done for these groups (HCV,HBV,HIV). Diagnostic tests done on thalassemic patients like immunological, hematological, biochemical tests.Results : - For the epidemic study the result shows a 24.76% for thalassemic patients infected with HCV , 0.77% for thalassemic patients infected with HBV, & 0.34% for thalassemic patients infected with both HCV,HBV. 74.89% for non infected thalassemic patients compared with blood donors of 0.4% for HCV infection, and 0.97% for HBV infection.Studies for investigating laboratory tests done on thalassemic patients after confirming HCV,HBV infections through doing diagnostic viral tests.HCV Viral results shows higher percentage of male to female by 27.48% for male, 21.35% for female respectively and it was seen that the same rate of 0.3% for male and female infected with HBV. Higher infection rate with age increasing of 41.5% for age group 21 - 30 years of HCV thalassemic patients, and 1.7% for age group 1 - 11 years for HBV thalassemic patients. Higher HCV infection rate noticed for Kurdish people 85.7% , Christians 20%, and in Al - Sabeaa 40%.while the percentage of HBV in Kurdish people 5.7%, and no one infected with HBV infection in Christian and Al - Sabeaa people. For Arabic patients the percentage of HCV infection is 22.83% and 0.63% for HBV infection.HCV - PCR Thalassemic patient results show that 50% of results are positive and 50% are negative (11 out of 22 patients), doing genotyping of HCV by RFLP test shows different subtypes of HCV (3b, 2b, 1b, 3a, 4, 6).Immunological study done on PCR positive patients’ shows antibodies percentage of 18% to ASMA, ANA and 0% for each of AMA, ADNA, APL. Electroforeces done for protein of these patients show significant statistical increasing values of protein globulin in comparison to albumin decreasing.For liver function tests, applied on thalassemic patients it had been noticed that there is a significant statistical increasing values in the thalassemic patients infected with HCV as compared to other thalassemic patients not infected with HCV. Increasing the level of ALT in HBV patients compression with HCV patients, increasing the level of AST of HBV, HCV thalassemic patients where the level of alkaline phosphates in the upper limit of normal value of HCV, HBV thalassemic patients.No significant statistical values where noticed for the biochemical tests applied on some thalassemic patients infected with HCV, HBV infection except cholesterol where it had been noticed a decrease of level 112.7 mmol/L in thalassemic patients infected with HCV. 93.69 mmol/L in HBV infection patients, a significant statistical decrease value between HBV , HCV thalassemic patients in comparison with non infected patients.There is a decrease level of uric acid for the thalassemic patients infected with HCV compared with non infected patients, significant increase of copper level in the blood of HCV thalassemic patients compared with HBV infected thalassemic patients and not infected thalassemic patients.Significant statistical value increment for the random blood sugar in HCV thalassemic patients compared with HBV infected thalassemic patients.Regarding immunological study, it had been noticed that there is an increasing in autoantibody with significant statistical value for thalassemic patients infected with HCV compared with other thalassemic groups. It had been seen that there is an increasing in the mitochondrial antibodies (AMA - M2) 43.4%, antihiston antibodies (AHA)40.9%, antismooth muscle antibodies (ASMA)17%, antinuclear antibodies (ANA)17%, anticardiolipin antibody antibodies (ACL)11.6%, antiphosphotidel serin antibodies (APL - S)17%, antidouble stranded DNA antibodies (A - ds - DNA) 31.8%, other antinuclear proteins like A - Jo1 2.27%, SS - B 4.5%, A - ScL 3.4%, where the other auto antibodies A - RNP/Sn, SS - A, A - Sm, anticentromer B antibodies (A - C - B) show zero percent for each one of them while in the HBV thalassemic patients a 15.38% was obtained for each APL - S , ACL & AHA.. A 38.46% for AMA - M2.There is an increase in rheumatoid factor (RF), CRP in thalassemic patients infected with HCV compared with non infected thalassemic patients with a ratio of 46%, 68% respectively. In HBV thalassemic patients 38.4% for each RF and CRP. Significant statistical difference for increasing incidence with auto antibodies in the females compared with males of autoantibodies type AHA, AMA - M2 in thalassemic patients infected with HCV noticed.We noticed an increasing in the immunoglobulines IgG 1789 mg/dl, 305.8mg/dl for IgA in thalassemic patients infected with HCV while IgM in the upper normal range 302.3 mg/dl, complimentary portions C3, C4 shows a decrease level in C3 82.6 mg/dl, and the level of C4 is 23.4mg/dl, which is regard as the lower normal limit. While in the HBV thalassemic patients we obtain a level 1515.3mg/dl for IgG, 204.8 mg/dl for IgM and for IgA 233.3mg/dl.In the hematological tests of thalassemic patients infected with HCV shows significant increment in the level of PT test was obtained as compared with other groups of thalassemic patients. Percentage decrement in neutrophil of WBC cells in HCV thalassemic patients as compared with HBV and non infected thalassemic patients. There is a decrement in platelets count in HBV thalassemic patients compared with HCV and non infected thalassemic patients.

استخلاص وتنقية انزيم اللايبيز من عفن Aspergillus niger 11414 (ATCC) واستخدامه في تحسين نوعية الدهن الحر == Extraction and purification of Lipase from Aspergillus niger 11414 ( ATCC) to improve the butter oil

Author name: سحر غازي عمران عبد الواحد التميمي

Supervisor name: سوسن ساجد محمد علي الجبوري | سعود رشيد العاني

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تضمنت هذه الد راسة عزل وتنقية انزيم اللايبيز من العزلة القياسية Aspergillus niger 11414 ( ATCC) ثم تطبيقه عمليا في مجال الصناعات الغذائية . • تم تــنمية العزلة وتنشـــيطها على وسط اجار البطاطا والدكستروز Potato dextrose Agar PDA . • تم التحري الاولي عن انتاج انزيم اللايبيز من العزلة A. niger 11414 بطريقة الاطباق باستخدام وسط ( Tween 80 ) ، وظهرت النتيجة موجبة بشكل هالة معتمة تحيط المستعمرة الفطـرية . استخدم وسط Tween 80 واضيف زيت الزيــــتون بـــدل الـ (Tween 80) الى وسط التحري وكانت النتيجة موجبة اذ ظهرت الهالة المعتمة حول المستعمرة لكن بمساحة اكبر مما سبق . • درست عدة معايير ( تركيز زيت الزيتون ، مدة التخمر ، الاس الهيدروجيني الابتدائي ، حجم اللقاح ، درجة الحرارة ) لايجاد الظروف المثلى لانتاج انزيم اللايـــبيز وكانــــت افضل الظروف لانتاج الانزيم هي ( تركيز زيت الزيتون 1 % ، مدة التخمر 168 ساعة ، واس هــــيدروجيني ابـــتدائي 6 وحجم لقاح 10 × 1 ( بوغ / مل ) ودرجة حرارة 30 م ، اذ سجلت عند هذه الظروف اعلى فعالية للانزيم المنتج . • اظهر الانزيم الخام بعد حضنه باسس هيدروجينية مختلفة لمدة 30 دقيقة ثباتا عند قيم الاسس الهيدروجينية بين ( 5.0 - 4.0 ) ، فيــــما اظهر الانـــــزيم الخام بعد حضنه في درجات حرارة مختلفة لمدة 60 دقيقة ثباتا حراريا عند ( 40 - 50 ) م , احتفظ الانزيم بكامل فعاليته.• استخدمـــت خطوات متسلسلة لغرض تنقية انزيم اللايبيز شـملت اولا التركيز بكبريتات الامونيوم وكان افضلها 30 % حين بلغت اعلى فعالية نوعية عندها بمقدار 3.8 وحدة / ملغم برويتن ، استخدمت خطوة الديلزة للتخلص من الاملاح . لقد اظهرت النتائج ارتفاع الفعالية والفعالية النوعية للانزيم اذ اصبحت 8.64 وحدة / ملغم بروتين وبلغ عدد مرات التنقية 8.73 . بعدها مرر الانزيم المنقى جزئيا على عمود هلام Sephadex G - 75 مرتين وجمعت الاجزاء التي اظهرت فعالية انزيمية ، مرر بعدها خلال عمود هلام Sephadex G - 100 ازدادت خلالها نقاوة الانزيم اذ ارتفــعت الفعالية النوعية الى 142.8 وحدة / ملغم بروتين وبلغ عدد مرات التنقية 143.19 وبحصيلة انزيمية 87.5 % .• درست بعض الخصائص المهمة للانزيم المنقى جزئيا اذ اظهر الانزيم المنقى جزئيا ثباتا تجاه قيم من الاس الهيدروجيني بين ( 5 - 6 ) ، وكان الاس الهيدروجيني الامثل 5.6 واحتفظ الانزيم المنقى جزئيا بـكامل فعاليته عند درجتي حرارة 30 و40 م على التوالي ولمدة 30 دقيقة وفقد 95 % من فعاليته عند درجة حرارة 80 م وللمدة نفسها ، اما درجة الحرارة المثلى فكانت 35 م . • استعمل اللايبيز المنقى جزئيا في تحسين نكهة الدهن الحر الذي تم معاملته بالانزيم ، اما السيطرة Control فتمثلت باضافة محلول دارىء فوسفات السترات ذي الاس الهيدروجيني 6.0 فقط الى الدهن الحر . اجري تقييس الفعالية على المعاملتين واظهرت النتائج ان هناك تغيرا محسوسا في الدهن المعامل بالانزيم في حين بقيت السيطرة دون تغيير . • استـخدم الدهن الحر المعامل بالانــــزيم والسيطرة Control في صنــع بعض انـــواع الحلويات ( البرمة ). عمل تقييم حسي للمنتوج من خلال 31 عينة للصــــفات ( اللون ، النسجة ، الرطوبة ، الرائحة ، النكهة " الطعم " ) . حللت النتائج احصائيا ووجد فرق معنوي ملحوظ بين الدهن الحر المعامل بالانزيم والسيطرة ، عدا صفة اللون فكان الفرق غير معنوي لكلتا المعاملتين . | In this study the extraction and purification of Lipase from isolated A. niger was studied. The ability of A. niger to produce Lipase was tested on Tween 80 media , indicate the positive result. Better result was obtained by added olive oil instead of Tween 80 media Several culture conditions were studied to determine the optimum conditions for Lipase producing , and the optimum conditions were : Concentration of Olive oil 1 % , period of fermentation 168 hour, initial pH 6 , inoculums size 1×10⁵ ( Spore / ml ) and the temperature 30 ℃ higher activity of produced enzyme was recorded in this conditions. The crude enzyme was stable after incubation at different pH (4 - 5 ) for 30 min., the enzyme was stable after incubation at different temperature (40 - 50) ℃ for 60 min., the enzyme retained all activity . Sequent steps used to purify Lipase. These included the concentration in ammonium sulfate the optimum saturation rate was 30 % , while the enzyme specific activity was 3.8 Unit / mg protein . Dialysis of enzyme resulted in increase of specific activity, which became 8.64 Unit / mg protein. Partially purified enzyme to the gel column sephadex G - 75 twice, the parts which show enzyme activity collected and added to the gel column sephadex G - 100, this increased the enzyme purification and a specific activity increased to 141.76 Unit / mg protein , while the number of purification was 193.19 and 82.46 % yield. Properties of the partially purified Lipase were investigated. Its showed stability against the values of pH (5.0 - 6.0) and the optimum pH was ( 5.6 ). The partially purified Lipase retained all activity 1n the temperature ( 30,40 )℃, for ( 30 ) minutes , and lost 95 % of its original activity at ( 80) ℃ , for the same time , while the optimum temperature was 35 The partially purified enzyme is used for improvement the flavor of butter oil which was treated with the enzyme , while the control was treated by addition phosphate citrate buffer solution ( pH = 6.0) only to the butter oil , the results showed that was sensible changes in the butter oil treated with enzyme while the control remain without any changes. The animal fat which treated with enzyme and the control was used in some kinds of sweets ( Al - Burma ) , making sensible evaluating for the product by (31) samples for characterization (color, texture, moisture, odor and flavor " tastes "). The results were analyzed statistically , and the noticed incorporeal comparison was found between the butter oil treated with enzyme and control , except the properties of color , it was non incorporeal comparison for both samples

تاثير بعض المواد الكيميائية في انتاجية وفعالية ذيفان الفا - هيمولايسين المنتج من المكورات العنقودية الذهبية المعزولة من مصادر سريرية مختلفة == Effect of some chemical materials on productivity and activity of ? - hemolysin which produced from Staphylococcus aureus Isolated from clinical samples

Author name: زينب فرحان علي الزهيري

Supervisor name: خولة جبر خلف

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تضمنت الدراسة عزل بكتيريا المكورات العنقودية من بعض مستشفيات بغداد، والتي شملت : مستشفى بغداد التعليمي، ومستشفى ابن البلدي، والمختبرات التعليمية،و مستشفى حماية الطفولة التعليمي، ومستشفى الكندي حيث امكن الحصول على (110) عزلة، توزعت بواقع (15) عزلة من عينات التهاب المجاري البولية، و(20) عزلة من الحروق، و(46) عزلة من الجروح ،و (17)عزلة من عينات الدم، و(12) عزلة من مسحات الاذن والفم والعيون.شخصت الدراسة (77) عزلة بكتيرية على انها مكورات عنقودية ذهبية من خلال اعطائها نتائج ايجابية في فحص الكاتليز وفحص انزيم مخثر البلازما ، وبقية الفحوص البايوكيمياوية مثل تخمير المانيتول في وسط ملحي تحت ظروف هوائية وقابلية العزلات على تحلل الدم وكانت عزلات Staphylococcus aureus قد توزعت على النحو الاتي (9) عزلات من عينات الدم، و(36) عزلة من الجروح، و(13) عزلة من الحروق، و(9) عزلات من مسحات الاذن والفم والعيون، و(10) عزلات من التهابات المجاري البولية.وقد اظهرت العزلات قدرتها على تكوين الغشاء الحيوي(Biofilm) اذا استطاعت (35) عزلة (45.45)% من اصل 77 عزلة ان تكون الغشاء الحيوي فيما لم تستطع (42) عزلة (54.54)% المتبقية من تكوين الغشاء الحيوي.اظهرت النتائج ان نسبة العزلات المنتجة لذيفان الفا - هيمولايسين كانت (32) عزلة (41.55)% اما العزلات غير المنتجة للذيفان ، فقد كانت (45)عزلة.اختبرت حساسية العزلات تجاه المضادات الحيوية، وقد كانت نسبة مقاومة العزلات تجاه مضاد Oxacillin هي 100%، اما مضاد Methicillin وCloxacillin ، فقد كانت نسبة المقاومة 98.7 % و97.4 % على التوالي. وكانت نسبة مقاومة مضاد Cephalexin وCefixim هي 93.5 % و76.6 % على التوالي، اما مضاد Rifampicin وVancomcin فقد كانت نسبة مقاومتها 67.5 % فيما كانت نسبة مقاومة Azithromycin وLevofloxacin وBacitracin هي 49.3%، 70.1 %، 93.5 % على التوالي.اختيرت العزلة الكفؤة رقم (19)، وحدد التركيز المثبط الادنىminimum inhibitory concentration (MIC) لمضاد المثيسلين والذي كان تركيزه (32) مايكروغرام / مل.اختبر تاثير مادة CD - Cholesterol، وCholesterol ، وCD ، وMethicillin ، وPbs في فعالية ذيفان الهيمولايسين وكان معيار التحلل Hemolytic Titer هو : 8، 32.768، 65.536، 140.737.488.355.32، E+254.961408 على التوالي.واختبر تاثير المواد نفسها في انتاجية ذيفان الهيمولايسين وكانت النتائج على الاتي : 67.108.864، 549.755.813.888، 274.877.906.944، 576.460.752.303.360، 3.96140812E+25 على التوالي.وقد نقي الذيفان جزئيا بطريقة الترسيب باستخدام كبريتات الامونيوم، واختبرت فعالية الذيفان في حل كريات الدم الحمراء بطريقة الانتشار في الحفر.واختبرت التجربة فعالية الذيفان المنقى جزئيا داخل الجسم الحي في قرنية عين الارانب المختبرية اذ تكونت مناطق تاكل في القرنية بقطر 7.70 ملم بعد 8 ساعات من الحقن وثبطت فعالية هذا الذيفان داخل الجسم الحي باستخدام مادة CD - Cholesterol مع الذيفان حيث اصبح قطر تاكل القرنية 3.95 ملم.استخدمت مادة CD - Cholesterol بوصفها مادة علاجية من خلال استخدامها على هياة قطرات اضيفت الى العين المصابة بالذيفان وادت الى تناقص منطقة التاكل في القرنية من 7.70 الى 3.95.ويستنتج من الدراسة الحالية : اهمية استخدام CD - Cholesterol في تثبيط ذيفان الفا - هيمولايسين في داخل وخارج الجسم الحي وما لهذه المادة من اهمية في المجالات التطبيقية وفي الوقاية من تاثيرات الذيفان وقدرته التحللية للخلايا | In this study, one hundred and ten clinical samples were obtained from hospitals patient at many hospitals of Baghdad governorate : Baghdad teaching hospital, , Ibn - EL Balady hospital, educational laboratories, Protect child teaching hospital, Al - kendi hospital . The types and the numbers of clinical samples were distributed as (15) samples from urinary tract infect , (20) samples from burns infection , (46) samples from wounds, (17) samples from blood, (12) samples from ear, mouth and eyes infections . In this study (77) isolates were diagnosed as cocci cluster gold by giving positive result for catalase test and coagulase enzyme test and the other biochemical tests such as fermentation of mannitol under aerobic conditions and the ability of some isolates to hemolysis blood . S. aureus isolates distributed as follows : (9) isolates from blood samples, (36) isolated from wounds, (13) isolates from burns, (9) isolates from ear, mouth and eyes infection, (10) isolates from urinary tract infections.The isolates showed the ability to form biofilm (35) isolates (45.45%) out of 77 isolates and the other isolates could not form biofilm were : (42) isolation (54.54%),. The results showed that the proportion of isolates producing α - hemolysin was (32) (41.55%) isolates were either non - producing toxin : (45) isolates. The isolates were tested sensitivity to antibiotics and showed proportion of resistant toward Oxacillin which was 100% , Methicillin and Cloxacillin resistance ratio was 98.7% and 97.4%, respectively.The proportion of resistant to Cephalexin and Cefixim were 93.5% and 76.6%, respectively, while the Rifampicin and Vancomcin resistance ratio were 67.5%, while the proportion of resistant to Azithromycin and Levofloxacin and Bacitracin were 49.3%, 70.1%, 93.5%, respectively. The chosen isolate was ( number 19), select the minimum inhibitory concentration (MIC) of methicillin which were (32) micrograms \ ml. Tested the effect of CD - Cholesterol ,Cholesterol ,CD ,Methicillin and Pbs on the activity of toxin α - hemolysin and the hemolytic Titer is : 8 ( line A, well 3), 32.768 (line B, well 4), 65.536 (line B, well 5), 140.737.488.355.32 (line D, well 12) , 4.961408E + 25 (line G, well 12) respectively. It also has been testing the effect of the same material on the productivity of toxin α - hemolysin and the results were respectively : 67.108.864 (line : C well : 3), 549.755.813.888 (line : D ,well : 4), 274.877.906.944 (line : D, well : 3) , 576.460.752.303.360 (line : E, well : 12) , 3.96140812E + 25(line : H, well : 12) respectively.The toxin α - hemolysin was purified by using ammonium sulfate precipitation, and tested the effectiveness of the toxin on the red blood cells by using wells diffusion method . purified toxin was injected inside the living body in the cornea of rabbits eye, and the erosion of cornea where formed with diameter : 7.70 mm after 8 hours of injection but the other eye that injected with CD - Cholesterol that mix with toxin where the erosion diameter was3.95mm.CD - Cholesterol was used in treatment as a drops which added to the affected eye and led to a decrease in corneal erosion area from7.70 mm to3.95.mm We follows from the present study : The importance of using CD - Cholesterol in the inhibition of alpha - toxin inside and outside the living body and the importance of this study in applied medical fields and in the prevention the effects of the toxin on the cells.

انتاج وتوصيف Protease من بكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة من بعض الحالات السريرية وعلاقته ببعض المضادات الحيوية == Production and Characterization of Protease from Pseudomonas aeruginosa Isolated from Some Clinical Cases and its Relation with some Antibiotic Agent

Author name: رنا مجاهد عبد الله الشويخ

Supervisor name: سمير فتح الله سمعان | سعود رشيد العاني

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: جمعت (170) عينة من حالات مرضية مختلفة التي تضمنت (35) مسحة من الجروح و(47) مسحة من الحروق و(25) مسحة من حالات التهابات الاذن الوسطى فضلا عن عينات الادرار التي تضمنت (63) عينة وجمعت العينات من مستشفى الكاظمية التعليمي للمدة من 1 - 5 - 2005 ولغاية 1 - 8 - 2005 .  تم تشخيص (50) عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa اذ زرعت على اوساط اغنائية وتفريقية لغرض العزل الاولي ثم اخضعت المزارع البكتيرية للفحوصات المجهرية والبايوكيميائية لغرض تشخيصها ، ثم استخدمت عدة الفحصapi20E للتشخيص النهائي لهذه العزلات ، اذ تضمنت (8)عزلات من بكتريا Pseudomonas aeruginosa (16%) من حالات التهاب الجروح ، (16) عزلة (32%) من التهابات الحروق ، (20) عزلة (40%) من حالات التهاب المجاري البولية و(6) عزلات (12%) من حالات التهاب الاذن الوسطى .  اختبرت حساسية بكتريا Pseudomonas aeruginosa ضد (20) مضادا حيويا وقد اظهرت العزلات تباينا واضحا وبنسب مختلفة في مقاومتها للمضادات الحيوية . اذ اظهرت بكتريا Pseudomonas aeruginosa نسبة المقاومة(100%) تجاه مضادات الامبسلين ، الاموكسسلين ، الاموكسسلين / حامض كلافيولونك ،الكلوكساسلين والسيفازولين . بينما بلغت نسبة المقاومة لمضادات السيفاكسيم ، الكاربنسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم (98%) ، (84%) ، (80%) و(78%) على التوالي. وبلغت نسبة المقاومة لمضادات الجنتاميسين ، التوبرامايسين ، الببراسيلين ، النورفلوكساسين ، الاميكاسين والسبروفلوكساسين (52%)، (26%) ، (24%) ،(14%) ،(6%) و(4% )على التوالي . في حين اظهرت جميع العزلات لبكتريا Pseudomonas aeruginosa حساسية عالية (100%) تجاه مضادات الازترونام ، امبينيم والسيفابيم البيفلوكساسين والافلوكساسين .  قدرت التراكيز المثبطة الدنيا (MICs ) للمضادات الحيوية وكانت اعلى نسبة مقاومة لمضادات الاموكسسلين ، السيفاتكسيم والسفتازديم . اما نسبة المقاومة لمضادات الامينوكلايكوسايد فكانت تتراوح (4 - 128) مايكرو غرام / مل للتوبرامايسين ، (4 - 256) مايكرو غرام / مل للجنتاميسين اما لمضاد الاميكاسين فكانت (4 - 128) مايكرو غرام / مل. في حين اظهرت قيم MIC حساسية عالية (100%) لمضادي السبروفلوكساسين والسيفابيم.  اظهرت نتائج خلط مضادات السبروفلوكساسين مع كل من الجنتاميسين والسيفتازديم والببراسيلين نتائج مهمة في تخفيف التراكيز المثبطة الدنيا لكلا المضادين المستخدمين لوحدهما ضد هذه البكتريا . كذلك اظهرت نتائج خلط مضادي التوبرامايسين مع السيفتازديم فعالية عالية عند خلطهما معا واستعمالهما ضد بكتريا Pseudomonas aeruginosa . اظهرت (86%) من عزلات بكتريا Pseudomonas aeruginosa قابليتها على انتاج انزيم البروتييز . اظهرت النتائج تاثر انزيم البروتييز الخام ببعض المضادات الحيوية التي ادت الى انخفاض في فعالية الانزيم عند زيادة تركيز هذه المضادات .  كانت الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتييز عند استخدام وسط لوريا عند رقم هيدروجيني(8) ولمدة(48) ساعة من الحضن بدرجة حرارة(35) م º . نقي انزيم البروتييز من العزلة Pseudomonas aeruginosa PsaW2 باستخدام كروماتوغرافيا التبادل الايوني DEAE - celluloseوكروماتوغرافيا الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100. قدر الوزن الجزيئي للانزيم المنقى بطريقة الترشيح الهلامي بعمود هلام سيفادكس G - 100 وكان (21379 ) دالتون ، وبلغت درجة الحرارة المثلى لفعالية البروتييز (35) م º والرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية وثبات الانزيم كانت (8) . اوضحت نتائج تاثير بعض المثبطات والعوامل المختزلة والكلابية في فعالية الانزيم ، ان فعالية الانزيم قد ازدادت عند معاملته بايونات Ca++ وZn ++ مما يدل انها تلعب دورا في تحفيز وثبات الانزيم ، ولم تثبط فاعلية الانزيم بوجود العوامل المختزلة مثل السستين ، بينما تثبط فعالية الانزيم بوجود العوامل الكلابية EDTA .  اظهر انزيم البروتييز المنقى من بكتريا Pseudomonas aeruginosa فعالية عالية عند خلطه مع مضادي الفانكومايسين والسيفازولين في علاج التهابات العيون في الارانب والمتسبب عنها بكتريا Staphylococcus aureus . |  One - hundred and seventy swab samples were collected from different cases including (35) wound and (47) burn infection , (25) otitis media and (63) samples from urinary tract infections from Al - Kadhymia Teaching Hospital in Baghdad city . The study period was from 1 - 5 - 2005 to 1 - 8 - 2005 .  Fifty isolates of Pseudomonas aeruginosa were identified using different microscopical , cultural characteristics and biochemical tests . Final identification of bacteria were performed by using api20E system. The isolates were 8(16%) from burn infections , 20(40%) isolates from urinary tract infections , 16(32%) isolates from burn infections and 6(12%) isolates from otitis media . The sensitivity of Pseudomonas aeruginosa isolates was been tested against (20) antibiotics showed isolates version resistance with different percentage against antibiotics .Pseudomonas aeruginosa exhibited (100%) resistance to Ampicillin , Amoxycillin , Amoxycillin / clavulanic acid, cloxacillin and cefazolin .While percentages of resistance to cefixime , carbencillin, cefotaxime and ceftazidime were (98%) ,(84%) ,(80%) and ( 78%) respectively .Resistance percentages to Gentamicin ,Tobramycin , Piperacillin , Norfloxacillin , Amikacin and Ciprofloxacine were (52%),(26%),(24%),(16%),(14%)and(4%) respectively. All isolates of Pseudomonas aeruginosa were highly sensitive (100%) to Aztronam , imipenem , cefepime , P - ofloxacin and ofloxacin .  Minimum inhibitory concentrations of Amoxycillin , cefotaxime , ceftazidime and piperacillin showed higher percentage of resistance . While resistance to aminoglycoside antibiotics including Tobramycin was (4 - 128) μ g / ml , Gentamicin was (4 - 256) μ g / ml and Amikacin was (4 - 128) μ g / ml . On the other hand , all bacterial isolates were susceptible (100%) to Ciprofloxacine and Cefepime .  Combinations of Ciprofloxacine with Gentamicin , ceftazidime and piperacillin gave interesting results against the local bacterial isolates in reducing their MIC values . Tobramycin and ceftazidime gave an obvious decrease in MIC values after combination of these drugs and used against Pseudomonas aeruginosa . A (86%) of the isolates of Pseudomonas aeruginosa have ability to produce protease enzyme . Enzyme activity was affected by some antibiotics . This activity was reduced with increasing the concentrations of these antibiotics . The optimum conditions for protease production were in LB medium with a pH (8) after (48) hrs of incubation at (35) C .  Purification of the protease was done using ion exchange chromatography DEAE - cellulose and gel filtration with sephadex G - 100 .  Molecular weight of the purified protease was measured by sephadex G - 100 and it was found to be around (21379 ) Dalton . The optimum temperature of enzyme activity was (35) C . However , the pH (8) was for activity and stability of this enzyme .  Zn++ and Ca++ ions may play a role in the enhancement and stability of the enzyme . Enzyme activity was not inhibited in the presence of reducing agent such as Cysteine , but it was inhibited in the presence of EDTA .  Pseudomonas aeruginosa purified enzyme shows a high activity when combined with Vancomycin and cefazoline and used for the treatment of the eye infection in rabbits caused by Staphylococcus aureus .

دراسة تاثير بعض الاحماض الدهنية على فعالية انزيمات المكورات العنقودية الذهبية المعزولة من حالات الحروق == Study the effect of some fatty acids on the enzymes activity of Staphylococcus aureus isolated from burns

Author name: رنا عبد الكريم رشيد

Supervisor name: سوسن حسن عثمان كورجي

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: جمعت 157 عينة مسحة من المرضى المصابين بالحروق من ثلاث مستشفيات في مدينة بغداد للفترة من شهر تشرين الثاني 2006 ولغاية اذار 2007 . زرعت هذه المسحات على اوساط مناسبة لعزل البكتريا . • اظهرت النتائج ايجابية 144 مسحة لتلوثها بالبكتريا ، وبنسبة 91.7% ، فيما كانت 13 مسحة منها سالبة ، وبنسبة 8.3% .• عزلت 50 عزلة من بكتريا المكورات العنقودية الذهبية Staphylococcus aureus بنسبة عزل 31.8% ، وشخصت باستخدام الاختبارات المظهرية والكيميائية الحياتية الخاصة بها .• قاومت جميع العزلات (50 عزلة) مضاد الاوكساسلين ، فضلا عن قدرتها على النمو في وسط اكار الاوكساسلين (Oxacillin agar) ، وبذلك كانت مقاومة للمثسلين (Methicillin resistant Staphylococcus aureus) (MRSA) وبنسبة 100% .• تم التحري عن حساسية العزلات تجاه 21 مضادا حيويا ضمن مجاميع مختلفة ، اذ اظهرت النتائج مقاومة عالية للعزلات البكتيرية لمعظم المضادات الحيوية قيد الدراسة ، في حين كان المضاد الجرثومي الفانكومايسين اكثر المضادات فاعلية ضد بكتريا المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للمثسلين ، اذ لم تظهر اي عزلة من العزلات مقاومة له ، وكانت العزلتان R120 وR148 الاكثر مقاومة ، اذ قاومتا عشرين مضادا ، فيما كانتا حساستين للفانكومايسين فقط .• اوضح اختبار Minimum inhibitory concentration (MIC) للاحماض الدهنية ضد العزلتين R120 وR148 ان حامض اللاورك هو الاكفا في تثبيط نمو البكتريا ، اذ بلغت قيمة MIC 0.4 ملغم / مل ، في حين بلغت قيم MIC لكل من حامض المايرستك واللينوليك والبالمتك والاوليك ( 1.6، 1.6، 6.4، 25.6) ملغم/ مل على التوالي .• اختبرت قابلية العزلتين R120 وR148 على انتاج انزيم البروتييز باستخدام وسط غراء كولومبيا الحاوي على الحليب الفرز ، واعتمادا على ظهور هالة شفافة حول المستعمرات كانت نسبة التحلل للعزلتين المدروستين 2.5 ، 2.7 وعلى التوالي . ولذا فقد انتخبت العزلة R148 لاختبار تاثير الحامض الدهني في فعالية انزيم البروتييز فيها . • حضرت تراكيز متعددة من حامض اللاورك (0.0125 ، 0.025 ، 0.05 ، 0.1 ، 0.2 ، 0.4 ، 0.8 ، 1.6) ملغم / مل ، واختبر تاثيرها على فعالية انزيم البروتييز ولوحظ انخفاض الفعالية عند التراكيز المدروسة ،اذ بلغت الفعالية معدل 2.36 وحدة / مللتر وبنسبة مئوية تبلغ 79.73% عند تركيز 0.0125 ملغم/ مل من الحامض لتنخفض الى معدل 0.69 وحدة/ مللتر ، ونسبة 23.31% عند تركيز 1.6 ملغم / مل من الحامض .• اختبر تاثير التراكيز المختلفة من حامض اللاورك على وقت تكون الخثرة بوساطة انزيم مخثر البلازما (Coagulase) ، اذ تاخر تكون الخثرة الى الساعة الثانية من اجراء الاختبار عند التركيز 0.05 ملغم/ مل ، في حين كان التاثير الاكبر عند التراكيز ( 0.4، 0.8 ، 1.6) ملغم / مل ، اذ تكونت الخثرة بعد مرور 18 ساعة من اجراء التجربة .• تم تقييم تاثير التراكيز المختلفة لحامض اللاورك على فعالية انزيم الهيمولايسين ، اذ لوحظ انخفاض الفعالية عند التراكيز المدروسة ، فعند تركيز 0.0125 ملغم/ مل من الحامض وتخفيف 1/2 بلغت النسبة المئوية للفعالية 52.9% ، لتنخفض هذه النسبة عند تركيز 0.2 ملغم/مل من الحامض ، وتخفيف 1/2 الى 5.9%. | A total of 157 samples of burn swabs were collected from three hospitals in Baghdad during November 2006 to March 2007. Culturing of the samples was done on suitable media to isolate the bacteria.• The results showed that 144 swabs were positive for bacterial contamination (91.7%), while 13 swabs were negative ( 8.3%).• Fifty isolates of Staphylococcus aureus were isolated (31.8 %), the identification was accomplished using morphological and biochemical tests.• All isolates (50 isolates) were resistant to oxacillin and could grow on oxacillin agar , thus they were resistant to methicillin (Methicillin resistant Staphylococcus aureus ) (MRSA) at 100%.• The sensitivity of the isolates against (21) antibiotics was investigated using different groups of antibiotics , the results showed high resistance of isolates to many antibiotics which have been used in the study , while they were sensitive to vancomycin and the two selected isolates - R120, R148 were sensitive to vancomycin only and resistant to all 20 antibiotics .• The minimum inhibitory concentration (MIC) test for fatty acids to the two isolates R120, R148 showed that lauric acid was the best fatty acid in inhibiting bacterial growth when the MIC reached 0.4 mg/ ml while the other fatty acids (Myristic, Linoleic, Palmitic and Oleic ) MIC reached to (1.6, 1.6, 6.4, 25.6) mg/ml respectively .• The ability of the two isolates (R120, R148 ) to produce protease was detected on solid media ( Skim milk Columbia agar) and depending on the development of clear zone the lysis ratio was 2.5 , 2.7 respectively , therefore the R148 isolate was chosen to detect the fatty acid effect on its protease activity .• Multiple concentrations of lauric acid have been prepared (0.0125, 0.025 , 0.05 , 0.1 , 0.2 , 0.4 , 0.8 , 1.6 ) mg/ml and tested for its effect on protease activity . The obtained results showed that the activity decreased at the concentrations studied. The activity reached an average of 2.36 unit/ ml and a percentage of 79.73% at the concentration 0.0125 mg/ ml of the acid , and then reached an average of 0.69 unit/ ml and a percentage of 23.31% at the concentration 1.6 mg/ ml of the acid.• The effect of different concentrations of lauric acid on the time of clot formation by coagulase have been tested . The clot was formed at the 2nd hour of the test at the concentration 0.05 mg/ml while the highest effect was at the concentrations (0.4 ,0.8 ,1.6) mg/ml as the clot was formed after 18 hours from the beginning of the test .• The effect of the different concentrations of lauric acid on the activity of haemolysin was evaluated . A decrease in activity at the concentrations studied was noticed. The activity reached to 52.9% at the concentration 0.0125 mg /ml of acid and the dilution 1/2 then the activity decreased to 5.9% at the concentration 0.2 mg/ml and dilution 1/2

مسح لمسببات التلوث البكتيري في وحدة الكلية الصناعية وحساسيتها للمضادات الحيوية في بعض مستشفيات مدينة بغداد == Survey of Bacterial contamination in Dialysis Unit and antibiotics susceptibility in some hospitals in Baghdad

Author name: زياد طارق نعمان شهاب

Supervisor name: نزار ادور ناصر

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تـم في هذه الدراسة جمع (204) عينة من مستشفيات مدينة بغداد ، وهي كـل مـن ( مستشفى بغداد التعليمــي/ وحدة الكلية الصناعية. ومستشـفى الكرامة التعليمـي / وحدة الكلية الصـناعية ) ، للفـترة مـن كانون الاول 2009 لغاية منتصف اذار 2010 .شملت العينات مسحات من بيئة وحدة الكلية الصناعية التي تضمنت 12 موقـعا وهي كـل من ( الاسرة والمفروشات والارضـية والجـدران والسـطح الخارجي لجـهاز الديـلـزة وجلد المرضى الراقـدين والادوات الطـبية ذات الاسـتخدام الــيدوي وملابـس الكادر الطـبـي وانابيـب دخول وخـروج الماء داخـل جـهاز الديـلزة وفتحات جـهاز الـتبريد والــتدفئـة وادوات الطـعام والاثاث الخشبي والمغاسـل فضلا عن عـينات من هـواء الصالـة وتم الحصول على النتائج الاتية : 1 - كان عدد المسحات والعينات الموجبة (95) عينة من ( 204 ) عينة وبنسبة (%46.56) واحتوت بعـض المسحات على اكثر من عزلة بكتيرية واحدة .2 - تم الحصول على (139) عزلة اجمالية من مجـموع العـينات الموجـبة كان مـنها (122) عزلة بكتيرية نقية مشخصة . شملت هذه العزلات كل من بكتريا Staphylococcus spp. وAcinetobacter spp. وPseudomonas spp. وKlebsiella spp. وCitrobacter freundii وEscherichia coli وEnterobacter spp. وAlcaligens spp. وStenotrophomonas maltophilia وBordettella spp. وOchrobacter anthropi وProteus spp. وShigella spp. وFlavomonas oryzihabitans وPasturella pneumotropica وChrysemonas lutula وBacillus spp. وNocardia spp. وEnterococcus spp. . فقد تم تشخيص هذه الـعزلات عن طريق الصـفات المظهرية والمزرعـية للمستعمرات وكـذلك عن طريـق الفحص المجهري للخلايا وباستخدام الفحوصات الكيموحياتية فضلا عن استخدام فحص API test لغرض التشخيص الدقيق للعزلات .3 - اظهرت العينات الماخوذة من هـواء الصالة والمغاسل نسبة عالية من الثلوث فقد كانت نسبة التلوث لكل منهما (%81.8) بعـدها جاءت الارضية والجـدران تلـيها الاسرة والمفروشات وبنسبة تلوث للعينات الماخوذة بلغت (%58) و(%53) على التوالي .4 - كانت بكتريا المكورات العنقودية الاكثر انتشارا في بيئة وحدة الكـلية الصناعية حيث تم الحصول على (47) عـزلة منها وبنسبة (%38.5) من اجمالي العزلات والتي كانت (122) عـزلة مشخصة . 5 - كانت بكتريا Acinetobacter spp. الاكثر انتشارا من بين العصيات السالبة لصـبغة كرام بعدد عزلات بلغ (15) عزلة من اصـل (65) عزلة سالبة لصبغة كرام وبنسـبة مئوية بلغت (%23.07) من مجموع العـزلات السالبة لصبغة كـرام ونسبة (%12.2) من مجموع العزلات الكلية، تليها كل من بكتريا Pseudomonas spp. وKlebsiella spp. وبنسب مئـوية بلغت (%10.6) و(%4.9) على التوالي من مجموع العزلات الكلية6 - تم التحري عن حساسية (70) عزلة بكتيرية مختلفة لاثني عشر مضادﴽ حيويا وهي كـل Amikacin وAmoxicillin / clavulanic acid وCiprofloxacin وCefotaxim وCefexime وChloramphenicol وGentamycin وPiperacillin وTrimethoprime وOfloxacin وVancomycin وNalidixic acid .7 - اظهرت بكتريا Staphylococcus aureus مقاومة عالية جدا تجاه المضاد الحيوي Cefexime فقد بلغت نسبة مقاومة هذا المضاد (%100) ، كما اظهرت العزلات مقاومة مرتفعة تجاه كل من المضادات الحيوية Cefotaxime وGentamycin وNalidixic acid حيث بلغت نسبة المقاومة لهذه المضادات (%60) . في حـين اظهـرت هذه العـزلات مقاومة منخفـضة تجاه كـل مـن المضادات Chloramphenicol وCiprofloxacin وOfloxacin وبنسبة مئوية بلغت (%10) لكل مضاد. 8 - اظهرت بكتريا Staphylococcus epidermidis مقاومة بنسبة (%100) للمضاد الحيوي Cefexime ، في حـين كانت نسـبة مقاومة البـكتريا للمـضاد الحـيوي Cefotaxime هـي (%58) كـما كانت نسـبة مقاومتها للمـضادات الحـيوية Nalidixic acid وTrimethoprime (%50) لكـل مـن هذه المـضادات. 9 - كانت بكتريا المكورات العنقودية جميعها حساسة بنسبة (%100) للمـضاد الحيوي Amikacin .10 - اظهرت بكتريا Pseudomonas spp. مقاومة عالية تجاه المضادين Cefotaxime وNalidixic acid وبنسبة مقاومة بلغت (%66) كما كانت نسـبة مقاومة كـل من المضادين Trimethoprim وVancomycin (%55.5) و(%44.4) على التوالـي في حين لم تظهر مقاومة للبكتريا تجاه المضاد الحيوي Amikacin وPiperacillin وOfloxacin وAmoxicillin/ Clavulanic acid .11 - كانت عزلات بكتريا Klebsiella spp. مقاومة بنسبة (%100) لكل من المضادات الحيوية Cefixime وTrimethoprim وVancomycin ، كما اظهرت البكتريا نسـبة مقاومة للمضادات الحـيوية Cefotaxime وPiperacillin وAmoxicillin/Clavulanic acid بلـغت (%66.6) ، يلـيها المضاد الحـيوي entamycin بنسبة مقاومة بلغت (%50) . وكانت بكتريا Klebsiella spp. البكتريا الوحيدة التي اظهرت نسبة مقاومة للمـضاد الحيوي Amikacin بلـغت (%16.6) .12 - تم اجراء فحص MICs لخمسة من المضادات الحيوية المستخدمة في الدراسة وهي Amikacin وAmoxicillin / Clavulanic acid وCefotaxime وGentamycin وCiprofloxacin . على البكتريا الاكثر حساسية او الاكثر مقاومة واظهرت العزلات جميعها التي اجري لها الاختـبار نسبة MICs واطـئة تجاه المضاد الحيوي Amikacin حيث تراوحت بين (8 - 1) مايكروغرام/مليلتر حيث كانت العزلات حساسة بشكل كبير للمضاد الحيوي المذكور.13 - اظهرت العزلات قيم MICs مرتفعة للمضاد الحيوي Cefotaxime حيث تراوحت القيم ما بين (128 - 2) مايكروغـرام/ مليلتر بالنـسبة لبكـتريا S. aureus في حين تراوحت القيم مابين (512 - 8) مايكروغرام/مليلتر بالنسبة لباقي المكورات العنقودية السالبة لفحص Coagulase ، اما بالنسبة لعزلات كل من بكتريا Klebsiella spp. وAcinetobacter spp. فـقد كانت قـيم MICs لها للمضاد المذكور تتراوح مابين (512 - 2) مايكروكرام / مليلتر . في حين اظـهرت عزلات بكتريا Pseudomonas spp. قيمMICs منخفضة للمضاد نفسـه حيث تراوحت القيم بين (2.0 - 0.25) مايكروكرام / مليلتر . | In this study has collected (204) samples from the hospitals of Baghdad, these are (Baghdad teaching hospital/Dialysis unit & AL karama teaching hospital/ Dialysis unit), for the period of December 2009 to March 2010.The samples included swabs ofartificial kidney unit environment that has 12 positions these are (beds, furniture, ground, walls, external surface of dialysis, skin of asleep patients, medical instruments - use manual, clothes of medical stuff, tubes of enter and out water inside of dialysis, slots cooling and heating device, Eating utensils, wooden furniture &sinks as well as samples of hall air and it has obtained the following results : 1 - The number of swabs & positive samples was (95) sample from (204) sample in the rate of (46.56%) some of swabs contain more than one bacterial isolate.2 - It has obtained (139) total isolate from the positive samples amount (122) of that were bacterial pure diagnostic isolates all of these isolates included the following kinds of bacteria : Staphylococcus spp., Acinetobacter spp., Pseudomonas spp., Klebsiella spp., Citrobacter freundii, Escherichia coli, Enterobacter spp., Alcaligens spp., Stenotrophomonas maltophilia, Bordettella spp., Ochrobacter anthropi, Proteus spp., Bacillus spp., Chrysemonas lutula, Pasturella pneumotropica, Nocardia spp. and Enterococcus spp. They have diagnosed these isolates by Phenotypic & farming characteristics of colonies & by Microscopic examination for cells by using bio - chemical tests as well as using API test for the purpose of accurate diagnosisfor isolates.3 - The samples taken from the hall air and sinks showed a high rate of pollution that were (81.8%) for every sample after that they were ground followed by beds, furniture, And by contamination of the samples taken at (58%) and (53%) respectively.4 - Staph bacteria were most prevalent in the environment of artificial kidney unit was obtained (47) isolate of them at (38.5%) of the total isolates, which was (122) diagnosed isolate.5 - Acinetobacter spp. were most prevalent among the negative bacilli of gram stain in the number of isolates was 15 out of 65 negative isolate of gram stain and a percentage amounted to 23.07% of the total isolate Followed by Pseudomonas spp. & Klebsiella spp. at (10.6%) & (4.9%) of the total isolates respectively.6 - It was investigated for sensitivity (70) bacterial isolates of twelve different antibiotics and are all of the : Amikacin, Amoxicillin /clavulanic acid, Ciprofloxacin, Cefotaxim, Cefexime, Chloramphenicol, Gentamycin, Piperacillin, Trimthoprime, Ofloxacin, Vancomycin and Nalidixic acid.7 - Staphylococcus aureus showed very high resistance to the antibiotic Cefaxime The ratio of this counter - resistance (100%), isolates also showed high resistance to both antibiotics Cefotaxime, Gentamycin & nalidixic acid Where the percentage of resistance to these antibiotics (60%).While these isolates showed low resistance to both antibiotics Chloramphenicol, Ciprofloxacin & Ofloxacin at (10%) to both antibiotic.8 - Staphylococcus epidermidis showed resistance by (100%) to antibiotic Cefexime, while the ratio of bacteria resistance to antibiotic Cefotaxime is (58%) also it was the resistance ratio to the antibiotics Nalidixic acid & Trimethoprime (50%) to both of these antibiotics.9 - Staphylococcus bacteria were all sensitive (100%) for antibiotic Amikacin.10 - Pseudomonas spp. Showed high resistance to both antibiotics Cefotaxime & Nalidixic acid by resistance reached (66%) it was also the resistance ratio of both antibiotics Trimethoprim & Vancomycin (55.5%) & (44.4%) respectively While did not show resistance to the bacteria to the antibiotic Amikacin, piperacillin, Ofloxacin & Amoxicillin/Clavulanic acid.11 - Bacteria isolates Klebsiella spp. Were resistant to every antibiotics Cefixime, Trimethoprim & Vancomycin by (100%), bacteria also showed resistant ratio for antibiotics Cefotaxime, Piperacillin & Amoxicillin/Clavulanic reached (66.6%), followed by antibiotic Gentamycin by resistant reached (50%). Klebsiella spp. Were the only bacteria that showed resistant ratio for antibiotic Amikacin reached (16.6%).12 - It has measured MICs test for five antibiotics that used in in the study these are : Amikacin & Clavulanic acid/ Cefotaxime, Amoxicillin, Gentamycin & Ciprofloxacin. on the bacteria most sensitive or most resistant and all isolates that tested showed low MICs ratio to antibiotic Amikacin where ranged between (1 - 8) microgram/milliliter where the isolates were sensitive to mentioned antibiotic geatly.13 - The isolates showed MICs values increased to antibiotic Cefotaxime where the values ranged between (2 - 128)microgram/milliliter to S. aureus while the values ranged between (8 - 512) microgram/milliliter to the remain negative Staphylococcus bacteria of Coagulase test, as for isolates of Klebsiella spp. & Acinetobacter spp. The values of their MICs for the mentioned antibiotic ranged between (2 - 512) microgram/milliliter. While the bacteria isolates Pseudomonas spp. MICs values were low for the same antibiotic where values ranged between (0.25 - 2.0)microgram/milliliter.

التحري عن بعض جينات عوامل الضراوة لبكتريا Cronobacter sakazakii المعزولة من حليب الاطفال الرضع المجفف وعينات سريرية == Detection of some virulence factors genes of Cronobacter sakazakii isolated from Powder infant formula and clinical samples

Author name: ذاريات عبد الرحمن مطلك الجبوري

Supervisor name: لمى عبد الهادي زوين

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: University of Baghdad

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: اجريت هذه الدراسة لعزل وتشخيص بكتريا Cronobacter sakazakii من حليب الاطفال المجفف ومن الحالات السريرية لاطفال دون عمر السنتين . اذ جمعت230) ) عينة، شملت (30) عينة حليب اطفال لاعمار مختلفة دون عمــــــــــر السنتين من الاسواق المحلية في بغداد, و(200) عينة سريرية، تضمنت 50 عينة من كل من (سائل النخاع الشوكي ودم وخروج وبول) من مستشــــــــفى مدينة الطب (حماية الاطفال ) ومستشفى الطفل المركزي، للمدة من الاول من ايلول 2015الـــــى الاول من كانون الثاني 2016م. زرعت العينات على اوساط زرعية خاصة، اذ زرعــــــــــت عينات (الحليب) على وسط Violet red bile glucose agar وزرعت العينات (السريرية) على وســــــــــــــــــــــــــــط MacConkey agar، وزرعت جميع العينات (الحليب والسريرية ) علــــــــــــــــــى وسط Tryptone soy agar ، ثم زرعت على وسط Biriiltent Enterobacter sakazakii agar. شخصت العزلات بالفحوصات المجهرية والمزرعية والكيموحيوية ، فضلا عن التشخيص باستعمال جهاز Vitek - 2 اذ امكن الحصول على 19 عزلة، وكانت جميعها تعود لبكتيريا Cronobacter sakazakii، وتضمنت 6 عزلات بنسبة تلوث 9.09 % (اذا كانت عزلة واحدة من عينات حليب Novolac Allernova وعزلتين من عينات حليب Novolac AD وثلاث عزلات من عينات حليــــب Dialak1) و13 عزلة بنسبة تلوث 6.5 % (موزعة بواقع 6 (%12) عزلات من عينات سائل النخاع الشوكي و7 ( %14) عزلات من عينات الدم) ولم يتم الحصول على البكتريا من عينات الخروج والبول. بينت نتائج التحري عن بعض عوامل الضراوة مظهريا بان جميع العزلات البكتيرية كانت قادرة على احداث حركة Swimming بقطر يتراوح بين ( 9 - 1ملم ) وSwariming بقطر يتراوح بين 40 - 1)ملم) , وقدرتها ايضا على تكوين الغشاء الحيوي Biofilm باستخدام ثلاث طرائــــــــــق، اذ بينت النتائـــج قدرة العزلات البكتيرية علـــــــى تكويــــــــن الغشاء الحيوي بطريقــــــــــــــة التخطيط على وسط احمر الكونغو الصلب Congo red agar اذ ان 16 عزلة من اصل 19 عزلة تعود لبكتريا C.sakazakii بنسبة 84.21% قادرة على تكوين الغشاء الحيوي على وسط احمر الكونغو الصلب التي هي 4 عزلات بكتيرية بنسبة 21.05% كانت منتجة للغشاء الحيوي وبشكل قوي 10 عزلات بكتيرية بنسبة 52.63% كانت منتجة للغشاء الحيوي وبشكل متوسط وعزلتين بكتيريتين بنسبة 10.52% كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف، في حين كانت 3 عزلات بكتيرية بنسبة 15.79% غير قادرة على تكوين الغشاء الحيوي ، اما طريقة Tubes method كانت جميع العزلات قادرة على تكوين الغشاء الحيوي، فقد وجد ان 4 عزلات بكتيرية بنسبة %21.05 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل قوي، و13 عزلة بكتيرية بنسبة 68.42 % كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل متوسط ، وعزلتين بكتيرية بنسبة 10.53 % كانت منتجة للغش اء الحي وي بشكل ضعيف ، وطريقة Microtiter plate method اذ ان 9 عزلات بكتيرية بنسبة %47.37 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل قوي و8 عزلات بكتيرية بنسبة 42.11 % كانت منتجة للغشاء الحيـــــــــوي بشكل متوسط وعزلتين بكتيرية بنسبة %10.53 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف . اظهرت نتائج فحص الحساسية باستعمال جهاز Vitek - 2 كونه اكثر كفاءة مقارنـــــــــــــــة بالطريقة التقليدية اتجاه 18 مضــــ ادا حيويــــ ا لتحديد التركـــــ يز المثبـــــــــــــــــط الادنـــ ـى( MICs) Minimum Inhibitory Concentration, وبينت النتائج ان جميع العزلات البكتيرية كانت حساسة Sensitive بنسبة 100% لعدد من المضادات الحيوية المستعملة في الـــدراسة وهـــــــــــي Ampicillin - Sulbactam وCefotaxim وCefpodoxime وCeftazidime وCiprofloxacim وGentamicin وImipenumو Levofloxacin وMeropenem وTazobactam - Piperacillin وTrimethoprim - Sulfamethoxaole وTigecyclin. بينما اختلفت العزلات البكتيرية فكانت مقاومة Resistance او متوسطة المقاومة، اذ كانت نسبة المقاومة اتجاه المضاد الحيوي Cefuroxim وCefuroxim Axetil بنسبة 5.26 % على التوالي، في حين كانت متوسطة الحساسية اتجاه المضاد الحيوي Ampicillin بنسبة %5.26 وللمضاد Cefuroxim بنسبة %15.79, وللمضاد Cefuroxim Axetilبنسبة 52.63% وللمضاد Nitrofurontion بنسبة %15.79 . تم التحري عن بعض جينات الضراوة لبكترياC.sakazakii وتضمنت هذه الجينات كلا من ompA( الذي يشفر عن بروتين A للـ Outer membrane ) وzpx (الذي يشفر عن انزيم Proteases) وfliD ( الذي يشفر عن (Flagella (D)واظهرت النتائج وجود هذه الجينات بنسبة 100% في جميع العزلات. | This study was conducted to isolate and identification of Cronobacter sakazakii from children milk powder and clinical cases of children under two years . It collected (230) samples , included (30) sample children's milk for various ages under two years from the local markets in Baghdad, and (200) from clinical cases , which included (50) samples from each of the (Cerebrospinal Fluid and blood and stool and urine) of the Medical City Hospital ( the protection of children) from Central Children Hospital and Children's Protection Educational Hospital during the period between 1/9/2015 to 1/1/2016. Specimens planted among agricultural private, as planted specimens (milk) to the center of Violet red bile glucose Agar and planted specimens (clinical) at the center of MacConkey agar and planted all samples (milk and clinical) on the central Tryptone soy agar, then planted on the central Biriiltent Enterobacter sakazakii agar. Diagnosed isolates tests microscopic farm and biochemical, as well as diagnostics using Vitek - 2 device as possible to get 19 in isolation, they were all returned to the Cronobacter sakazakii, included (6 (9.09%) isolates included isolation of one isolate from Novolac Allernova and two isolate from Novolac AD and three isolates from Dialak1 ) and 13 isolated (6.5%) included ( 6 (12%) isolates from CSF and 7 (14%) isolates from blood) don't found in stool and urine samples. The results of the investigation of some virulence factors shoewd that all bacteria isolates were able to Swimming motility with a diameter ranging (9 - 1 mm) and Swariming motility with a diameter ranging (40 - 1 mm) and so their ability form biofilm by using three methods. The results show the ability of isolates to form biofilm by using Congo red media methods where it 16 out of 19 isolated bacteria belonging to C.sakazakii increased by (84.21%) able to form biofilm on the central Congo red steel which is 4 (21.05%) were strong production biofilm , 10 (52.63%) were intermediate production biofilm and 2 (10.52% ) were weak biofilm formation , while the 3 (15.79%) unable to form biofilm, The tubes method were all isolates were able to form biofilm, it were found that 4 (21.05%) isolates strong, and 13 (68.42%) intermediate and 2( 10.53%) weak biofilm formation , Microtiter plate method gave 9 (47.37%) isolates strong and 8 (42.11%) intermediate and 2 (10.53%)weak biofilm formation. The susceptibility measured by Vitek - 2 was its more efficient than the traditional methods towards the direction of 18 antibiotic to determine the Minimum Inhibitory Concentrations (MICs) Minimum. The results showed that all bacterial isolates were sensitive 100% for a number of antibiotics used in the study, a Ampicillin - Sulbactam and Cefotaxim and Cefpodoxime and Ceftazidime and Ciprofloxacim and Gentamicin and Imipenum and Levofloxacin and Meropenem and Tazobactam - Piperacillin and Trimethoprim - Sulfamethoxaole and Tigecyclin. While different bacterial isolates were resistant Resistance or medium resistance, as the proportion of the resistance counter direction vital Cefuroxim and Cefuroxim Axetil was (5.26%) respectively. Whereas , the isolates show intermidate sensitivity towards the Ampicillin with ratio ( 5.26%) Cefuroxim (15.79%), Cefuroxim Axetil (52.63%) and Nitrofurontion (15.79%). Has been investigating some of the genes of pathogenic bacterium C.sakazakii These included genes both ompA (which encodes for Outer membrane protein A) and zpx (which encodes for an enzyme Proteases) and fliD which encodes for (Flagella (D) and the results showed the presence of these genes by 100% in all isolates.

دراسـة مقاومة انواع من البكتريا المعزولة من المرضى لبعض المضادات الحياتية والمركبات الكيمياوية الجديدة == STUDY THE RESISTANCE OF BACTERIAL SPECIES ISOLATED FROM PATIENTS TO THE SOME ANTIBIOTICS AND NEW CHEMICAL COMPOUNDS

Author name: خانزاد خضر جرجيس

Supervisor name: عادل كمال خضر | سوزان سعدي حسين

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: جمعت 488 عينة ماخوذة من مختلف انواع الاصابات من مختبر الصحة العامة المركزي ومستشفيات محافظة اربيل . اخذت 100 عينة من اشخاص لهم التهابات المجاري البولية، وجمعت 388 مسـحة من التهاب الجروح، الحروق، الاذن، اللوزتين، ملتحمة العين، المهبل والانف . استنبتت هذه العينات على وسطي اكار الدم وماكونكي اكار للتحري عن وجود البكتريا المسـببة للاصابات المتنوعة وتشخيصها . بلغ عدد العينات الموجبة للزرع البكتيري 321 (% 65.77)، فيما كان عدد العينات السالبة 167 (% 34.22)، شــخصت العزلات النامية مظهريا وزرعيا وخواصها الكيموحيوية اذ اهملت جميع انواع البكتريا النامية باســـتثناء S. aureus ، S. epidermidis ، P .aeruginosa ، E. coli . اظهرت نتائج التشخيص البايوكيميائي وجود 67 عزلة (% 20.87) منها تعود الى نوع S. aureus من خلال ايجابيتها لفحص الكاتليز وفحص انتاج انزيم مجلط البلازما، وتخمير سـكر المانيتول، اختزال التليورايت وانتاج انزيم محلل الدنا DNase المقاوم للحرارة كما واظهرت نتائج التشـــخيص وجود 59 عزلة (% 18.38) منها تعود الى E. coli اذ تميزت هذه البكتريا عند تنميتها على وسط EMB (Eosin - methylene blue agar) بمستعمراتها ذات بريق معدني اخضر وتنمو على اكار الماكونكي بشكل مستعمرات وردية لكونها مخمرة لسكر لاكتوز اضافة الى اختبار IMVC كانت موجبة لاختبار الاندول واحمر المثيل فيما كانت سالبة لفحص الفوكس بروسكاور ولم تتمكن بكتريا E. coli من اسـتهلاك السترات فقد اعطت فحصا سالبا لليوريز والاوكســيديز وكذلك وجود 50 عزلة (% 15.57) P. aeruginosa الموجبة لفحص الاوكسيديز والكاتليز واختبار استهلاك السترات وسالبة لاختبار انتاج اليوريز.واظهرت وجود 21 عزلة (% 6.54) تعود الى S. epidermidis منتجة لانزيم الكاتليز وغير منتجة لانزيم مجلط البلازما وانزيم تحلل الدنا DNase وغير مخمرة لســكر مانيتول، ، واستعمل نظام ابي API STAPH ، API 20E لدعم هذه النتائج .شملت الدراسة فحص حساسية العزلات تجاه 33 مضادا حياتيا و9 مركبات كيمياوية . اظهرت بكتريا S. aureus مقاومة عالية للمضادات Penicillin ، Ampicillin، Piperacillin ،Carbenicillin ، Augmentin ، Tetracycline اذ بلغت نسبتها (,90, 100 ,90 80 , 6050 ,) %على التوالي واظهرت هذه العزلات مقاومة اقل للمضاد Rifampicin اذ بلغت نسبتها 5% واظهرت هذه البكتريا مقاومة منخفضة للمضادات Oxacillin ، Cloxacillin ، Imipenem , Amikacin , Ciprofloxacillin , Pefloxacillin , Sulphamethoxazole Trimethoprim اذ بلغت نســـــبتها % 15 على التوالي في حين حصلت استجابة مختلفة للمضادات الحيوية الاخرى . بينت النتائج ان جميع العزلات S. aureus كانت % 100 حساسة لمضاد Vancomycin ، Novobiocin ، Fusidic acid .اظهرت بكتريا S. epidermidis مقاومة عالية للمضادات Piperacillin, Penicillin G , Doxycycline hydrochloride, Ampicillin Carbenicillin ,Tetracycline, Augmentin, اذ بلغت نسبتها % (50,60,70,70,80,90, 100) .اظهرت هذه العزلات مقاومة اقل للمضادات Imipenem Ciprofoxacillin,Rifampicin , ,Pefloxacillin, Fusidic acid , اذ بلغت نســـبتها % (5,10,10,10,10) على التوالي واظهرت جميع عزلات بكتريا S. epidermidis حساسيتها للمضادات Vancomycin , Novobiocin والتي بلغت نســـبتها % 100. اظهرت عزلات P. aeruginosa مقاومة عالية بلغت نسبتها % 100 للمضادات Penicillin G , Ampicillin , Augmentin , Oxacillin , Cloxacillin , Cephalothin , Cephalexin , Cefoxitin , Streptomycin ,Tetracyclin , Doxycycline hydrochloride , Chloramphenicol , Erythromycin , Rifampicin , Nitrofurantoin وSulphamethoxazole Trimethoprim.اظهرت عزلات هذه البكتريا مقاومة اقل للمضادات Amikacin Ciprofloxacillin, Pefloxacillin, Imipenem, Aztreonam,, اذ بلغت نسبتها % (15,20,20,20,25) , بينما اختلفت العزلات في نسبة مقاومتها للمضادات الحيوية الاخرى . اظهرت عزلات E. coli مقاومة عالية للمضادات Penicillin G , Cloxacillin,Oxacillin , Ampicillin Erythromycin, Augmentin, اذ بلغت نسبتها % (90,95,95, 100, 100,100) , اظهرت عزلات هذه البكتريا مقاومة اقل للمضادات ,Gentamicin Ciprofoxacillin , Imipenem Aztreonam , , ,Amikacin,Nitrofurantoin,Pefloxacillin اذ بلغت نسبتها%(5,10,10,10,10,15,15) على التوالي في حين اختلفت العزلات في نسبة مقاومتها للمضادات الحيوية الاخرى . تم دراسة مركبات مشتقة من - 5,5 ثنائي فنيل - 4,2 - ايميدازوليدين دايون (فنتيون) من خلال اجراء تفاعلات قواعد مانيخ مع البارافورمالديهايد والامينات الاولية المعروفة باستخداماتها الدوائية . واختبرت هذه المركبات الكيميائية الجديدة التســعة كمواد مضادة للبكتريا Antibacterial agent باستخدام خمسة تراكيز (0.2,0.1,0.08,0.06, 0.04 ml) . بينت نتائج التحليل الاحصائي ان افضل طريقة هي طريقة التخفيف بالمرق broth dilution وتليها طريقة تخفيف بالاكار . فقد تم التوصل الى وجود فروقات معنوية (P< 0.05) ، بين طريقة التخفيف بالمرق وكل من الطريقتين انتشار القرص والحفرة .جميع المركبات الكيمياوية المحضرة لها تاثيرات قاتلة على كل من S. aureus وS. epidermidis باســـتثناء V,VII حيث وجد ان لهما تاثيرا مثبطا وليـس قاتلا في التراكيز (0.2,0.1,0.08,0.06,0.04ml) في حين اظهرت المركبات I، IV، V، VIII،IX تاثيرات قاتلة على بكتريا P. aeruginosa ، كما وجد ان المركبات II،III، VI، VII لهم تاثيرات مثبطة على هذه البكتريا في التراكيز المذكورة نفسها، كانت جميع المركبات الكيمياوية لهم تاثيرات قاتلة على بكتريا E. coli وفي جميع التراكيز المستخدمة .

الخصائص الحيوية والجزيئية والفعالية ضد الميكروبية للنايسين المنتج من قبل بكتريا subsp. lactis Lactococcus lactis المعزولة من الحليب الخام == Biological, Molecular characteristics and antimicrobial activity of Nisin produced by Lactococcus lactis subsp. lactis Isolated from Raw Milk

Author name: خالد اسماعيل عزيز

Supervisor name: رجوة حسن عيسى الربيعي | زيرك فقى احمد عبد الرحمن

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تمت جمع مائة وخمسة واربعون نموذجا من الحليب الخام خلال فترة ما بين تموز الى التشرين الثانى لعام 2013 فى مزارع تربية المواشي لمحافظة اربيل ودهوك .اسفرت النتائج عن الحصول على 45 عزلة من بكتريا L. lactis subsp. lactis تمت تشخيص هذه العزلات باستخدام الصفات المجهرية , المظهرية , البايوكيميائية ,API 20E SYSTEM بالاضافة الى تقنية الـ PCR . اختبرت فعالية العزلات لبكتريا L. lactis subsp. lactis تجاه ثلاثه عشر نوعا من المضادات الحيويه وتباينت العزلات فيما بينهما من حيث استجابتها لاختبار الحساسية وعدد منها مقاومة كالاتي : Cephalothin, Ampicillin, Amoxicillin/ Clavulanic acid, Sulfamethoxazole/Trimethoprim, Cefotaxime, Clindamycin, Ceftriaxone, Nitrofurantoin, Gentamycin, Vancomycin, Ciprofloxacin, Chloramphenicol, and Imipenem.، ونسبة المقاومة كالاتي : 95.55%, 93.33%, 93.33%, 91.11%, 84.44%, 77.77%, 71.11%, 62.22%, 53.33%, 40%, 35.55, 24.44%, 2.22%. على التوالي.اظهرت نتائج جميع العزلات فعالية عالية ضد خمسة انواع من البكتريا المرضية وهى : E. coli, B. subtilis, P. aeruginosa, C. perfringes and S. aureus باستعمال تقنية طريقة الانتشار بالحفر. اظهرت العزلة 41 و15 فعالية عظمى (16mm) (20mm) ضد بكتريا S. aureus وB. subtilis بينما اظهرت العزلة 20 فعالية كبيرة (13mm) ضد بكتريا aeruginosa P.. عموما فان البكتريوسين لجميع العزلات المذكورة كانت فعالة ضد البكتريا الموجبة والسالبة لصبغة كرام .ايضا تم استخدام النايسين النقي ضد خمسة انواع من البكتريا المرضية واظهرت النتائج بان مناطق التثبيط كانت 18، 22، 14، 13 و15 ملم ضد كل من S. aureus، B. subtilis، C. perfringens، E. coli وP. aeruginosa على التوالي.درست تاثير الاس الهايدروجينى،الحرارة والاشعة الفوق بنفسجية على فعالية نايسين للعزلات 10، 26 و42. اظهرت النتائج بان مستخلص نايسين لعزلة L42 كانت اكثر فعالية عند الاس الهايدروجينى 2.5 والحرارة - 4 م ضد البكتريا المرضية. لم يظهر مستخلص النايسين اى فعالية ضد البكتريا المرضية عند تعريضه للاشعة الفوق بنفسجية مبينا التاثير السلبى لهذه الاشعة على فعالية البكتريوسين.تم اختيار العزلة اكثر مقاومة للمضادات الحيوية (L42) لاجراء عملية التحول وذلك لتحديد مواقع الجينات مانحة المقاومة للمضادات الحيوية باستخدام عملية التحول الوراثي باستعمال بكتريا coli DH5 - α E. الخالية من البلازميدات مع البلازميد المنقى من العزلة L42. تم اجراء عملية التحول بنجاح واظهرت النتائج بان جينات : Chloramphenicol, Nitrofurantoin, Cefotaxime, and Vancomycin كانت واقعة على البلازميد بينما البقية كانت واقعة على الكروموسوم. تم تحديد التركيز المثبط الادنى للنايسين واظهرت النتائج بان MIC للنايسين بالنسبة لبكتريا aureus S. كانت 400µg/ml بينما لبكتريا coli E. كانت 500µg/ml. استخدمت MIC للنايسين كعامل تحييد للسيطرة على جينات مانحة المقاومة للمضادات الحيوية لنوعين من البكتريا المرضية وهى aureus S. وcoli E.. كشفت النتائج بان الجينات منحت المقاومة لـ AMP, OXA, TET, C, CTX, SXT, AK, CFM, تم تحييدها بنسبة 61.5% بينما فى بكتريا coli E. تم تحييد الجينات لـLEV, MEL, NOR, and SXTبنسبة 31%. تم دعم النتائج عمليتي التحول والتحييد باستخدام تقنية الترحيل الكهربائى للهلام. | In this study a total of one hundred forty five raw milk samples were collected during the period of (July to November, 2013) from different fields in Erbil and Duhok province. Screening revealed that 45 out of 145 samples of raw cow milk (31%) were L. lactis subsp. lactis. Characterization of these selected isolates were carried out using morphological, microscopical, biochemical characteristics, API 20 system and further confirmation were achieved by PCR assay.Antibiotic sensitivity test performed for L. lactis subsp. lactis against thirteen antibiotics which include Ampicillin (AMP), Amoxicillin/ Clavulanic acid (AMC), Imipenem (IMP), Gentamycin (GM), Sulfamethoxazole/Trimethoprim (SXT), Cephalothin (CEP), Clindamycin (CLIN), Nitrofurantoin (F), Ciprofloxacin (CIP), Ceftriaxone (CRO), Chloramphenicol (C), Cefotaxime (CTX), and Vancomycin (VAN). The isolates appeared to be varied in their resistance, the number and resistance percent for antibiotics used CEP, AMP, AMC, SXT, CTX, CLIN, CRO, F, GM, VAN, CIP, C, and IMP were as follow 95.55%, 93.33%, 93.33%, 91.11%, 84.44%, 77.77%, 71.11%, 62.22%, 53.33%, 40%, 35.55%, 24.44%, and 2.22% respectively.All supernatants were isolates exhibited marked activity against five pathogenic bacteria includes S. aureus, B. subtilis, C. perfringens, P. aeruginosa, and E. coli using agar well diffusion method. Isolate 15 and 41 exert maximum activity (20 mm) and (16 mm) against B. subtilis and S. aureus. Whereas isolate 20 showed highest activity (13 mm) against P. aeroginosa. Generally, all aforementioned isolates were active against gram positive and Gram negative bacteria. In addition, the effect of pH, temperature and UV light were studied on nisin activities of L10, L26 and L42 against some pathogenic bacteria. The results showed that nisin extract of L42 displayed highest activity at pH 2.5 and temperature at - 4 °C against pathogenic bacteria under study. Under UV light wavelength all nisin showed low or no activity against different pathogenic bacteria selected in this study.Also a pure nisin was used against five pathogenic bacteria and the results shows that the inhibition zones were 18, 22, 14, 13 and 15 mm against each of S. aureus, B. subtilis, C. perfringens, E. coli and P. aeruginosa respectively.One highly resistance isolate was chosen (L42) for transformation test to determine the location of the antibiotic resistance genes by genetic transformation process using the laboratory strain E. coli DH5 - α with plasmid DNA purified from this isolates. The transformation process conducted successfully and the results showed that the resistance genes for F, C, CTX, and VAN were located on plasmid DNA. While for others were located on chromosomal DNA.Minimum inhibitory concentrations were tested for nisin and the results revealed the MIC of nisin for S. aureus was 400 µg/ml while for E. coli was 500 µg /ml. MIC of nisin was used as curing against to control the antibiotic resistance genes in two pathogenic bacteria represented by E. coli and S. aureus. The results showed that the genes encoding resistance to AMP, OXA, TET, C, CTX, SXT, AM, and CFM were cured and the percentage of curing was 61.5%. Whereas for E. coli the gene of LEV, MEL, NOR, and SXT were cured with 31%. The above results of both transformation and curing process were supported with gel electrophoresis.

دراسة بكتيرية ومناعية للانظيم الحال للبروتين نوع - ا - المستخلص من بكتيريا Proteus mirabilis المعزولة من خمج السبل البولية == Bacteriological and Immunological Study of IgA - Protease Enzyme Extracted from Proteus mirabilis Isolated from Urinary tract infection

Author name: حسن علي حسين السعدي

Supervisor name: رجوه حسن عيسى الربيعي | جاسم طعمه حسين الخفاجي

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Doctorate

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تضمنت هذه الدراسة اربعة محاور : 1 - العزل والتشخيص : تم عزل وتشخيص (40 ) عزلة من بكتيريا Proteus spp. من مجموع ( 200 ) عزلة بكتيرية من عينات اخماج مرضى السبل البولية في مستشفيي مدينة الطب والكندي للفترة بين 1/3/2004 لغاية 30/10/2004.اظهرت الفحوصات الكيميائية الحيوية ان 40 عزلة بكتيرية (20% ) من العزلات البكتيرية كانت تنتمي الى جنس Proteus والتي اشتملت على ( 37 ) عزلة تعود الى بكتيريا)P. mirabilis18.5%) ثلاث عزلات من بكتيريا Proteus vulgaris. عشر عزلات من بكتيريا P. mirabilis كانت منتجة للانظيم الحال للبروتين (IgA Protease)، بينما كانت عزلات بكتيريا Proteus vulgaris غير منتجة للانظيم المذكور ،واختيرت العزلة (Pm5)P.mirabilis كعزلة منتجة للانظيم.2 - تنقية وتوصيف الانظيم : اختير الوسط مرق ( Cysteine lactose electrolyte deficient ) كافضل وسط زرعي لانتاج الانظيم من بكتيريا Proteus mirabilis وتم تنمية العــــزلة البكتيريـــة( Pm5) في درجة حرارة( 37 )م باستخدام الحاضنة الهزازة وثم نقي الانظيم باستخدام الترسيب ملح كبريتات الامونيوم بتشبع(60%) وديلزته واستخدام هلام السيفادكس G - 100 Sephadex وكذلك المبادل الايوني DEAE - Cellulose، قيست الفعالية الانظيمية وتركيز البروتين للانظيم في كل مرحلة من مراحل التنقية ظهر منحني تنقية الانظيم باستخدام هلام السيفادكس وجود اربعة قمم بروتينية منها قمة واحدة للانظيم الحال للبروتين بينما اظهرت طريقة استخدام المبادل الايوني قمة واحدة فقط، تم حساب الفعالية الانظيمية وتركيز البروتين والفعالية النوعية والفعالية الكلية وعدد مرات التنقية والحصيلة الانظيمية فكانت على التوالي : (28.7)وحدة/مل،(0.15)ملغم/مل، (191.3)وحدة/ملغم، (258.3)، (5.5)،(9.9%) عند التنقية باستخدام المبادل الايوني وحسب الوزن الجزيئي للانظيم اذ كان (50)كيلودالتون باستخدام طريقة الترشيح الهلامي وكانت الفعالية المثلى للانظيم عند الاس الهيدروجيني 8 ودرجة الحرارة المثلى لانتاج الانظيم هي (37)م ودرجة الحرارة الملائمة لخزن الانظيم هي (4)م مقدارها وكان للايون (Ca+2) تاثير واضح في زيادة فعالية الانظيم بينما كان للـEDTA تاثير مثبط على فعالية الانظيم. 3 - الدراسة المناعية : - استعملت ثلاث مجاميع من الارانب لغرض التمنيع (ارنبين لكل مجموعة) حقنت داخل العضلة باستعمال تراكيز مختلفة من الانظيم(0.2،0.5،1)ملغم/مل فضلا عن ارنبين ضمن مجموعة السيطرة. اتبعت طريقتين (الاوكترلوني والترسيب باستعمال الانابيب) لغرض التحري عن الاضداد المتخصصة للانضيم الحال للبروتين في مصل الارنب، اظهرت النتائج عدم تكون الخط الترسيبي عند استعمال طريقة الاوكترلوني بينما تكونت حلقة ترسيبية واضحة باستعمال طريقة الترسيب بالانابيب. تم فصل امينوكلوبيولينات الارنب باستعمال المبادل الايوني DEAE - Cellulose بعد عملية الفصل ظهرت ثلاث قمم بروتينية على الطول الموجي 280 نانوميتر تم اختبار فعالية الانظيم في كل قمة مقارنة بالقمم المؤشرة في الادبيات، اظهرت القمة الثالثة حلقة ترسيبية واضحة باستعمال طريقة الترسيب بالانابيب بينما لم تظهر خط ترسيبي باستعمال اختبار الاوكترلوني وهذا قد يدلل على وجود تحت الانواع IgG المقاومة لفعالية الانظيم الحال للبروتين ضمن هذه القمة. تم دراسة تاثير التراكيز المختلفة للانظيم الحال للبروتين (0.2، 0.5، 1)ملغم/مل على بعض الخلايا المناعية وفق المعايير التالية : اذ ادى تركيز الانظيم(0.2)ملغم/مل الى زيادة في عيوشية الخلايا اللمفاوية وخلايا متعددة النوى (PMNs) وعلى التشكل الزهري التائي والبائي وعملية التهام الخميرة المقتولة في الزجاج واختزال صبغة النايتروبلوتترازوليم (NBT) ومعامل الانقسام الخيطي في الفئران. 4 - الدراسة النسجية : - درست التغيرات النسجية المختلفة في الارانب الممنعة بالانظيم الحال للبروتين بتركيز((0.2 ملغم/مل فكان له تاثيرا واضحا على انسجة الكبد، الرئة، الكلية والطحال،اذ لوحظ وجود مناطق تنكس استسقائي شديد في هيولي خلايا الكبد مع احتقان الوريد المركزي في نسيج الكبد، كمالوحظ وجود خلايا التهابية في جدران الاسناخ وضمور تجويف الاسناخ في الرئة، بينما توسعت محفظة بومان مع ارتشاح بعض الخلايا الالتهابية وخاصة حول الكبيبات في الكلية، اما في الطحال ازداد عدد الخلايا التائية حول الشرين المركزي كذلك الخلايا البائية في باقي اللب الابيض في الطحال نتيجة لتكاثرها وفرط نموها. | This study was included four aspects : - 1 - Isolation and ldentifcation : Forty isolates of Proteus spp were isolated and identified among (200) bacterial isolates from patients samples with urinary tracts infection in two hospitals (Baghdad and Al - Kindy). Biochemical tests were showed (20 %) from bacterial isolates were belonged for genus Proteus (37) isolates replied to Proteus mirabilis with (18.5 %) and (3) isolates were for Proteus vulgaris. Ten isolates from Proteus mirabilis were producing for IgA protease while P.vulgaris isolates were non - producing for this enzyme. Proteus mirabilis (Pm5 ) was selected among isolates efficient producing isolate(Pm5). 2 - Purification and characterization of the enzyme : Cysteine lactose electrolyte deficient medium was selected as the best medium for culturing for production the enzyme by P. mirabilis. Bacterial isolate (Pm5) to produce protease, then protease was purified by application Ammonium sulfate with (60 %) saturated, dialysis, Sephadex G - 100 filtration, and Ion exchange with DEAE. Cellulose. The enzymatic activity and protein concentration were measured in every stage of purification. Four peaks were appeared one of them belong to IgA - protease activity, while by using Ionic exchange method was appeared only one peak. Enzymatic activity, protein concentration, specific activity, total activity, no. of purification, and enzymatic yield were determined in Ionic exchange technique were : ( 28.7) U/ml,(0.15)mg/ml,(191.3)U/ml,(258.3),(5.5),(9.9%) respectively, molecular weight of the enzyme was performed by using gel filtration was (50)Kd. The optimum activity was at pH (8), the optimum temperature with the enzymatic activity was at (37) ˚C, the suitable temperature for storage with enzymatic activity was at (4) ˚C, the (Ca+2) Ion has on effect on increasing the enzymatic activity, while the EDTA was suppressed activity. 3 - Immunological study : Three groups of rabbits were used for immunization (two rabbits for each group in addition to control were injected intramuscular by different enzyme concentrations (0.2, 0.5, 1) mg/ml. Two methods (Ouchterlony and tube precipitation are used for checking up specific protease antibody in rabbit serum. Results showed no precipitin line between enzyme as antigen and serum in (Ouchterlony) while there was clear ring of precipitin was formed in the second method. Rabbit immunoglobulines were separated by using DEAE - Cellulose results showed three peaks protein at (280) nm wave length absorbency, enzyme activity of each peak was tested. In comparing these peaks with standard rabbit immunoglobulines. The third peak was tested against IgA - protease by using tube precipitation test result showed precipitation ring. This result indicated that this peak may include IgG subclasses which are resist protease activity while other peaks were opsonized by the enzyme. The effects of the IgA protease concentration (0.2, 0.5,1) mg/ml on immune cells were studied according the following parameters : the effect of the enzyme on immune and (PMNs) cells, T, B - rosette, phagocytosis in vitro, reduction of Nitroblue tetrazolium, and Mitotic index in Mice, (0.2) mg/ml of the enzyme has an effect on induction activity of T, B - rosette, phagocytosis in vitro, reduction of Nitroblue tetrazolium, and Mitotic index in Mice. 4 - Histological aspect : Different pathological changes were shown on rabbit’s tissues (liver, lung, kidney and spleen) which were immunized with IgA protease (0.2)mg/ml. In liver great hydropic degeneration was noticed in the cytoplasm in addition to present an with congestion of central venule, inflammatory cells in the alveolar walls and alveolar cavity atrophy in lung, enlargement of Bouman s capsule with infiltration of phagocytes around glomerulus was shown in kidney, while in spleen T cells around central arteriole as well as B cells in other white pulp were increased as a result of proliferation .

تاثـيــر فعالية الانتيروسين المنتج من بكتريا faecium Enterococcus على بعض البكتريا المرضية المعزولة من مصادر مختلفة == Activity effect of enterocin produced from Enterococcus faecium on some pathogenic bacteria isolated from different sources

Author name: حسام سامي عويد الشمري

Supervisor name: خليل مصطفى خماس

General topic: Biology

Specific topic: Microbiology

Degree: Master

University: Mustansiriyah University - College Of Science

Language: Arabic

University location: Baghdad

First pages:

Abstract: تـتـناول هــذه الـــدراســة تاثـيـر الانتيـروســـين المنتــج بــواســطــة بكــتــريا E.faecium ضـــد بــعــض البكتــريا الــمـمـرضــة المـتـواجـــدة بكثرة في الحـليب ومشتقاته. فقد تم لهذا الغـرض جمع 382عينة من اطفال يعانون حالات اسهال والتهاب السبيل البولي والحليب الخام لعـزل بكتريا E.faecium وتم تشخيص العزلات بالفحوصات الكيموحيوية وتاكيد تشخيصها باستعمال منظومة فايتك 2 . فضلا عن ذلك فقـد تم جمع 50 عينة لعـزل بكتريا Listeria monocytogenes و66 عينة لعزل بكتريا Salmonella typhimurium من الحليب الخام ومشتقاته وتم تشخيصهما باتباع الفحوصات الكيموحيوية وتاكيد التشخيص باستعمال Api Listeria وApi - 20Eاضافة الى التنميط المصلي لبكتريا Salmonella typhimurium . تم تقصي انتاج الانتيروسين المنتج بواسطةE. faecium باستعمال طريقتي اقراص الاكار والانتشار في الحفر , ونقي الانتيروسين باستعمال الترسيب بسلفات الامونيوم والفصل بكحول البيوتانول , كما تم الكشف عن حساسية البكتريوسين المنتج لمجموعة واسعة من الانزيمات الحالة للبروتين والدهون وبعض الانزيمات الاخرى .فضلا عن ذلك فقد تمت دراسة تاثير الحرارة والرقم الهيدروجيني على البكتريوسين المنتج , وتم اختبار تراكيز مختلفة من المايتومايسين - سي لحث الانتيروسين .اختبرت الحساسية للمضادات الحيوية لعزلات بكتريا اللستيريا والسالمونيلا والمكورات المعوية باستخدام طريقة كيربي - باور .يمكن تلخيص النتائج التي تم الحصول عليها بالاتي : كانت نسبة عـزل E. faecium 7.59)%) من مجموع 382 عينة , اما نسبـة عـزل Listeria monocytogenes 10)%) من مجموع 50 عينة , اما نـسبـة عـزل Salmonella typhimurium فقد كانت .06)6%) من مجموع 66 عينة . اظهـر الانتيروســين المنتـج بواســطة E. faecium طـيفا واسعا من التاثير ضـد البكتريا الاختبار المـوجبة والسالبة لصبغـة غــرام التي عددها 8 وبضمـنها Listeria monocytogenes وSalmonella typhimurium . اظهر الحث بالمايتومايسين - سي )بتركيزي 1.5 و2 مكغم/ مل( انتاجا عاليا للانتيروسين . ادت تنقية الانتيروسين جزئيا باستعمال الترسيب بنسبة 80 % الى اعطاء اعلى نتيجة عندما بلغت 2.225 وحدة / مكغم بروتين , اما الفصل بكحـول البيوتانول فقد اعطى محصولا وصــل الى 0.57 وحدة / مكغم بروتين . ادت معاملة الانتيروسين بالانزيمات وتلك الحالة للبروتين حساسية الانتيروسين تجاه هذه الانزيمات باستثناء انزيمات Lipase وCatalase وα - amylaseو Lysozyme . اظهـرت تجارب المعاملة بالحرارة مقاومة الانتيروسين للحرارة وحتى عند121ºC لمدة 20 دقيقة , في حين كان مدى الاس الهيدروجيني له 4 - 9 .اظهرت تجارب الحساسية للمضادات الحيوية ان Enterococcus faecium كانت حساسة الى 7 مضادات حيوية . وكانت بكتريا Listeria monocytogenes مقاومة الى 9 مضادات حيوية وبكتريا Salmonella typhimurium مقاومة الى 4 مضادات حيوية .امكن الحصول على النتائج وكما يلي : انتجت عزلات Enterococcus faecium الانتيروسين بكميات واطئه فيما امكن حثه باستعمال المادة الحاثة المايتومايسين - سي , وامكن تنقيتها جزئيا باستعمال مرسبات البروتين . اتصف الانتيروسين المنتج من هذه البكتريا بطيف واسع النطاق من التاثير ضد البكتريا الموجبة والسالبة لصبغة غرام ولاسيما تلك التي تلوث الحليب ومشتقاته . | This study investigate the effect of bacteriocin by Enterococcus faecium against some pathogenic bacteria frequently found in milk and dairy product. Three hundred eighty two sample collected from patients and raw milk were used for isolation of E.faecium the isolates were diagnostic by biochemical tests and confirmed using Vitek 2 system . In addition Listeria monocytogenes , Salmonella typhimurium were isolated from milk and dairy products these were diagnostic by biochemical tests and confirmed using Api Listeria and Api - 20E system in addition to serotyping to bacteria Salmonella typhimurium . Enterocin produced by E.faecium detected using tow methods Cup agar and Well diffusion and partially - purified using ammonium sulfate precipitation and n - butanol partition , the sensitivity of the material was tested against diverse group of proteolytic , lipolytic and some other enzymes. In addition the effect of temperature as well as pH an the bacteriocin were tested . and used different concentration of Mitomycin - C to induce enterocin . Antibiotic sensitivity of Listeria and Salmonella and Enterococcus isolates were tested using Kirby - Bauer method. The results showed the followings : The isolation rate of E . faecium was (7.59%) from 382 sample , L. monocytogenes isolation rate approach (10%) from 50 sample , S.typhimurium isolation rate reached (6.06%) from 66 sample .Enterocin produce by E . faecium demonstrated a broad - spectrum effect against both gram positive and gram negative bacteria including Listeria monocytogenes and Salmonella typhimurium . Mitomycin - C induction was used to induce a high level production of Enterocin the concentration of optimum inducing agent was 1.5 - 2 mg /ml. The enterocin was partially purified eighty percent of Ammonium sulfate give the highest yield reaching 2.225 Unit /mg protein , n - butanol partition yield 0.57 Unit/mg protein. Enzymatic effect on enterocin demonstrated that proteolytic enzymes completely inactivated the bacteriocin , other enzymes including Lipases Catalase demonstrated no effect. α - amylase , Lysozyme ,The Enterocin was heat - resistance at even 121º C for 20 minute , the optimum pH was shown to be 4 - 9 .Enterococcus faecium was highly sensitive to 7 antibiotic used .and Listeria monocytogenes was highly resistance to 9 antibiotic and Salmonella typhimurium was resistance to 4 antibiotic . In results E . faecium produce enterocin at low level which was induced to high level yield using Mitomycin - C , the enterocin could be partially purified using precipitators protein, That enterocin product of this bacteria characterized a broad spectrum against positive and negative gram bacteria including contaminate milk and its products