اسم المؤلف:
هديل مكي حبيب المؤمن
اسم المشرف:
بشرى محمد جابر علوش | محمد عبد الهادي غالي
المستخلص:
هدفت الدراسة الى اختبار فاعلية المركبات الفعالة لنبات الرازقي Jasminum sambac ضد الخطوط السرطانية وزيادة كفاءة هذه المركبات باستعمال تقنيات النانوتكنولوجي. استخلصت المركبات الفعالة من جميع اجزاء النبات باستعمال اربعة مذيبات عضوية هي الكلوروفورم 99.4% والميثانول 99.8% و70% الميثانول والايثر البترولي, وقد كشف عن هذه المركبات نوعيا باستعمال الكشوفات الخاصة وتقنية TLC ، وكشف عنها كميا باستعمال تقنية HPLC. عزل مركب Jasminin iridiod glycoside ونقي وحسبت كميته في المستخلصات الاربعة باستعمال تقنية HPLC . اختبرت الفعالية السمية للمستخلص الكلوروفورمي وJasminin iridiod glycoside على الخطين الخلويين السرطانيين HeLa وRD والخط الخلوي الطبيعي REF باستعمال التراكيز 0.0 و7.81 و15.6 و20 و25 و31.25 و62.5 او 125 مايكروغرام/ مل ولمدة تعريض 24 ساعة، اذ حضرت جسيمات اللايبوسوم النانوية (liposome) بطريقة التجفيف - اعادة الترطيب (dehydration - rehydration) وباستعمال DMPC : Cholesterole بنسبة (50 : 45) ملغم/مل، وحملت بالمستخلص الكلوروفورمي او Jasminin بتركيز 50 مايكروغرام/ مل، وتم التحري عن كفاءة تحميل اللايبوسوم باستعمالHPLC وحدد حجم جسيمات اللايبوسوم باستعمال DSL ، وكشف عن وقيست شحنة اللايبوسوم باستعمال Zeta - Potential، وحدد شكل اللايبوسوم باستعمال المجهر اللالكتروني الماسح SEM، كما اختبرت سمية المستخلص الكلوروفورمي او الـ Jasminin المحملة على الاجسام الدهنية النانوية على الخطوط الخلوية السرطانية HeLa وRD والخط الخلوي الطبيعي REF مقارنة بالمستخلص الكلوروفورمي والـ Jasminin فقط ومجموعة السيطرة. اظهرت النتائج ان المستخلصات الاربعة (الكلوروفورمي والميثانولي99.8 و70% ميثانولي الايثر البترولي) تحتوي على القلويدات والفلافينويدات والتانينات والصابونيات والتربينات، وكانت كمية الـ Jasminin في المستخلص الكلوروفورمي والمستخلص الميثانولي وو المستخلص 70% ميثانول والمستخلص الايثر البترولي هي 111.38 ، 62.69 ، 61.50، 25.88 ومايكروغرام/ مل على التوالي من كل 100 ملغم/لتر. وكانت نتائج تحديد السمية ضد الخطوط الخلوية ان التركيز 125 مايكروغرام /مل للمستخلص الكلوروفورمي قد تسبب في اعلى نسبة تثبيط لخلايا الخطين الخلويين السرطانيين (HeLa وRD ) اذ بلغت في خلايا الخط الخلوي HeLa 72.51 وكانت في خلايا الخط الخلوي RD 64.28.في حين ادى استعمال الـ Jasminin الى نسبة تثبيط بلغت اقصاها باستعمال التركيز 125 مايكروغرام/ مل ضد خلايا الخط الخلوي HeLa 72.60 بينما كانت 67.27 ضد خلايا الخط الخلوي RD ، ولم يكن للمستخلص الكلوروفورمي والـ Jasminin تاثيرا تثبيطيا ضد خلايا REF. كانت شحنة اللايبوسوم المحمل بالمستخلص الكلوروفورمي - 44.84 وحجمها 84.7. اما باستعمال الـ Jasminin فقد وصلت الى - 57.00 وبلغ حجمها 70.3 نانوميتر ، وظهرت جسيمات اللايبوسوم عند فحصها بالمجهر الالكتروني الماسح SEM كروية الشكل، اما تركيز المستخلص الكلوروفورمي فقد كان 20 مايكروغرام/مل في اللايبوسوم، وبلغت كفاءة تحميل اللايبوسوم له 40%، اما تركيز الـ Jasminin فقد كان 25.42 مايكروغرام/ مل في اللايبوسوم ووصلت كفاءة تحميله الى 50.84%. اظهرت نتائج سمية اللايبوسوم المحمل بالمستخلص الكلوروفورمي او الـ Jasminin ولثلاث مدد تعريض (24 و48 او 72 ساعة)، ان اعلى نسبة تثبيط كانت لللايبوسوم المحمل بالمستخلص الكلوروفورمي لخلايا الخط الخلوي HeLa وبلغت 84.31 مقارنة بنسبة 80.57 لخلايا الخط الخلوي RD وذلك بعد مرور 48 ساعة من التعريض. اما اللايبوسوم المحمل بالـ Jasminin فسجل اعلى تثبيط في خلايا الخط الخلوي HeLa والذي بلغ 80.90 ثم خلايا الخط الخلوي RD 87.18 وذلك بعد مرور48 ساعة من التعريض. | This study investigated the activity of natural compounds of the Jasminum sambac L. against cancer cell lines, and increased the active compounds efficiency by using nanotechnology. The active compounds were extracted by using four organic solvents (chloroform 99.4, methanol 99.8, 70% methanol and petroleum ether), detected qualitively by using special reagent and TLC technique, and quantitively by using HPLC technique. The Jasminin iridoid glycoside was isolated, purified accounted in four by using the HPLC technique. The cytotoxic activity of chloroform extract and Jasminin was tested on two cancer cell lines HeLa and RD, and the normal cell line REF by using the concentrations 0.0, 7.81, 15.6, 20, 25, 31.25, 62.5, or 125 µg/ml, for each one for 24 hours exposure time. Liposome was prepared by the dehydration - rehydration method by using DMPC : Cholesterol as (50 : 45) mg/ml ratio and loaded with 50 µg/ ml of chloroform extract or Jasminin. The liposomic encapsulated efficiency was detacted by using HPLC technique, liposome size by DSL. Detected the charged type and measure the liposome charged by zeta potential, and liposome shape were measured by using scanning electron microscope SEM, and the cytotoxic activity chloroformic extract or Jasminin on which loaded on liposome nanoparticals was tested on the cancer cell lines (HeLa and RD) and the normal cell line (REF) compared with unloaded extract and control cells. The results showed that the four extracts chloroformic, methanolic, 70% methanol and petroleum ether containing alkaloids, flavonoids, trpinoid, taninins and saponnins. The account of jasminin in chloroformic extract, methanolic extract,70% methanolic extract and petroleum ether extract was 111.38, 62.69, 61.50 and 25.88 µg/ ml respectively from 100mg/l. The results of cytotxicity against cell lines showed that the concentration 125 µg/ ml of chloroformic extract caused the highest inhibition percentage for the two cancer cell lines which reaches in HeLa cells line 72.51 and RD cells line 64.28, whereas the use of jasminin caused the maximum inhibitory percentage at the concentration 125 µg/ ml against HeLa cells line 72.60 and 67.27 for RD cells line, and there was no high inhibitory effect on REF cells line. The zeta potential of liposome loaded with chloroformic extract recorded - 44.84 and its size is 84.7 nm, whereas by useing of Jasminin it reached - 57.00 and its size was 70.3 nm. The scanning electron microscope (SEM) shows the spherical shape of liposome, whereby the concentration of chlroformic extract was 20µg/ ml in liposome, and the liposome encapsulated efficiency was 40%. The concentration of jasminin, on the other hand, was 25.42µg/ml in liposome and the encapsulated efficiency reaches 50.84%. The results of cytotxicity of liposome loaded with chloroformic extract and jasminin for three exposure times (24, 48 and 72) hours showed that the highest inhibition percentage in the liposome loaded with chloroformic extract for HeLa cells line recorded 84.31 and RD cells line was 80.57 after 48 hours from exposure. The liposome loaded with jasminin, by contrast, recorded the highest inhibition percentage in HeLa cells line 80.90 and RD cells line 87.18 after 48 hours from exposure.
