اسم المؤلف:
وفاء فوزي ابراهيم الموسوي
اسم المشرف:
ناهي يوسف ياسين | هناء حنين منكلو
المستخلص:
صمم هذا البحث لدراسة التاثيرات السمية الخلوية للمستخلصين المائي والكحولي الخام للعرهون Agaricus bisporus في الزجاج in vitro وفي الحي in vivo في اثنين من الخطوط الخلوية السرطانية، هما خط خلايا سرطان الحنجرة البشري (Hep - 2) وخط خلايا سرطان الغدة اللبنية الفاري (AMN3) ، واظهرت النتائج ان التاثير السمي لكلا المستخلصين الخام اعتمد على التركيز المستخدم ومدة التعريض وذلك باستخدام خمسة تراكيز لكل منهما وهي 312.5) ، 625 ، 1250 ، 2500 ، (5000 مكغم/مل, كان للمستخلص المائي الخام تاثيرا معنويا باحتمالية (P≤0.01) على خط خلايا (Hep - 2) بعد 72 ساعة من تعريضها بالتراكيز المستخدمة وكانت اعلى نسبة تثبيط نمو عند التركيز (5000) مكغم/مل حيث بلغت %34.20، وبلغت نسبة تثبيط النمو الاعلى في خط خلايا (Hep - 2) للمستخلص الكحولي %60.27 ، وكانت نسبة تثبيط هذين المستخلصين الخام لخط خلايا (AMN3) ولنفس التركيز المذكور انفا %48.57 و%50 على الترتيب بعد مدة حضن 24 ساعة. في حين اوضحت نتائج تاثير المستخلصين الخام عند التركيز الاعلى (5000) مكغم/مل وجود فروق معنوية باحتمالية (P≤0.01) في عدد الخلايا التي عانت موتا خلويا مبرمجا لكل من خلايا (Hep - 2) بنسبة 46.44، %25.33 على التوالي و(AMN3) كانت النسبة 62.00، %46.01 على التوالي بالمقارنة مع السيطرة 18.01 ،11.45 % على التوالي.وبينت نتائج المعاملة بالمستخلصين الخام انخفاضا معنويا باحتمالية (P≤0.01) ولجميع التراكيز المستخدمة وهي 62.5) ، 125 ، 250 ، 1000 ، (2000 مكغم/مل في معامل الانقسام الخيطي Mitotic Index (MI) ومعامل التحول الارومي Blast Index (BI) للخلايا اللمفية للدم البشري ، في حين تبين ان كلا المستخلصين لم ينجحا بالعمل كعوامل مشطرة بديلا عن المادة المشطرة Phytohemagglutinin (PHA) , حيث انخفضت معدلات معامل (MI) و(BI) عند المعاملة بالمستخلص المائي الخام الى (1.45،30.33) % على التوالي والمستخلص الكحولي الخام الى (0.86 ،26.79) % بالمقارنة مع السيطرة (913.،57.48) % على التوالي.وتضمنت الدراسة ايضا دراسة التاثيرات السمية للمستخلصين الخام في الحي التي شملت التاثيرات السمية الحادة والتي من خلالها حددت الجرعة المميتة الوسطية (LD50) في الفئران وهي 2842.73 ملغم/كغم و9248.33 ملغم/كغم للمستخلصين المائي والكحولي الخام على الترتيب . في حين كانت نتائج التاثيرات السمية المزمنة باستخدام الجرع 333.3) ، 500 ، (666.6 ملغم/كغم و500) ، 1000 ، (1500 ملغم/كغم للمستخلصين المائي والكحولي الخام على التوالي داخل الخلب (IP) لمدة 30 يوما وبواقع جرعة واحدة كل 48 ساعة كالاتي : اظهرت نتائج التاثيرات السمية للمستخلصين الخام على خلايا نقي العظم في الفئران، التي تضمنت تاثيرها في معامل الانقسام الخيطي (MI) ومعامل التحول الارومي (BI)، ارتفاعا معنويا (P≤0.01) في (MI) عند المعاملة بالمستخلص المائي الخام، في حين لم تظهر النتائج فرقا معنويا عند المعاملة بالمستخلص الكحولي الخام، سببت المعاملة بالمستخلصين الخام ارتفاعا معنويا واضحا في معامل التحول الارومي (BI) اعتمد على الجرعة. في حين لم تظهر النتائج اي تاثير معنوي في وزن الجسم للفئران المعاملة. وبينت النتائج ايضا وجود فروق معنوية باحتمالية (P≤0.01) في مستوى IFN - في المصل ولجميع الجرع المستخدمة. كما اظهرت الدراسة النسيجية المرضية ان المستخلصين الخام لايمتلكان تاثيرا سميا في الكبد والكلية والطحال عند المعاملة بالجرع الثلاثة لكل منهما حيث اظهر الفحص ارتشاحا للخلايا الالتهابية في الانسجة الماخوذة. في حين لم تظهر المعاملة بالمستخلصين الخام فروقا معنوية في عملية البلعمة بالمقارنة مع السيطرة. اعطت نتائج التاثير العلاجي للمستخلصين الخام في الفئران المغروسة بسرطانة الغدة اللبنية الفاري (AM - 3) باستعمال جرع علاجية ثلاثة هي 333.3) ، 500 ، (666.6 ملغم /كغم للمستخلص المائي والجرع 500) ، 1000 ، (1500 ملغم/كغم للمستخلص الكحولي وذلك عن طريق الحقن داخل الخلب Intra - Peritoneum (IP) لمدة 30 يوما بواقع جرعة واحدة كل 48 ساعة فعالية علاجية في اختزال حجم الورم بشكل يعتمد على الجرعة المستخدمة منها. كانت الجرعة العلاجية للمستخلص المائي (666.6) ملغم/كغم هي الافضل تاثيرا من خلال تثبيطها لحجم الورم بنسبة بلغت %87.10 . اما المستخلص الكحولي فكانت الجرعة العلاجية الافضل هي (500) ملغم/كغم بنسبة تثبيط لحجم الورم بلغت %87.93. ان مقارنة حجم الورم النسبي لمختلف المجاميع العلاجية يوضح الفروق المعنوية الكبيرة بين هذه المجاميع ومجموعة السيطرة . كما اظهرت نتائج المعاملة بالمستخلصين الخام زيادة معدل الخلايا التي عانت موتا خلويا مبرمجا في الحي in vivo كانت هذه الزيادة معنوية باحتمالية (P≤0.01).اوضحت نتائج التاثيرات السمية للمستخلصين الخام لجميع الجرع المستخدمة ارتفاعا معنويا (P≤0.01) في وزن الجسم للفئران الحاملة لسرطانة الغدة اللبنية الفاري وفي مستوى الانترفيرون كاما IFN - .بينت نتائج المعاملة بالمستخلص المائي والكحولي الخام للفئران الحاملة للورم وجود انخفاض معنوي (P ≤ 0.01) في معامل الانقسام الخيطي (MI) ومعامل التحول الارومي (BI) لخلايا نقي العظم بالمقارنة مع السيطرة.بين الفحص النسيجي لورم سرطانة الغدة اللبنية الفاري والمعالج بالمستخلصين الخام ولجميع الجرع المستخدمة وجود نسيج ليفي يحيط ببقايا الورم مرتشح بعدد هائل من الخلايا الالتهابية مع ظهور تنخر واسع داخل الورم. في حين اوضحت نتائج فحص الكيمياء النسيجية المناعية لكتلة الورم زيادة في معدل الخلايا التي عانت موتا خلويا مبرمجا وكانت هذه الزيادة معنوية باحتمالية (P≤0.01). وقد اوضح الفحص النسيجي للاعضاء (الكبد، الكلية، الطحال) للفئران المغروسة بالورم والمعاملة بالمستخلصين الخام عدم وجود خلايا منبثة لتلك الاعضاء ووجود ارتشاح للخلايا الالتهابية في الكبد والكلية، في حين اظهر الطحال تنسجا في خلاياه وتوسعا في اللب الابيض مع وجود الخلايا المولدة للصفيحات الدموية ووجود صبغة الهيموسدرين. | This research was designed to study the effect of water and alcoholic crude extracts of Agaricus bisporus in vitro and in vivo. Cytotoxic effect of different concentrations (312.5, 625, 1250, 2500, 5000) of these extracts was investigated by using tumor cell lines, murine mammary gland carcinoma (AMN3) and Human epithelial cell carcinoma of larynx (Hep - 2). The results showed high significant differences (P ≤ 0.001) cytotoxic effect in dose - dependent manner for both watery and alcoholic extracts particularly at the higher concentration 5000 µg/ ml of both extracts showed cytotoxic effect on (Hep - 2) cell line after 72 hour incubation in which the growth inhibition became 34.20% and 60.27% respectively. Similarly these extracts showed cytotoxic effect on (AMN3) cell line, but after 24 hour incubation, in which the growth inhibition was 25.54% in those treated with water extract at concentration of (5000) µg/ml, and 42.64% in those treated with alcoholic extracts at the same concentration. Water and alcoholic extracts at the highest concentration (5000) µg/ml revealed significant apoptotic effect in each of (Hep - 2) cell line (25.33, 46.44% respectively) and (AMN3) cell line (46.01, 62.00 respectively) in comparison with those of non treated (11.45, 18.01). This study also investigated significant effect (P≤0.01) of both extracts at different concentrations (62.5, 125, 250, 500, 1000, 2000) µg/ml on the mitotic index (MI) and blast index (BI) of PHA - induse human peripheral lymphocytes In vitro. The result revealed significant inhibitory effect (P≤0.01) in dose - dependent manner, in which water extracting highest dose reduced the (MI) and (BI) from (3.91, 57.48 %) in control down to (1.45, 30.33%) in treated lymphocytes respectively, while alcoholic extract reduced (MI) and (BI) from (3.91, 57.48 %) in control down to (0.86, 26.79 %) in treated lymphocytes respectively. On the other hand this study tested the toxic effect of both extracts in normal laboratory mice. The results showed that water and alcoholic extracts relatively have an acute toxic effect in mice in respect to LD50 (85.282 mg/kg, and 277.45 mg/kg respectively). However the chronic toxicity of water extract at three different concentration (333.3, 500, 666.6 mg/kg) and alcoholic extract at concentrations of (500, 1000, 1500 mg/kg) was investigated in normal mice by (I.P) administration for 30 days alternatively. The results indicated significant effect (P ≥ 0.01) increasing in (MI) and (BI) of bone marrow cells and serum IFN - level, but with no significant effect on body weight and histological changes in some internal organs (liver, kidney, spleen). Therapeutic effect of both extracts was studied in tumor - bearing mice after (I.P) administration of watery extract at concentrations of (333.3, 500, 666.6 mg/kg) and alcoholic extract at concentrations of (500, 1000, 1500 mg/kg) for 30 days alternatively. The results revealed significant reduction in the tumor volume weather in those treated with watery extract 87.10%, or those treated with alcoholic extract 87.98%, particularly at the concentration of 666.6 mg/kg and 500 mg/kg respectively. Also both extract caused inhibitory effect in each of (MI) and (BI), however they should significant increase (P ≥ 0.01) in the serum level of IFN - and body weight. Histopathological study showed necrosis and infiltration of inflammatory cells encapsulated tumor mass by fibrous tissue , while the immunohistochemistry demonstrated significant (P≥0.01) apoptotic effect in the tumor cells in those treated with water or alcoholic extract. However, histopathological study of internal organs in tumor - bearing mice treated with water or alcoholic extract revealed no metastasis of cancerous cells in these organs, but inflammatory cells had detected infiltrated in both liver and kidney, while the spleen was enlarged with extractivation of the white pulp and Megakaryocytes
