عرض: 25 50 75 100 النتائج

نتائج البحث: 5 من أصل 5

دراسة العلاقة بين انتاج البروتسين وحركة بكتيريا Proteus spp المعزولة من المرضى وبعض صفاتها الحيوية == Study the relationship between proticine production and motion of Proteus spp isolates from patients and some biological characters

اسم المؤلف: عقيل محمد مجيد حبيب العزي
اسم المشرف: رجوة حسن عيسى الربيعي
الموضوع العام: علوم الحياة
السنة: 2008
الدرجة: ماجستير
اللغة: العربية
مكان الجامعة: بغداد
الصفحات الاولى:
المستخلص: تم الحصول على عشرين عزلة من بكتريا Proteus من مرضى مصابين بالتهاب المجاري البولية عن طريق زرع احدى واربعين عينة ادرار, ومن مرضى مصابين بالتهابات الاذن الوسطى عن طريق زرع احدى وستين مسحة . زرعت عينات الادرار ومسحات الاذن على الوسطين الزرعيين وسط اكار الدم ووسط الماكونكي ، ثم اخضعت المزارع البكتيرية النامية الى الفحوصات المجهرية والكيميائية الحيوية لغرض تشخيص بكتيريا اﻠ Proteus , وتم تاكيد التشخيص باستخدام عدة التشخيص الخاصة بالعائلة المعوية API 20 E فقد تم تشخيص تسعة عشرة عزلة من البكتريا Proteus mirabiIis ( اربع منهاعزلت من عينات الادرار وخمسة عشرة عزلة من مسحات الاذن ) , وعزلة واحدة من بكتيريا Proteus vuIgaris من مسحات الاذن . فقد اخضعت العزلات البكترية الى اختبار الحساسية للمضادات الحيوية باستخدام المضادات الاتية : ,Pipracillin ,Amikacin ,Azithromycin Oxytetrayclin Gentamycin , , Naldixic acid , Azteroname , Cefotaxime , Ciprofloxacin , Imipneme , واظهرت النتائج تباينا واضحا في مقاومة العزلات المستخدمة اذ كان مضاد Imipneme من اكثر المضادات الفعالة تجاه تلك العزلات البكتيريةوبنسبة100%. تلاه مضاد Ciprofloxacinوبنسبة ( 95 % ) , بينما كانت البكتريا مقاومة بنسبة 100% لكل من المضادين Azithromycin , Oxytetracyclin .و اظهرت جميع العزلات مقاومةلاكثر من مضاد حيوي ( 2 - 8 مضادات). فقد اظهر قسم من العزلات , القابلية على انتاج البروتسين اذكانت سبعة عزلات منتجة للبروتسين بنسبة 35 % بطريقة التخطيط المتقاطع , وستة عشر عزلة منتجة للبروتسين بنسبة 80 %بطريقة الحفر , وكانت طريقة التخطيط المتقاطع اسهل طريقة للتحري عن فعالية البروتسين الخام في العزلات المنتجة. وقد اختبر ت قابلية عزلات بكتريا البروتيس على انتاج البروتسين تجاه بعض انواع من العائلة المعوية مثل E.coli , Acinetobacter baumannii , Klebsiella spp وكذلك Pseudomonas aeroginosa , ولم يظهر اي تاثير تثبيطي لعزلات البروتيس العشرين تجاه اي من عزلات الاختبار المذكورة في اعلاه , فيما اظهرت ثمانية عشرة عزلة من النوع Proteus mirabiIis وعزلة واحدة من النوع Proteus vulgaris (منتجة للبروتسين) تاثيرا تثبيطيا واضحا تجاه بعض عزلات الاختبار الموجبة لصبغة الكرام aureus Staphylococcus , Streptococcus pyogens , وكذلك خميرة Candida albicansوبنسبة 95 % . بينت النتائج وجود علاقة ايجابية بين مقاومة المضادات الحيوية وصفة انتاج البروتسين , فقد كانت عشرة عزلات من اصل 16 عزلة (5 . 62 % ) منتجة للبروتسين ومقاومة للمضادات الحيوية مما يؤكد العلاقة بينهما . واظهر اختبار دينس وجود تشابه كبير بين العزلات (3, 13) و( 9, 19 ) وتشابه في مقاومتها لمضادات Pipracillin , Gentamycin , Amikacin . حيث اوضحت النتائج وجود علاقة بين انتاج البروتسين والحركة التموجية لبكتيريا Proteus فقد كانت نسبة البكتيريا غير المتحركة بحركة تموجية ومنتجة للبروتسين (60%) فيما كانت نسبة المنتجة للبروتسين والمتحركة(20%) وغير المنتجة وغير المتحركة(20%) وغير المنتجة والمتحركة(0%) . | This study was carried out for Bacterial Isolation from different clinical sources. Twenty isolates of bacteria Proteus was isolaled from culturing 41 urine sample of urinary tract infection and 61 ear swabs from otitis media infection. Urine samples and ear swabs were cultured on blood agar medium and MacConkeys medium . The isolated bacteria were diagnosed according to their morphological shapes and by using biochemical tests , Then the diagnosis was confirmed by using Api 20 E , which revealed that 19 Proteus mirabilis isolates (four isolates from urin and 15 isolates from ear swabs) and one isolate of Proteus vulgaris (from ear swab). Antibiotics sensitivity test was carried for all the Proteus bacteria by using the following antibiotics, Pipracillin ; Azithromycin ; Amikacin ; Oxytetracycline ; Gentamicin ; Nalidixic acid ; Azteroname ; Cefotaxime ; Ciprofloxacin and Imipnem the results showed that the antibiotic Imipnem was the most effective antibiotic (100%) , followed by Ciprofloxacin (95%) , while the bacteria were resistant (100%) for Azithromycin and Oxytetracyclin. Most of the isolates were resistant to 2 - 8 antibiotics . The ability of Proteus bacteria to produce proticine was detected in seven isolates (35%) by using cross streaking procedure and 80% by using well method. The proticine activity was detected against Escherichia coli ; Acinetobacter baummannii ; Klebsiella spp . and Pseudomonas aeruginosa , the result showed no effect , while the proticine of 18 isolates of Proteus mirabilis and one isolate of Proteus vulgaris were effective (95%) against some Gram positive bacteria (Staphylococcus aureus and Streptococcus pyogenes) and Candida albicans, the results showed that there was a relationship between the production of proticine and antibiotics resistant , since 62.5% of the protecin producing bacteria were resistant to antibiotics. Denes test reveald that some strains (3,13) ; (9,19) were highly identical and also in their resistance to the antibiotics Pipracillin. Gentamycin and Amikacin . The results indicated that there were relationship between the proticine production and the swarming motion of Proteus bacteria , since the isolates with no swarming motion were 60% producer for proticine , while the producer of proticine with swarming were 20% and the no producer of proticine and no swarming 20% while the no producer of proticine and motile were 0.0% .

دراسة التاثيرات الوراثية لمتعدد السكريد خارج خلوي لبكتريا Enterococcus faecium في الخلايا السرطانية == Study of the Genetic Effects of Exopolysaccharide (EPS) from Enterococcus faecium in the Cancer Cells

اسم المؤلف: هويدة كريم عبد الجنابي
اسم المشرف: هيفاء هادي حساني
الموضوع العام: علوم الحياة
السنة: 2008
الدرجة: ماجستير
الجامعة: جامعة بغداد
اللغة: الانكليزية
مكان الجامعة: بغداد
الصفحات الاولى:
المستخلص: تم الحصول على ثلاث عزلات لبكتريا Enterococcus faecium من 120 عينة منتجات الالبان المحلية والمستوردة، وقد شخصت هذه العزلات باستخدام الفحوصات البكتريولوجية والكيموحيوية، استخلص متعدد السكريد خارج خلوي Exopoly Saccharide من العزلة رقم (1) لبكتريا E. faecium وذلك لكون هذه العزلة اعطت اعلى معدل انتاجية من المستخلص وبلغ 300 ملغرام/لتر من الوزن الجاف.درس التاثير السمي الخلوي لمستخلص EPS في اثنين من الخطوط الخلوية السرطانية هما AMN - 3 وHeLa، واظهر المستخلص فعالية تثبيطية في الخلايا السرطانية اعتمادا على التركيز المستخدم ومدة التعريض خصوصا عند التركيزين 2500 و5000 مايكروغرام/مللتر حيث وصلت نسب التثبيط الى 59.3% و86.2% على التوالي في خلايا AMN - 3، ثم بدات هذه النسب بالانخفاض مع تقليل التركيز المستخدم الى 1250 مايكروغرام/مللتر لتصل الى (8.3)% بينما استمرت الخلايا بالنمو والتضاعف خلال مدد التعريض الثلاث 24 ، 48 و72 ساعة عند التركيز 625 مايكروغرام/مللتر وكانت النسبة المئوية لتضاعفها (157.1%) مقارنة بعينة السيطرة (100%).اما تاثير المستخلص في خلايا HeLa فقد اظهر تاثيرا تثبيطيا على هذه الخلايا ازدادت نسبته مع زيادة التركيز ومدة التعريض وان نسب التثبيط في خلايا HeLa كانت اقل بفارق معنوي عن نسب التثبيط في خلايا AMN - 3 حيث بلغت نسب التثبيط في خلايا HeLa عند التركيزين 2500 و5000 مايكروغرام/مللتر 28.0% و31.1% على التوالي ولمدة تعرض 72 ساعة واستمر انخفاض الفعالية التثبيطية للمستخلص في خلايا HeLa في التراكيز الواطئة 625 و1250 مايكروغرام/ مللتر حيث بلغت 10.7% و14.4% على التوالي ولمدة تعرض 72 ساعة مقارنة بعينة السيطرة.درس تاثير مستخلص (EPS) وراثيا في الخلايا اللمفاوية للانسان من خلال حساب معامل التحول الارومي Blast index (BI) ومعامل الانقسام الخيطي (MI) Mitotic index وفحصت التغايرات الكروموسومية والفعالية التحفيزية لانقسام الخلايا. وجد ان هذا المستخلص قد سبب انخفاضا معنويا في معدلات معامل الانقسام ومعامل التحول الارومي يتناسب مع زيادة التركيز المستعمل ومدة التعريض لكنه لم يحدث اية تاثيرات سمية وراثية في كروموسومات الخلايا اللمفاوية المعاملة. | Three isolates of Enterococcus faecium were obtained from 120 of dairy products. These isolates were identified using bacteriological and biochemical assays.Exopolysarccharide (EPS) was extracted by (TCA 10%) method from isolate E. faecium no.1 for high production. One gram of dry weight produced 300 mg/ml of EPS.Cytotoxicity effect of EPS on cancer cell lines AMN - 3 and HeLa. An inhibitory activity of EPS against cancer cells was noticed, it was depended on EPS concentration and time exposure. Both concentrations 2500 and 5000 µg/ml were inhibited cells of AMN - 3; the percentage of inhibition was 59.3 and 86.2% respectively. Whereas, the percentage of inhibition was reduced when EPS concentration was low, 1250 µg/ml of EPS was showed 8.3% of inhibition rate. Notable, the low concentration (625µg/ml) of EPS was induced proliferation of AMN - 3 cancer cells of AMN - 3 for proliferation; the viability rate of cancer cells was 157.1% in comparison with untreated cells (control). In addition, the cytotoxic activity of EPS on cancer cell line HeLa was also studied. Significantly, inhibition rate on HeLa cells was less than that against AMN - 3 cells. The inhibition rate of HeLa cells at 2500 and 5000 µg/ml of EPS after 72 hr. was 28.06 and 31.1 % respectively. While the inhibitory activity of EPS at low concentrations (625 and 1250 µg/ml) on HeLa cells were 10.7% and 14.4% respectively.Genetically, the effect of EPS on normal human lymphocytes using different parameters such as mitotic index (MI), blastogenic index (BI), rearrangement of chromosomes, and mitogenic activity was examined. The results showed that EPS was significantly reduced MI and BI. Moreover, no genotoxic effect on chromosomes of healthy human lymphocytes was noticed

دراسة كيموحيوية وجزيئية لانزيم Hyaluronidase المنتج من عزلات محلية لبكتريا Pseudomonas spp. == Biochemical and Molecular Study of Hyaluronidase Produced by Local Isolates of Pseudomonas spp

اسم المؤلف: ابية صباح صديق الدملوجي
اسم المشرف: لينة عبد الكريم الامير | غازي منعم عزيز
الموضوع العام: علوم الحياة
السنة: 2008
الدرجة: دكتوراه
الجامعة: جامعة بغداد
اللغة: العربية
مكان الجامعة: بغداد
الصفحات الاولى:
المستخلص: جمعت 140 عينة من مصادر مختلفة تضمنت الادرار، والخمج، والجروح، والبراز، والقشع، والتهاب الاذن، والدم، وسائل من الرئة ، وللمدة من حزيران ولغاية ايلول 2005 وتم الحصول على 55 عزلة لبكتريا Pseudomonas spp. بنسبه عزل 39.3%, وكانت اعلى نسبة عزل من الخمج والجروح اذ بلغت 38.2%.2 - اختبرت حساسية العزلات المحلية لبكتريا Pseudomonas spp .اتجاه اثنا عشر مضادا للحيوية وقد ابدت العزلات مقاومة مختلفة ومتعددة للمضادات اذ كانت العزلات جميعها مقاومة لثلاثة مضادات هي : Ampicillin ، وAugmentin ، وRifampin . وكانت 82% من العزلات مقاومة ﻟ 6 - 9 مضادات ، بينما كانت 14.5% من العزلات مقاومة ﻟ 1 - 5 مضادات و3.7% من العزلات المحلية مقاومة ﻟ 10 - 12 مضادا. كما لوحظ ان اغلب العزلات كانت حساسة لمضاد Amikacin ثم Ciprofloxacin ثم Gentamycin وتباينت مقاومة العزلات ا تجاه بقية مضادات الحيوية المستعملة.3 - تم التحري عن انتاج عوامل الضراوة المختلفة للعزلات قيد الدراسة مثل : الهيمولايسين ، والايلاستيز، واليورييز ووجد ان نسبة انتاج الهيمولايسين كانت بحدود 78.1% متوزعة بشكل اساسي في نماذج الخمج والجروح ثم الادرار ، كما اتصفت العزلات المحلية بانتاجها لانزيم الايلاستيز وبنسبة 85.4% تمركزت عند عينات الخمج والجروح ثم الاذن والادرار اما نسبة انتاج اليورييز فكانت 80% للعزلات قيد الدراسة وكانت اغلبها عائدة لعينات الادرار والبراز ثم الخمج والجروح.4 - تم التحري عن انتاج انزيم الهيالورونيديز باستعمال وسط نقيع القلب والدماغ الحاوي على حامض الهيالورونك ، واتضح ان 72.7% من العزلات المحلية تمتلك القابلية على انتاج الانزيم توزعت بشكل اساسي في عينات الادرار ثم عينات الخمج والجروح والاذن.5 - درست العلاقة بين انتاج انزيم الهيالورونيديز مع عوامل الضراوة قيد الدراسة (الهيمولايسين ، والايلاستيز ، واليورييز) . واتضح ان 43.6% من العزلات الكلية كانت منتجة لهذه العوامل مع انزيم الهيالورونيديز بينما كانت 18.18% من العزلات الكلية منتجة لعاملي ضراوة وانزيم الهيالورونيديز وتميزت ست عزلات محلية بكونها منتجة لعامل ضراوة واحد مع انزيم الهيالورونيديز ، كذلك لوحظ ازدياد عدد المجموعات الخاصة بنسق توزيع عوامل الضراوة من 7 عند ربط ثلاثة عوامل فقط الى 11 عند اضافة عامل الهيالورونيديز اليها.6 - غربلت العزلات المحلية على وسط نقيع القلب والدماغ الصلب وانتخبت خمس عزلات لاعطاءها نسب تحلل عالية لحامض الهيالورونك. 7 - لوحظ عند دراسة النسق البلازميدي لخمسة عزلات محلية (P52, P2, P10, P27 ,P30) لبكتريا Pseudomonas spp. المنتجه لانزيم الهيالورونيديز باحتوائها على حزمة بلازميدية واحدة.8 - عند محاولة تحييد البلازميدات باستعمال صبغة بروميد الايثيديوم ، لوحظ اختفاء البلازمد من العزلة P2 باستعمال تركيز 2000 مايكروغرام/مليلتر من الصبغة ، وتم اختبار قدرة العزلة المحيدة في انتاج الهيالورونيديز واظهرت هذه العزلة قدرتها في انتاج الانزيم.9 - اختبرت العزلات المحلية (التي اعطت نسب تحلل عالية على الوسط الصلب) في الوسط السائل، وتم تقدير الفعالية النوعية لها بالاعتماد على طريقة Turbidimetric assay ، واختيرت العزلة المحلية P27 Pseudomonas spp. كونها الاغزر انتاجا اذ بلغت الفعالية النوعية لها 2.7 وحدة /ملغم بروتين واستعملت في التجارب اللاحقة.10 - حددت الظروف المثلى لانتاج الهيالورونيديز باستعمال وسط مرق نقيع القلب والدماغ المدعم ﺒ 0.5% مستخلص الخميرة و0.25 ملغم/مليلتر من مادة التفاعل (حامض الهيالورونك) برقم هيدروجيني 6 والملقح بعدد خلايا 1×106 خلية/مليلتر ، والحضن بالمزارع الهزازة بسرعة 50 دورة /دقيقة لمدة 18 ساعة.11 - نقي الهيالورونيديز المنتج من العزلة المنتخبة بخطوات تضمنت الترسيب باستعمال كبريتات الامونيوم بنسبة تشبع 50% ثم استخدام تقنيتي كروماتوغرافي التبادل الايوني باستخدام المبادل DEAE - Cellulose ثم الترشيح الهلامي بعمود Sephacryl S - 300 ، وتم الحصول على عدد مرات تنقية مقدارها 10.8 وبحصيلة انزيمية 20.4%.12 - درست بعض العوامل المؤثرة في فعالية وثباتية الانزيم المنقى اذ كان الرقم الهيدروجيني الامثل للفعالية 6 وثبات الانزيم 6 - 7 وظهرت اقصى فعالية للانزيم عند درجة حراره 40 م واحتفظ الانزيم بحدود 85 - 100% من فعاليته في درجات الحرارة (30 - 45) م ، واحتفظ الانزيم ﺒ 12% فقط من فعاليته عند حضنه بدرجة حراره 50 م لمدة 30 دقيقة. كما درس تاثير بعض الايونات الفلزية في فعالية الهيالورونيديز ، وجد ان لايونات الصوديوم بتركيزي 5 و10 ملي مولار فعلا تنشيطيا للانزيم اذ احتفظ الانزيم ﺒ 107% و102% من فعاليته على التوالي. بينما ثبطت فعالية الانزيم بصورة واضحة عند معاملته بايونات الحديديك Fe+3 ، اذ احتفظ الانزيم ﺒ 50% و15% من فعاليته عند معاملته ﺒ عند معاملته 5 و10 ملي مولار على التوالي ، فضلا عن ذلك لوحظ ان تاثير كل من : ايونات الحديدوز Fe+2 ، والنحاس Cu+2 ، والخارصين Zn+2 ، والزئبق Hg+2 كان اقل من الايونات السابقة، اذ احتفظ الانزيم ﺒ 60% , و53% , و74% , و66% من فعاليته عند معاملته بتركيز 10 ملي مولار لكل من الايونات على التوالي. كذلك احتفظ الانزيم بكامل فعاليته عند معاملته بمادتي EDTA وازايد الصوديوم بتركيز 5 ملي مولار ، بينما احتفظ الانزيم ﺒ 95% و76% من فعاليته عند معاملته ﺒ 5 ملي مولار من المركب Phenyl methane sulphonyl fluoride والسيستايين. | 1 - A total of 140 Samples including urine infections wounds, burns, sputum, blood, stool and lung fluid samples were collected from different hospitals and medical centers in Baghdad city, during the period June _September 2005. Fifty five isolates belonged to Pseudomonas spp.(40.7%) of which 38.2% belonged to infections and wound samples.2 - Sensitivity of local Isolates was examined against 12 antibiotics, Results showed different and multi resistance patterns to antibiotics. All isolates were resistant to Ampicillin , Augmentin and Rifampin. 82% of which were resistant to 6 - 9 antibiotics, while 14.5% of the isolates were resistant to 1 - 5 antibiotics and only 3.7% were resistant to 10 - 12 antibiotics. Amikacin, Ciprofloxacin and Gentamycin were found to be the most effective agents against most of the isolates.3 - Detection of some virulence factors (hemolysin, elastase and urease) by the local isolates was studied. Results showed that 78.1% of the isolates produced hemolysin (mainly infection and wound isolates, then urine isolates). 85.4% of were mainly elastase producers (wound and infection, ear and urine). Results also showed that 80% of isolates were able to produce urease mostly belonged to urine, stool and infection and wound isolates.4 - Detection of the ability of Pseudomonas spp.local isolates to produce hyaluronidase enzyme by using Brain heart infusion (BHI) agar that contains hyaluronic acid was studied. 72.7% of the isolates were able to produce the enzyme.5 - The relation between hyaluronidase production and other virulence factors (hemolysin, elastase and urease) was studied. The results showed that 43.6% of the isolates produced the three studied virulence factors with hyaluronidase, while 18.18% of the isolates produced two of the virulence factors with hyaluronidase, and onlysix isolates produced one virulence factor and hyaloronidase. The results also showed that the groups concerning virulence factors increased from 7 to 11 when the hyaluronidase was added as a forth virulence factor.6 - Five isolates (P27, P30 , P10 , P2, P52) of Pseudomonas spp.producing hyaloronidase were selected to carry out studies on the plasmid profile. Results showed that all five isolates contained one plasmid.7 - The results of plasmid curing by using ethidium bromide showed that the plasmid of the local isolates P2 was curried by treatment with 2000μg/ml ethidium bromide, the curried isolate kept the ability to produce hyaluronidase. 8 - Five local isolates that gave large inhibition zones on (BHI) agar were chosen for specific activity determination by using submerged cultures. The local isolate P27 was chosen to be the most producing one, it’s specific activity was 2.7 unit/mg protein.9 - The optimum conditions for hyaloronidase production determined by using submerged cultures. Results showed that the optimum media for hyaluronidase production was (BHI) broth containing 0.5% yeast extract and 0.25 mg/ml hyaluronic acid with an inoculum of 1×106 cell/ml at an optimum pH 6, after 18 hours incubation in a shaker incubator 50 cycle/min.10 - Hyaloronidase was purified from selected local isolate by using several steps including concentration by ammonium sulphate in saturation percentage of 50%, this step was followed by DEAE - Cellulose ion exchange chromatography technique and gel filtration technique using sephacryl S - 300 colum. Purification fold and recovery were 10.8 and 20.4% respectively.11 - The optimum pH for enzyme activity and stability was 6 and 6 - 7 respectively. Maximum enzyme activity was obtained at 40C º and the enzyme retained 85 - 100% and 12% of it’s initial activity at (30 - 45) Cº and 50 C º respectively.12 - The effect of some metal ions on hyaluronidase activity was studied, 5 and 10 mμ of Na+2 increased enzyme activity to 107% and 102% respectively, while the enzyme kept only 50% and 15% of it’s initial activity when treated with 5 and 10 mμ of Fe+3 respectively. The enzyme also retained 60%, 53%, 74% and 66% of it’s activity when treated with 10mμ of Fe+2, Cu+2, Zn+2 and Hg+2 respectively. EDTA and sodium azide showed no effect on hyaluronidase activity, while retained only 95% and 76% of it’s initial activity when treated with 5 mμ of PMSF and cysteine respectively.