عرض: 25 50 75 100 النتائج

نتائج البحث: 2 من أصل 2

تاثير مجموعة الفلوروكوينولونات في فاعلية انزيمي البروتييز والهيمولايسين للمكورات العنقودية الذهبية المعزولة من نماذج سريرية

اسم المؤلف: بثينة محمد طه عبد الحسين
اسم المشرف: رعد خليل عزيز الحسيني
الموضوع العام: علوم الحياة
السنة: 2009
الدرجة: ماجستير
اللغة: العربية
مكان الجامعة: بغداد
الصفحات الاولى:
المستخلص: • شملت هذه الدراسة عزل وتشخيص بكتريا المكورات العنقودية الذهبية Staphylococcus aureus من اثنين من مستشفيات بغداد خلال المدة من تشرين الثاني 2006 الى حزيران 2007 . تناولت هذه الدراسة جمع 500 عينة سريرية شملت عينات الادرار, والدم , ومسحات الجروح , والحروق , والاذن , والانف , والمهبل , والدمامل , والقشع , والعين . • زرعت العينات (المسحات وعينات الادرار والدم) مباشرة على وسط اكار الدم, لغرض العزل والتشخيص الاولي للنمو البكتيري, حضنت الاطباق بدرجة حرارة 37م° لمدة 24 ساعة . اخضعت العينات للفحص المجهري والاختبارات الكيموحيوية , وشخصت على هذا الاساس 100 عزلة بكتيرية تعود للمكورات العنقودية الذهبية (S.auerus) وبنسبة عزل 20% . • اختبرت حساسية العزلات تجاه سبعة مضادات جرثومية , ستة منها تعود الى مجموعة الفلوروكوينولونات , ومضاد حياتي واحد هو الاوكساسلين الذي يعود الى مجموعة البيتا - لاكتام ,وقد بينت النتائج ان البكتريا المعزولة كانت مقاومة وبنسب عالية لكلا المجموعتين من المضادات الجرثومية قيد الدراسة , اذ كانت نسبة مقاومة Enrofloxacin 80% , 72 Ofloxacin % ,ثم Pefloxacin 71% . كما تقاربت نسب مقاومة المضادين الجرثوميين Levofloxacin وNorfloxacin , اذ كانت 57% و52% على التوالي , فيما بلغت المقاومة ضد Ciprofloxacin 33% فقط . • اظهرت91 % من العزلات قيد الدراسة مقاومة للاوكساسلين ,وهذا يشير الى مقاومة تلك العزلات للمثسلين (Methicillin - resistant Staphylococcus aureus)• اوضح اختبار التراكيز المثبطة الدنيا (Minimal inhibitory concentrations) ان Levofloxacin كان الاكفا في تثبيط هذه البكتريا , اذ بلغت قيمة MIC بين (64 - 4) مايكروغرام / مل , في حين تراوحت قيم MIC للـ (Ciprofloxacin) بين (512 - 4) مايكروغرام / مل وOfloxacin بين ((512 - 16 مايكروغرام / مل وNorfloxacin بين (1024 - 16) مايكروغرام / مل . • اختبرت قدرة العزلات المحلية على انتاج انزيم الهيمولايسين على اوساط الدم باستخدام الاصناف الاربعة لدم الانسان ( A ,B, AB,O ) , وقد كانت منتجة وبنسبة 82.75 % عند استخدام الصنف A , وبنسبة 93.10% عند استخدام الصنف AB وبنسبة 79.31% عند استخدام الصنف B , وبنسبة 79.41 % عند استخدام الصنف O , وهذا يظهر بوضوح ان صنف الدم AB هو افضل الاصناف لمعرفة نوع التحلل . • تم التحري عن قابلية البكتريا قيد الدراسة على انتاج انزيم البروتييز على وسطي اكار الحليب الفرز واكار كولومبيا الحاوي على الحليب الفرز واعتماد ظهور هالات شفافة حول المستعمرات . كانت العزلات منتجة لهذا الانزيم بنسبة 79.31 % على وسط اكار الحليب الفرز , وبنسبة 82.75 % على وسط اكار كولومبيا , الذي اظهر كفاءة اعلى في الكشف عن هذا الانزيم. • حضرت التراكيز تحت المثبطة للمضادات الجرثومية Ciprofloxacin وNorfloxacin وOfloxacin وLevofloxacin واختبر تاثيرها في فعالية انزيمي الهيمولايسين والبروتييز ولوحظ ازدياد فعالية هذين الانزيمين عند التراكيز المدروسة, فقد ازداد النشاط الهيمولايسيني باستخدام صنف الدم A الى 86.20% للمضادات الجرثومية الاربعة, الصنف B الى 86.20% باستخدام Norfloxacin , و82.75% مع المضادين الجرثوميينCiprofloxacin وOfloxacin , و89.65% للمضاد Levofloxacin , الصنف AB % 100للمضادات الجرثومية Ciprofloxacin وNorfloxacin وOfloxacin , والى96.55 % للـ Levofloxacin , اما الصنف O فقد ارتفع الى 74.41% للـ Norfloxacin والى 75.86% للـ Ciprofloxacin وOfloxacin والى 93.10% للـ Levofloxacin .ارتفعت فعالية انزيم البروتييز الى 86.20 % عند التراكيز المثبطة الدنيا للمضادات الجرثومية الاربعة. | This study was included the isolation and identification of Staphylococcus aureus from two of Baghdad hospitals , during the period of November 2006 to June 2007. Five hundreds clinical samples of urine and blood and the swabs of wounds , burns, ear, nose, vagina, abscesses, sputum and eye, were collected .The samples were directly cultured on blood and MacConckey's media for the primary isolation of bacteria , the plates were incubated at 37°C for 24 hours . The samples were objected to the microscopic examination and biochemical tests , though 100 bacterial isolates were belonged to Staphylococcus aureus (20%) .The susceptibility of the isolates was tested toward 7 antimicrobial agents , six of them belong to the Fluroquinolones group and one antibiotic (Oxacillin) belongs to the Beta - Lactam group . The results showed that these bacteria were highly resistant to both groups of the studied antimicrobial agents . The percentage of resistance to Enrofloxacin was 80% , followed by Ofloxacin 72% then Pefloxacin 71% , Levofloxacin and Norfloxacin were nearly identical 57% and 52% respectively , while the resistant to Ciprofloxacin was only 33% .Ninety - one percent of isolates were resistant to Oxacillin , Thus it was Methicillin - resistant Staphylococcus aureus (MRSA) .The test of minimal inhibitory concentrations (MICs) showed that Levofloxacin was the most active in inhibiting these bacteria , its MIC was ranging between 4 - 64 gml , while for Ciprofloxacin , the MICs values ranged from 4 - 512 gml , Ofloxacin 16 - 512 gml , Norfloxacin 16 - 1024 gml .The ability of the isolates for the production of hemolysin enzyme was studied on blood agar media by using the four human blood groups (A, AB, B, O ) . 82.75% of the isolates were producing hemolysin by human blood group A , 93.10% with group AB , 79.31% with group B , and 72.41% with group O , this clearly showed that AB blood group is the best type to detect hemolysin activities .The ability of bacteria to produce protease enzyme on skim milk agar and skim milk Columbia agar media was investigated , and depending on the appearance of clear zones around the colonies , 79.31% of isolates were able to produce this enzyme on skim milk agar media and 82.75% of isolates were able produce this enzyme on skim milk Columbia agar , which was more suitable for detecting this enzyme .The sub - inhibitory concentrations of Ciprofloxacin , Norfloxacin , Ofloxacin and Levofloxacin were prepared and its effect on the hemolysin and protease activity was tested . The activity of the two enzymes were increased by using these concentrations , hemolytic activity raised by using blood group A to 86.20% with the four antimicrobial agents , group B to 86.20% with Norfloxacin, 82.75% with Ciprofloxacin and Norfloxacin, and 89.65% with Levofloxacin , group AB 100% with Ciprofloxacin , Norfloxacin and Ofloxacin , and to 96.55% with Levofloxacin , while by using blood group O it is raised to 74.41% with Norfloxacin , 75.86% with Ciprofloxacin and Ofloxacin , 93.10% with Levofloxacin . Protease activity raised to 85.20% with the sub inhibitory concentration of the four antimicrobial agents.

دراسة بعض الخصائص الفيزيائية والكيميائية لانزيم Staphylolysin المنتج من بكتريا Pseudomonas aeruginosa == Study of Some Physical and Chemical properties of Staphylolysin produced by Pseudomonas aeruginosa

اسم المؤلف: شيماء سهيل نجم
اسم المشرف: مي طالب فليح
الموضوع العام: علوم الحياة
السنة: 2009
الدرجة: ماجستير
الجامعة: جامعة بغداد
اللغة: العربية
مكان الجامعة: بغداد
الصفحات الاولى:
المستخلص: عزلت (50) عزلة عائدة لبكتريا Pseudomonas aeruginosa من 120 عينة سريرية جمعت من مصادر مختلفة تضمنت (الادرار،والقشع ،والبراز ،ومسحات الاذن ، والجروح،والحروق).تم التحري عن انتاج بعض من عوامل الضراوة للعزلات قيد الدراسة مثل : الهيمولايسين، والايلاستيز ، والبروتيز ، ووجد ان نسبة انتاج الهيمولايسين والايلاستيز كانت 76% ، فيما كانت نسبة انتاج البروتيز 72% في العزلات المحلية قيد الدراسة.اختبرت قابلية العزلات المحلية على انتاج انزيم الستافيلولايسين ، وبينت نتائج الغربلة شبه الكمية ان 18 عزلة (36%) من العزلات لها القابلية على انتاج الانزيم وبنسب متفاوتة،اذ تراوحت اقطار الهالة الشفافة من(5 - 22)ملم ، وتميزت خمس عزلات منها باعطاءها اوسع مناطق تحلل على وسط ] ترتبك صويا الصلب + 0.2% (وزن/حجم) من بكتريا Staphylococcus aureus المعزولة المقتولة بالحرارة بدرجة 100م [تراوحت من (16 - 22)ملم ، وتم انتخاب العزلة 16P لاستخلاص الستافيلولايسين A (LasA) ، اذ بلغت الفعالية النوعية لها (8.59)وحدة / ملغم بروتين ، والعزلة 5P لاستخلاص الستافيلولايسين D (LasD)، اذ بلغت الفعالية النوعية لها (0.66)وحدة / ملغم بروتين ،لكونهما الاغزر انتاجا للانزيم عند اجراء الغربلة الكمية.استخلص انزيم الستافيلولايسين بالنبذ المركزي المبرد وتمت تنقيته جزئيا بترسيبه بكبريتات الامونيوم بنسبة اشباع 80% ثم بكروموتوغرافيا التبادل الايوني باستخدام المبادل DEAE - Cellulose ، بينت النتائج ان الفعالية الانزيمية الحالة للعنقوديات (Staphylolytic activity) لانزيم الستافيلولايسين A ظهرت في القمة الاولى، وبلغت عدد مرات التنقية 10.74 مرة وبحصيلة انزيمية 14.2%،فيما اظهرت القمة الثانية الفعالية الانزيمية الحالة للعنقوديات لانزيم الستافيلولايسين D بعدد مرات تنقية 9.1 مرة وبحصيلة انزيمية 18.14%.درست بعض خصائص الانزيمين فكان الوزن الجزيئي 20.417 كيلو دالتون و23.988 كيلو دالتون للستافيلولايسين D,A على التوالي عند تقديرهما بطريقة الترحيل الكهربائي في هلام SDS - PAGE. لوحظ ان الرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية الستافيلولايسين A هو 8 اذ اعطى اعلى فعالية بلغت 150 وحدة / مل ، ولثبات الانزيم 7.5 - 8.5 اذ احتفظ الانزيم بكامل فعاليته تقريبا ، فيما كان الرقم الهيدروجيني الامثل لفعالية الستافيلولايسين D هو 9.5 اذ اعطى اعلى فعالية بلغت 16 وحدة / مل ، ولثبات الانزيم 8.5 - 9.5 اذ احتفظ الانزيم بكامل فعاليته تقريبا ، وظهرت اقصى فعالية للانزيمين عند درجة حرارة 40م اذ بلغت الفعالية النوعية للستافيلولايسين A 140 وحدة /مل وللستافيلولايسين D 16.4 وحدة/ مل ، واحتفظ كلا الانزيمين بكامل فعاليتهما تقريبا عند حضنهما بدرجة حرارة 25 - 40م لمدة ساعة.عند دراسة تاثير بعض المواد في الفعالية الانزيمية للستافيلولايسين D,A كان لكلوريد الصوديوم وكلوريد البوتاسيوم بتركيز 1 و5 ملي مولار تاثير منشط للفعالية الانزيمية قياسا بالسيطرة اذ احتفظ انزيم الستافيلولايسين A بـ105% و108% من فعاليته على التوالي عند معاملته بكلوريد الصوديوم ، واحتفظ بـ 102% و104% من فعاليته على التوالي عند معاملته بكلوريد البوتاسيوم، في حين ثبطت الفعالية الانزيمية عند معاملتهما بكلوريدات الحديد والزئبق والخارصين وبنسب متفاوتة ،اذ احتفظ انزيم الستافيلولايسين A بـ 73% و7% من فعاليته على التوالي عند معاملته بـ5ملي مولار من كلوريد الحديد والزئبق على التوالي،و9% فقط من فعاليته عند معاملته بـ 0.1 ملي مولار من كلوريد الخارصين ، فيما احتفظ انزيم الستافيلولايسين D بـ45% و13% من فعاليته فقط عند معاملته بـ5 ملي مولار من كلوريد الحديد والزئبق على التوالي،و23% فقط من فعاليته عند معاملته بـ0.1 ملي مولار من كلوريد الخارصين، بينما احتفظ كلا الانزيمين بكامل فعاليتهما عند المعاملة بمادة EDTA بتركيز 10 ملي مولار ،وفنيل مثيل سلفونيل فلورايد (PMSF) بتركيز 0.4 ملي مولار. | Fifty isolates of Pseudomonas aeruginosa were obtained from 120 various clinical samples included (urine, sputum, stool, ear, wound & burn swabs). Detection of the production of some virulence factors (hemolysin, elastase and protease) by the local isolates was studied. Results showed that the hemolysin and elastase production ratio were 76%, while the protease production ratio was about 72% by the local isolates.Detection of the ability of local isolates to produce staphylolysin enzyme was studied, the semi quantity screening results showed that 18 (36%) of the isolates have the ability to produce this enzyme in variable ratios , the diameters of lysis Zone ranged from(5 - 22)mm, and five isolates were characterized by giving the highest lysis zone on (Tryptic soya agar + 0.2% (wt./vol.) of heat killed Staphylococcus. aureus at temperature 100oC ) medium which were ranged from(16 - 22)mm, then the isolate P16 was chosen to extract staphylolysin A (LasA) and it's specific activity reaches 8.59 unit /mg protein, whi1e chosen the isolate P5 to extract staphylolysin D (LasD) where it's specific activity reaches 0.66 unit /mg protein since the two isolates were the most production of enzyme by quantity screening . Staphylolysin enzyme was extracted by cooling centrifugation and partially purified by ammonium sulphate precipitation in saturation percentage of 80%, this step was followed by Ion exchange chromatography technique by using DEAE - cellulose column, results showed that the enzymatic activity (Staphylolytic activity) of the staphylolysin A appeared in first peak with purification folds and recovery of 10.74 fold and 14.2% respectively, while the second peak appeared the activity for staphylolysin D with purification folds and recovery of 9.1 fold and 18.14% respectively.Some of the characters of the two enzymes were studied, so the molecular weights were 20.417 kilo dalton & 23.988 kilo dalton for staphylolysin A&D respectively were estimated by SDS - polyacryl amide gel e1ectrophoresis. The optimum pH for staphylolysin A activity was found to be 8 which gives higher activity reaches 150 unit/ml, and for enzyme stability was 7.5 - 8.5 in which the enzyme nearly retained it's full activity, while there were for staphylolysin D 9.5 that gives higher activity of 16 unit/ml.& 8.5 - 9.5 in which the enzyme nearly retained it's full activity respectively, Maximum activity of two enzymes was obtained at 40 C in which the specific activity were for staphylolysin A and D 140 and 16.4 unit/ml , and the activity for two enzymes at 25 - 40 C remained approximately without change for one hour. When the effects of some materials on staphylolysin A & D activity were studied, the results showed that both sodium chloride & potassium chloride at 1 & 5 mM had the activator effect on enzymatic activity compared with its control where the staphylolysin A and D retained 105% ,108% and 102%, 104% of their activity, respectively when treated with sodium chloride, while they retained 110%, 114% and 133%, 118% of their activity, respectivity when treated with potassium chloride, while ferric, mercury & zinc chlorides inhibited the activity in variable ratios in which the staphylolysin A and D kept only 73%, 7% and 45%, 13% respectively of their initial activity when treated with 5mM of ferric and meracury chloride and 9%, 23% respectively of their initial activity when treated with 0.1mM zinc chlorid & enzymatic activity for both enzymes were not affected when treated with EDTA at 10mM & phenyl methyl sulphonyl fluoride (PMSF) at 0.4mM.