Share
تاثير التجميد بالتزجيج وطرق الاذابة المختلفة على حيوية وسلامة الحامض النووي للنطف == The Effect Of Laser Thawing After Vitrification On Sperm Motility And DNA Integrity
Author name:
شذى صادق المراياتي
Supervisor name:
غسان ثابت سعيد
General topic:
Medicine
Specific topic:
Physiology
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
19T1515 - p.pdf
Abstract:
ان التجميد بطريقة التزجيج تعتبر من طرق تجميد النطف البشرية وتعتمد على التجميد السريع للماء الى الحالة الزجاجية من خلال زيادة اللزوجة بدون تكوين بلورات داخلية (داخل الخلية). ان التجميد من الممكن ان يؤدي الى تاثيرات ضارة على تركيب ووظيفة النطف البشرية وان الاضرار الناتجة من التجميد من الممكن ان تؤثر على تركيب وسلامة الغشاء البلازمي. وان هذه الاضرار لا تقتصر على اضرار التجميد فقط بل تشمل ايضا على الاضرار الناتجة من عملية الاذابة بسبب اذابة او تبلور الثلج الناتج من التجميد. ان هذه العمليات ( التجميد والاذابة) من الممكن ان تؤثر سلامة الاحماض النووية وكذلك من الممكن ان تؤدي الى تغييرات في نواة النطف البشرية . ان التجميد قد يؤدي الى اجهاد تاكسدي للنطف البشرية كنتيجة الى انحلال الدهون التاكسدي وتقليل الية الدفاعية بواسطة الانزيمات المضادة للاكسدة. خلال عملية التجميد الخلايا والانسجة تخضع الى تغييرات كيميائية وفيزيائية . ان تاثير الليزر ومن خلال التحفيز الضوئي من الممكن ان يقاوم الاضرار الناتجة من التجميد للنطف البشرية وهذا من الممكن ان يؤدي الى تحسين نوعية النطف المجمدة وزيادة قابيلتها على الخصوبة. الهدف : دراسة تاثير الليزر كطريقة لاذابة النطف البشرية المجمدة وتاثيرها على سلامة الاحماض النووية والحركة مقابل الاذابة بدرجة حرارة الغرفة او عن طريق الحمام المائي. الموضوع والطرق : دراسة اجريت على 70 نموذج من النطف البشرية. كل نموذج قسم الى قسمين , قسم قد تم تحضيره بتقنية السباحة الى فوق والقسم الثاني بدون تحضير , وكل قسم قد قسم الى ثلاثة, جمدت, وتم اذابة كل جزء من النماذج بالليزر اوبدرجة حرارة الغرفة او بالحمام المائي بدرجة 37 درجة مئوية . تم دراسة سلامة الاحماض النووية وحركة النطف قبل وبعد التجميد , وكذلك قبل وبعد التحضير بتقنية السباحة الى فوق بطريقة الاكردين اونج (AOT) الحصول بالاعتماد على قياس المذنب (comet).النتائج : اظهرت النتائج ان الاذابة عن طريق الليزر لها تاثير معنوي (P<0.05 ) في تقليل تحطيم الاحماض النووية مع زيادة في الحركة الفعالة للنطف عند المقارنة مع الاذابة بدرجة حرارة الغرفة او بالحمام المائي.الاستنتاج : استنتجت هذه الدراسة ان تجميد الحيامن له اثار مؤذية تؤثر على سلامة الاحماض االنووية وحركة النطف البشرية. ان الاذابة بالليزر تحافظ على سلامة الاحماض النووية والحركة النشطة للنطف وان تقنية السباحة الى فوق كذلك تؤدي الى تنشيط النطف وتقليل تحطم الاحماض النووية. | Vitrification is a method of sperm freezing based on the rapid cooling of water to a glassy state through extreme elevation of viscosity without intracellular ice crystallization. Cryopreservation may lead to deleterious changes of sperm structure and function. Cryoinjury is not limited to the freezing process but may also occur during the thawing process as the ice melts or recrystallizes. It have been reported that cryopreservation/thawing significantly lead to alterations of sperm DNA integrity and could alter the quality of the spermatozoon’s nucleus. Cryopreservation induces oxidative stress in the spermatozoa due to increasing rate of lipid peroxidation and suppression of the antioxidant enzyme defense mechanism. These effects of cryopreservation lead to spermatozoa damage including nucleic acids. Subjects and methods : This prospective study carried on 70 cryopreserved semen samples. Each sample wasdivided into two parts, one part is unprepared and other part was prepared by swim - up technique and each part is divided into 3 parts, freezed and thawed by three methods of thawing by laser irradiation till melting for one part, and by room temperature and water bath at 37°C for the other two parts. The semen parameters were assessed by microscopical examination and the DNA integrity assessed by acridine orange test and comet assay before vitrification and after the three methods of thawing as well as before and after preparation. Result : The results of cryopreserved semen samples showed that laser irradiation thawing has a significant increase in sperm motility as well as a significant decreased DNA fragmentation (P < 0.05) versus room temperature and water bath thawing in addition sperm preparation by swim up method also lead to improve sperm motility and DNA integrity (P < 0.05).Conclusions : Vitrification has a deleterious effect on sperm DNA integrity and motility. Laser irradiation thawing methods of post freezing sperm improves post - thaw motility and DNA integrity. Sperm preparation by swim up technique for sperm preparation increasing motility and decrease DNA damage after thawing . The results of the acridine orange test and comet assay gave relatively similar predictive values for DNA fragmentation.
