Share
التوصيف الجزيئي لبعض عوامل الضراوة لبكتريا Streptococcus pneumoniae المعزولة من الاطفال المصابين بالتهاب الاذن الوسطى الحاد == Molecular characterization of some virulence factors of Streptococcus pneumoniae isolated from children with acute otitis media
Author name:
شيماء عبد العباس محمدعلي الطائي
Supervisor name:
لميس عبد الرزاق عبد اللطيف | صفاء حسين الطريحي
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1670 - p.pdf
Abstract:
في هذه الدراسة تم الحصول على 120 مسحة من الاطفال المصابين بالتهاب الاذن الوسطى المراجعين لمستشفى الحلة التعليمي (شعبة الانف والاذن والحنجرة) للفترة من تشرين الثاني 2014 الى كانون الثاني 2015 والذين تراوحت اعمارهم من شهر واحد الى 12 سنة . وقد تم عزل وتشخيص 8 عزلات فقط من بكتريا Streptococcus pneumoniae . خضعت جميع العزلات لاختبار الحساسية للمضادات الحيوية .وقد وجد ان جميع عزلات هذه البكتريا كانت حساسة بشكل تام (100%) لكل من Tetracycline Clarithromycin وMeropenem.ولكنها حساسة بدرجة اقل لكل من Vancomycin, Imipeneme وCloxacillin . كما واظهرت العزلات مقاومة Cefotaxime في حين كانت مقاومة وبدرجة اقل لكل Amoxy - clavulanic acid, وOxacillin . تم استخدام بادئات نوعية (primers) في تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) للتحري عن الجينات الخاصة بانتاج (ply) جين وقد اظهرت النتائج امتلاك اربع من العزلات لهذا الجين, وقد وجد ايضا ان هذه العزلات الموجبة لها القابلية على انتاج hemolysin خارجي . اضافة الى ذلك وجدت نتائج مماثلة لجين (LytA) حيث وجد ان نفس العزلات الاربعة اعطت نتائج موجبة لهذا الجين . اضافة الى ذلك فان التحري عن امتلاك Streptococcus pneumoniae لجين (LuxS) يظهر امتلاك خمس عزلات فقط لهذا الجين . كما وجد ان جينات (nan A) عنصر اساسي في الاستعمار الناجح في القنوات التنفسية وان هذه الجينات حددت بواسطة بادئات ( Primers) خاصة بواسطة تقنية PCR وقد اظهرت النتائج اعطاء جميع العزلات نتائج موجبة لهذا الجين. اضافة الى ذلك فان التحري عن جين (PsaA) قد تم باستخدام تقنية PCR قد درست ايضا وقد اظهرت النتائج بان اثنين من العزلات فقط اظهرت نتائج موجبة لهذا الجين . كما تم التحري عن جين (CpsA) بواسطة استخدام تقنية PCR ,وقد اظهرت النتائج امتلاك العزلات كافة لهذا الجين وان هذه النتيجة تدعم النتائج التي تم الحصول عليها phenotypically حيث وجد ان جميع العزلات اعطت نتائج موجبة للكبسول وهذا الجين يعتبر housekeeping جين . كما تم التحري عن الجين (α - Eno) باستخدام تقنية PCR, وقد اظهرت النتائج امتلاك خمس من العزلات لهذا الجين. وقد تم التحري عن تكوين الغشاء الحيوي biofilm بواسطة لوحة زراعة النسيجية حيث اظهرت النتائج تكوين biofilm بصورة قوية بنسبة 87.5% وتكوين biofilm بصورة متوسطة بنسبة 12.5 % وعدم وجود بكتريا غير قادرة على تكوين biofilm . بالاضافة الى ذلك تم دراسة تاثير سكر Xylitol على نمو بكتريا Streptococcus pneumoniae وقد وجد ان وجود سكر Xylitol بتركيز 3% يسرع بدخول البكتريا الى طور الثباات stationary phase .كما تم التحري عن تاثير سكر Xylitol بتركيز 5% على تكوين biofilm ,واظهرت النتائج قابلية سكر Xylitol على تفليل تكوين biofilm بنسبة 100%. | In this study , a total 0f 120 ears swabs obtained from children suffering from otitis media who were attended to Al - Hilla Teaching general Hospital (ENT unit) during the period ranging from November (2014 ) to March (2015). The patient age ranged from (1months - 12 years). Only eight isolates of S. pneumoniae were isolates. All the identified S. pneumoniae isolates from ear swabs were subjected to in vitro antibiotics susceptibility test by modified Kirby - Bauer disc diffusion method . It has been found that S. pneumoniae isolates were sensitive (100%) to Tetracycline , Clarithromycin and Meropenem. But lesser to each of Vancomycin, Imipeneme and Cloxacillin. However, the isolates showed resistance to Cefotaxime , but in a less degree to Amoxy - clavulanic acid, and Oxacillin. Molecular detection of Pneumolysin (Ply) gene was done by using specific PCR primer. It was found that Ply was observed in only four bacterial isolates, and these positive isolates have the ability to produce extracellular hemolysin. In addition, the same result was seen in autolysin (LytA) where the same four isolates give positive result for this gene. Moreover, luminescence (Lux S) was also detected in Streptococcus pneumonia isolates .It was shown that only five isolates gave positive result with this gene . It was found that neuraminidase (NanA) is essential for successful colonization of respiratory track, these genes was detected by specific PCR primer; it was observed that all isolates gave positive result of this gene. Besides, two isolates gave positive result for pneumococcal surface antigen A (psaA) gene when it was be detected through using PCR primer. Capsular polysaccharide synthesis (cpsA) was detected by using specific PCR primer. It was found that all isolates gave positive result for this gen and this result was confer phenotypically were all isolates gave positive results for capsule this gene was designated as housekeeping gene. In addition to that, specific PCR primer was used for detection of α - enolase gene. It was found that α - Eno was observed in five isolates of S. pneumoniae. Biofilm formation was also investigated by using Tissue culture plate. It was shown that biofilm formation was (87.5%) strong biofilm formation, ( 12.5 % ) moderately biofilm formation and no isolates that express non biofilm formation . Regard the effect of xylitol on bacterial growth was likewise studied which indicated that xylitol at (3%) concentration could cause accelerate the entrance of bacteria in the stationary phase when it is toxic to this bacteria. In addition, the effect of xylitol (5%) on biofilm formation was also studied, it was found that the result of this study demonstrated that xylitol effectively reduced the biofilm forming bacteria from weak to (100%) and no strong formation.
