Share
دراسة بكتيريولوجية وجزيئية للنوع Proteus mirabilis المعزولة من مصادر سريرية وحيوانية == Bacteriological and molecular study of Proteus mirabilis isolated from clinical and animal sources
Author name:
علي سعد كاظم حسين
Supervisor name:
محمود ابراهيم اسماعيل
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3386 - p.pdf
Abstract:
الجانب الاول : شمل هذا الجانب عزل وتشخيص البكتيريا Proteus mirabilis من 801 عينة تضمنت 179 عينة سريرية مختلفة (البول، الاذن والجروح) و622 عينة حيوانية مختلفة (براز الدجاج، مستقيم الابقار، مستقيم القطط ومستقيم الكلاب) جمعت من محافظة بغداد للمدة من 26/10/2015 الى 29/3/2016. بعدها درست الحساسية للمضادات الحيوية وقد توصلت نتائج هذا الجانب الى ما ياتي : .1 88 عزلة بكتيرية تعود للنوع P. mirabilis تضمنت 51 (28.49%) عزلة من العينات السريرية و37 (5.95%) عزلة من العينات الحيوانية وشخصت باستعمال طرق التشخيص التقليدية وعدة الفايتك كما تم تاكيد تشخيصها باستخدام البادئ النوعي للجين 16SrRNA للكشف عنه في جينوم البكتيريا بتقنية تفاعل البلمرة المتسلسل اذ اظهرت نتائج التشخيص الجزيئي ان جميع العزلات البكتيرية امتلكت الجين .16SrRNA 2. بينت نتائج فحص حساسية عزلات P. mirabilis (88 عزلة) للمضادات الحيوية بطريقة انتشار القرص انها امتلكت المقاومة المتعدة لـ )2 - 8( من المضادات الحيوية المختبرة. كما وجد ان اقل معدل مقاومة لعزلات P. mirabilis السريرية كان لمضادات ciprofloxacin (3.9%) وnorfloxacin (7.8%) وimipenem (9.8%) بينما اقل معدل مقاومة للعزلات الحيوانية كان لمضادات cefoxitin (0%) وamikacin (2.7%) وciprofloxacin (5.4%) وcefepime وimipenem وlevofloxacin (8.1%) لكل منها. الجانب الثاني : شمل الكشف عن بعض عوامل الضراوة ظاهريا والكشف الجزيئي عن ثلاثة جينات مرتبطة بعوامل الضراوة وقد توصلت نتائج هذا الجانب الى ما ياتي : 1. بينت نتائج فحص انزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف لبكتيريا P. mirabilis بطريقة القرص التازري المزدوج ان 52.49% (27/51) و48.65% (18/37) من العزلات السريرية والعزلات الحيوانية على الترتيب كانت موجبة للفحص.2. بينت نتائج فحص الفعالية الانحلالية للهيمولايسين لعزلات P. mirabilis على اطباق اكار دم الانسان واطباق المعايرة الدقيقة لدم الانسان والارنب ان 66/88 (75%) عزلة منها كانت محللة للدم من نوع الفا وبيتا على اطباق اكار الدم كما انها اعطت معيارا انحلاليا للدم تراوح بين (16 - 256)، كما وجد ان 22/88 (25%) عزلة لا تمتلك فعالية انحلالية لخلايا الدم الحمر على اطباق اكار الدم ولا على اطباق المعايرة الدقيقة. اظهرت نتائج الكشف الجزيئي عن الجين hpmA (الذي يشفر الى انتاج الهيمولايسين) ان جميع العزلات التي اعطت فعالية انحلالية لخلايا الدم الحمر امتلكت الجين hpmA بينما 19/22 من هذه العزلات التي لم تعط فعالية انحلالية لخلايا الدم الحمر كانت لا تمتلك جين الهيمولايسين gene) .(hpmA3. بينت نتائج فحص تكوين الغشاء الحيوي لبكتيريا P. mirabilis بطريقة اطباق المعايرة الدقيقة وعند الطول الموجي 630 نانوميتر ان جميع العزلات (88/88) كانت مكونة له. اذ ان 53.41% (47/88) من العزلات كانت مكونة للغشاء الحيوي بدرجة قوية و25% (22/88) بدرجة متوسطة و21.59% (19/88) بدرجة ضعيفة.4. بينت نتائج فحص انتاج انزيم البروتيز لبكتيريا P. mirabilis على اطباق اكار الحليب الفرز والكشف الجزيئي عن الجين zapA (الذ يشفر الى انتاج البروتيز) ان 82/88 (93.18%) عزلة منها كانت منتجة لانزيم البروتيز على اطباق اكار الحليب الفرز وتمتلك الجين zapA بينما 6/88 (6.82%) عزلات كانت غير منتجة لانزيم البروتيز ولا تمتلك الجين zapA، اي يوجد تطابق مابين الكشف الظاهري والكشف الجزيئي عن الجين zapA.5. بينت نتائج الكشف الجزيئي عن عامل الضراوة الجين ucaA (الذي يشفر الى الهدب UCA) ان جميع عزلات P. mirabilis (88/88) كانت تمتلك هذا الجين.6. بينت نتائج فحص انزيم اليوريز لبكتيريا P. mirabilis على وسط اكار اليوريا ان جميع العزلات (88/88) كانت منتجة له وبسرعات مختلفة. | A. Part One included isolation and identification of Proteus mirabilis from 801 samples, including 179 clinical various samples (urine, ear and wounds) and 622 animal (chicken faeces, cows rectal, cats rectal and dogs rectal) various samples were collected from Baghdad province during the period from 26 - 10 - 2015 to 29 - 3 - 2016. Then, their antibiotic sensitivity was studied. This part concluded the following results : 1. 88 bacterial isolates belong to P. mirabilis species included 51(28.49%) isolates from clinical sources and 37 (5.95%) isolates from animal sources were identified by conventional method, Vitek - 2 compact system and confirmed by using specific primer to detect 16SrRNA gene in bacterial genome by polymerase chain reaction technique. Results of molecular identification showed that all these bacterial isolates were possessed this gene (16SrRNA). 2. The results of sensitivity test by disc diffusion method showed that P. mirabilis isolates were multidrug resistant to (2 - 8) from antibiotics tested. The lowest resistance rates for clinical P. mirabilis isolates were (3.9%) for ciprofloxacin, (7.8%) for norfloxacin and (9.8%) for imipenem while animal isolates showed lowest resistance rates : (0%) for cefoxitin, (2.7%) for amikacin, (5.4%) for ciprofloxacin, (8.1%) for each one of cefepime, imipenem and levofloxacin.B. Part Two consisted of a study of some phenotypic virulence factors and molecular detection of 3 genes associated with virulence factors. This part concluded the following results : 1. The results of extended spectrum - β lactamases test by double disk synergy test revealed that 52.49% (27/51) and 48.65% (18/37) of clinical and animal P. mirabilis isolates were respectively positive for the test. 2. The results of hemolytic activity tests of P. mirabilis isolates on human blood agar plates and hemolytic microtiter plates showed that 66/88 (75%) isolates were alpha - and beta - hemolytic on human blood agar plates and they were giving measurable hemolytic titer between (16 - 256), and 22/88 (25%) isolates did not give hemolytic activity. Results of molecular detection of hpmA gene showed that all isolates were giving hemolytic activity possessed the hpmA gene while 19/22 of these isolates did not give hemolytic activity and did not possess the hemolysin gene (hpmA gene).3. The results of biofilm formation test of P. mirabilis by microtiter plates at wave length 630 nm showed that all isolates (88/88) were positive for the test, results showed a strong biofilm formed was 53.41% (47/88), moderate biofilm was 25% (22/88) and weak biofilm was 21.59% (19/88).4. The results of protease production test of P. mirabilis isolates on skim milk agar and results of molecular detection of zapA gene (protease gene) revealed that 82/88 (93.18%) isolates of P. mirabilis were positive for protease test and they were possessed the protease gene. While 6/88 (6.82%) isolates were negative for protease test and did not possess protease gene, there is congruence between phenotypic and molecular detection of zapA gene.5. The results of molecular detection of virulence factor ucaA gene showed that all of the P. mirabilis isolates (88/88) were possessed this gene.6. The results of urease test of P. mirabilis isolates on urea agar plates showed that all of the isolates (88/88) were positive for the test.
