Share
كشف عن الجينات المشفرة لانتاج البايوسين من بكتريا Pseudomonas aeruginosa ومقارنة الانتاج مع تكوين الغشاء الحيوي == Detection of Genes Encoding Pyocin Production of Pseudomonas aeruginosa and Comparison the Production with Biofilm Formation
Author name:
حسين ظاهر عليوي التميمي
Supervisor name:
رجوة حسن عيسى الربيعي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3233 - p.pdf
Abstract:
جمعت50)) عزلة تابعة لبكتريا Pseudomonas aeruginosa من مستشفيات مختلفة في بغداد وخلال شهر ايلول لغاية شهر الكانون الاول لسنة (2014). تم اخذ هذه العزلات من مصادر مختلفة ثم شخصت بالاعتماد على الصفات المظهرية والمجهرية عند تنميتها على الاوساط التفريقية والاختيارية فضلا عن الفحوصات الكيموحيوية ولتاكيد نتائج الفحوصات الكيموحيوية استعمل نظام VITEK2 Compact كخطوة تكميلية. كما تضمنت الدراسة التصنيف المصلي لاجناس P. aeruginosa حيث تتعدد الانماط المصلية لهذه البكتريا حيث كانت ( : 11, O : 9, O : 8 and O : 7) بعد فحص العزلات. كان النمط المصلي (O : 11) الاكثر شيوعا وانتشارا من الانماط الباقية .كانت الانماطO : 8) وO : 9) اقل انتشارا ويعد النمط المصلي (O : 7)من الانماط حديثة الظهور. استعملت في هذه الدراسة طريقة Cross Streaking Method للكشف عن قدرة البكتريا على انتاج البايوسين حيث استخدم الوسط trypticase soy agar في هذه الطريقة, كانت العزلات المنتجة للبايوسين (P) قادرة على انتاج البايوسين عندمزارعت بشكل خط مستقيم وذلك بعد ان حضنت لمدة 24 ساعة وبدرجة37 مئوية, العزلة الدالة(I) فقد زرعت بشكل خط عمودي على العزلة المنتجة (P). ان غياب النمو البكتيري في الوسط الزرعي وعند نقطة التقاء الخطين دلالة على انتاج البكتريا للبايوسين, اذ لوحظ ان (16) عزلة من اصل (50)عزلة لها القدرة على انتاج البايوسين.واستعملت في هذه الدراسة طريقتين للتحري عن تكوين الغشاء الحيوي وهي طريقة Congo Red Method (CRA) وطريقة اطباق المعايرة Micro Titration Plate Method (MTP). اظهرت النتائج ان طريقة (MTP) كانت اكثر حساسية في التحري عن تكوين الغشاء الحيوي ، اذ لوحظ ان (19) عزلة من اصل (50) عزلة وبنسبة (38%) كانت مكونة للغشاء الحيوي وبشكل قوي ، في حين كانت (13) عزلة وبنسبة (26%) مكونة للغشاء الحيوي وبشكل ضعيف ، لكن كانت هنالك (18) عزلة وبنسبة (36%) غير مكونة للغشاء الحيوي. في حين بينت النتائج الخاصة بطريقة ال (CRA) ان (33)عزلة وبنسبة (66%) كانت قادرة على انتاج الغشاء الحيوي ، بينما كان عدد العزلات غير المكونة للغشاء الحيوي (17) عزلة وبنسبة (34%).اخضعت جميع العزلات (50 عزلة) للفحص بواسطة تقنية Polymerase Chain Reaction(PCR) لتشخيص الجينات المسؤولة عن انتاج البايوسين من نوع S باستخدام برايمرات خاصة لكل من (S1S2 pyocin) و(S3 pyocin). اظهرت نتائج تقنية الPCR بان (24) عزلة من اصل (50) عزلة وبنسبة تقدر ب (48%) تمتلك جين S1S2 (اذ كان ناتج تقنية البلمرة لهذا الجين بالحجم 287bp), لكن هنالك (21) عزلة وبنسبة (42%) تمتلك جين S3 (اذ كان ناتج تقنية البلمرة لهذا الجين بالحجم 451bp). | Fifty bacterial isolates of Pseudomonas aeruginosa have been collected from many hospitals in Baghdad include : Al - Kindy hospital, Ibn Al - baladi hospital, wound and burn hospital and Baghdad hospital in medical city during the period from Sep. to Dec. (2014). These isolates were collected from different sources. Then, they were diagnosed depending on morphological and microscopic properties when they were cultured on selective and differential culture media as well as by using biochemical tests, then in order to confirm the results of biochemical test VITEK2 compact have been used as a confirmatory step. Serotype classification of P. aeruginosa isolates showed multiple serotypes were existed (O : 11, O : 10, O : 9, O : 8, O : 7 and O : 5) for isolates which tested and (O : 11) serotype consider as more frequent serotype as (48%) whereas (O : 9, O : 5 and O : 8) are low spreading serotypes as (8%, 10% and 12%) respectively, while (O : 7) serotype as (4%) represent appearance of new serotype in comparison with local studies. In this study, pyocin production was detected by using cross streaking method, it was applied by using trypticas soy agar media. In this method producer isolates (P) which were able to produce pyocin were cultured as straight line and after incubation at 37Co for 24h., inducer isolates (I) were cultured on media as a vertical on the first line (producer isolates).Absence of bacterial growth on the media which were cultured by vertical line on producer bacteria leads to pyocin that produce by producer isolate prevent growth of inducer isolates, where it had been noted that (16) isolates out of (50) isolates have the ability to produce pyocin.Ability of bacterial isolates to produce biofilm was detected by two methods : these methods are Congo Red Agar method (CRA) and micro titration plates method (MTP). Results have been showed that (MTP) method was more sensitive to determine biofilm producers. It was noted that (19) isolates from (50) isolates as a (38%) were powerful biofilm producers while (13) isolates as a (26%) were weak biofilm formation, but there were (18) isolates as a (36%) were non - biofilm producers. On the other hand the (CRA) method appeared that (33) isolates as a (66%) were able to produce biofilm while non - biofilm formation isolates were (17) isolates as (34%).All fifty isolates were tested by Polymerase Chain Reaction (PCR) technique to detect gene responsible for S type pyocin by using primers specific for S1S2 pyocin and S3 pyocin. Results appear that there were (24) isolates from all (50) isolates (48%) contained the S1S2 gene, but there are (21) isolates also from (50) isolates as a (42%) contained S3 gene. The total number of isolates which contain genes encoding of S - type pyocin production (both S1S2 and S3 genes) were (31) isolates as (62%).The results have shown that there were (39) isolates as (78%) have the ability to produce pyocin by both phenotypic and genotypic methods (cross - streaking and PCR technique), while there were (43) isolates as (86%) able to produce biofilm by both CRA and MTP methods. Relationship between pyocin production and biofilm production were shown that all isolates have the ability to produce pyocin at least by one method were able to produce biofilm and at least by one method too
