Share
دراسة تاثير المحورات المناعية للمستخلص الايثانولي لبذور نبات Azadirachta indica على الاستجابة المناعية للفئران الملقحة ببكتريا Proteus vulgaris == Study the Immunomodulatory Effect of Ethanolic Azadirachta indica Seeds Extract on the Immunologic Response in Mice Vaccinated with Proteus vulgaris
Author name:
سيف مزعل عبد
Supervisor name:
طارق فعل الجنديل | تركي مفتن سعد
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
Al-Muthanna University - College Of Science - Department Of Biology
Language:
Arabic
University location:
Muthanna
First pages:
24T3343 - p.pdf
Abstract:
جمعت 100 عينة من عينات الادرار من النساء الحوامل الذين اتن الى مستشفى الاطفال والولادة في مدينة السماوة، خلال فترة تمتد من نوفمبر الى يناير 2012. تضمنت الدراسة العزل والتشخيص البكتريلوجي لبكتريا Proteus vulgaris ، واختبار الحساسية للمضادات الحياتية وكذلك تضمنت الدراسة تاثير المحورات المناعية المتمثلة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم على الاستجابة المناعية للفئران الملقحة بمستضد جرثومة P. vulagris. تضمنت الدراسة ثمانية مجموعات ( 40 فار في كل مجموعة) وتمت معاملة المجاميع كما يلي (I : معاملة بالماء المقطر، II : معاملة بمستضد بكتريا p. vulagris فقط ، III : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 600 ملغم لكل كغم ، IV : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 400 ملغم لكل كغم ة ، V : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 600 ملغم لكل كغم ومستضد بكتريا البر وتيس فلكارس معا ، : VI : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 400 ملغم لكل كغم ومستضد بكتريا البر وتيس فلكارس ، : VII معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 600 ملغم لكل كغم ومستضد بكتريا . P .vulagris معا، VIII : معاملة بالمحلول الايثانولي لنبات النيم بجرعة مقدارها 400 ملغم لكل كغم ومستضد بكتريا . P .vulagris وتم حقن المجموعتين الاخيرتين بمقدار 5 ملغم لكل كغم من وزن الجسم من مادة بردنزولون (Prednisolone) المثبطة للمناعة قبل 5 ايام من اجراء المعاملة . اجريت جميع هذه المعاملات في اليوم الاول في اليوم الرابع وضحي بالحيوانات في اليوم 8 لاختبار Nitro blue tetrazolium NBT) مقاسا بجهاز الاليزا ، في اليوم 14 لاجراء معامل تفاعلات فرط الحساسية المتاخرة ومعامل تحول الخلايا اللمفاوية المقاسة بطريقة الاليزا )في اليوم 21 و28 لقيايس anti - proteus vulgaris antibody titer ولاجل اختبار serum electrophoresis لقياس بروتينات المصل ). اظهرت النتائج تاثيرات واضحة للمحورات المناعية المستخدمة في الدراسة وفي المجاميع الممنعة بمستضد البر وتيس فلكارس ومن خلال تحسن الاستجابة المناعية غير النوعية والمناعة الخلوية الخلطية مقارنة مع المجاميع غير المعاملة بالمحورات المناعية، واشارت النتائج الى ارتفاع ملحوظ في نسبة الخلايا الموجبة لفحص NBT في المجاميع الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية وبفوارق احصائية معنوية بالمقارنة بمجاميع السيطرة السالبة (معاملة بالماء المقطر فقط) والسيطرة الموجبة المعاملة بالمحورات المناعية او اللقاح فقط . وقد ظهر ارتفاع في النسبة المئوية لمعامل الخلايا الموجبة لفحص NBT في كل المجاميع وسجلت المجموعةV اعلى نسبة مئوية للخلايا الموجبة لفحص NBT ( 57% ) وبفوارق احصائية معنوية (P≤ 0.01) وسجلت المجموعة IV ادنى نسبة مئوية (5%) مقارنة بمجموعة السيطرة السالبة 0 ) I% )، كما لوحظ ارتفاع واضح في النسبة المئوية لمعامل التحول للخلايا اللمفية في الدم المحيطي ، حيث اعطت جميع الحيوانات الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية نتائج اعلى من تلك الممنعة وغير معاملة بالمحورات المناعية وبفوارق احصائية معنوية وسجلت المجموعة V اعلى مستوى للنسبة المئوية لمعامل تحول الخلايا اللمفاوي في الدم (264%) ، بينما اعطت المجموعة IV ادنى نسبة وهي ( 17% ) .اما نتائج فحص الحساسية المتاخرة في الجلد فقد سجلت حيوانات المجاميع الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية نتائج اعلى وبفوارق احصائية معنوية ( P≤ 0.01) عن مجاميع السيطرة الموجبة والسالبة واعطت المجموعة V. اعلى قيمة بلغت بعد 24 ساعة من حقن مستضد البر وتيس ، وكانت جميع نتائج فحص الحساسية المتاخرة المسجلة في الحيوانات بعد 24 ساعة افضل منه بعد 48 ساعة. وعند قياس عيارية اضداد anti proteus vulgaris بواسطة الوميض الاشعاعي غير المباشر، اظهرت المجاميع الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية ارتفاع مستوى هذه الاضداد مقارنة بمجاميع السيطرة السالبة والموجبة وبفوارق احصائية معنوية بمستوى P≤ 0.01) ) وسجلت اعلى معيار حجمي لتلك الاضداد بمستوى 512 بعد 21 يوم التمنيع. كذلك سجلت المجاميع الممنعة والمعاملة بالمحورات المناعية ارتفاع ملحوظ في قيمة كاماكلوبيولين والفا - 1 والفا - 2 وبيتا عند تحليل البروتين بجهاز الترحيل الكهربائي وبفوارق احصائية معنوية ( P≤ 0.01) عن مجاميع السيطرة الموجبة والسالبة المعاملة بالمحورات.حيث سجلت المجموعة V (19.24 ± 0.80, 8.68 ± 0.23, 27.31 ± 0.06, 34.02 ± 0.21 ) على التولي بعد 21يوم من التمنيع وكذلك اعلى قيمة كاماكلوبيولين والفا - 1 والفا - 2 وبيتا سجلت في المجموعة 19.26 ± 0.8 )V , 8.17 ± 0.38 , 27.43 ± 0.12 , 34.10 ± 0.06 ) على التوالي بعد 28 يوم من التمنيع . من خلال النتائج اظهر المحلول الايثانولي لنبات النيم تحسنا واضحا على الاستجابة المناعية غير الخصوصية والمناعة الخصوصية بشقيها الخلطي والخلوي. | A total of 100 urine samples were collected from pregnant women who attended to Children and delivery's hospital in Samawah city, during the period extended from November to January 2012. The study is carried out for bacteriological isolation and identification of P. vulagris, antibacterial susceptibility testing and to investigate the immunomodulatory effect of the Ethanolic neem seeds extract on the immune response of mice vaccinated with Proteus vulgaris antigens. The study included eight groups; the first group (I) was treated with distilled water. group II included mice treated with Proteus vulgaris antigens only (III) : injected mice subcutaneously with a dose of (600 µg /Kg) ethanolic neem seed extract, IV group included injected subcutaneously with a dose of (400 µg /Kg) ethanolic neem seed extract only, The V, VI groups mice were treated with combination of p.vulgaris and ethanolic neem seed extract while (VII and VIII) groups mice were injected with the immunosuppressive drug prednisolone prior to the forthcoming treatment 5 days. All these treatments were carried out at day 1, and then the mice were sacrificed at day 8 to estimate phagocytic activity index by ELISA reader and on day I4 for estimation of lymphocyte transformation by MTT index by ELISA reader and for delayed - type hypersensitivity reaction test at 24 , 48 and 72 hours after proteus vulgaris antigens injection, at day 21 and 28 for (anti - proteus vulgaris antibody titer) by indirect immunoflourescent assay and for serum electrophoresis to estimate the serum fraction.In this regard, all groups of mice showed different significant increases(P≤ 0.01) in the NBT index which represent the phagocytic activity% as compared to group I (0%), which was injected with distilled water (negative control group). The best treatment efficiency was recorded in - group V (57%), while the lowest treatment efficiency was recorded in - group IV (5%). The results of lymphocyte transformation index in mice of all groups showed different significant increases by MTT assay which represent the lymphocyte transformation index as compared to group I (0%). The best treatment efficiency was recorded in - group V (264%), while the lowest treatment efficiency was recorded in - group VI (17%).Delayed type hypersensitivity (DTH) index estimated by skin test in footpad of the mice that immunized with P vulgaris antigens and treated with ethanolic neem seed extract and the high value in the group V after 24 hours. The best delayed type hypersensitivity (DTH) index was recorded in group V. The anti - Proteus antibodies assessed by indirect immunoflourescent test also showed a significant increase titer in immunomodulator - treated and - vaccinated mice in comparison with negative and positive groups. At 21, 28 days, and the best treatment efficiency was recorded in - group V after 21 days with titer of 512. In all mice a significant increase in the value of gamma globulin fraction and Alpha - 1 serum fraction and Alpha - 2 Fraction and Beta serum fraction were observed in group V (19.24 ± 0.80, 8.68 ± 0.23, 27.31 ± 0.06, 34.02 ± 0.21) respectively after 21 days of immunization, and also The highest values of gamma globulin fraction and Alpha - 1 serum fraction and Alpha - 2 Fraction and Beta serum fraction were observed in V (19.26 ± 0.8 , 8.17 ± 0.38, 27.43 ± 0.12, 34.10 ± 0.06 ) respectively after 28 days of vaccination of mice. The results demonstrated a clear immunomodulatory effect of the ethanolic neem seed extract (improvement of non - specific, and cellular immune response) of the treated mice immunized with proteus vulgaris .
