Share
تقدير بعض العقاقير غير الستيرويدية المضادة للالتهابات باستخدام طريقة الاقتران التاكسدي وكروماتوغرافيا السائل ذات الاداء العالي ذي الطور العكوس == Oxidative Coupling and Reverse - Phase High Performance Liquid Chromatographic Methods for Determination of Some Non - Steroidal Anti - Inflammatory Drugs
Author name:
رؤى مؤيد محمود العاني
Supervisor name:
سرمد بهجت ديكران
General topic:
Chemistry
Specific topic:
Chemistry
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
25T1766 - p.pdf
Abstract:
تضمنت الدراسة تطوير طريقتين مختلفتين لتقدير اربعة عقاقير غيرستيرويدية مضادة للالتهاب هي : الدايكلوفيناك صوديوم (DCL)، البايروكسيكام (PX)، حامض المفيناميك (MFNC) والنابروكسين (NAP) باشكالها النقية وبمستحضراتها الصيدلانية (حبوب، كبسول، امبول).الطريقة الاولى : تفاعل الاقتران التاكسدي.تعتمد على تفاعل العقاقير قيد الدراسة مع الكاشف 4،2 - ثنائي نايترو فنيل هيدرازين (2,4 - DNPH) بوجود ايودات البوتاسيوم وهيدروكسيد الليثيوم لتكوين معقدات ملونة اظهرت اعظم امتصاصات عند الاطوال الموجية 600 نانوميتر لدايكلوفيناك صوديوم و520 نانوميتر للبايروكسيكام و465 نانوميتر لحامض المفيناميك و474 نانوميتر للنابروكسين، مقابل محاليلها الخلب.وقد تمت دراسة عدد من العوامل التي تؤثر في اتمام التفاعل بعناية للحصول على ظروف فضلى للتفاعلات باتباع الطريقة الكلاسيكية (بنمط المتغير الواحد) وطريقة السمبلكس المحورة (بنمط المتغيرات المتعددة). اظهرت النتائج والبيانات الاحصائية ان الخصائص الطيفية لمنحنيات المعايرة كانت افضل عند اتباع الظروف الفضلى التي تم الحصول عليها بطريقة السمبلكس المحورة عند مقارنتها بالطريقة الكلاسيكية بنمط المتغير الواحد بالنسبة لعقار الدايكلوفيناك صوديوم. وعلى هذا الاساس تم الحصول على الظروف الفضلى لتقدير بقية العقاقير قيد الدراسة (البايروكسيكام، حامض المفيناميك والنابروكسين) باتباع نمط المتغيرات المتعددة وذلك من خلال دراسة ثلاث من المتغيرات التي لها تاثير واضح على ناتج التفاعل وهي تركيزمحلول الكاشف وتركيزمحلول العامل المؤكسد وحجم محلول القاعدة. واستخدم لهذا الغرض طريقة السمبلكس المحورة ، بينما تم الحصول على القيم الفضلى للمتغيرات التي لها تاثير ضئيل على ناتج التفاعل باتباع الطريقة التقليدية (طريقة نمط المتغير الواحد).اظهرت نتائج هذه الدراسة لتقدير العقاقير المذكورة مطاوعة لقانون لامبرت بير، ولمديات من التراكيز تراوحت لعقار الدايكلوفيناك صوديوم بين (0.5 - 40) µg.mL - 1 وبحد كشف 0.020 µg.mL - 1 ولعقار النابروكسين بين (0.5 - 50) µg.mL - 1 وبحد كشف 0.104 µg.mL - 1 ، اما بالنسبة لعقار حامض المفيناميك فقد تم الحصول على مديين للخطية : الاول (1 - 15) µg.mL - 1 وبحد كشف 0.284 µg.mL - 1 والثاني (15 - 100) µg.mL - 1 وبحد كشف 1.534 µg.mL - 1 . وكان مدى الخطية لعقار النابروكسين (10 - 100) µg.mL - 1 وبحد كشف 2.347 µg.mL - 1. قيمة معامل الامتصاص المولي مساوية لـL.mol - 1cm - 1 20995 و17034 لكل من عقار الدايكلوفيناك صوديوم والبايروكسيكام على التوالي ، L.mol - 1cm - 1 7287و 1351 لعقار حامض المفيناميك بينما 484 L.mol - 1cm - 1 لعقار النابروكسين باستخدام طريقة السمبلكس.اظهرت الدراسة عدم وجود اي تاثير للمتداخلات المتعارف على وجودها في المستحضرات الصيدلانية في تقدير الدايكلوفيناك صوديوم، البايروكسيكام وحامض المفيناميك، بينما لوحظ هناك تاثير ضئيل في تقدير النابروكسين. لذلك طبقت الطريقة المقترحة بنجاح في تقدير العقاقير الاربعة بمستحضراتها الصيدلانية.الطريقة الثانية : كروماتوغرافيا السائل ذات الاداء العالي ذي الطور العكوستضمنت الدراسة تطوير وتقييم طريقة بسيطة في كروماتوغرافيا السائل عالي الاداء ذي الطور العكوس (RP - HPLC) من اجل فصل وتقدير اربعة عقاقير غير الستيرويدية من مضادات الالتهاب (الدايكلوفيناك صوديوم، البايروكسيكام، حامض المفيناميك والنابروكسين).تم اجراء الفصل الكروماتوغرافي باستخدام عمود من نوع NUCLEODUR® 100 - 5 C18ec بابعاد ( (250 × 4.6 mmوحجم جسيمات 5 μm كطور ساكن. اما الطور المتحرك فيتالف من الاسيتونتريل : الماء منزوع الايونات محمض بحامض الخليك (1% ) بنسبة (50 : 50, v/v). تم استخدام معدل جريان ثابت 1.5 mL.min - 1، درجة حرارة 35 °C وحجم حقن 30 µL لتحقيق الفصل واجري الكشف عن الحزم المستردة عند طول موجي 264 نانوميتر. تم فصل العقاقير باستخدام نظام الاسترداد التدريجي وبزمن كلي 8 min. ازمان الاحتجاز لكل من البايروكسيكام، النابروكسين، الدايكلوفيناك صوديوم وحامض المفيناميك هي 4.267 min، 4.785 min، 6.555 min ، 7.683 min على التوالي.اظهرت منحنيات المعايرة علاقة خطية بين مساحة القمة وارتفاع القمة مقابل التركيز وكان مدى الخطية لعقار البايروكسيكام (3 - 200) µg.mL - 1 بينما لعقاري النابروكسن وحامض المفيناميك (1 - 200) µg.mL - 1 اما الدايكلوفيناك صوديوم فكان (1.5 - 200) µg.mL - 1 وبمعامل تصحيح اكثر من0.9990 لكل المركبات. تم حساب حدود الكشف وحدود التقدير للطريقة وقد وجد انها تتراوح بين (0.089 - 0.300) µg.mL - 1 و(0.294 - 0.989) µg.mL - 1 على التوالي.تم حساب المتغيرات الكروماتوغرافية وقد وجد بان معامل التذيل TF)) لكل مركب يتراوح بين (1.438 - 0.938)، وكانت كفاءة الفصل لهذه الطريقة والتي تتمثل بمعامل الفصل (α) بين (1.524 - 1.181) وعدد الصفائح النظرية (N) بين (36027.56 - 5521.71) ومعامل التفريق (Rs) بين (9.270 - 2.454).تم حساب دقة وضبط الطريقة الكروماتوغرافية المطورة بالطرائق الاحصائية ووجد ان الخطا النسبي المئوي Er % كان اقل من 5 %، اما مقدار التكرارية (الذي يعطى كانحراف معياري نسبي) RSD % اقل من 6 % لكل المركبات.تم تطبيق الطريقة على المستحضرات الصيدلانية التجارية لهذه العقاقير، والتي تم تصنيعها في مناشئ مختلفة مثل (الهند ومصر والصين)، واظهرت النتائج ان هذه العقاقير تحتوي زيادة او نقصان في وزن المادة الفعالة حيث ان معامل الاسترجاع المئوي كان يتراوح بين (107.9 % - 91.6 %). | Two different methods were developed in this study for the determination of four nonsteroidal anti - inflammatory drugs namely; diclofenac sodium (DCL), piroxicam (PX), mefenamic acid (MFNC) and naproxen (NAP) in their pure form and pharmaceutical preparations which are formulated as tablets, capsules and ampoule.The first method : Oxidative coupling reactionBased on the reaction of each drug with 2,4 - dinitrophenyl hydrazine (2,4 - DNPH) in the presence of potassium iodate and lithium hydroxide to form colored products. The absorbance values for the formed complexes were measured at 600 nm for diclofenac sodium, 520 nm for piroxicam, 465 nm for mefenamic acid and 474 nm for naproxen; against reagent blank.Different variables affecting the completion of reaction have been carefully optimized following the classical univariate method and modified simplex method. The results show better optical characteristics for calibration curve and statistical data under optimum conditions obtained by simplex optimization, in comparison with those obtained via univariate method for diclofenac sodium. Therefore, in the spectrophotometric determination of piroxicam, mefenamic acid and naproxen, only those parameters which have significant effect on the reaction yield (via the concentration of reagent and concentration of oxidant and the volume of base) were optimized by simplex method, while the parameters which have small effect on the reaction product were obtained by univariate method.The calibration graphs are linear in the ranges of (0.5 - 40) µg.mL - 1 with detection limit 0.020 µg.mL - 1 for DCL complex, (0.5 - 50) µg.mL - 1 with detection limit 0.104 µg.mL - 1 for PX complex, two scales of linearity for MFNC complex, (1 - 15) µg.mL - 1 with detection limit 0.284 µg.mL - 1 and (15 - 100) µg.mL - 1 with detection limit 1.534 µg.mL - 1 and for NAP complex (10 - 100) µg.mL - 1 with detection limit 2.347 µg.mL - 1. The molar absorptivities were found to be 20995 and 17034 L.mol - 1cm - 1 for DCL and PX respectively, and 7287 and 1351 L.mol - 1cm - 1 for MFNC and 484 L.mol - 1cm - 1 for NAP by simplex method.No interferences from the studied excipients on the determination of DCL, PX, and MFNC were found, while slightly interferences were found in the determination of NAP. Therefore, the proposed method was applied successfully for the determination of four drugs in their pharmaceutical preparations.The second method : Reverse - phase high performance liquid chromatographyA simple reverse - phase high performance liquid chromatographic (RP - HPLC) method has been developed and validated for simultaneous determination and separation of four NSAIDs (DCL, PX, MFNC and NAP). Chromatographic separation was achieved using a RP - NUCLEODUR® 100 - 5 C18ec (250 × 4.6 mm i.d.; particle size 5 μm) column. The mobile phase consisted of acetonitrile : deionized water acidified with 1% acetic acid in a ratio (50 : 50, v/v). A steady flow rate of 1.5 mL.min - 1, temperature 35 °C and injection volume 30 µL were used to carry out the separation and the detection was made at 264 nm. The drugs were resolved by gradient elution system with the run time of 8 min. The retention times of piroxicam, naproxen, diclofenac sodium and mefenamic acid were 4.267 min, 4.785 min, 6.555 min and 7.683 min respectively.Calibration plots were constructed by plotting the peak area and peak height against respective concentrations in the range of (3 - 200) µg.mL - 1 for piroxicam and for naproxen and mefenamic acid were in the range (1 - 200) µg.mL - 1, while for diclofenac sodium was in the range (1.5 - 200) µg.mL - 1 with correlation coefficient higher than 0.9990 for all drugs. LOD and LOQ were between (0.089 - 0.300) µg.mL - 1 and (0.294 - 0.989) µg.mL - 1 respectively. The chromatographic parameters were calculated, it was found that the tailing factor (TF) for each drug was between (0.938 - 1.438), the separation factor (α) was between (1.181 - 1.524), the number of theoretical plate (N) was between (5521.71 - 36027.56) and the resolution factor (Rs) was between (2.454 - 9.270).The accuracy and precision were calculated, the Er % was less than 5 %, while RSD % was less than 6 % for all drugs.The method was applicable on pharmaceutical formulations for these drugs which were obtained from different sources as (India, Egypt and China), it is found that these drugs have more than or less than the nominated weight of active compounds, where the recovery % was between (91.6 % - 107.9 %).
