Share
استخدام جين الميتوكوندريا COI في تمييز انواع لحوم مختلفة من الحيوانات اعتمادا على تقانة PCR - RFLP == The use of mitochondrial gene COI in Identifying different animal types of meat based on PCR - RFLP technique
Author name:
زهراء رياض محمود الموسوي
Supervisor name:
اسعد يحيى عايد
General topic:
Agricultural sciences
Specific topic:
Zoology
Degree:
Master
University:
University Of Basrah - Faculty Of Agriculture - Department Of Animal Production
Language:
Arabic
University location:
Basrah
First pages:
31T1799 - p.pdf
Abstract:
اجريت هذه الدراسة في مختبر د. طالب احمد جايد للوراثة الجزيئية في قسم الانتاج الحيواني التابع لكلية الزراعة في جامعة البصرة. اذ جمعت عينات اللحوم الطازجة والمعلبة من الابقار والجاموس والاغنام والماعز والدجاج والديك الرومي، بشكل عشوائي، من مناطق مختلفة في محافظة البصرة بالاضافة الى عينات من دم الجمال. واجريت هذه الدارسة للتعرف على لحوم الانواع الحيوانية المختلفة (عدا الجمال) ومن هنا تاتي اهمية الاعتماد على كشف الانواع من خلال استهداف الحامض النووي الرايبوزي منقوص الاوكسجين DNA عبر تطبيق تقانة PCR - RFLP. تم استخلاص الحامض النووي منقوص الاوكسجين DNA من نسيج اللحوم 0.2) غم) والدم باستعمال عدة استخلاص الدنا (Invitrogen). اما فيما يتعلق بنقاوة عينات DNA المستعملة في الدراسة فقد قيست اعتمادا على الطول الموجي 260 - 280، حيث تركيز DNA 1.8 - 2.0 نانوغرام.استخدم تفاعل البلمرة التسلسلي PCRلتضخيم جزء من المورثة الميتوكونديرية mt COI DNA باستعمال بادئ عام، ولتحديد هوية الانواع استخدمت تقانة التمييز على اساس تعدد طرز اطوال قطع التقييد PCR - RFLP من خلال استخدام اربعة انزيمات قطع محددة( Hpa II وAva II وRsa Iو Taq I ) والتي تقطع وفقا لتتالي تسلسل DNA الخاص بكل نوع. ويمكن تلخيص نتائج هذه الدراسة بما ياتي : 1 - اعطى منتج التضخيم لجين COI الحزمة 710 زوجا قاعديا ولجميع الانواع كونه بادئ عام.2 - ميز انزيم TaqIالماعز حيث انتج الحزمة 650زوجا قاعديا كذلك الجمال اذ انتج حزمتين بحجم 303و 403ازواج قاعدي بينما لم يميز بين لحوم الجاموس والابقار والدجاج والديك الرومي بسبب حصولهما على الحزمة 637 زوجا قاعديا عند الهضم في حين لم يتم الحصول على حزم من لحوم الاغنام. 3 - تمكن انزيم HpaII من توليد ملف تعريفي خاص لتمييز انواع اللحوم جميعا على حدة اذ انتج الحزمة 480في الابقار و520 في الجاموس و372 - 336في الاغنام و300 - 410 في الماعز و333 - 234 في الدجاج و533 - 177 في الديك الرومي و130 246 - 213 - زوجا قاعديا في الجمال.4 - انتج انزيم Rsa I انماطا مميزة لجميع الانواع عدا الماعز والدجاج، اذ انتج منتج هضم كل من الاغنام 300 - 350والجمال130 - 580والابقار153 - 193 - 337 والجاموس600 والديك الرومي 214 - 481زوجا قاعديا.5 - انتج انزيم Ava II حزمتين للجمال 224 - 485وحزمة واحدة للاغنام بحجم650 وحزمة بحجم 600 زوجا قاعديا للجاموس. | This study was conducted in the Laboratory of Dr.Talib Ahmed Jaayid Molecular Genetics, Department of Animal Production, College of Agriculture, University of Basra. Cow, buffalo, sheep, goat ,chicken, turkey meat (fresh or canned) & camels blood samples are randomly collected from different areas of Basra province. The aim of this study is to identify the animal species from their meat except camels by targeting the deoxyribonucleic acid (DNA) through PCR - RFLP technique. DNA is extracted from the tissue of meat (0.2)g and blood using kit (invitrogen). With regard to the purity of DNA sample used in this study it has been measured depending on wave length of 260 - 280 and 1.8 - 2.0 ng DNA concentration.Polymerase chain reaction was used to amplify the part of the mitochondrial gene (mt COI DNA) by universal primers and to identify the species origin PCR - RFLP technique applied through the use of four restriction enzymes (Ava II, Rsa I, Taq I, Hpa II) that cut according to the following bases of each type of DNA. The results of the current study can be summarize as follows : 1 - PCR product gives the fragment 710 bp in all species for being a universal primers.2 - TaqI enzyme distinguish goats with a fragment of (650) bp, (303 - 403) bp in camels. While it doesn’t distinguish between buffaloes , cow, chicken , turkey meat. As they obtain the same fragment (637) bp when digestion. Whereas, no fragments are obtained from Sheep meat.3 - The enzyme HpaII enables to generate a special file definitions to distinguish all types of meat separately if they yield the fragment of (480) bp in cow, (520) bp in buffaloes, (300 - 410) bp in sheep, (336 - 372) bp in goats, (234 - 333)bp in chicken, (533 - 177) bp in Turkey and (130 - 213 - 246) bp in camels. 4 - Rsa I enzyme generates patterns characteristic for all species except goats and chickens. Whereas, fragments are obtained in sheep (300 - 350) bp, cow (135 - 193 - 337) bp, buffaloes (600) bp, turkey (214 - 481) bp & (130 - 580) bp in camels.5 - AvaII enzyme generates two fragments in buffaloes (600) bp, (224 - 485) bp in camels and (650) bp in Sheep meat
