Share
تتبع مسار الارومات العصبية من منطقة ما تحت البطين باتجاه البصلة الشمية في ادمغة الفئران البالغة == TRACING THE PATHWAY OF THE NEUROBLASTS FROM THE SUBVENTRICULAR ZONE TO THE OLFACTORY BULB IN THE ADULT MICE BRAINS
Author name:
زينب زاهد سعدون
Supervisor name:
هدى مهدي الخطيب
General topic:
Medicine
Specific topic:
Anatomy and Histology and Embryos
Degree:
Master
University:
University of Baghdad - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
19T1591 - p.pdf
Abstract:
لقد تم العثور على خلايا جذعية عصبية فريدة من نوعها في المناطق الرئيسية لتكوين الخلايا العصبية في ادمغة البالغين،سميت هذه المناطق بالاعشاش العصبية واكبر هذه المناطق هو منطقة ماتحت البطين للبطين الوحشي. يشار الى عملية تكوين الخلايا العصبية بانها العملية التي من خلالها تقوم الخلايا الجذعية العصبية، وذريتها من الارومات العصبية في توليد خلايا عصبية جديدة في الوضع الطبيعي والمرضي. ان دراسة هذه العملية وتتبع نتائجها مفيدة في وصف سلائف الخلايا العصبية وهجرتها خلال مساحات مقيدة في ادمغة الثدييات البالغة.اهداف الدراسة التعرف على الارومات العصبية على طول جدار البطين الوحشي في منطقة ما تحت البطين في دماغ الفار البالغ وكذلك تتبع هذه الخلايا على طول مسار خاص من منطقة ماتحت البطين حتى البصلة الشمية يعرف هذا المسار بالتيار المهاجر المنقاري. تم ذلك عبر التصبيغ النسيجي العادي باستخدام الهيماتوكسيلين والايوسين(H وE) والتصبيغ المناعى النسيجي الكيميائي باستخدام الجسم المضاد antidoublecortin المتخصص بتحديد الارومات العصبية. المواد والطرائق تم تنفيذ الدراسة في مبنى الحيوان، كلية الطب / جامعة بغداد. من خلال جمع وتربية 36 من الفئران الاناث والذكورنوع (Micromys minutus)، اربعة منها حديثة ولادة استخدمت لعرض الشاهد الايجابي لعمل الجسم المضاد. ال32 الاخرى كانت بالغة (اكبر من 60يوم) استخدمت سبعة منها لاجراء الدراسة الاستطلاعية. ال25 الاخرى استخدمت لاجراء الدراسة الحقيقية حيت تم تثبيت ادمغتها من خلال ارواء مادة البارافورمالدهيد عن طريق القلب مع جهاز مضخة صغيرة تم تصنيعه محليا لهذا الغرض ثم الحصول على ادمغتهم مباشرة بعد ذلك. بعد تشريح الادمغة اكليليا وسهميا تم تثبيتها لمدة 20 ساعة في نفس المادة المثبتة المستخدمة في الارواء. تمت المعالجة بالتجفيف في درجات متزايدة من الكحول الاثيلي والتصفية في الكلوروفورم ثم الغمر في البارافين. تم الاجتزاء بواسطة مشراح، بعد ذلك تمت ازالة البارافين بواسطة الزايلين والاماهة بدرجات متناقصة من الكحول الاثيلي ثم التصبيغ بواسطة صبغة الهيماتوكسيلين والايوسين. للتصبيغ المناعى،تمت حضانة الاجسام المضادة الاولية antidoublecortin مع النسيج لمدة 2 ساعة وللاجسام المضادة الثانوية لمدة 1 ساعة بدرجة حرارة 30°, ثم اضافة صبغة الداب كخطوة نهائية. وقد تم القيام برؤية النسيج المصبوغ من خلال المجهر الضوئي النتائج في المستوى الاكليلي المار بالبطين الوحشي بمسافة 1 ملم امام اليافوخ الامامي، تم تحديد منطقة ماتحت البطين. بالتصبيغ النسيجي العادي الهيماتوكسيلين والايوسين (H and E) ظهرت هذه المنطقة كتجمعات خلايا مجاورة لخلايا البطانة العصبية. مع التصبيغ المناعي الكيمائي، استطعنا ان نثبت بان كتل خلايا من هذه التجمعات تمثل الارومات العصبية وذلك لاخذها الصبغة الايجابية للاجسام المضادة antidoublecortin. على الرغم من هذا فان مجموعة من الخلايا المحيطة بكتل الارومات لم تعطي التصبيغ الايجابي لهذا الجسم المضاد لكنها ظهرت بوضوح وهي تنتشر بين كتل الارومات العصبية. جرى تتبع هذه الارومات سهميا من منطقة ما تحت البطين. وقد وجد انها تشارك في مسارملتزم يدعى التيار المهاجر المنقاري ، يبدا من الطرف الامامي للبطين الجانبي وينتهي في منتصف الفص الشمي . الارومات في التيار المهاجر المنقاري تصطف عرضيا بشكل موازي لسطح الدماغ وتدعم بعضها البعض لتشكيل ما يبدو انه شريط سلسلي من خلايا ممدودة الشكل ذات انوية مغزلية غامقة محاطة بشكل وثيق من قبل خلايا اخرى متعددة الاشكال لم تاخذ صبغة الجسم المضاد antidoublecortin. وقد تم ملاحظة شكل مميز وواضح للسلسلة ابتداءا من منبعها وحتى نقطة انتهائها. تشكل السلسلة تيار منحني بشكل حرف S ينقسم الى اربعة اجزاء مميزة : القمع والطرف العمودي والمرفق والطرف الافقي. علاوة على ذلك , تتخذ الارومات العصبية معالم شكلية مختلفة على طول الاجزاء الاربعة للتيار حيث يتغير شكلها من الشكل الممدود والانوية المغزلية في القمع والطرف العمودي الى الشكل البيضوي الاقل انتظاما في المرفق ثم الشكل الكروي في الطرف الافقي . غير التيار المهاجر المنقاري وضع الهجرة بالقرب من قطبه المنقاري من الوضع العرضي الى الوضع الشعاعي الذي تدخل به الارومات العصبية داخل البصلة الشمية. بالاضافة الى ذلك خضعت الارومات العصبية في التيار المهاجر المنقاري للانقسام الخيطي مما ادى الى زيادة عددها بالقرب من نهاية التيارالمهاجر | adult brain, these regions called neurogenic niches, the larger of which is the subventricular zone (SVZ) of the lateral ventricle. Adult neurogenesis is referred to the process in which neuronal stem cells, and their progeny the neuroblasts; generate new neurons in physiological and pathologic conditions. The study of this process and the tracing of its consequences are beneficial in describing the precursors of neurons and its migration through restricted territory in the adult mammalians brains. Aims of studyTo identify the neuroblasts, along the wall of the lateral ventricle, the SVZ, in the adult mouse brain and to trace them from the SVZ to the OB along the special pathway, the Rostral Migratory Stream (RMS), using routine stains the Hematoxylin and Eosin (H and E) and immunohistochemical staining with antidoublecortin antibody, the specific marker of the neuroblasts. Materials and methodsThe study have been executed at the animal house of College of Medicine \ Baghdad University; by collecting and breeding 36 male and female mice (Micromys minutus), 4 of them were neonates used for demonstrating positive control for the antibody, and the other 32 were adults (< 60 days old), seven of them were used for pilot study. The other 25 were used for proper study. They were perfused intracardially by paraformaldehyde solution with a mini - pump apparatus that has been constructed locally for this purpose then harvesting their brains immediately. After dissecting the brains coronally or sagittaly they were fixed for 20 hours in the same fixative used for the perfusion. Processing had been done by dehydrating in ascended grades of ethanol alcohol and clearing in chloroform then embedding in paraffin. Sectioning had been done with microtome; deparaffinization by xylene and rehydration with descended grades of ethanol alcohol then staining by H and E. For the immunohistochemical staining, the primary antibody “antidoublecortin antibody” was diluted to (1/1000) and incubated with the tissue for 2 hours at 30 C°. Incubation with the secondary antibody lasted for 1 hour. Application of DAB was the final step. Visualization had been done with a light microscope.Results At the coronal plane through the lateral ventricle "1 mm anterior to bregma", identification of the SVZ had been done. By the ordinary staining "H and E", the zone appeared as an aggregate of cells next to the ependymal layer. With the immunohistochemical staining, clusters of cells were proved to be the neuroblasts by staining positive for the antidoublecortin antibody; though groups of surrounding cells did not express the signal of this marker but apparently interspersed among the clusters of the neuroblasts. The neuroblasts were traced sagittaly from the SVZ and they have been found to be engaged in a committed pathway called RMS, began from the anterior tip of the lateral ventricle and ended at the core of the OB. The neuroblasts in the RMS oriented tangentially parallel to the brain surface and scaffolded each other forming what seemed to be a chain - like strip of cells which were elongated with dark spindle shaped nuclei and surrounded intimately by another cells, polymorphic in shape and did not take the signal of the antidoublecortin antibody. Distinct morphology of the chain had been encountered grossly from its emergence site till its termination point. It was forming a sigmoidal shape stream that could be divided as a whole into four distinct parts; infundibulum, vertical limb, elbow and horizontal limb. Furthermore, the neuroblasts took different morphological features along the stream. They changed from spindle shaped - nuclei cells in the infundibulum and the vertical limb to oval or irregular - shaped nuclei cells in the elbow and to more spherical - shaped nuclei in the horizontal limb. The RMS might change the mode of the migration near its rostral pole from the tangential parallel mode to the radial scattered mode by which the neuroblasts entered the olfactory bulb. In addition, the neuroblasts in the RMS revealed mitotic activity and increase their number near the termination of the stream.
