Share
تاثير انزيمي اللايبيز والبروتيز المنتجين من بكتريا Pseudomonas fluorescens في فساد اللحم والحليب == Effect of Lipase and Protease enzymes produced from Pseudomonas fluorescens on Spoilage of Milk and Meat
Author name:
ثناء ماجد زاير النوري
Supervisor name:
عبد الواحد باقر الشيباني | خليل مصطفى خماس
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Enzymes
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3228 - p.pdf
Abstract:
جمعت ( 75 ) عينة من المصادر المحلية شملت الحليب الخام ، واللحم البقري الطازج ، وتربة الرايزوسفير لنبات ورد الروز ، عزلت منها ( 45) عزلة بكتيرية تعود الى جنس Pseudomonas ، وتم عزلها باستخدام وسطين : الاول وسط ( CVB ) الحاوي على صبغة البنفسج البلورية ، والثاني وسط MacConkey agar . اخضعت العزلات جميعها للفحوصات المجهرية والزرعية ، فضلا عن الاختبارات الكيموحيوية التي شملت انتاج انزيمات الاوكسيديز والكاتليز والجيلاتينيز واللايسثينيز، وانتاج الصبغة ، والـتالق تحت الاشعة فوق البنفسجية عند طول موجي ( 254 نانوميتر ) ، واستهلاك السترات كمصدر وحيد للكاربون، والقــدرة على الــنمو بحرارة ( 4 ) م و( 20) م و( 42) م ، وعلى الوسط الحاوي على 6.5 % ملح كلوريد الصوديوم ، وكذلك النمو في وسط ( Triple Sugar Iron - TSI ) ، وعدم انتاج غاز كبريتـــيد الهـــيدروجيـــن فيه ، فضلا عن اجـراء اختبارات عدة الفــــحص الاولـــي api20E وapi20NE . نميت العزلات على وسط اكار حليب الفرز المقشود ( Skim milk agar ) ، وتم التحري عن قابليتها على انتاج انزيم البروتييز، واختيار العزلة الاكفا ، وتحديد الظروف المثلى للانتاج . كما نميت العزلات على وسط ران الصلب ( Rhan agar ) للتحري عن قابليتها على انتاج انزيم اللايبيز ، واختيار العزلة الاكفا ، وتحديد الظروف المثلى للانتاج تم حساب العدد البكتيري الكلي الاولي لكل من عينات الحليب الخام واللحم الطازج غير المعقمين وعينات الحليب المعقم واللحم المعقم بالاشعة فوق البنفـــسجية بطريقة العــد بالاطباق. اختبر ايضا تاثير بكتريا Pseudomonas fluorescens على عينات الحليب واللحم المعقمين ولوحظت التغيرات في الصفات الحسية ، كما تم حساب العدد الكلي البكتيري الاولي بطريقة العد بالاطباق ومن ثم اختبر تاثير بكتريا حامض اللاكتيك Lactobacillus fermentum ضد بكتريا Pseudomonas fluorescens في عينات الحليب واللحم المعقمين ، وقدرت النسبة المئوية للتثبيط . يمكن تلخيص اهم النتائج التي امكن الحصول عليها بالاتي : اولا _ شخصت (45) عزلة تــــعود للــــنوع Pseudomonas fluorescens ، كانت (20) مــنها مصدرها لحم بقري طازج ، و(15) منها مصدرها حلــــيب بقري خام ، فيــــما كانت العزلات المتبقية (10) مصدرها تربة الرايزوسفير لنبات ورد الروز. ثانيا _ انتخبت عزلتان هما : PFM6 كونها الافضل كفاءة في انتاج البروتييز، التي كان مصدرها الحليب البقري الخام وPFE4 الافضل كفاءة في انتاج اللايبيز ، والتي كان مصدرها اللحم البقري الطازج. ثالثا _ حددت الظروف المثلى لانتاج انزيم البروتيــــيز من العزلة المحلية PFM6 , اذ كانــــت درجة الحرارة المثلى للانتاج هي ( 20) م وافضل اس هيدروجين (7.2) , كما كان للتـــهوية تاثير فعال في زيادة انتاجية العزلة هذه من الانزيم من خلال قياس قطر منطـــقة التحلل. كما وحــددت الظروف المثلى لانتاج انزيم اللايبيز من العزلة المحلية PFE4 , اذ كانت درجة الحرارة المثلى للانتاج ( 28) م ، وافضل اس هيدروجيني ( 7.2 ) وكان للتهوية ايضا تاثيرها الفعال في زيادة انتاجية العزلة من انزيم اللايبيز من خلال قياس قطر منطقة الترسب لملح الحامض. رابعا _ بلـــغ الـــعدد البكتـــيري الكــلي الاولي لعيـــنات الحلــــيب الخام واللـــحم الطازج غير المعقمين 10⁶x 1.1)) خلية / مل و(10⁶x 2.1) خلية / غم ، بعد حضانة (3) و(5) ايام على التوالي ، فيما ظلت عينات الحليب المعقم واللحم الطازج المعقم من البكتريا ( صفر خلية / غم) بعد نفس مدة الحضن . خامسا _ تغيرت الصفات الحســـــــية لعينتي الحــــــليب واللحم المعقمين ، بعد تلقيحها (10⁷ X 1 ) خلية / مل من بكتريا Pseudomonas fluorescens من حيث القوام واللــون والرائحة والنكهة ، وبلغ معـــدل العـــــدد الكلي البكتـــيري الاولي في العينـــتين (10⁸x 5.1) خلية / مل لعيــــنة الحلـــيب و(10⁸x 9.2) خلية / غم لعينة اللحم بعد الحضن مدة ( 3 ) و( 5 ) ايام على التوالي .سادسا _ تغيرت الصفات الحسية لعينات الحليب واللحم المعقمين بعد تلقيحها بـ (10⁷ X 1) خلية / مل من بكتريا Pseudomonas fluorescens و(1) مل راشح بكتريا Lactobacillus fermentum من حيــث القوام واللون والرائـــحة والنكهة ، مع انخــفاض معــدل الــــعدد الكلي البكتيري الاولي في كلتا العينتين والى (10⁶x 1.2) خلية /مل و( 10⁶x 2.7 ) خلية/غم على التوالي ، بعد الحضن لمدة (3) ايام لعينات الحليب و(5) ايام لعينات اللحم ، كما بلــــغت النسبة المئوية للــــــــتثبيط في عينات الحليب 99.764 % وعينات اللــــحم 99.706 %. | Seventy five samples were collected from the local food sources , which included contained crude milk and fresh cow meat, and from rhizosphere soil for rose flower plant . Forty five bacterial isolates were isolated , which are suspected to be belongs to the Genus Pseudomonas .Thus media were used for isolation (CVB) media which contains crystal Violet stain , and MacCkonkey agar. All isolates were subjected to the microbiological and cultural examinations for primary identification . In addition to the biochemical testes which included production of , oxidase , catalase , gelatenase , lecithenase and pigment , as well as glister under the ( UV light ) at ( 254 ) nm wave length , and citrate utilization as the unique source of carbon , ability to grow at ( 4 , 20 and 42) ℃ , and in the media which contained 6.5 % NaCl , also testing the ability to growing at Triple Sugar Iron - (TSI ) medium Producing sulfate hydrogen gas in it .However , api system was used to confirm the identification. The isolates were grown on Skim milk agar media, to test their ability for producing Protease enzyme , then choosing the most efficient isolate , and determing the typical conditions for producing . Also the isolates were grown on the ( Rhan media ) ,to investigate their ability for producing lipase enzyme , then choosing the efficient isolate and determining the typical conditions for producing. Primary total bacterial number was counted for raw milk and fresh beef meat samples . Also primary total bacterial number for the sterilized milk and fresh meat samples with ultra violet ray by using plating method . Effect of Pseudomonas fluorescens on the sterilized milk and meat samples was detected and changes in the sensory characteristics was evaluated. Inhibitory effect of Lactobacillus fermentum against Pseudomonas fluorescens in the sterilized milk and meat samples was investigated , and percentage of inhibition was estimated. Important results may be summarized as follow : 1 - Forty five isolates were identified to belong to Pseudomonas fluorescens species . Twenty of the samples were from fresh meat and fifteen from crude cow milk , while the rest (10) were from rhizosphere soil of rose flower plant . 2 - Two isolates were selected : PFM6 the most efficient in producing protease ( crude cow milk origin ) , PFE4 the most efficient in producing lipase ( fresh cow meat origin ). 3 - Optimum conditions for producing protease enzyme from the local isolate PFM6 were (20)℃, pH( 7.2) and the aeration. The evaluation depended on ensuring the diameter of analysis zone Also optimum conditions for producing lipase enzyme by the local isolate PFE4 were . ( 28) ℃, pH ( 7.2) and the aeration. The evaluation depended on measuring the diameter the depositing zone for acid salt. 4 - Primary total bacterial number of the crude milk samples and the fresh meat was estimated as (1.1 x 10⁶) cell / ml , (2.1 x 10⁶) cell / gm , respectively . While the primary total number of bacteria of the sterilized milk and sterilized fresh meat samples was (Zero) cell / ml upon . 5 - Changes occurred in the sensory characteristics ( taste , odor , color and texture) of sterilized milk and meat samples after inoculation with (1X 10⁷) cells / ml of Pseudomonas fluorescens Primary total bacterial number in both samples were (5.1x 10⁸) cell / ml , (9.2x 10⁸) cell / gm respectively. 6 - Changes occurred in sensory characteristics ( taste , odor , color and texture of sterilized milk and meat samples after incubation with (1X 10⁷) cell/ ml of Pseudomonas fluorescens bacteria, and with 1ml Lactobacillus fermentum. Primary total bacterial numbers of both samples were decreased to (1.2x 10⁶) cell / ml ,( 2.7x 10⁶) cell / ml respectively after incubation 3 days for milk sample , 5 days for meat samples. Percentages of inhibition were in milk sample 99.764 % and in meat sample 99.706%.
