Share
دراسة الاضداد الضادة للميوسينات اللعابية في مرضى السكري النمط - 1 والاصحاء == Anti - salivary mucins antibodies in Patients of Type - 1diabetes&healthy controls
Author name:
عذراء نجم عبد محمد
Supervisor name:
خضر حسن علي الجوراني | يعقوب عبد الواحد صالح الموسوي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3377 - p.pdf
Abstract:
برزت اهمية مستضدات مجاميع الدم المختلفة كجزيئات ترتبط مع امراض المناعة الذاتية وعلى دور مجموعة الدم لويس في هذه الامراض . فقد ركزت الدراسة الحالية في جانبها على تنميط مجاميع الدم ومدى تكرار هذه المجاميع في مرضى داء السكري النمط - 1 مقارنة بالاصحاء , اما الجانب المناعي من الدراسة فقد تطرق الى وجود الاستجابة المناعية في مرضى داء السكري النمط 1 - وعلاقة تلك الاستجابة بمجاميع دم لويس ومستضداتها اللعابية . تمت دراسة (59) عينة دم ولعاب وخروج من الاناث و(50) عينة دم ولعاب وخروج من الذكور ومقارنة ذلك للاصحاء ب(25) عينة دم ولعاب وخروج من الاناث والذكور .تم تنميط مجاميع دم لويس باستعمال طريقة الشريحة الزجاجية وملاحظة التلازن الدموي تحت تكبير 40x.ولوحظ دور المجموعة Le(a+b - ) في القابلية لاحداث المرض حيث بلغت نسبتها عند المريضات (33%) مقارنة بالسليمات (12%) (P=3.77×10 - 4**)، في حين كانت مجموعة دمLe(a - b+) مجموعة مقاومة للمرض اذ انخفظت نسبتها الى (23%) في المريضات مقارنة بنسبة (64%) للسليمات 10 - 9)×4.98=P) ، في حين كانت مجموعة دم Le(a+b+)عند المريضات (17%) مقارنة بالسليمات (16%) (0.462 P=)، في حين كانت مجموعة دم(Le(a - b - في المريضات (23%) مقارنة بنسبة(%8) (10 - 3×1.20 P=) للسليمات . ولوحظ دور المجموعة Le(a+b - ) مجموعة مقاومة للمرض اذ بلغت نسبتها في المرضى الذكور (%20) مقارنة بنسبة(24%) للاصحاء (0.239 =P)، في حين كانت مجموعة دم Le(a - b+) مجموعة مقاومة للمرض اذ انخفضت نسبتها في المرضى(32%) مقارنة بالاصحاء(40%)(0.313 P=)، في حين كانت مجموعة دم Le(a+b+) في المرضى (10%) مقارنة بنسبة(16%) للاصحاء(p=0.462) . وكانت مجموعةدم Le(a - b - ) في المرضى(28%)مقارنة بنسبة(20%) للاصحاء (P=0.185).وقد تبين دور الافراز في احتمالية الاصابة بالسكري النمط ـ1 ذات صنفLe(a) . ففي الاناث كان تردد الفارزين بنسبة (50%) في المريضات مقارنة بنسبة(33.3%) للسليمات (P=0.015 ) ،اما تردد مجموعة غير الفارزين حيث بلغت نسبتها(50%) مقارنة بنسبة (66.6 %) للسليمات(0.022 P=) ، وفي الذكور كان تردد الفارزين بنسبة(12.5%) في لمرضى مقارنة بنسبة(40%) للاصحاء (10 - 6×6.37 P=)، اما تردد مجموعة الغير فارزين حيث بلغت نستها (87.5%) مقارنة بنسبة(60%) .(10 - 5×1.52 P=) ، كما تبين دور الافراز في احتمالية الاصابة بالسكري النمط - 1 ذات صنف Le(a - b - ) ، ففي الاناث كان تردد الفارزين بنسبة(%62.5)، اما السليمات فلم توجد نسبة لتحديدها لقله عدد النماذج .اما تردد مجموعة غير الفارزين اذ بلغت نسبتها(%37.5) للمريضات مقارنة بنسة (100%) للسليمات (10 - 22×8.80 P=) ،اما في الذكور كان تردد الفارزين بنسبة (16.6%) للمرضى مقارنة بنسة(8%) بالاصحاء (0.082 P=) ، اما مجموعة تردد الغير فارزين حيث بلغت نسبتها (83.3%) مقارنة بنسبة(20%) للاصحاء (10 - 19×4.94 p=)، اظهرت تجارب كشف الاضداد الضادة للميوسينات اللعابية وباستعمال كشف الايلازا غير المباشر(مستوى الاضداد مقاس بمعدل الكثافة الضوئية ± الانحراف القياسي)، فلمجموعة Le.a للمريضات كان معدل الاضداد0.0 )±0.085) مقارنة بمعدل0.0127)±0.1495) للسليمات(10 - 8**×8.48=P)، مجموعة Le.b للمريضات كان معدل الاضداد0.011)±0.089) مقارنة بمعدل0.0127)±0.151) للسليمات (10 - 12**×P=6.37) ،مجموعة Le.a+b+ للمريضات كان معدل 0.007)±0.099) مقارنة بمعدل0.0138)±0.288) للسليمات (10 - 13***×9.09=P) ،مجموعة Le.a - b - كان للمريضات بمعدل الاضداد0.003)±0.073) مقارنة بمعدل 0.0076)±0.1207) للسليمات (10 - 13***×9.09=P). تم دراسة تثبيط الاضداد الضادة للميوسينات اللعابية بالمستضدات اللعابية OL e.a وOLe.b الحرة وكانت النتائج كالاتي : كان معدلات الكثافة الضوئية ±الانحراف القياسي للمعاملات كالاتي : مجموعة Le.a قبل الثنبيط بالمستضد اللعابي OLe.a كان (0.01±0.160) مقارنة بعد التثبيط (0.025±0.145) (P=0.490) ،مجموعة Le.b قبل التثبيط بالمستضد اللعابي OLe.a كان(0.018±0.117) مقارنة بعد التثبيط (0.03±0.1) (P=0.142) ،مجموعة Le.a+b+ قبل التثبيط بالمستضد اللعابي OLe.a كان (0.037±0.188) مقارنة بعد التثبيط (0.094±0.201) ( P=0.667) ،مجموعة Le.a - b - قبل التثبيط بالمستضد اللعابي OLe.a كان(0.066±0.2) مقارنة بعد التثبيط (0.029±0.103) (10 - 4×P=4.76)، مجموعة Le.a قبل الثنبيط بالمستضد اللعابي OLe.b كان (0.01±0.160) مقارنة بعد التثبيط (0.01±0.118) (10 - 8×2.33=P)، مجموعة Le.b قبل التثبيط بالمستضد اللعابي OL.b كان(0.018±0.117) مقارنة بعد التثبيط (0.016±0.088)(10 - 3×P=1.29). مجموعة Le.a+b+ قبل التثبيط بالمستضد اللعابي OLe.bكان (0.037±0.188) مقارنة بعد التثبيط(0.077±0.189) ( P=0.971)، مجموعة Le.a - b - قبل التثبيط بالمستضد اللعابي OLe.bكان(0.066±0.2) مقارنة بعد التثبيط(0.02±0.097) (10 - 4×P=1.70)..اما في الجانب البكتيري فقد تم تشخيص عزلات بكتريا Staphylococcus aureusو Pseudomonas aeruginosa .وكالاتي : عزل بكتريا Pseudomonas aeruginosa شخصت 5 عزلات aeruginos .P من اصل ( 25) عيبة خروج للمريضات اذ بلغت نسبة الزرع الافتراصي (20%) وفي حين بلغت نسبة الزرع للسليمات (0%) من اصل 25)) عينة خروج , وايضا شخصت 4))من الذكورمن اصل (25)وكانت نسبة العزل الافتراضي (16%) في حين بلغت نسبة عز ل الاصحاء (%0).عزل بكتريا Staphylococcus aureus شخصت 5 عزلات S. aureus من اصل (25) عينة خروج للمريضات اذ بلغت نسبة الزرع الافتراضي الموجب(20%) وفي حين بلغت نسبته للسليمات 0)% )من اصل 25 عينة خروج , وايضا شخصت 4)) عزلات من الذكورمن اصل (25)وكانت نسبة العزل الافتراضي (16%) في حين بلغت نسبة عزل الاصحاء (%0).استنتج ان داء السكري النمط - 1 له علاقة بمجاميع الدم ABO ,ومجموعة دم لويس اذ دراستنا هذه اجريت سابقا بنفس الموضوع في قسم علوم الحياة . اشرت الدراسة ان هنالك اضداد ضادة لميوسين اللعاب مسجلة لاول مرة، وهي ملازمة بعيارية عالية (استعمل المصل المخفف 1 : 100) تكثر في المرضى مقارنة بالاصحاء .هنالك زيادة في تكرار عزل البكتريا Pseudomonas aeruginosa وStaphylococcus aureus . فيما يدل ذلك وجود تلازم بين نوعي البكتريا والمرض الى ان ذلك يحتاج الى دراسات معمقة . ممكن ان تكون الفروقات بين الذكور والاناث في توزيع مجاميع دم لويس اساسها هرمونات ستيرويدية. من النتائج الواردة في اعلاه تبين ان هناك علاقة بين مجاميع دم لويس وقدرة الافراز والاستجابة المناعية الضادة للعابين في مرضى السكري والتي يمكن ان تستهدف هدفا لتشارك في انشاء المناعة الذاتية في هذا المرض. | Blood group antigen, are associated with autoimmune diseases . studies emphasized on lewis blood groups. The present study concentrated on finding the frequency distribution of ABO - Lewis blood groups association in type - 1 Diabetes compared to the distribution in healthy controls.The immunological part of this study investigated the immune response in the disease and its relation ship with salivary mucins Lewis molecules. Fiftynine diabetic female samples(blood، saliva،stools) as well as 50 male diabetic sample(blood، saliva،stools) were used in addition to 25sample (blood، saliva،stools )of female and males healthy controls . Typing of blood groups Lewis using the glass slide Not blood agglutination and under magnification 40x.The findings indicated that Lea+b - molecule has arole in disease susceptibility. Ites percentage approach 33% in female patients compared to 12% in healthy controls (p=7.33 x 10 - 4)، On the other hand however, Lea - b+ group gave 23% in diabetic females compared to 64% in healthy females (p= 4.98 x10 - 9). Lea+b+ groups gave 17% in diabetic females and 16% in healthy females (p=0.46).Interestingly however, Lea - b - groups was represented at 23% in diabetic females versus 8% in healthy females (p=1.2x 10 - 3) In males the results of the frequenecies could be summarized as follows : Lea + b - 20% in diabetics vs 24% in controls. p=(0.239).Lea - b+ : 33% in diabetics vs 40% in controls. P=(= 0.31).Lea+b+ : 10% in diabetics vs 16% in controls. P= (0.462).Lea - b - : 28% in diabetics vs 20% in controls. P=(0.185).The role of secretion (se gene role) in diabetes was investigated also, particularly in Lea group and the findings were as follows : secretors female : 50% in diabetics vs 33.3% in controls.(p=0.015).None secretors : 12.5% in diabetics vs 40% incontrols (p=6.37x10 - 6).In addition to that the role of secretion was seen in Lea - b - group as well. Secretor diabetics female, showed 62.5% . There was no available samples in controls.A Statistically siqnificant frequency differences was seen in non secretors diabtic, females compared to controls (37.5% in diabetics vs 100% in controls p=8.8 x 10 - 22).In Males the results of secretions reported a significant difference in non secretors83.3%. In diabetics vs 20% controls ( p= 4.94 x 10 - 3)The other part of the study experiments oriented to uncovering the presence of anti - salivary mucins antibody .Using Lewis types, salivary mucin as coating antigen، and indirect ELISA, we could demonstrate the occurrence of anti - mucin antibodies in patients sera that was from controls.In this respect the level of anti - mucin antibody measured as ELISA mean o.D±SD seen below and as following : In Lea diabetic females group was 0.085+0.02 vs 0.1495±0.0127 in control (p= 8.48 x10 - 8)،In Leb diabetic females group 0.089±0.011 vs 0.151±0.0127 in control group( p= 6.37 x10 - 12)،In lea+b+ diabetic females group 0.099+0.007 vs control groups 0.288+0.0138 in control p=( 9.09 x10 - 13) ،In Lea - b - diabetic females group 0.07+0.003 vs control group 0.1207+0.0076( p=9.09 x 10 - 13)In specificity experiment, using free olea and oleb free saliva as inhibitor for anti - mucin antibody, it was demaonstrated that in female patients group Lea : no inhibition by free Lea was seen (0.6 ± 0.01) vs 0.145±0.02 for treatments before and after inhibition respectively (p=0.49)، similarly there was no inhibitin by the free antigens، similarity there this no inhibition by the free antigens towards antibodies in group Leb.Significnt inhibition of anti - mucin antibody by free Lewis was seen in group : (0.2±0.060) vs (0.103±0.029) before and after inhibitim respectiuly(p=476 x 10 - 4) and similar results was seen in Lea - b - group.The bacteriological study on The isolation of P.aeroginosa from stool samples revealed an isolation frequency of 20% in diabetic vs 0% in control.In addition S.aureus isolation from stool gave a frequency of 20% in patients vs 0% in control.It is concluded that there is areltionship among Lewis blood groups – secretion of there molecules and anti - mucin، immune response directed to aspecific targt and initiating autoimmunity in this particular disease.
