Share
تقييم لقاح الحصبة لدى الاطفال والبالغين باستخدام طرق مصلية مختلفة == Evaluation of Measles Vaccine in Children and Adults Using Various Serological Methods
Author name:
كريم مؤمن ليلو الساعدي
Supervisor name:
ضحى سعد صالح | فيصل غازي الحمداني
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Viruses
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3071 - p.pdf
Abstract:
بالرغم من نسبه التغطيه (العاليه ) من التلقيح في العراق الا ان وباء الحصبه مستمر في الحدوث وازدياد نسبة المعرضين للاصابه بمرورالزمن الى مستوى ينتشر فيه المرض بسهوله. ان السيطره على هذا مرض في بلدنا عمليه صعبه لسهولة انتقال الفيروس بين الملامسين بالاضافه الى عدم تطور البنيه التحتيه لانجاز عملية التلقيح ومراقبة الاصابات للحد من انتشار المرض . شمل البحث دراسة الاستجابه المناعيه ضد فايروس الحصبه لنمادج من المصل لاشخاص عراقيين من بغداد ولاطفال من زامبيا مدينة لوساكا .فيما يخص نماذج العراقيين تم اخذ 165 نموذج دم لاطفال وبالغين بواقع 95 ملقحين و70 مصابين من بينهم 34 مصاب بالحصبه على الرغم من التلقيح ضد المرض باعمار تتراوح بين ( 8 شهر - 30 سنه) وللمده ( من شباط / 2007 الى حزيران / 2007 ) , قسمت النماذج الى ستة مجاميع اعتمادا على المدى العمري . شخصت الاصابات التي وقعت عام 2007 سريريا في المراكز الصحيه ومن ثم تاكيدها مختبريا في مختبر الصحه العامه المركزي في بغداد , تم تقييم الاستجابه المناعيه المتخصصه ضد فايروس الحصبه باستخدام ثلاثة طرق مصليه مختلفه وهي : التعادل المصلي الدقيق وقياس الكلوبيولين المناعي صنف G وطريقة تثبيط التلازن الدموي اجريت هذه التجارب في مختبر تقييم اللقاحات الفايروسيه والزراعه النسيجبه في المركز الوطني للرقابه والبحوث الدوائيه . اظهرت نتائج طريقة التعادل المصلي ان جميع المشاركين بالدراسه يمتلكون الاجسام المضاده ( وهم الذين يمتلكون عياريه مساويه او اعلى من ( 128 ) المتخصصه ضد فيروس الحصبه ولكن بمستويات مختلفه , حيث كان مستوى الحمايه المصليه بنسبة 79% للملقحين و94,2% للمصابين وهذا يؤكد على بقاء الاجسام المضادة هذه لفتره طويله بعد حصول الاصابه والتلقيح . وكان معدل الانتشار المصلي لمختلف اعمار الملقحين : 923± 258 , 714± 336 , 705 ± 384 , 268 ± 289 , 278 ± 214 للاعمار (6 - 10 ),(11 - 15) , (16 - 20) ,(21 - 25) , (26 - 30) سنه بالتعاقب , اذ تبين عدم وجود مؤشر احصائي معنوي (P>0.05)عند المقارنه بين الملقحين بالعمر(6 - 10 ) سنه مع المصابين حديثا باعمار اقل من 6 سنوات, اما الملقحين بعمر (11 - 15) سنه قد اظهر وجود مؤشر احصائي مختلف (P<0.01) عند المقارنه بين الملقحين بالعمر(6 - 10 ) سنه , اما الفئات العمريه (16 - 20) , (26 - 30) سنه من الملقحين فقد اظهرت مؤشرات احصائيه مختلفه (P<0.01)بالمقارنه مع نفس الفئات العمريه من المصابين ولم تظهر الفئه العمريه (21 - 25) سنه من الملقحين مؤشر احصائي مختلف مع المقارنه لنفس الفئه من المصابين . اظهرت النتائج نسبه 97 - 100% للحمايه المصليه لفئة الملقحين في المدى العمري (6 - 10) سنه بعد ذلك تبدا بالانخفاض بتقدم العمر , وكانت نسبة الحمايه المصليه 95 - 100% للمصابين بالمرض من مختلف الفئات العمريه المشاركه في الدراسه . اجريت دراسه ايضا بقياس الحمايه المصليه بالاعتماد على عدد جرع اللقاح المعطاة باستخدام طريقة التعادل المصلي وكانت النتائج (1 : 838 ± 403) , ( (1 : 938± 244) للاشخاص الذين اعطوا 5 و6 جرع على التوالي واظهرت اختلاف احصائي(P<0.01) عن الذين اعطو (1 - 2)جرعه من لقاح الحصبه .تمت دراسة فترة بقاء الاجسام المضادة المتخصصة ضد فايروس الحصبه للملقحين والمصابين اذ وجدت بنسبة عاليه قبل مرور فترة 3 سنوات من اعطاء اخر جرعه من اللقاح حيث اظهرت مؤشر احصائي مختلف من الذين امضوا اكثر من 3 سنوات باستلامهم اخر جرعه , بينما لا توجد مؤشرات احصائيه مختلفه من اعطاء اخر جرعه لفترة (3 - 10)سنه واكثر من 10 سنوات , وهذا يعطي دليل بانخفاض مستوى الاجسام المضاده مع مرور الوقت سواء بعد التلقيح او الاصابه الطبيعيه . اظهرت نتائج قياس IgG بطريقة ELISA ان الحمايه المصليه تمثل 89% ضد الاصابه بفايروس الحصبه وتمثل نسبة 7.7% حمايه مصليه غير ثابته ونسبة 3.3% دون حمايه مصليه .وكانت اعلى نسبه من الحمايه المصليو 94,7% في الاعمار الصغيره (6 - 10) سنه من المشاركين في البحث واقل نسبه من الحمايه المصلية 75% للاعمار الكبيره (25 - 30) سنه . وبصوره عامه فان معدل عيارية الاجسام المضاده المتخصصه ضد فايروس الحصبه صنف IgG هي 2080 ±1837 لجميع الملقحين قيد الدراسة وبدون اختلاف احصائي معنوي بالمقارنه مع المصابين والتي كانت 1949 ±1838 , وان التلقيح بالجرعات التعزيزيه الاضافيه للفئات العمريه المناسبة تلعب دور كبير في تمنيع المجتمع للحد من حدوث الاوبئه وانتشارها . اما باستخدام طريقة تثبيط التلازن الدموي وجد 60 مشاركا من اعمار مختلفه يمتلك اجسام مضاده متخصصه مثبطه للتلازن الدموي , وعند الاخذ بنظر الاعتبارعيارية 1/8 كمؤشر للتعرض للاصابه وجد الانتشار المصلي المثبط للتلازن الدموي 53,6 % , 73,6% للملقحين والمصابين بالتتابع , كما وجد انخفاض واضح لمستوى هذه الاجسام المضاده بتقدم العمر , وكما كانت النتائج التي حصل عليها هذا البحث باستخدام تقنية التعادل والاليزا يمكن الاستنتاج ايضا ان مقدارتركيز الانتشار المصلي المثبط للتلازن الدموي ذو علاقه مباشره وطرديه مع نسبة الحمايه المصليه ضد النوع البري للاعمار ما بين (6 - 15) سنه , وكانت نتائج معظم افراد الفئه العمريه (16 - 30) سنه ذو نسبه واطئه من الحمايه المصليه وهذه النتائج ربما تعود ان المشاركين في الدراسه للفئه العمريه الكبيره كانت ولادتهم قبل الشروع ببرنامج التلقيح الموسع اوكونهم عاشو خلال فترة كانت فيها نسبه واطئه من التغطيه في التلقيح مما يؤدي الى انخفاض ونقص في الانتشار المصلي . اما نتائج دراسة المقارنه باستخدام الطرق المناعيه الثلاث في قياس الاستجابه المناعيه ضد الحصبه وجد هناك علاقه جبده ومباشره بين طريقتي التعادل وتثبيط التلازن الدموي ( r =0.87 , P<0.01 كما بينت النتائج ان طريقة تثبيط التلازن الدموي اقل حساسيه من طريقة التعادل , اما المقارنه مع طريقة قياس الكلوبيولين المناعي صنف الكلوبيولين المناعي IgGتعتبرمقياس دقيق وذات علاقه جيده ومباشره مع طريقة التعادل (r = 93 , P< 0.05) واخيرا يمكن الاستنتاج ان طرق التعادل هي الطريقه المثلى في قياس الاجسام المضاده ضد فايروس الحصبه وتعتبر الطريقه المناسبه لقياس مستوى الحمايه ضد المرض . اما بخصوص نماذخ المصول العائده للاطفال من زامبيا , شملت الدراسه (50) نموذجا , يعضها كان قبل التلقيح والبعض الاخر بعد (1 - 3 اشهر ) من تلقيح الاطفال بلقاح الحصبه المنفرد بعمر 9 اشهر , تم قياس الاجسام المضادة المتخصصه ضد فايروس الحصبه بتقنية التعادل المصلي في الاكار وباستخدام النوع البري لفايروس الحصبه المعزول من حالات مصابه بالحصبه واجري الاختبار باصابة خلايا كلية القرد الاخضر الحامله للمستلم CD150 واجري الاختبار بالتزامن مع المصل القياسي العالمي لغرض المقارنه ولغرض تحويل العياريه للنتائج الى الوحدات العالميه , تم اجراء الاختبارات في مختبر الاستاذه كرفن في جامعة جون هوبكنز الامريكيه.اما نتائج هذه الاخيبارات فقد كان قياس الاجسام المضاده للاطفال الزامبيين بعمر 9 اشهر قبل اخذ اللقاح 0.079 وحده عالميه وبنفس الوقت هي تمثل ما تبقى من الاجسام المضاده المكتسبه وهي اقل من مسوى الحمايه ضد المرض التي هي 0.120 وحده عالميه عند استخدام تقنية التعادل المصلي في الاكار , اما بعد الفتراة الزمنيه شهر واحد وثلاثة اشهر من التطعيم كان قياس الاجسام المضاده 0.606 , 0.493 وحده عالميه وبمؤشر احصائي P< 0.05 ,P<0.01 , على التوالي بالمقارنه بنتائج قبل التطعيم وهو اعلى من مستوى الحمايه ضد المرض , بينما كان قياس الاجسام المضاده بعد الاصابه الطبيعيه للاطفال بعمر 76 شهر 3.303 وبمؤشر احصائي P<0.005 وحده عالميه وهذه النتيجه تؤكد النتائج السابقه بان الاستجابه المناعيه بعد الاصابه الطبيعيه اعلى من نسبتها بعد التطعيم .وهذه النتائج تتفق مع نتائج الاستجابه المناعيه للاطفال العراقيين دون سن 6 سنواة فيما يخص مستوى الحمايه ضد المرض . | In this study, the potency of the live measles vaccine ( Rouvax / Sanofi pasture production) has been determined by an in vitro microtitration assay ,the results were considered comply and meet with the WHO requirement .The estimation of the prevalence measles antibody among serum samples from Iraqi and Zambian population after measles vaccination and natural infection. Regarding the Iraqi blood samples were collected from Iraqi children and adults with documentation of vaccinated or exposure to natural infection with an average age of (8 months - 30 years) .Samples were divided into six groups based on the age of participants .The individuals were infected during 2007 outbreak identified in the health center of their area and confirmed serologically in Center Public Health Laboratory (CPHL) in Baghdad; Serological assays were performed at the National Center for Drug control and Research ( NCDCR) to detect measles antibody . All 156 participants had detectable neutralizing antibodies, while the prevalence of protective level of neutralizing antibody titer (≥ 1 : 128), was found in 79% of vaccinated group and 94.2 % for participants with a history of measles cases suggesting that the rate of antibody persist longer when expressed exposure to circulating wild virus. When groups distribution of the Geometric Mean Titer (GMT) values was determined according to the age groups, revealed that the measles neutralizing antibody titers after vaccination were 923± 44.2 , 714 ± 68.7 , 705 ± 99.2 , 268 ± 91.4 and 278 ± 87.7 for groups 6 - 10 ,11 - 15 ,16 - 20, 21 - 25 and 26 - 30 years respectively . There was no significant statistical difference (p>0.05) for age group 6 - 10 when comparing with infected children (<6 years), 11 - 15 years group showed statistical significancet when compared with infected children (>6 years) ( P < 0.01) , 16 - 20 and 26 - 30 of vaccinated groups also showed to be statistically significant when comparing with similar age of infected individuals (P< 0.01 ) ; But there is no statistical significance for age groups 21 - 25 years when comparing with similar age of infected individuals ,(p> 0.05) The percentage of neutralizing protective level was 97 - 100% for (>6 - 10) years of vaccinated group and then decreased with increasing ages, while persistent (95 - 100%) for the different age groups infected with measles. Neutralizing antibody titers after five and six vaccine doses was a (1 : 838 (SEM) 100) and (1 : 938 (SEM) 93) respectively this is showing statistically significance when compared with individuals previously had received one and two doses (p < 0.001 and p < 0.01) respectively . In the study of persistence of neutralizing antibody after vaccination and natural infection the prevalence of measles antibody was very high before 3 years of the last dose and show significant differences when compared with group of individuals who had received the last dose after more than 3 years ( P<0.05) and there was no significant statistical differences between groups with the period 3 - 10 and >10 years after the last dose. therfore, no evidence was found of neutralizing antibody against measles which decreased to nonprotective levels from neutralizing result after both vaccination and natural infection. In the second assay, sera were tested for measles specific IgG by ELISA result showed that 89% of all individuals who participated in the research were seropositive against measles, 7.7% equivocal and 3.3% had shown seronegative. The highest seroposivity was ( 94.7% ) among individuals with the lowest age group (6 - 10 years), and the lowest seroposivity (75 %) was among the oldest age group (26 - 30 years). In general all individuals participated in this study have shown IgG level 2080± 197.5 mIU/ml of the vaccinated groups. when compared with participants previously exposed to measles natural infection that was found (1949 ± 262.5mIU/ml) with no statistically significant . When individuals grouped according to the increased age , a marked decline in IgG levels were observed, resulting in different levels of protection against measles and suggested that supplementary vaccination might play a role in vaccinating population before measles outbreaks . In the third assay the prevalence of measles antibody by hemagglutination inhibition has been found that 60 participants of different age groups have detectable hemagglutination inhibition antibody titer using the titer(<1 : 8) as indicator of susceptibility .It was found that 53.6% and 73.6% of hemagglutination inhibition seroprevalence among vaccinated and those with previous to natural infection respectively . Hence again a marked decline in hemagglutination inhibition antibody titers was observed with the increasing age of participants in this study. Regarding neutralizing and IgG - ELISA antibody, the results of hemagglutination inhibition suggest that the seroconvesion after vaccination correlated with the protective levels against wild type among age group (6 - 15) years and most of the participants with (16 - 30) years age group have a low percentage of hemagglutination inhibition antibody titers, and these results may be due to the fact that individuals were born before the implementation of routine immunization against measles in 1985 and lived in the time of low vaccination coverage resulting in waning of antibody or lack of initial seroconversion. In comparison of different methods that have been used in this study to evaluate specific measles immune response, it was found that a good correlation between hemagglutination inhibition and neutralization test ( r=0.87 , P<0.01).With measles virus , hemagglutination inhibition was considered less sensitive than neutralization test . Also was found a good correlation between IgG - ELISA and neutralization assays ( r=0.93 , P<0.05). It has been concluded that the neutralization assay is considered the gold standard in measuring antibodies properly and most important in clinical protection. About the Zambian children were used in order to know the level of immunity required for measles elimination after administration with different measles virus vaccine strain .Fivity serum samples were available from Zambia children in prevaccination , 1 - 3 months after vaccination at 9 months of age ,and infected children with ages (76 ± 65 months ) . A modified plaque reduction neutralization assay was conducted to measure measles antibodies ,using wild type of Measles virus strain to infect veroSLAM cells , Plasma samples were tested in parallel with the International World Health Organization (WHO) Serum Standard and results were transformed into mIU/ml .The tests were conducted in Prof. Griffin lab. of the molecular microbiology and immunology department in John Hopkins School of public health. In the present study,Zambia infants vaccinated at 9 months of age have had passive antibody (79 mIU/ml) lower than the protective level (≥ 120 mIU/ml) and the presence of passive antibody at the time of vaccination continued to have high titers of antibody after one month ( 493 mIU/ml ) (P> 0.01) and three months (606 mIU/ml ) ( P<0.05) of measles vaccination above the protective level against measles infection ,while the antibody levels have reached to (3303 mIU/ml) ( P > 0.005) in children with natural infection, these results showed in agreement with the results of Iraqi children under 6 years of ages regarding the level of protection against the disease .
