Share
الكشف عن انواع الجنس Fusarium المنتج للفيومنسين ب1 على حبوب الذرة الصفراء باستخدام الطرائق الجزيئية ودراسة تاثيراته المرضية النسيجية على الفئران البيض == Detection of Fusarium Species Producing Fumonisin B1 on Maize Using Molecular Methods and Study Its Histopathological Effects on Albino Mice
Author name:
سيناء وليد محمد سعيد
Supervisor name:
خالد عبد الرزاق حبيب | سالم رشيد العبيدي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3345 - p.pdf
Abstract:
هدفت الدراسة الى تشخيص انواع الجنس Fusarium المرافقة للذرة وقابليتها على انتاج السم FB1 باستخدام الطرق التقليدية والجزيئية. كما تم دراسة الظروف المثلى لانتاجه فضلا عن تاثيره على انسجة الكبد والكلية والطحال وقياس انزيمات الكبد والطحال في ذكور الفئران المجرعه فمويا بالسم.تم جمع ثمانية وثمانين عينة ذرة للفترة ما بين تشرين الثاني 2013 واذار 2014 من الاسواق المحلية ومخازن الحبوب في بغداد (35 عينة ذرة من مخازن الحبوب و53 عينة من الاسواق المحلية) كما وتم الكشف عن الفطرين المنتجين للفيومينيسين وهما Fusarium verticillioides وF. proliferatum باستخدام تفاعل تضاعف البلمرة (PCR) وتقنية فصل الصفائح الرقيقة (TLC) وتقنية الاليزا.(ELISA) وكانت النتائج كما ياتي : 1. الاجناس الفطرية المعزولة من الذرة هي : الفطر Aspergillus وكان الاكثر سيادة (58.6%) تليه الفطرياتFusarium (17.5%) ثم Rhizopus (6.7%), Alternaria (6.1%), Mucor وPenicillum (3.9%), Bipolaris (1.9%) وTrichthecium (1.2%).2. النوع الاكثر سيادة ضمن جنس Fusarium كان F. verticillioides (70.64%) 3. اظهرت النتائج باستخدام تفاعل تضاعف البلمرة المتسلسلة (species specific PCR) ان من بين سبعة وسبعين عزلة, فقط ثلاثة عشر عزلة تعود للجنس F. verticillioides ومن بين تسع عزلات فقط عزلة واحدة تعود للجنس F. proliferatum.4. تمتلك جميع عزلات F. verticillioides الثلاثة عشر الجين fum1 وبذلك يعد المنتج الرئيسي للسم FB1 مقارنة مع عزلة F. proliferatum التي لم تمتلك الجين.5. من بين العزلاتF. verticillioides الثلاثة عشر, كانت العزلة FV1 هي الاكفا في انتاج FB1 (175.39 جزء في البليون) على وسط فطيرة الذرة بينما تراوح تركيز السم FB1 لبقية العزلات يتراوح بين (21.31 - 170.51 جزء في البليون).6. كانت نتائج الظروف المثلى لانتاج السم FB1 هي وسط فطيرة الذرة وفترة حضانة 21 يوم ودرجة حرارة مثلى 20ºم.7. حددت الجرعة القاتلة المتوسطة (LD50) للسم FB1 لذكور الفئران وهي 1800 جزء في البليون.8. لوحظت زيادة في تركيز انزيمات الكبد والكلى للفئران بعد تجريعها فمويا بالسم FB1 عند التركيزين 800 و1200 جزء في البليون مقارنة مع مجموعة السيطرة.9. كشفت النتائج ان التغيرات في انسجة الكبد والكلى والطحال للفئران المجرعه فمويا بالسم FB1بالتركيزين 800 و1200 جزء في البليون، ظهرت زيادة التغيرات 10. التنكسية والموت المبرمج للخلايا مقارنه مع مجموعة السيطرة. | The study aimed to identify Fusarium species associated with maize grains and their ability to produce Fumonisin B1 using traditional and molecular methods. The optimal conditions of FB1 production were assayed. The effect of FB1 on liver, kidney and spleen tissues of albino mice were studied and measured its effects on enzymes in affected liver and kidney.Eighty - eight maize samples were collected between November 2013 and March 2014 from local markets and silos of Baghdad province (thirty - five from silos and fifty - three from markets). Fusarium verticillioides and F. proliferatum were investigated and their ability to produce Fumonisin B1 was detected using : Polymerase chain reactions (PCR), Thin layer chromatography (TLC) and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) techniques. The following results were obtained from the current study : 1. The fungal genera isolated from maize were : Aspergillus (58.6 % ) followed by Fusarium (17.5% ), Rhizopus (6.8 %), Alternaria (6.1 %), Mucor and Penicillium (3.9 %), Bipolaris (1.9 %), and Trichothecium (1.2%).2. The predominant species among Fusarium was F. verticillioides (70.64%).3. The use of species specific PCR reactions for Fusarium species revealed that out of seventy seven isolates, thirteen isolates only belong to F. verticillioides and out of nine isolates, one isolate only belong to F. proliferatum.4. All the thirteen F. verticillioides isolates were shown to possess fum1 gene (FB1 producer), whereas the F. proliferatum isolate was shown not to possess this gene. 5. Among the thirteen isolates of F. verticillioides, FV1was the most efficient one in production of FB1(175.39 ppb) on patty maize medium, while the concentration of FB1 for other isolates ranged between (21.31 - 170.51) ppb. 6. The optimum culture conditions for FB1 production using solid state fermentation included : patty maize medium with incubation period 21 days at 20ºC. 7. The median lethal dose 50 (LD 50) of FB1for male mice was 1800ppb.8. liver enzymes (AST, ALT, ALP) and kidney functions (Creatinine and Blood urea) were increased in male mice which were orally gavaged FB1 at 800 and 1200ppb concentrations comparing with control group.9. The histopathological changes in the liver, kidney and spleen of orally gavaged mice by FB1 at 800 and 1200 ppb, showed a significant increase degenerative changes and apoptotic cells in comparison with control group
