Share
التحري وراثيا عن انتاج بعض انزيمات البيتا لاكتاميز واسعة الطيف والمعدنية من بكتريا Klebsiella pneumoniae المعزولة من مصادر سريرية مختلفة == Genetics Detection of Metallic and Extended spectrum Beta - Lactamase production from Klebsiella pneumoniae Isolated from different clinical sources
Author name:
نبا علي جاسم
Supervisor name:
رياض عبد الحسين دلول
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3441 - p.pdf
Abstract:
تضمنت الدراسة جمع 1600 عينة سريرية من مرضى يعانون من التهابات مختلفة ، توزعت ما بين 1500 عينة ادرار و100 عينة قشع, ومن خلال نتائج الفحوصات الزرعية والفحص المجهري والاختبارات الكيموحيوية ، شخصت 53 عزلة تعود لبكتريا Klebsiella spp تضمنت 44 عزلة تعود للنوع K.pneumoniae و6 عزلات تعود للنوع K.oxytoca و3 عزلات تعود للنوع K.planticola .اختبرت حساسية عزلات بكتريا K.pneumoniae لـ 15 مضادا حيويا شملت على : Aztreonam وAmpicillinو Amikacinو Ceftriaxoneو Cefotaxime وCeftazidime[ Amoxicillin / Clavulanic acidو Meropenemو Imipenemو Ciprofloxacin Kanamycin وPipracillinو Cefepimeو CarbenicillinوStreptomycin,] . تم التحري عن انتاج هذه العزلات لانزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف والمعدنية ، اذ استخدمت طريقة الاقراص المتاخمة للتحري عن انتاج انزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف وثلاث طرائق للتحري عن انتاج انزيمات البيتالاكتاميز المعدنية ،وتم الحصول على خمس عزلات منتجة لانزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف وعزلة واحدة منتجة لانزيمات البيتالاكتاميز المعدنية وكانت العزلات المنتجة لهذه الانزيمات تحمل مقاومة عالية للمضادات الحياتية AztreonamوCeftriaxone وCefotaxime وCeftazidime وCarbenicillin وPipracillin وAmpicillinبنسبة 100%. تم تحديد التركيز المثبط الادنى(MIC) Minimum Inhibition Concentration باستخدام طريقة تخفيف الاكار القياسية،وقد اظهرت العزلات قيمة MIC عالية اتجاه المضادات قيد الدراسة (Ceftriaxone وCefotaxime وCeftazidime وImipenem) اذ تراوحت القيم للعزلات المنتجة لانزيمات البيتالاكتاميزالواســعة الطــيف(K22,K26,K28,K29,K36) من g/mlµ(0.1 - 0.05) لمضاد Imipenem وg/mlµ (256 - 32) لمضاد وg/mlµ (1024 - 256) لمضاد Ceftriaxone وg/mlµ (1024 - 128) لمضاد Cefotaxime. اما العزلة المنتجة لانزيمات البيتالاكتاميز المعدنية K8 فقد كانت قيمة MIC لهg/ml µ ( 64 ,512,1024, ( 512 للمضادات (Imipenem , Ceftazidime , Ceftriaxone , ( Cefotaxime على التوالي.تــمـــت دراســــة المــحتــوى البلازمـيـــدي للــعــزلات الســـتة المنتخبة (K8, K22, K26, K28, K29, K36) واظهرت نتائج الترحيل الكهربائي في هلام الاكاروز امتلاك العزلة المنتجة لانزيمات البيتالاكتاميز المعدنية (K8) حزمة بلازميدية في حين تباينت العزلات الخمسة المنتجة لانزيمات البيتالاكتاميز الواسعة الطيف ، اذ احتوت العزلتين K22 وK26 على ثلاث حزم بلازميدية ، بينما العزلة K36 على حزمتين بلازميدية في حين احتوت العزلتين K28 وK29 على حزمة واحدة فقط. اظهرت نتائج معاملات الدنا البلازميدي باستخدام مادتي Ethidum Bromide وSDS عدم قدرة مادة SDSعلى تحييد الحزم البلازميدية، في حين كان Ethidum Bromide محيدا كفوءا عند التركيز g/mlµ (512 - 1024 ).تم استخدام تقنية (PCR) Polymerase Chain Reaction للتحري عن امتلاك العزلات قيد الدراسة على الجينات التي تشفرالى انتاج انزيمات ESL وML وباستخدام طريقة الاستخلاص السريعة (الغليان) وطريقة المستعمرة المباشرة كقالب الدنا وباستخدام بادئات متخصصة لاستهداف الجين shv - bla والجين bla imp - 1. اظهرت العزلات المنتجة لانزيمات ESLجميعها امتلاكها للجين shv - bla وبنسبة %100 ولكن العزلة المنتجة لانزيمات IMP اعطت نتيجة سالبة، كما اظهرت طريقة الاستخلاص بواسطة الغليان كفاءة عالية كقالب للدنا، مقارنتا بطريقة المستعمرة المباشرة. | The study included (1600) clinical samples from Patients suffering From different infections distrubated between (1500) urine and (100) sputum. Morphological ، biochemical tests and use Api 20 E system were employed to diagnose bacterial species and the result showed they were (53) isolates of Klebsiella spp.included(44) K. pneumoniae. (6) K. oxytoca and (3) isolates of K. planticola. Antibiotic susceptibility for K. pneumoniae isolate was performed against 15 antibiotic using disk diffusion method. Disc approximation method was used to detect production of ESLs , and three methods used to detect production of MLs.Results indicated that 5 isolates produced ESLs and only one isolate produced MLs, they isolates which produced ESLs were have highly resistant to antibiotic (100)%to [Aztreonam, Ceftriaxone, Cefotaxime, Ceftazidime, Ampicillin, Pipracillin, Carbenicillin]. Agar dilution method was used for the determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) for the ESLs and MLs producing isolates. The result showed high resistance to Ceftriaxone, Cefotaxime, Imipenem and Ceftazidime. The value of MIC of isolates producing ESLs(K22,K26,K28,K29,K36) were (0.05 - 0.1) µg/ml to Imipenem antibiotic, Ceftazidime (32 - 265) µg/ml, Ceftriaxone (256 - 1024) µg/ml and Cefotaxime (128 - 1024) µg/ml, while the isolate producing ML(K8) showed MIC value (64, 512, 1024, 1024) µg/ml respectively. The plasmid content of six isolates (K 8, K 22, K 26, K 28, K 29, K 36) were studies، the result of revealed electrophorsis in agar gel that the isolate K8 have one plasmid, while isolates produce ESLs differs on plasmid content,in our side K22, K26 have three plasmid, K36 have two plasmid and K28, K29 have one plasmid. Curing was conducted by the use of SDS and ethidum bromide ، and the results showed that the isolates lost the plasmids at concentration (512 - 1024) g/mL of ethidum bromide. Polymerase chain reaction technique was performed for the detection ESLs and ML, DNA template that used for PCR reaction was prepared by using boiling method and the Direct colony method, by using SHV to detect ESL and IMP - 1 to detect MLs. The results showed that all isolates were 100% harboring blashv while blaIMP - 1 gave negative result.also the extraction by use boiling method showed high efficiency compare with direct colony method.
