Share
التحري الجزيئي والوبائي لطفيلي المتحولة Entamoeba Spp. في الاطفال المصابين بالاسهال في محافظة ذي قار == Molecular and Epidemiological investigation of the Parasite Entamoeba Spp. In children with diarrhea in Thi Qar Province
Author name:
منار كريم كاظم السعيدي
Supervisor name:
فاضل عباس منشد العبادي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Parasites
Degree:
Master
University:
University of Thi-Qar - College Of Education For Pure Sciences - Department Of Biology
Language:
Arabic
University location:
Dhi Qar
First pages:
24T3035 - p.pdf
Abstract:
شملت الدراسة الحالية فحص 3909 عينة غائط للاطفال دون سن 12 سنة الذين يعانون من الاسهال ويشكون من الام بطنية والمراجعين لمستشفى بنت الهدى التعليمي ومستشفى الشهيد محمد الموسوي والمراكز الصحية والعيادات الخارجية في محافظة ذي قار خلال المدة من شهر تشرين الاول 2015 لغاية شهر ايلول 2016 تضمنت الدراسة ثلاثة محاور رئيسة . المحور الاول هو تشخيص جنس المتحولة مجهريا باستعمال المسحة المباشرة الرطبة وطريقة التركيز وذلك للكشف عن الاطوار المتغذية والمتكيسه للطفيلي واظهرت اصابة كلية بجنس المتحولة Entamoeba spp. بنسبة 26.86% واختيرت 80 عينة من العينات الموجبة مجهريا لتاكيد التشخيص باستعمال الفحص الجزيئي PCR بواسطة الجين 18S rRNAفسجلت الدراسة اصابة كلية بطفيلي المتحولة بنسبة 35% ، اظهرت نتائج الفحص باستعمال طريقة Nested PCR لتمييز الانواع (Species Specific) اصابة بطفيلي المتحولة الحالة للنسج Entamoeba histolytica بنسبة 39.29% وبطفيلي المتحولة المتغايرة Entamoeba dispar بنسبة 39.29% . فحصت العينات الموجبة (28) للPCR باستعمال Real - Time PCR وبوجود المجسان Probes المجس Histolytica - 96 T الخاص بالمتحولة الحالة للنسج والمجس Dispar - 96 T الخاص بالمتحولة المتغايرة وذلك لتاكيد التشخيص وتمايز الانواع فثبت وجود المتحولة الحالة للنسج باعلى نسبة 53.57% والمتحولة المتغايرة بنسبة 39.29% والانواع الاخرى لجنس المتحولة بنسبة 7.14% وبفارق معنوي بين الطريقتين الجزيئيتين مع وجود تاثير معنوي لنوع الطفيلي في احداث الاصابة . اظهرت الدراسة اصابة مفرد لطفيلي E. histolytica بنسبة 45.50% ولطفيلي E.dispar بنسبة 27.20% فيما سجلت اصابة مختلطة بنسبة 27.30% كما وسجلت وجود كريات الدم الحمر في 80% من العينات الموجبة لوجود E. histolytica وبنسبة 54.55% من العينات الموجبة لوجود E.dispar . تضمن المحور الثاني دراسة انتشار الاصابة بجنس المتحولة من خلال دراسة علاقة الاصابة مع بعض العوامل الوبائية ، منها فصول السنة التي اظهرت وجود فروق معنوية P≤0.05 فكان فصل الصيف اعلى الفصول من حيث نسبة الاصابة 37.06% وادناها في فصل الشتاء بلغت 14.14% ، كذلك لم تبين النتائج وجود فروق معنوية للاصابة فيما يخص الفئات العمرية فكانت النسب اعلاها بين الاطفال دون (3) سنوات فبلغت 30.50% ادناها بين الاطفال في الفئة الاعلى من (10) سنوات بلغت 17.13% ، لم تسجل الدراسة اية فروق معنوية في نسبة الاصابة بالطفيلي بحسب الجنس فسجلت نسبة 26.87% و26.85% للاناث والذكور على التوالي، في حين اظهرت الدراسة وجود فروق معنوية ملحوظة فيما يخص المستوى المعاشي فكانت نسبة الاصابة لدى الاطفال الذين ينتمون للعائلات ذات الدخل المحدود هي الاعلى 37.98% واقلها للذين ينتمون للعائلات ذات الدخل فوق الجيد وبلغت 10.11% كما سجلت النتائج وجود فروق معنوية في نسب الاصابة حسب المستوى التعليمي للابوين فكانت نسبة الاصابة عالية لدى الاطفال الذين المستوى العلمي لذويهم دون الابتدائية مقارنة بذوي الاطفال من حملة الشهادات الجامعية وبلغت النسب 36.85% و8.55% على التوالي فيما يخص عدد افراد العائلة كانت نسبة الاصابة عالية وبفارق معنوي لدى الاطفال الذين ينتمون لعائلات تتكون اكثر من (10) افراد واقلها للذين ينتمون لعائلات التي يبلغ عددها (5 - 3) افراد بنسب بلغت 36.95% و8.54% على التوالي . تضمن المحور الثالث دراسة بعض المعايير الدمية ومعرفة التغير في نسبة هذه المعايير لدى الاطفال المصابين بالطفيلي عند مقارنتها بالمعايير الدمية للاطفال الاصحاء وتم ذلك باستعمال جهاز Coulter Counter . جمعت 150 عينة دم من الاطفال المصابين بطفيلي المتحولة و50 عينة دم من الاطفال الذين يمثلون مجموعة السيطرة الاصحاء وتبين وجود فروق معنوية واضحة في نسبة خضاب الدم 10.16%وحجم كريات الدم الحمر المضغوط 34.7% حيث لوحظ انخفاضهما في مجموعة المصابين مقارنة بالقيم في مجموعة السيطرة التي بلغت 12.34 و39.10 على التوالي. سجلت نتائج العد الكلي لخلايا الدم البيض وجود ارتفاع معنوي في الاطفال المصابين مقارنة بمجموعة الاطفال الاصحاء وبلغت 11.3، 8.37 على التوالي وفيما يخص العد التفريقي لها فقد بينت النتائج وجود ازدياد بفارق معنوي في عدد الخلايا العدلة 6.92 و4.03 والخلايا الحمضة 0.61 و0.17 والخلايا الوحيدة 1.19 و0.93 على التوالي ولوحظ كذلك وجود انخفاضا معنويا في عد الخلايا اللمفاوية في الاطفال المصابين مقارنة بقيمتها لدى اطفال مجموعة السيطرة التي بلغت 2.19 و2.76 على التوالي | The current study included examination of 3909 stool samples from under 12 years old children who visited Bint Al - Huda hospital, Martyr Mohammad Al - Mosawi hospital, medical centres and outpatient clinics in Thiqar governorate during the period from October 2015 until September 2016. All those individuals were suffering from diarrhea and abdominal pain. This study included the microscopic identification of Entamoeba Spp. using direct wet amount and concentration techniques in order to diagnose both Trophozoite and cyst stages of the parasite. The result revealed that 1050 (26.86%) of the collected samples were infected with Entamoeba Spp. Out of these infected samples, 80 were randomly selected for further confirmation by conventional PCR and 18S rRNA. Using this method, 28 (35%) was recorded to have Entamoeba Spp. Positive samples from conventional PCR were further examined by Nested PCR for species specific identification. The result of this method showed the presence of two species, E. histolytica (39.29%) and E. dispar (39.29%).Positive samples for molecular examination (28) were then examined by Real time PCR in order to verify and confirm the molecular results. Two probes were used, Histolytica - 96 Tfor E. histolytica and Dispar - 96 T for E. dispar. A significant difference was observed between two methods. E. histolytica was found to be higher percentage followed by E. dispar and then Entamoeba Spp., 53.57%, 39.29% and 7.14% respectively. The Real time PCR reported mono - infection with E. histolytica in 45.5% and with E. dispar in 27.2%, whereas reported mixed infections by both parasites in 27.3%. Red blood cells (RBCs) were detected in 80% E. histolytica positive samples and in 54.55% E. dispar positive ones.The environmental factors and their correlation with Entamoeba Spp. prevalence were also included in this study. The infection prevalence based on the seasonal variation showed significant differences P≤ 0.05. Summer recorded the highest infection prevalence whereas the lowest was in the winter, 37.06% and 14.14% respectively. Regarding the infection in age groups, the highest percentage (30.5%) was recorded in under 3 years old group and the lowest (17.13%) was found in above 10 years old one. However, no significant difference P≤ 0.05 was observed between these age groups. Furthermore, no significant differences were recorded betweenpatient’s sex. Entamoeba Spp. infection (37.98%) appeared to be higher in children who belong to families with low standard of living compared to those who are from families that earning a higher income (10.11%). A Similar pattern was found in Entamoeba Spp. prevalence based on the number of the patient’s family members. Higher prevalence and significant difference were reported (39.95%) in patients who belong high family member (above 10), compared to those from 3 - 5family member (8.54%).One hundred and fifty blood samples from infected children with Entamoeba Spp. and fifty samples from healthy children as a control were collected during the present study in order to observe the change in blood picture and parameters between two groups. Significant differences were reported in blood hemoglobin (10.16%) and volume of packed RBCs (34.7%) in the infected group compared to 12.34% and 39.10% in the control group. Total leukocyte count was found to be significantly higher in the infected group (11.3) compared to the individuals in the control group (3.37). Differential leukocyte count also showed significant differences in Neutrophils (6.92%, 4.03), eosinophils (0.61, 0.17), monocytes (1.19,0.93) and lymphocytes (2.19, 2.76) in infected and control groups respectively.
