Share
دراسة كيمونسجية مناعية وعلاجية في الفئران الممنعة والمصابة بالاكياس العدرية == Immunohistochemical and Therapeutic Study in Immunized and Infected Mice With Hydatid Cyst
Author name:
افراح عبد الامير صادق العامري
Supervisor name:
وحيدة رشيد علي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Parasites
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3194 - p.pdf
Abstract:
تناولت الدراسة الحالية جوانب اساسية للاصابة بالاكياس العدرية الثانوية لـ 120 فارا من ذكور الفئران البيض Mus musculusسلالة Balb/c، شمل الجانب الاول تحديد دور التمنيع في الجوانب الدموية كالعد التفريقي لخلايا الدم البيض والجوانب المناعية كفرط الحساسية الاجلة ومعامل البلعمة. اوضحت نتائج العد التفريقي ارتفاعا ملحوظا في اعداد الخلايا اللمفاوية بنسبة 64.75% مع حدوث تباين في اعداد الخلايا احادية النواة والحمضة وانخفاضا في اعداد الخلايا العدلة ليصل 32% في مجموعة الفئران الممنعة والمجرعة بمضادات الاكسدة. وفيما يتعلق بالاستجابة المناعية الخلوية المتخصصة المتمثلة بقياس فرط الحساسية الاجلة في وسادة القدم اليسرى، اظهرت نتائج الدراسة الحالية حصول ارتفاع في معدل سمك وسادة القدم في الفئران الممنعة والمجرعة بمضادات الاكسدة ، مع ارتفاع في معامل البلعمة بنسبة 74% مقارنة بفئران السيطرة السالبة، فضلا عن التغيرات العيانية لتلك المجموعة ومن ثم انعكس ايجابيا على المظهر الخارجي وحركة الفئران ووزنها وقابليتها على التغذية وعليه اصيبت تلك الفئران تجريبيا بداء الاكياس العدرية الثانوية من خلال الحقن داخل الخلب (البريتون) بـ 2000 رؤيس اولي من اكباد ورئات اغنام مصابة طبيعيا بالاكياس العدرية. اما الجانب الثاني من الدراسة تمثل بمعالجة الفئران المصابة بثلاثة عقاقير من مشتقات البنزيميدازول والايزوكوينولين هي الالبندازول ((ABZ والاوكسفيندازول (OFZ) والبرازكوينتل (PZQ) ومتابعة بعض الجوانب الدموية والمناعية في الفئران بعد الاصابة والتمنيع والمعالجة، وشملت العد التفريقي لخلايا الدم البيض، اختبار فرط الحساسية الاجلة، معدل معامل البلعمة، اختبار النوى الصغيرة واختبار الانتشار المناعي في الهلام. سجلت مجموعة الفئران المعاملة بعقارOFZ وOFZ+PZQ ارتفاع النسب المئوية للعدلات وانخفاض الخلايا اللمفاوية مقارنة مع فئران مجموعة السيطرة الموجبة، وسجلت زيادة في سمك وسادة القدم اليسرى بعد 24 ساعة مقارنة بالمجاميع الاخرى ومقارنة بمجموعة السيطرة الموجبة، وسجلت زيادة معنوية في معدل معامل البلعمة في مجموعة الفئران المعاملة OFZ (53.17%) ومجموعة الفئران المعاملة OFZ+PZQ (71.5%) وانخفاضا معنويا في معدل النوى الصغيرة (28% و29.1%، على التوالي) مقارنة مع الفئران المعاملة بـOFZ+ABZ وABZ+PZQ، مما يدل على كفاءة المعالجة بعقار OFZ بشكل مفرد او متحد. اما الجانب الثالث فتمثل بدراسة تاثير الاصابة بالاكياس العدرية والعلاجات الكيميائية المختلفة في وظائف الكبد اذ اظهرت الدراسة ان انزيمات الكبد وهي AST وALT وALP فضلا عن مستوى البيليروبين الكلي والمباشر في مصل الفئران المعاملة بـ OFZ وبـ OFZ+PZQ كانت نتائجها اقرب الى السيطرة السالبة مقارنة مع المجموعتين OFZ+ABZ وABZ+PZQ.اما الجانب الرابع فشمل دراسة الجوانب الحياتية المتعلقة بوزن الفئران الممنعة والمعاملة بعقار OFZ بشكل مفرد او مختلط مع البرازكوينتل OFZ+PZQحيث ظهر ارتفاعا طفيفا بمعدل وزنها بنسبة 11.13% و12.10% على التوالي مقارنة بفئران السيطرة السالبة مقارنة بالفئران المعاملة بـ OFZ+ABZ وABZ+PZQ التي سجلت زيادة معنوية ((p≤0.001 قدرها 13.50% و14.87% على التوالي. وسجلت مجموعة الفئران المعاملة انخفاضا في معدل وزن الكبد ومعدل تضخهما اذ اختلفت معنويا عن مجموعة السيطرة الموجبة عند مستوى احتمالية p≤0.001. لذا فحصت الاكياس العدرية الثانوية بعد اربعة اشهر من الاصابة وتم قياس وزن وقطروعدد الاكياس العدرية وحساب الكفاءة النسبية للعلاج, اظهرت الدراسة ان عقارOFZ+PZQ اعلى كفاءة علاجية (96.70%) لكونه تسبب باختفاء الاكياس من الطحال وتلته المعاملة بعقار OFZ) 93.75%)، وسجلت المجاميع المعاملة بعقارOFZ+ABZ وABZ+PZQ كفاءة علاجية نسبية بلغت 82.5% و77.5%, على التوالي. شملت الدراسة التغيرات النسجية المرضية في طحال وكبد الفئران بعد اربعة اشهر من الاصابة والمعاملة. بينت النتائج حصول تغيرات نسجية معتدلة مقارنة مع فئران السيطرة الموجبة. وعند التقصي عن دور بعض الحركيات الخلوية في الاستجابة المناعية ضد طفيلي المشوكة الحبيبية عن طريق الكيمونسجية المناعية ( IHC) اظهرت النتائج زيادة مستوى الحركيات الخلوية المفرزة من قبل الخلايا التائية المساعدة - النوع الاول (Th1) متمثلة بانترلوكين - 2، انترفيرون - كاما وعامل تنخر الورم اظهرت النتائج ارتفاعا معنويا ((P≤0.001 في مستوى تعبير بروتينIL - 2 في مجموعة الفئران المعاملة بـ OFZ+PZQ التي بلغت في الطحال 65.1% والكبد 54.1% مقارنة بالمجاميع الاخرى ومجموعة السيطرة السالبة والموجبة، وزيادة تعبير بروتين IFN - γفي المجاميع المعاملة مقارنة بمجاميع السيطرة السالبة والموجبة. وبينت نتائج التحليل الاحصائي وجود فروق معنوية عالية ذات دلالة احصائيةp≤0.001 في مستوى تعبير بروتينات TNF - α مقارنة مع مجموعتي السيطرة السالبة والموجبة. اما بالنسبة الى الحركيات المفرزة من قبل خلايا Th2 فقد سجلت نقصانا في انترلوكين - 10 وعامل تحويل النمو بيتا لدى الفئران المعاملة بالمجاميع العلاجية الاربعة لاسيما المجموعة المعالجة بـ OFZ+PZQ فقد اظهرIL - 10 تعبير بروتينيا واطئا في الطحال بلغ 29.7% وفي الكبد 8.2% مقارنة بالمجاميع المعاملة الاخرى ومجموعة السيطرة، كما اظهرت الفئران الممنعة والمعاملة مستوى تعبير بروتينات TGF - β فروقا معنوية عند مستوى احتماليةp≤0.001 للمجاميع مقارنة مع مجموعتي السيطرة السالبة والموجبة. بشكل عام لوحظ ارتفاع معنوي في مستوى الحركيات الخلوية المنتجة من قبل Th1 وTh2وبشكل متوازن لدى الفئران الممنعة والمعاملة. | The current research in deals with fundamental aspects of the infection of 120 white mice Mus musculus strain Balb/c with secondary hydatid cysts, comprising first aspect the role of immunization in the haematological aspects such as the differential count of white blood cells and the immunological aspects such as the delayed type hypersensitivity and phagocytosis. The results of differential white blood cell count showed marked increase in the numbers of lymphocyte percentage (64.75%) with a variation in the numbers of monocytes and eosinophils and a decrease in neutrophil numbers which reached 32% in mice immunized and orally administered with antioxidants. In connection with delayed type hypersensitivity in the foot pad the results showed a rise in the rate of foot pad thickness in mice immunized and orally administered with antioxidants as the highest thickness reached 0.82 mm at 24 hours after the injection of antigen and phagocytosis index in mice immunized and orally administered with antioxidants showed an increase of 74% compared with negative and positive control mice in addition to the gross changes of this group which was positively reflected on their appearance, movement, weight and feeding. So this group was experimentally infected with secondary hydatid cyst through their intra peritoneal injection with 2000 protoscolices. The second aspect of the study was to evaluate the therapeutic efficacy of three drugs which belong to Benzimedazole and Isoquinoline viz albendazole (ABZ), oxfendazole (OFZ) and praziquental (PZQ) as well as to follow - up some aspects of the haematological and immunological parameters in mice after their infection, immunization and treatment which included differential white blood cell count, delayed type hypersensitivity test, phagocytosis, micronucleus test and agar gel immune diffusion test.Regarding changes in differential white blood cell count, mice treated with OFZ and OFZ + PZQ showed an increase in neutrophils and decline in lymphocytes compared with positive control group. Also, an increase in foot pad thickness after 24hrs compared with other treated groups and positive control group. An increase in the phagocytosis was noticed in OFZ treated group (53.17%) and OFZ+PZQ treated group (71.5%) and a significant decline in the micronucleus test of 28% and 29.1%, respectively compared with mice treatment with OFZ + ABZ and ABZ+ PZQ which indicates the efficiency of OFZ drug treated alone or in a combination form.The third aspect of the study was to evaluate the effect of infection with hydatid cyst and different chemical treatments on liver functions where the study showed that liver enzymes such as AST, ALT and ALP, as well as the total and direct bilirubin serum level in mice treated with OFZ alone and OFZ + PZQ were closer to those of the negative group compared with the groups treated with OFZ+ABZ and ABZ+PZQ.The fourth aspect of the study was to evaluate the biological aspects related to weight of the mice treated with OFZ alone or combination with praziquental OFZ+PZQ where a slight increase in the average weight of 11.13% and 12.10%, respectively was occurred in compared with the negative control due to the low number of cyst and cyst fibrosis which occurred in comparison with those existed in mice treated with OFZ+ABZ and ABZ+PZQ which showed a significant increase(p<0.001) which reached 13.50% and 14.87%, respectively.The treated group showed a reduction in liver weight and enlargement rate which was significantly different from that of the positive control group at the level of probability of P< 0.001, as OFZ+PZQ caused the disappearance of the cysts from the spleen(96.70%), followed by group treated with OFZ (93.75%) and then by group treated with OFZ+ABZ and ABZ+ PZQ which showed a treatment efficacy of 82.5% and 77.5%, respectively. The study also included the evaluation of the pathological changes of liver and spleen of mice after four months of the infection and treatment. The result showed satisfactory histopathological changes in comparison with positive control group. When investigating the role of some cellular interleukins in the immune response against Echinococcus granulosus through the immunohistochemical (IHC)test, the results showed an increase in the level of cytokines secreted byTh1 such as IFN - γ andTNF - α as well as IL - 2. The results showed higher level of protein expression IL - 2 in mice group treated with OFZ+PZQ which amounted 65.1% in spleen and 54.1% in liver compared with other treated and negative and positive control groups. Also, an increase in protein expression of IFN - γ was occurred in the treated groups compared with the negative and positive controls except in the group which was treated with OFZ+PZQ where no significant differences were appear in the negative control. The statistical analysis showed the presence of high significant differences (p<0.001) in the level of expression proteins TNF - α compared with negative and positive control groups. Reduction level of cytokines secretion from Th2 (IL - 10 and TGF - β) in mice treated with the four treated group particularly the group which was treated with OFZ+PZQ showed that IL - 10 protein expression in spleen was low and reached 29.7% and 8.2% in liver compared with the other treated and control groups. The level of expression of proteins of TGF - β in the immunized and treated mice showed significant differences at the level of the probability of p<0.001 of the group compared with negative and positive control group. Generally, a high significant level of cytokines produced byTh1andTh2 in immunized and treated mice
