Share
دور الببتيدو كلايكان في امراضية بكتريا Staphylococcus saprophyticus == Role of Peptidoglycan in Pathogenicity of Staphylococcus saprophyticus
Author name:
عذراء صالح فليح الهيتي
Supervisor name:
مي طالب فليح | حارث جبار فهد
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Bacteria
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3060 - p.pdf
Abstract:
من مجموع 300 عينة ادرار تم الحصول على 71 عزلة عائدة لجنس الـ Staphylococcus من مريضات مصابات بخمج المجاري البولية واظهر عائدية 16 عزلة للنوع S. saprophyticus تم تشخيصها بوساطة الاختبارات الكيموحيوية ، كما تم اختبار حساسيتها للمضادات الحيوية ، استخدمت عملية التكسير الميكانيكي (Mechanical disintegration) باستخدام المازج (vortex) والحبيبات الزجاجية ، والتكسير باستخدام جهاز الذبذبات فوق الصوتية لتكسير جدار خلية العزلةS67 saprophyticus S. والحصول على خلايا متكسرة تمثل الجدار الخلوي الخام ومن ثم استخلاص وتنقية جزئية للببتيدوكلايكان بالاعتماد على الهضم الانزيمي بوساطة انزيمات الـ DNase وRNase وPronase وTrypsin فضلا عن استخدام مركب سلفات دودسيل الصوديوم (SDS) ومواد كيميائية اخرى ؛لازالة الاغشية السايتوبلازمية والمحتويات البروتينية الاخرى ؛ وبذلك تم الحصول على ببتيدوكلايكان نقي خال من الشوائب وهذا ما اكده الفحص بالمجهر الضوئي والالكتروني وقد اظهر الببتيدوكلايكان حزمة بروتينية واحدة عند اجراء الرحلان الكهربائي بهلام متعدد الاكريل امايد تحت ظروف غير ماسخة مقارنة بالجدار الخلوي الخام والذي اظهر عدة حزم بروتينية ؛ مما يدل على كفاءة الطريقة المستخدمة في الاستخلاص. تضمن البحث دراسة امراضية بكترياS67 S. saprophyticus المسببة لخمج المجاري البولية في الفئران اذ حقنت مجموعة من الفئران الاناث البيض عبر الاحليل وباستخدام القثطرة بتركيز 109 خلية جرثومية / مليلتر ، وحقنت مجموعة اخرى من الفئران بتركيز 3 ملغم / 0.2 ملليتر من الببتيدوكلايكان المستخلص منS67 S. saprophyticus والمنقى جزئيا وتم تشريح الفئران حيث اظهرت الاعضاء (الكلى والمثانة) تغييرات نسيجية ممرضة تمثلت بانكماش الكبيبة الكلوية واحتقان الاوعية الدموية للكلية وارتشاح الخلايا الالتهابية وفقدان طبقة الكيراتين في المثانة سواء اكانت محقونة بالجراثيم ام بالببتيدوكلايكان . حضر المصل المضاد للببتيدوكلايكان في الحيوانات المختبرية (الارانب البيض) وتبين ان الببتيدوكلايكان ممنع جيد عند حقنه في الارانب ، وتم اثبات وجود الاجسام المضادة للببتيدوكلايكان باستخدام اختبار الندف بالانابيب واختبار التلازن الجرثومي (Bacterial agglutination) حيث كون المصل المضاد للببتيدوكلايكان المعزول من جدار بكتريا S.saprophyticusS67 تلازنا مع جراثيم البكتريا نفسها وايضا اعطى تلازنا مع العزلة القياسية ATCC6538 S. aureusمما يشير الى وجود تفاعل تصالبي لهذه الاضداد. تم دراسة التاثيرات السريرية للببتيدوكلايكان في الارانب المحقونة، اذ لوحظ ارتفاع في مستوى اليوريا والكرياتنين وانزيمي GPT وGOT والكلوكوز في الدم وانخفاض مستوى انزيم الفوسفتيز القاعدي( Alkaline phosphatase ) مما قد يدل على وجود خلل وظيفي في عدد من الاعضاء مثل : الكلى ،و الكبد ،و البنكرياس نتيجة تاثرها بالببتيدوكلايكان | Seventy one isolates of Staphylococcus were obtained from 300 urine samples isolated from female patients with urinary tract infection. sixteen of these isolates were identified as S.saprophyticus by biochemical tests , the sensitivity of the isolates to different antibiotics were also studiedMechanical disintegration method using vortex and glass beeds in addition of Ultrasonicator were used for preparing disintegrated cell wall which represent Crude cell wall , Extraction and partial purification of the peptidoglycan were accomplished by enzymatic digestion using DNase ,RNase ,Pronase and Trypsin in addition to SDS and other chemicals to remove the cytoplasm membrane and other protein contents, so we obtained pure peptidoglycan that were confirmed by light and electron microscope, the partial purified peptidoglycan showed one protein band compared with crude cell wall which showed many protein bands when performed in poly acryl amide gel electrophoresis under non denaturing conditions which improved the efficacy of method that employed in extraction of peptidoglycan The pathogenicity of the S.saprophyticus in urinary tract infection of mice was studied, Female mice were injected transurethrally by using catheter with 109 germ cells concentration /ml, other group of mice were injected by 3mg concentration /0.2ml of partial purified peptidoglycan which extracted from S.saprophyticus , The histopathological changes in the organs (Kidney and Bladder) whether it was injected with germ or the peptidoglycan were observed Antiserum of the peptidoglycan was prepared in the laboratory animals (white rabbit) the results revealed that the peptidoglycan was a good immunogen, The presence of antibodies was shown by tube flocculation test and bacterial agglutination test.Thiese antibodies cause agglutination with S.saprophyticus by using microtiter plate and also give cross - reaction with ATCC5538P S.aureusThe clinical effects of the peptidoglycan in the injected rabbit were also studied, The levels of Urea,Creatinine ,GOT, GPT ,Glucose were increased in the blood where the level of Alkine phosphatase was decreased which indicate that the peptidoglycan caused dysfunction of several organs like kidney,liver and bladder
