Share
دور البكتريا المحللة للاستروجين والجينات المنتخبة في النساء المصابات بفشل المبايض المبكر == Role of Estrogen - degrading Bacteria and Candidate Genes in Women with Premature Ovarian Failure
Author name:
جمان خليل ابراهيم الصباغ
Supervisor name:
محمد صبري عبد الرزاق السعيد | ملال محمد عبد الرضا الجبوري
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Doctorate
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1688 - p.pdf
Abstract:
هدفت هذه الدراسة الى توضيح دور البكتيريا المحللة الاستروجين والاساس الجزيئي للجينات المرشحة في النساء المصابات بفشل المبيض المبكر. تضمنت هذه الدراسة 60 امراة من الذين يعانون من فشل المبيض المبكر. واللاتي اختبرن على الاقل 8 اشهر من انقطاع الطمث تراوحت اعمارهن بين (20 - 39) سنة، تم جمع العينات من الدم الوريدي ومسحات من اعلى المهبل من النساء المراجعات لكل من مستشفى بابل للولادة والاطفال ومستشفى الحلة التعليمي في مدينة الحلة / العراق في الفترة من فبراير حتي يوليو العام 2015. تضمنت الدراسة ايضا 40 من النساء كمجموعة سيطرة واللاتي ليس لهم تاريخ من انقطاع الطمث تتطابق فئاتهن العمرية مع مجموعة المرضى . تم استخدام تقنية الاليزا لجميع العينات لغرض التحري عن هرمونات FSH, LH والاستروجين . واظهرت النتائج ان هناك زيادة وفرق معنوي كبير في تركيز كل من هرمون FSH وLH (.(P<0.05 بينما وجد ان هناك تناقص وفرق معنوي كبير فيما يخص هرمون الاستروجين في هؤلاء النساء بالمقارنة مع الاصحاء في مجموعة السيطرة . وقدرت كذلك الاجسام المضادة للمبيض في هؤلاء النساء . كشف متوسط تركيز مصل AOA ان هناك زيادة وفرق معنوي كبير عند (P <0.05) في المرضى مقارنة بالاصحاء بتركيز (153.58 و38.54) وحدة دولية / مل على التوالي . من بين 60 من النساء اللاتي تعاني من فشل المبيض المبكر اظهرت النتئج ان 42 مريضة فقط عانت من اصابة بكتيرية في حين لم تظهر 18 مريضة اي نمو بكتيري .تم اختبارقدرة هذه الانواع المختلفة من البكتيريا التي عزلت من المهبل على استهلاك هرمون الاستروجين في المختبر باستخدام تقنية كروماتوغرافيا الاداء العالي للسوائل (HPLC). اظهرت العزلات البكتيرية قدرة للحط من اهذا الهرمون في الظروف الهوائية واللاهوائية. والنتائج تدلل على قدرة البكتيريا المهبلية لاستنفاد الاستروجين بكفاءة والتي قد تؤثر على مستويات هرمون الاستروجين االجهازية في هؤلاء النساء. تم دراسة التنميط الجيني من خلال استخدام تقنيات PCR، RFLP وSCCP لتحديد المتغيرات في بعض الجينات المنتخبة في هؤلاء النساء . فيما يتعلق بجين INHα1 اظهرت النتائج ان هناك اختلافات كبيرة بين المرضى ومجموعة السيطرة التي تتعلق بوجود او عدم وجود هذه الجينات في النساء . اما نتئج RFLP للتحقيق في وجود المتغيرات في هذه الجينات اظهرت ان معظم مجموعة المرضى وكل مجموعة السيطرة ان النوع البري كان G الاليل، وان تردد هذا الاليل كان (92.8٪) في مجموعة المرضى و(100٪) في مجموعة الاصحاء في حين كان تردد A اليل (7.2٪) في المرضى و(0٪) في الاصحاء . المورثات متماثلة الزيجة GG لها تردد (85.7٪) في المرضى و(100٪) في مجموعة السيطرة، في حين تم العثور على الطراز الوراثي متباين الزيجة AG بنسبة (14.3٪) و(0٪) في مجموعة المرضى والسيطرة على التوالي. نتائج التحري عن وجود طفرات في الجينات INHβA1 , INHβB1 وINHβB2 . وجدت ان هناك فروق ذات دلالة احصائية معنوية في وجود وعدم وجود هذا الجين INHβA1 بين مجموعتي المرضى السيطرة عند (قيمة P=0.01) , في حين ان لا احد من المرضى ومجموعة الاصحاء اظهرت اختلافات في وجود او عدم وجود الوحدات الجينية INHβB1 وINHβB2. باستخدام تقنية SSCP للتحقيق في وجود متغيرات في INHβA1، INHβB1 وINHβB2. وتوضح النتائج ان هناك اختلافات كبيرة في انماط ترحيل هذه الجينات بين مجموعتي المرضى والسيطرة في هذه الدراسة. وهذا يعطى مؤشرا على العلاقة بين المتغيرات في هذه الوحدات الفرعية مع نشوء المرض في النساء المصابات . كذلك تمت دراسة الطفرات في الجين FSHR واظهرت النتائج ان عدم وجود فروق ذات دلالة احصائية فيما يخص فقدان الوحدة الجينية FSHR 10A بين النساء المرضى والاصحاء. اما بالنسبة للوحدة الجينية 10B FSHR فقد ظهرت هناك فروق ذات دلالة احصائية بين المجموعتين. وباستخدام تقنية تفاعل البلمرة المتسلسل وتقنية تعدد اشكال اطوال الشدف المقتطعة تم دراسة التعدد الشكلي في الجين FSHR باستخدام الانزيم القاطع DdeI . وكان التوزيع الوراثي للنمط متباين الزيجة CG (81.5٪) للمرضى و(95٪) في النساء الاصحاء. في حين ان النمط متماثل الزيجة GG له تردد (18.5٪) و(5٪) لكلتا المجموعتين على التوالي , وكان تردد C اليل (41٪) في النساء المرضى و(47.5٪) في االنساء الاصحاءبينما كان تردد G اليل (59 ٪) للمرضى و(52.5٪) لمجموعة السيطرة. وعلاوة على ذلك، اظهرت نتائج الجين BMP15 انه لا يوجد فروق ذات دلالة احصائية لوجود او عدم وجود الجينات بين المجموعتين في هذه الدراسة. تم اجراء تقنية SSCP المستندة الى تفاعل البلمرة المتسلسل لفحص التغايرات في هذا الجين. اظهرت الدراسة وجود فرق معنوي كبير لنمط ترحيل هذه الجينات بين مجموعتي المرضى السيطرة. وهذا قد تعطي تفسيرا معقولا لنشوء المرض لدى النساء . وكذلك تمت دراسة الطفرات في الاكسونات 1 و5 في الجين NOBOX البشري، وبينت النتائج انه لا يوجد اختلاف بين المجموعتين تحت الدراسة فيما يخص وجود exon1، في حين في exon5 على الرغم من ان اثنين من المرضى لا يمتلكون لهذه الوحدة الجينية ، لا وجود لفرق معنوي بين مجموعتي السيطرة والمرضى المصابات بفشل المبيض المبكر . كذلك تم التحري عن وجود تغاير في هذه الوحدات الجينية باستخدام تقنية SSCP لكل من الاكسونين 1 و5 واوضحت النتائج ان لا احد من المجموعتين ولكلا الجينين اظهر تغييرات في انماط الترحيل . ان التحري عن الطفرات في الجين MSH5 في النساء المصابات بينت ان هناك اختلافات وفرق معنوي كبير عند (0.006p=) في فقدان هذا الجين قيد الدراسة . وهذا ممكن ان يعطي تفسيرا جيدا لتحفيز ظهور المرض بين النساء الشابات. وكذلك تم دراسة الطفرات في الجين DMC1 وكشفت النتائج ايضا عن وجود فروق ذات دلالة احصائية عند (P=0.03) وهذا قد تعطي تفسيرا مقبولا لاسباب وجود المرض لدى النساء | This study aimed to illustrate the role of estrogen - degrading bacteria and molecular basis of candidate genes in women with premature ovarian failure (POF) . In this study , sixty women who suffered from POF ; and have menopause at least 8 months after the last period , whose ages range between (20 - 39) years, venous blood samples and high vaginal swabs were collected from these patients who are admitting to the Children and Maternity Hospital and Al - Hilla teaching hospital for surgery in Hilla city/Iraq from the period of February to July 2015 . Also, forty women with no history of menopause with age range approximately matched to that of patients were included as a control group .These women were subjected to investigate FSH ,LH and estrogen hormone . The results of FSH and LH hormones showed a significant increasing (p< 0.05) in the concentration of these hormones in blood of patients when compared to healthy control women . While there is a significant decreasing in the concentration of EST hormone in these women as compared to healthy control . Antiovarian Antibodies (AOA) levels were estimated by using ELISA . The mean of serum concentration of AOA revealed that there is a significant increasing (P< 0.05) in POF patients as compared to healthy control(153.58 and 38.54) IU/L respectivelyOut of 60 women patients with POF , only 42 patients showed positive pathogenic bacterial growth , while 18 patients show no growth of pathogenic bacteria . Different types of bacteria isolated from the patients҆ vagina . And these isolates examined as they have the ability to lyse estrogen in vitro by using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) technique. The bacterial isolates showed the ability to degrade estradiol in aerobic and anaerobic condition. And the results demonstrated the ability of vaginal bacteria to exhaust the estrogen efficiently and that may affect the systemic estrogen levels in these women . The genotyping was carried out by using PCR , RFLP and SCCP techniques to identify variants in some of candidates genes associated with POF . So regarding to INHα1 gene , the result showed that there is a significant differences between patients and control groups that related to the presence this gene subunit .The results of RFLP technique to investigate the variant in this gene showed that most of patients and all control were homozygous for the wild type G allele , and G allele frequency was (92.8%) in patients group and (100%) in control group whereas A allele frequency was (7.2%) POF patients group and (0%) in the control group . The GG genotypes have frequency (85.7%) in POF and (100%) in control group, whereas the AG was found to be (14.3%) and (0%) in patients and control respectively . The results of INHβA1, INHβB1and INHβB2 mutational screening , showed that , there is a significant differences between presence and absence of INHβA1 gene in patients and control group at (P value 0.01) , while no one of patients and control groups show missing of INHβB1and INHβB2 subunits . Using SSCP technique to investigate the presence of variants in INHβA1, INHβB1and INHβB2 genes . The results illustrate that there is a significant differences in comformational changes of these gene subunits in patients and control subjected to this study. And this gave an indicator to presence a relationship of the variants in these subunits with arising of POF in women in our population . Regarding to FSHR mutational screening , the results obtained showed that there were no significant differences in presence and absence of FSHR 10A subunit between the patients and control . While for 10B subunit there are a significant differences between two groups . PCR - RFLP based assay by DdeI enzyme used to show the polymorphism in exon 10 . The genotype distribution for the heterozygous CG was (81.5%) for POF patients and (95%) for control . While the homozygous GG has genotype frequency as (18.5%)for POF and (5%)for control , the allele frequencies in which C allele was(41%) in POF, and (47.5%) in control while G allele frequency was (59 %) for patients and (52.5%) for control. Moreover, the result of BMP15 gene proved that, there is no significant differences for this gene absence between two groups subjected to this study . SSCP - PCR based - technique was performed for mutational screening in this gene . A significant differences found for the variant in this gene in patients and control groups. And this may give a plausible explanation for POF. Determination of mutations in the exons 1 and 5 of human NOBOX gene were done, and the results appear that there are no one of patients and control groups show missing in exon1 , while for exon5 in spite of two patients have missing this subunit ,there is no significant differences for missing this subunits between POF women and control groups . All the patients and control samples were analyzed by SSCP technique for both exons to detection of the variant in these gene subunits . No one of patients and control groups show conformational changes for both gene subunits. After screening of MSH5 gene in POF women , the results gave a significant differences at P value (0.006) for lacking this gene between the POF women and control groups . And this show a good explanation for arising the disease among young women . As well as screening for DMC1 gene was performed And the results also detect the presence a significant differences at (P value 0.03) . This may give an acceptable explanation to outcome the POF in women
