Share
التحري عن بعض عوامل الضراوة لبكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة من مصادر مختلفة == Detection of Some Virulence Factors in Pseudomonas aeruginosa Isolated from Different Sources
Author name:
حوراء احمد علي الشمري
Supervisor name:
محمد صبري عبد الرزاق السعيد | زينب حمود السعدي
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1691 - p.pdf
Abstract:
تم الحصول على 100مسحة من المرضى الذين يعانون من التهابات مختلفة مثل التهاب المسالك البولية والحروق والجروح كذلك اخذت عينات من القشع من المرضى الذين يعانون من امراض الجهاز التنفسي والذين تتراوح اعمارهم بين 15 الى 60 سنة من المراجعين والراقدين في مستشفى الحلة الجراحي ومستشفى مرجان للفترة بين من اكتوبر 2015 الى يناير 2016. وقد وجد من خلال الدراسة ان 12 عزلة من بكتريا Pseudomonas aeruginosa كانت موزعة على النحو التالي ستة عزلات (%50 ) تم الحصول عليها من مرضى الحروق وثلاثة عزلات (%25) من مرضى الذين لديهم التهابات في المسالك البولية وعزلتان فقط (%6.16 )من مرضى الحروق بنسبة وعزلة واحدة فقط (%3.8) من القشع .خضعت جميع هذه العزلات لاختبار الحساسية للمضادات الحيوية باستخدام طريقة الانتشار في الوسط حيث اظهرت العزلات البكتيرية مقاومة كلية للامايكيسين,سيفاكسيم والتتراسايكلين.وكذلك اظهرت النتائج ان جميع العزلات اعطت حساسية بنسبة (8.34%) للببراسيلين والسيفتاراكسون ومقاومة بنسبة (91.66) لنفس المضادات المذكورة انفا .في حين ان جميع عزلات هذه البكتريا كانت حساسة كلية للمضاد الحيوي الليفوفلوكسين. واقل حساسية للمضاد الحيوي ازثرومايسين بنسبة (83.33%) .تم زراعة البكتريا على وسط سائل يحوي 5% من الدم لاختبار قابلية البكتريا على انتاج الهيمولايسين حيث وجد ان عشرة عينات لها القابلية على انتاج الهيمولايسين. وكذاك في هذه الدراسة تم الكشف عن تاثير التراكيز المختلفة من التتراسايكلين على حركة البكتريا وتحفيز ظاهرة السوارمنك قد لوحظ ظهور السوارمنك بشكل واضح على وسط الزرع عندما يكون تركيز التتراسايكلين اقل من 0.5 ميكروغرام / مل وفي نفس الوقت لوحظ تضاؤل ظهور الصبغة مع تناقص تركيز التتراسايكلين وكذلك ظهور السوارمنك اوضح عندما تصبح الصبغة غائبة عند تركيز 0.5 ميكروغرام / مل او اقل.تم التحري عن وجود الجين toxA باستخدام بادئات حيث اظهرت النتائج ان عزلتان فقط كانت موجبة والاخرى سالبةوكذلك في هذه الدراسة تم استخدام بادئات نوعية خاصة اخرى للكشف عن toxA والتي تدعى بETA اظهر التحري عنها عن امتلاك ثمانية عزلات فقط لهذا الجين . كذلك في هذه الدراسة تم استخدام بادئات نوعية(primers) في تقنية PCR لتحري عن الجينات الخاصة ب exoenzyme S حيث تم استخدام ثلاث مواقع جينية .exos1 ,exos2,exos3اذ لوحظ جميع العزلات تحتوي على جين ,exos1 واحدى عشر عينة تحتوي على جين exos2 وبالاخير وجد تسعة عينات تحتوي على جين exos3 .اما التحري عن البروتين السطحي P.aeruginosa ( (OprIباستخدام بادئ متخصص , اذ لوحظ ان كافة العزلات كانت موجبة لهذا الجين. اضافة الى ذلك فان التحري عن امتلاك بكتريا الزائفة الزنجارية لجينOprLيظهر امتلاك ثلاث عزلات فقط لهذا الجين. تم الحصول على مستخلص P.aeruginosa بعد فصل نمو البكتري باستخدام Millipore filter حجم (0.45 مايكرو غرام) بعدها يتم تخفيفه بنسبة (1 : 1) باستخدام منزوع الايونات للماء المقطر وقد اظهرت الدراسة ان هنالك تاثير كبير على خلايا السرطان التي تدعى SW 480 من خلال زيادة في معدل التثبيط وتاثيره على الحد الادنى للتخفيف. | A total of 100 clinical samples were collected during this study which were obtained from patients suffering from different infections such as UTI , skins , burns , wounds and from sputum in patient with respiratory diseases. All the patient ages raged from ( 15 - 60 ) years old who admitted to two main hospitals in Hilla city : Al - Hilla General Teaching Hospital , and Mergan Teaching hospital during a period of three months lasting from (October 2015 to January 2016). It was found that (12)isolates of P.aeruginosa were recovered where six isolates (50%) were taken from burns patient, three isolates (25%) from catheters patient who have UTI and only two isolates (16.6%) from wounds and one isolate (8.3%) from sputum. The bacterial isolates showed entire resistant to Colistin, Amikacin, Cefixime and Tetracycline, while ,this resulte explain all the bacterial isolates show sensitivity for Piperacillin and Ceftriaxone(8.34%)and resistant (91.66%) for the same antibiotics. whereas, this results explain all the isolates entire sensitivity for Levofloxacin(100%) and lesses sensivity to Azithromycin (83.33%). P.aeruginosa was grown on liquid media containg 5% blood in order to show its ability to produce extracellular Hemolysin, and the results showed that hemolysis on blood agar was seen in (10) isolates. To detect the effect various concentrations of tetracycline on bacterial motility and swarming induction, it was seen that swarming was observed clearly in the culture media at concentration below 0.5 µg/ml, at the same time pigment appearance diminished with the decreasing of tetracycline concentration and swarming appearance where the pigment became absent at 0.5µg/ml or below. Exotoxin A was encoded by (toxA) gene was detected in Pseudomonas aeruginosa isolates by using specific primers , it was found that 2 (16.67 %) isolates of P.aeruginosa gave the positive amplicon for this gene. Also in this study, another primer was used to detect (toxA) production of molecular detection of Pseudomonas aeruginosa (ETA) was done by utilize specific PCR primer.It was found that (ETA) was observed in 8 (66.6 %) isolates positive results with molecular size (396 bp). In this study use three specific primers for exoenzyme S to detect Pseudomonas aeruginosa.It was found that exos1 at a locus 500bp was observed positive in all isolates result ,exos2 at a locus 240bp was observed in 11(92%) positive results and exos3 at a locus 270bp was observed only 9(75%) positive results Molecular detection of Pseudomonas aeruginosa (OprI) was done by utilize specific PCR primer. It was found that (OprI )marker was observed in all bacterial isolates (100%) with molecule size (250bp). On the other hand , Molecular detection of peptidoglycan - associated lipoprotein (OprL) ,was also done by using specific primer for this gene. Since (OprL) was present in 3 (25% ) positive isolates under study, with the molecular size (500 bp). Pseudomonas aeruginosa extract was obtained after filteration the growth of bacterial isolate by using Millipore filter of size (0.45µm).The extract was then diluted (1 : 1) by using deionized distilled water.The results showed that there was a huge effect on cancer cell line SW480 through increasing the inhibition rate (I.R) and the effect was reduced in the minimum dilution
