Share
دراسة مقارنة للتاثيرات ضد المايكروبية والسمية الخلوية للبايوسيانين المنتج من النوع البري وطافرة بكتريا Pseudomonas aeruginosa المعزولة محليا == A comparative study on the antimicrobial and cytotoxic effects of pyocyanin produced by wild type and mutant of locally isolated Pseudomonas aeruginosa
Author name:
حسام محمود حسن العماري
Supervisor name:
هيفاء هادي حساني | عدوية عبد الله السعدي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Bacteria
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3127 - p.pdf
Abstract:
عزلت بكتريا Pseudomonas aeruginosa من مختلف العينات (قشع, حروق, جروح, اذن, خروج, عين, ادرار) وشكلت بكتيريا P.aeruginosa نسبة 32% من العدد الكلي للبكتيريا المعزولة, تم تشخيصها على اساس الاختبارات البكتريولوجية والكيموحيوية, %92 من العزلات الكلية تميزت بانتاجها الصبغة الزرقاء المخضرة(Pyocyanin) على وسط كنج A.تميزت عزلة واحدة فقط من بين 45 عزلة من العزلات المنتجة للبايوسيانين بانتاجها للصبغة, حيث انتجت2.8ملغم/مل , هذه العزلة يرمز لها 1 - PAH هي التي استعملت لاغراض الدراسة الحالية·حددت الخصائص الكيميائية للبايوسيانين المنتج من العزلة 1 - PAH بوساطة عدة تحليلات كيميائية وهي التغير بالرقم الهيدروجيني, FTIR, وHPLC والتي اكدت ان المستخلص هو صبغة البايوسيانين; بعد ذلك عرضت العزلة البرية 1 - PAH لتراكيزمختلفة من مختلف المضادات الحياتية, فاظهر المضادان Getamycin وephataximeC افضل النتائج في الحصول على الطفرات التلقائية. خضعت عدد من هذه الطافرات لاختبار قدرتها لانتاج البايوسيانين لاختيار الاكفا, فكانت الطافرة 8 - 300S هي الاكفا بانتاجها البايوسيانين, فقد انتجت3.73 ملغم/مل. اظهر البايوسيانين المنتج من الطافرة 8 - 300S صفات مماثلة لصفات البايوسيانين المنتج من العزلة البرية٬ بعد ذلك تم اختيار مدى كفاءة البايوسيانين المنتج من العزلة البرية والطافرة من Pseudomonas aeruginosa في الفعالية ضد بكتيرية ضد عدد من البكتريا السالبة والموجبة لصبغة كرام.تم فحص فعالية البايوسيانين لتقليل نمو الخطوط الخلوية السرطانية. فاظهر البايوسيانين المنتج من العزلة الطافرة بانه الاكفا في تثبيط نمو الخلايا السرطانية خط سرطان العضلات المخططة RD,و خط خلايا سرطان عنق الرحم Hela, وخط خلايا سرطان الحنجرة 2 - Hep. فضلا عن ذلك اظهر البايوسيانين المنتج من العزلة البرية والطافرة فعالية الموت الخلوي المبرمج isApoptos ضد الخط السرطاني RD. | Pseudomonas aeruginosa was isolated from different specimens (sputum, burn, wounds, ear, stool, eye, blood, and urine); these isolates formed 32% of total specimens. These bacteria were identified according to morphological, and biochemical tests. Approximately 92% of P.aeruginosa isolates were able to produce a greenish blue pigment (pyocyanin) on king A medium. One out of 45 isolates was distincted in pyocyanin production; it gave 2.8mg/ml. This isolate was designated as P.aeruginosa PAH - 1 isolate and used for further study. The chemical properties of pyocyanin produced by PAH - 1 were detected by several chemical analyses such as changing in pH, FTIR, and HPLC that was confirmed that the extracted pigment is pyocyanin. After that, the wild type isolate PAH - 1 was exposed to various concentrations of different patterns of antibiotics, Gentamycin and Cefotaxime were showed perfect results for obtaining spontaneous mutations. These mutants were submitted for production pyocyanin; the mutant P. aeruginosa S300 - 8 isolate was distincted to producing pyocyanin equal to 3.73 mg/ml. Pyocyanin produced by mutant S300 - 8 showed similar properties of that produced by wild type PAH - 1 isolate. Pyocyanin produced by wild type and mutant of P.aeruginosa isolates showed antibacterial activity against several Gram negative (Salmonella, Proteus, Shigella, Escherisia, Klebsiella) and Gram positive bacteria (Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus). The ability of this pigment to reduce the proliferative activity of cancer cell lines was examined. Pyocyanin produced by mutant S300 - 8 mutant was more efficient to inhibit growth of cancer cell lines, RD, Hela, and Hep - 2, moreover pyocyanin produced by wild type and mutant showed apoptotic activity against cancer cell line RD.
