Share
الكشف الجزيئي عن فايروس الجي سي وجينات البي ثلاثة وخمسون والشبكية الجيني والبتا - كتنين في المرضى المصابين بالاورام الغدية للقولون والمستقيم == MOLECULAR DETECTION OF JC VIRUS, P53, RETINOBLASTOMA GENES AND ? - CATENIN IN PATIENT WITH COLORECTAL ADENOCARCINOMA
Author name:
ابراهيم فاضل ابراهيم الدروبي
Supervisor name:
فائزة عبد الله مخلص | بان عباس عبد المجيد
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology - Viruses
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
19T1293 - p.pdf
Abstract:
تمهيد : يعود فايروس الجي سي الى عائله الفيروسة التوارمية. ينتشر الفايروس بين السكان وعلى نطاق واسع حول العالم. يحمل الفايروس جينة Ag T والتي لها القدره على التكوين السرطاني في الانسجة من خلال التفاعل مع المسارات التنظيمية المختلفه, ويمكن ان تتداخل مع التحكم في دوره الخلية واليات عدم الاستقرار الجيني.العلاقة بين فايروس الجي سي وسرطان القولون وسرطان المستقيم لايزال المنظر ينتضرالقرار النهائي.اهداف الدراسة : 1. تحد يد الدور المحتمل لفايروس الجي سي في سرطان القولون والمستقيم من خلال الكشف والتقدير الكمي لجينة التي وتحميل جينة الاكنوبروتين واظهار الحامض النووي الدي ان اي للفايروس في كل من الخزعات النسيجية السرطانية والطبيعية للقولون والمستقيم. 2. الكشف عن الايجابية المصلية من خلال فحص الاجسام المضادة للفايروس في مصول مجموعه البحث.3. تقدير الرابطة المحتملة بين فايروس الجي سي مع البيتاكاتانين وملاحظة قابلية الفايروس على كبح او تحديد عمل الجينات المشبطة للاورم البي خمسة وثلاثون والشبكية الجيني.طرق العمل : تم تصميم البحث كدراسة مستقبلية للسيطرة على الحالة وانطوت على اخذ الجزعات الطازجة لانسجة القولون والمستقيم من خلال تنظير القولون والمستقيم وقد شملت على 28 مريض مصاب بورم القولون والمستقيم الخبيث وثلاث وثلاثون مريض ممن لم يشخص لديهم ورم سرطاني قي القولون والمستقيم والذين راجعوا وحدة التنظير في مستشفى الاورام ومستشفى بغداد التعليمي ومستشفى اليرموك التعليمي خلال الفتره من حزيران 2013 ولغاية اذار2014. تم الكشف عن جينة فايروس الجي سي ( التي جين) والاكنوبروتين بواسطة جهاز تفاعل سلسلة البلمره وكذلك فحص الحامض النووي الدي ان اي لفايروس الجي سي من خلال التهجين الموقعي وكذلك تم الكشف عن الاجسام المصلية المضادة للفايروس بطريقة الاليزا. تم الكشف عن البيتا - كتنين وبروتين الشبكية الجيني بطريقة المعلمات المناعية والكشف عن البي خمسة وثلاثون بتقنية التهجين الموقعي الفلوري.النتائج• بالنسبة لمجموعة السرطان كان اعلى نسبة تردد للاصابة بورم القولون والمستقيم (35.71%) في المجموعة العمرية مابين 50 - 59 سنة. كان سرطان القولون والمستقيم اكثر شيوعا في الذكور منه في الاناث وبنسبة 1.8 : 1.• اضهر الفحص النسيجي ان النوع الاكثر شيوعا كان بنسبة 85.72% من نوع غدية غير ميوسينية.وان ورم القولون الاكثر شيوعا هو غدية متباينة بشكل معتدل (75%) بين درجات غدية ورم القولون والمستقيم• تم الكشف عن جينة الورم لفايروس الجي سي بطريقة الوقت الحقيقي لتفاعل البلمرة المتسلسل وسجل اعلى تردد للاصابة(57.1%) واعلى نسبة نسخ من الجين في مجموعة السرطان مقارنته بمجموعة السيطرة (27.3%) وكانت نتائج الحمل الفايروسي لمجموعة السرطان بمعدل416.93±217.77 نسخة/مايكروغرام اما مجموعة السيطرة فكانت بمعدل229.866±111.49 نسخ /ميكروغرام والتي اضهرت بدورها فرق كبير بين مجموعات الدراسة.• تم تشخيص جينة الاكنوبروتين لفايروس الجي سي بطريقة الوقت الحقيقي لتفاعل البلمرة المتسلسل في مجموعة السرطان وكانت النتسبة ( 53.6%) وهي اعلى من النسبة التي تم تشخيصها في مجموعة السيطرة والتي كانت (15.2%). الحمل الفايروسي في مجموعة السرطان كان بمعدل 317±129.12 نسخة/ مايكروغرام وهو اعلى من معدل الحمل الفايروسي في مجموعة السيطرة (152.94±10514) نسخة/ مايكروغرام .• وجد اتفاق كبير بين نتائج تشخيص جينة التي وجينة الاكنوبروتين بطريقة الوقت الحقيقي لتفاعل البلمرة المتسلسل لمجموعة السرطان ومجموعة السيطرة.• بطريقة التهجين الموقعي لل(دنا) لفيروس الجي سي, اضهرت النتائج ان 53.6% من مجموعة السرطان اضهرو نتائج موجبة لفايروس الجي سي . اما مجموعة السيطرة فاضهرت (30.3%). وكان الفروق ذات دلاله احصائية بين مجموعاتا لدراسة P<0.05 . تبين وجود فروق ذات دلالة احصائية بين مجموعات الدراسة بشان كثافة اشارة ونسبة الاصابة ونمط تورط (P <0.05)، في حين لا توجد فروق كبيرة عثر فيما يتعلق بالمشاركة غدي او اللحمية (P = 0.458)• لم يتم العثورعلاقة ذات دلالة احصائية عند مقارنة ال (دنا ) بواسطة التهجين الموقعي وفقا لدرجات ومواقع الورم.• وجد اتفاق كبير بين نتائج تشخيص جينة التي بطريقة الوقت الحقيقي لتفاعل البلمرة المتسلسل ونتائج التشخيص بطريقة التهجين الموقعي لل ( دنا) بين مجموعات الدراسة.• وجد اتفاق متوسط بين نتائج تشخيص جينة الاكنوبروتين بطريقة الوقت الحقيقي لتفاعل البلمرة المتسلسل ونتائج تشخيص فايروس الجي سي بطريقة التهجين الموقعي لل (دنا) بين مجموعات الدراسة.• فحص المضاد المناعي لفايروس الجي سي بطريقة الاليزا اضهرت وجود مضاد مناعي في 14/ 22(63.6%) مريض من مجموعة السرطان في حين وجد ان 15/28 (53.6%) من مجموعة السيطرة تحمل المضاد المناعي. (p=0.474) وجد توافق ضعيف بين نتائج تشخيص فايروس الجي سي بطريقة الوقت الحقيقي لتفاعل البلمرة المتسلسل ونتائج التهجين الموقعي لل (دنا) ونتائج فحص المضاد المناعي في مجموعات الدراسة.• تم الكشف عن توطين البتا كتنين في النووية بطريقة الفحص النسيجي المناعي الكيمياوي وكانت بنسبة12/28 ( 42.86%) من مجموعة السرطان، في حين لم يكشفت على تلطيخ نووي ايجابي في مجموعة السيطرة (P <0.05). لم يتم العثور على علاقة احصائية لا مع درجات الوروم ولا الى موقع الورم.• تم الكشف عن بروتين جينة الشبكية الجيني بتقنية الفحص النسيجي المناعي الكيمياوي.بالنسبة لمجموعة السرطان 10/28 (35.7%) اضهرت تلطيخ نووي ايجابي في حين ان 18/28 (64.3٪) كشفت عن تلطيخ نووي سلبي اما مجموعة السيطره فاضهرت(100%) تلطيخ ننووي ايجابي. لا اتفاق بين نتائج فحص جين الرتينوبلاستوما وجينة التي وجينة الاكنوبروتين وكذلك التهجين الموقعي لل (دنا) بين مجموعات الدراسة.• بطريقة التهجين الموقعي الفلوري تم الكشف عن التعبير الجيني للبي خمسة وثلاثون. فوجد ان خمسة حالات تم شطب موقع البي خمسة وثلاثون من كرومسوم رقم 17. ثلاث حالات وجدت فيها شطب كروموسوم 17 وحالة واحد وجد فيها خليط من شطب موقع البي خمسة وثلاثون وايضا شطب لكروموسوم رقم 17.الاستنتاجاتابرزت هذه الدراسة الدور المحتمل للفايروس الجي سي التي قد تشارك في طرق مختلفة في التسبب في سرطان القولون والمستقيم، والتي تتفق مع دراسات اخرى. على الرغم من هذه الادلة دور JCV في الاورام الخبيثة القولون والمستقيم وoncoproteins في تعزيز التحول لا يزال بعيدا عن الوضوح. | John Cunningham Virus (JCV) a member Polyomaviridae family is a type of human polyomavirus. It’s widespread virus detected in different populations throughout the world. JCV encodes for T - Ag which have oncogenic capability through interaction with different regulatory pathways and can interfere with cell cycle control and genomic instability mechanisms. The association between JCV and colorectal carcinoma still awaits the final conformation. Aims of study : 1. Determine the possible role of JCV in colorectal carcinoma by detection, quantification of T - Ag gene and agnoprotein gene load and demonstrating JCV DNA in both colorectal carcinoma and normal colonic tissue biopsies. 2. Detect the seropositivity of JCV antibodies among the study groups.3. Estimate the possible interaction of T - Ag with B - catenin and P53 and retinoblastoma tumor suppressor genes. Methods : This study was designed as prospective case - control study that involved fresh colonic tissue biopsies taken through colonoscopy from 28 patients with colorectal cancer and from 33 patients who did not have colorectal carcinoma attending to GIT endoscopic unit of Oncology Hospital, Baghdad Teaching Hospital, and Al - Yarmouk Teaching Hospital during the period from June 2013 to march 2014. JCV DNA was detected and quantified by real time PCR for T - Ag gene and agnoprotein genes. Using JCV bioprobe, chromogenic in situ hybridization (CISH) technique was used to detect JCV in tissue biopsies. Serological detection of JCV IgG antibodies was detected by ELISA. B - catenin and retinoblastoma protein products were detected by immunohistochemistry. Tumor suppressor gene P53 was detected by fluorescent in situ hybridization technique. Results : • Among the total 28 colorectal carcinoma cases, the highest frequency 10/28(35.7%) were detected in age group 50 - 59 years and its more frequent in male than female with ratio 1.8 : 1.• Histopathological finding revealed that 24(85.72%) cases were non mucinous adenocarcinoma and moderately differentiated adenocarcinoma was more frequent 21/28 (75%) among grades of CRC.• JCV T - Ag was detected in 16 (57.1%) of CRC group and 9/33(27.3%) of control group, with viral load VL mean 416.93 ± 217.77 copy/µg for CRC group and 229.866 ± 111.49 copy/µg for the control group which in turn showed significant difference between the study groups• Agnoprotein gene was detected in 12/28 (42.9%) of CRC group with VL mean (317 ± 129.12) compared to 5/33 (15.2%) with VL mean (152.94 ± 105.14) in non CRC patient (p=0.016). • Substantial agreement was found between T Ag gene and agnoprotein gene by real time PCR for both CRC group K=0.72 and control group K=0.784.• Using chromogenic in situ hybridization technique JCV DNA was detected in 15/28(53.6%) of CRC compared to 10/33(30.3%) in control group (p=0.065). Significant differences were detected comparing the percentage of JCV DNA in study groups according to intensity, score and signal pattern of involvement (p<0.05).• Substantial agreement was found between T Ag by qPCR and JCV DNA by CISH among the study groups. Moderate agreement was found between JCV agnoprotein gene by qPCR and JCV DNA by CISH among the study groups. • Serological detection of JCV antibodies by ELISA revealed 14/22 (63.6%), 15/28 (53.6%) of CRC group and control group showed positive results respectively. (p=0.474). Poor agreement was found between (T Ag by real time PCR and by CISH) and JCV antibodies by ELISA in the study groups.• Nuclear localization of B - catenin was detected by immunohistochemistry in 12/28(42.86%) of CRC groups, while none of the control group revealed positive nuclear staining (p<0.05). No significant associations found neither to grades nor to the site of tumor.• Retinoblastoma protein was detected by IHC. Only ten out of 28 (35.7%) showed positive nuclear staining, 18/28 (64.3%) of CRC revealed negative nuclear staining. All control group showed positive nuclear staining (p=0.000). No agreement was found between Rb protein and JCV T Ag, agnoprotein gene and JCV DNA by CISH among study groups.• P53 deletion was detected using FISH technique. Five cases out of 25 were with deleted p53 region, 3/25 were with deleted whole chromosome 17, and 1/25 revealed combination signals of deleted p53 region and deleted whole chromosome 17. The results were invalid for statistical analysis.Conclusion : This study highlighted the possible role of JCV which might participate in different ways in the pathogenesis of colorectal carcinoma, which in agreement with other studies. Despite these evidences the role of JCV in colorectal malignancies and its oncoproteins in promoting transformation is still far from clear
