Share
عزل وتشخيص فيروس شلل الاطفال من الاطفال الملقحين بلقاح شلل الاطفال ومقارنته مع الفيروس الضاري == Isolation &Identification of Poliovirus from Vaccinated Children with Oral poliovirus vaccine and Comparison With Wild Type Virus
Author name:
زهراء جعفر جميل عبد الكريم
Supervisor name:
غنيمة صادق محمد | عبد اللطيف محمد احمد
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Viruses
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3145 - p.pdf
Abstract:
يعد فيروس السنجابيةPoliovirus(PV) العامل المرضي الرئيس المسبب لشلل الاطفال Poliomyelitis . ويعتبر هذا المرض من الامراض الخطرة في العالم والتشخيص المختبري له ضروريا لغرض مراقبة وترصد حالات شلل الاطفال ومدى فعالية عملية التلقيح، وكذلك للتميز بين الشلل المتسبب من فيروس السنجابية (PV) والعوامل الاخرى ، والعناية المثالية للمريض هي تجنب الحركة والركض والركون الى الراحة والعلاج الطبيعي . تطوير علاج المرض باستعمال مضادات الفيروس لاصابات شلل الاطفال ممكن ان يضيف في المستقبل القريب حافزا اضافيا للتشخيص المختبري له . تضمنت الدراسة جمع مئة وثمانين عينة خروج من الاطفال (اعمارهم اقل من خمس سنوات) الذين اعطوا لقاح شلل الاطفال الفموي Poliovirus vaccine Oral في مركز الرعاية الاولية الصحية في بغداد لعزل وتشخيص فيروس السنجابية (PV) ، وكذلك تم اختيار خمسة عشر طفلا من المجموع الكلي للاطفال واستمرار متابعة مدى طرح فيروس السنجابية (PV) في الخروج لمدة عشرة ايام بعد التلقيح بلقاح شلل الاطفال الفموي (OPV) .لعزل فيروس السنجابية (PV) : حقنت نماذج الخروج في خطوط خلوية مختلفة (L20B, RD,Hep - 2C, CEF) ، ويتبع ذلك تشخيص نوع فيروس السنجابية (PV) من النماذج الموجبة التي اظهرت تاثيرات مرضية Cytopathic Effect بوساطة اختبار التعادل الدقيق Microneutralization Test ثم اجراء الترحيل الكهربائي SDS - PAGE Electrophoresis لبعض العينات التي شخصت وعينة اللقاح وعينات برية تم الحصول عليها من مختبر الصحة المركزي، وقد تم التوصل الى النتائج الاتية : - • اظهرت الدراسة ان 114 عينة اعطت نتيجة موجبة لعزل فيروس السنجابية(PV)من اصل 180 عينة اي بنسبة (63%) .• لا توجد فروق معنوية ( P<0.05 ) في معدل عزل فيروس السنجابية (PV) من الذكور والاناث اذ ان نسبة الذكور الى الاناث في عزل (PV) هي 1 : 1 .• وجد ان هناك فروقا معنوية ( P<0.05 ) في معدل عزل فيروس السنجابية (PV ) خلال فصول السنة حيث وجد ان اعلى النسب كانت 74.6% في فصل الصيف .• عند مقارنة عزل فيروس السنجابية (PV) من عينات خروج اطفال باعمار مختلفة وجد ان اعلى نسبة لعزل (PV) 83.3% من عينات الاطفال بعمر 8 - 10 اشهر .• عند مقارنة معدل النتائج الموجبة على خطوط خلوية مختلفة : اظهرت النتائج ان (L20B) تعطى افضل المعدلات (93%) يليها خلايا (RD) لمعدل (88%) ثم خلايا (Hep - 2C) بمعدل (84%) ،وعلى النقيض خلايا (CEF) لم تعط اية نتيجة موجبة .• وجد ان هناك فروقا معنوية ( P<0.05 ) في سرعة ظهور فيروس السنجابية (PV) على خطوط خلوية مختلفة : اظهرت النتائج ان خلايا(L20B) اسرع الخطوط الخلوية في اعطاء النتائج، وكذلك توجد فروق معنوية ( P<0.05 ) بين الخلايا (L20B) و(RD) في اليوم الثالث وكذلك توجد فروق معنوية بين (RD) و(Hep - 2C) ( P<0.05 ) في اليوم الخامس، بينما توجد فروق معنوية عالية ( P<0.05 ) في التحري عن فيروس السنجابية (PV) بين خلايا (L20B) و(Hep - 2C) وجد في اليوم الخامس .• في اختبار التعادل N.T : اظهرت النتائج ان النمط الاول (PV1) هو الشائع وقد كان بنسبة 60% ، ثم النمط الثالث (PV3) بنسبة 27% . لكن في هذه الدراسة لم يتم عزل النمط الثاني (PV2) ، وقد ظهرت فيروسات معوية (EVs) اخرى بنسبة 13% .• عند مقارنة عزل فيروس السنجابية (PV) مع باقي الفيروسات المعوية (EVs) خطوط خلوية مختلفة : اظهرت النتائج ان (L20B) تعطي افضل المعدلات (100%) لعزل فيروس السنجابية (PV)، ولم تعزل فيروسات معوية (EVs) ، اما خلايا (RD) بمعدل (90%) اما خلايا(Hep - 2C) بمعدل (71%) لعزل فيروس السنجابية (PV) ، وقد عزلت (EVs) بمعدل (29%) .• في اختبار الترحيل الكهربائي (Electrophoresis (SDS - PAGE في هذه الدراسة تم تمييز اربعة حزم للسلاسل الببتيدية لفيروس السنجابية (PV) لكن هذه النتائج : لم تظهر اي فروقات تميز بين انماط فيروس السنجابية (PV) الثلاثة ، وكذلك لا توجد فروقات تميز بين فيروس السنجابية (PV) المعزولة من عينات الخروج (المشتقة من اللقاح) والعينات البرية (تم الحصول عليها من مختبر الصحة العام المركزي)او عينات اللقاح .نستنتج من الدراسة ان تقنية الزرع النسيجي في الكشف عن فيروس السنجابية (PV) في نماذج الخروج ان الخلايا (L20B) تعد خط الخلايا الامثل والافضل لعزل فيروس السنجابية (PV) بدون عزل فيروسات معوية (EVs) اخرى من نماذج الخروج ، وهذا يوفر لناالوقت والجهد والمواد المبذولة لعزل وتشخيص فيروس السنجابية (PV) من عينات الخروج خلال وجود ومراقبة حالات الشلل الرخو الحاد (AFP )والمراقبة البيئية ضمن مبادرة استئصال شلل الاطفال وكذلك نستنتج ان النمط الاول(PV1)هو الاكثر شيوعا في هذه الدراسة . | Poliovirus (PV) is the etiologic agents of poliomyelitis , This Disease was one of the dangerous diseases in the world. Laboratory diagnosis is still required for detection of poliomyelitis cases and surveillance, to qualification of Immunization and other potentially treatable conditions; development of antiviral agent for the treatment of (PV) infection may provide added impetus for laboratory diagnosis in the near future. In this study collection one hundred and eighty stool specimens from children (less than 5 years old) who administered Oral Poliovirusvaccine (OPV) in preliminary health protection centers in Baghdad and Select fifteen children from the total children and following shedding (PV) in stool for 10 days after immunization with (OPV). Isolation of (PV) was conducted using stool specimens of the vaccination children and inoculated in (L20B) cells, human rhabdomyosarcoma (RD) , human epidermoid carcinoma (Hep - 2C) and check embryo fibroblast (CEF). Followed by identification of (PV) type from positive case which appear cytopathic effect (CFE). By microneutralization test, SDS - PAGE Electrophoresis was done to some specimens which identified as (PV1) ,(PV3),vaccine and wild type. The following results were obtained in this study : - • This study found (114) specimens were positive out of (180) specimens (63%).• No significant difference in isolation of (PV) taken from males and females ,The male to female ratio in (PV) isolation was 1 : 1 .• In comparison, the recovery rate of (PV) due to age of children was found to be the greater proportion and was 83.3%for children within age 8 - 10 month.• Significant difference in isolated (PV) due to during seasons ,the greater percentage was 74.6% during summer .• In Comparison, the recovery rate of (PV) in different cell lines revealed that L20B cell provided the best recovery rate (93%) from fecal samples , differing significantly from the other cell lines (P< 0.05) .• Significant difference in speed recovery of PV in different cell lines , recovery of L20B cell provided the faster recovery rate , significant difference (p > 0.05) of detecting PV between L20B and RD cell at day 3 and between RD and Hep - 2C cell (p > 0.05) at day 5;whereas more significant difference (p > 0.05) in the detection of PV between L20B and Hep - 2C found at day 5.• In neutralization test,it was found the poliovirus type (PV1)was more frequent (60%) than (PV3) (27%)but in this study can’t isolated (PV2), in this study found other (ENs) (13%). • In comparison, the recovered (PV) and other (EVs) in different cell lines ,showed that L20B cell was the best in the recovery rate (100%) for the isolation of (PV) while did not isolation of (EVs),RD in rate (90%) for (PV) while Hep - 2C isolation (PV) in rate (71%),and (ENs) in rate (29%).• In SDS - PAGE Electrophoresis, in this study distinguish 4 bands for polypeptide of (PV), but this result didn't show any difference between strains of (PV) which isolation from stool specimens and wild type. In conclusion the T.C. technique used for detection of ( PV) from stool specimens , the L20B cell was superior to isolation of (PV) without isolation of (EVs) and therefore established a first line of clinical diagnostic test for the detection of (PV) from stool specimens during AFP surveillance and Environmental surveillance in the initiation of eradication of Poliomyelitis. and in conclusion that the (PV1) was widespread in Environment .
