التحري عن بعض جينات عوامل الضراوة لبكتريا Cronobacter sakazakii المعزولة من حليب الاطفال الرضع المجفف وعينات سريرية == Detection of some virulence factors genes of Cronobacter sakazakii isolated from Powder infant formula and clinical samples
Author name:
ذاريات عبد الرحمن مطلك الجبوري
Supervisor name:
لمى عبد الهادي زوين
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3255 - p.pdf
Abstract:
اجريت هذه الدراسة لعزل وتشخيص بكتريا Cronobacter sakazakii من حليب الاطفال المجفف ومن الحالات السريرية لاطفال دون عمر السنتين . اذ جمعت230) ) عينة، شملت (30) عينة حليب اطفال لاعمار مختلفة دون عمــــــــــر السنتين من الاسواق المحلية في بغداد, و(200) عينة سريرية، تضمنت 50 عينة من كل من (سائل النخاع الشوكي ودم وخروج وبول) من مستشــــــــفى مدينة الطب (حماية الاطفال ) ومستشفى الطفل المركزي، للمدة من الاول من ايلول 2015الـــــى الاول من كانون الثاني 2016م. زرعت العينات على اوساط زرعية خاصة، اذ زرعــــــــــت عينات (الحليب) على وسط Violet red bile glucose agar وزرعت العينات (السريرية) على وســــــــــــــــــــــــــــط MacConkey agar، وزرعت جميع العينات (الحليب والسريرية ) علــــــــــــــــــى وسط Tryptone soy agar ، ثم زرعت على وسط Biriiltent Enterobacter sakazakii agar. شخصت العزلات بالفحوصات المجهرية والمزرعية والكيموحيوية ، فضلا عن التشخيص باستعمال جهاز Vitek - 2 اذ امكن الحصول على 19 عزلة، وكانت جميعها تعود لبكتيريا Cronobacter sakazakii، وتضمنت 6 عزلات بنسبة تلوث 9.09 % (اذا كانت عزلة واحدة من عينات حليب Novolac Allernova وعزلتين من عينات حليب Novolac AD وثلاث عزلات من عينات حليــــب Dialak1) و13 عزلة بنسبة تلوث 6.5 % (موزعة بواقع 6 (%12) عزلات من عينات سائل النخاع الشوكي و7 ( %14) عزلات من عينات الدم) ولم يتم الحصول على البكتريا من عينات الخروج والبول. بينت نتائج التحري عن بعض عوامل الضراوة مظهريا بان جميع العزلات البكتيرية كانت قادرة على احداث حركة Swimming بقطر يتراوح بين ( 9 - 1ملم ) وSwariming بقطر يتراوح بين 40 - 1)ملم) , وقدرتها ايضا على تكوين الغشاء الحيوي Biofilm باستخدام ثلاث طرائــــــــــق، اذ بينت النتائـــج قدرة العزلات البكتيرية علـــــــى تكويــــــــن الغشاء الحيوي بطريقــــــــــــــة التخطيط على وسط احمر الكونغو الصلب Congo red agar اذ ان 16 عزلة من اصل 19 عزلة تعود لبكتريا C.sakazakii بنسبة 84.21% قادرة على تكوين الغشاء الحيوي على وسط احمر الكونغو الصلب التي هي 4 عزلات بكتيرية بنسبة 21.05% كانت منتجة للغشاء الحيوي وبشكل قوي 10 عزلات بكتيرية بنسبة 52.63% كانت منتجة للغشاء الحيوي وبشكل متوسط وعزلتين بكتيريتين بنسبة 10.52% كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف، في حين كانت 3 عزلات بكتيرية بنسبة 15.79% غير قادرة على تكوين الغشاء الحيوي ، اما طريقة Tubes method كانت جميع العزلات قادرة على تكوين الغشاء الحيوي، فقد وجد ان 4 عزلات بكتيرية بنسبة %21.05 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل قوي، و13 عزلة بكتيرية بنسبة 68.42 % كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل متوسط ، وعزلتين بكتيرية بنسبة 10.53 % كانت منتجة للغش اء الحي وي بشكل ضعيف ، وطريقة Microtiter plate method اذ ان 9 عزلات بكتيرية بنسبة %47.37 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل قوي و8 عزلات بكتيرية بنسبة 42.11 % كانت منتجة للغشاء الحيـــــــــوي بشكل متوسط وعزلتين بكتيرية بنسبة %10.53 كانت منتجة للغشاء الحيوي بشكل ضعيف . اظهرت نتائج فحص الحساسية باستعمال جهاز Vitek - 2 كونه اكثر كفاءة مقارنـــــــــــــــة بالطريقة التقليدية اتجاه 18 مضــــ ادا حيويــــ ا لتحديد التركـــــ يز المثبـــــــــــــــــط الادنـــ ـى( MICs) Minimum Inhibitory Concentration, وبينت النتائج ان جميع العزلات البكتيرية كانت حساسة Sensitive بنسبة 100% لعدد من المضادات الحيوية المستعملة في الـــدراسة وهـــــــــــي Ampicillin - Sulbactam وCefotaxim وCefpodoxime وCeftazidime وCiprofloxacim وGentamicin وImipenumو Levofloxacin وMeropenem وTazobactam - Piperacillin وTrimethoprim - Sulfamethoxaole وTigecyclin. بينما اختلفت العزلات البكتيرية فكانت مقاومة Resistance او متوسطة المقاومة، اذ كانت نسبة المقاومة اتجاه المضاد الحيوي Cefuroxim وCefuroxim Axetil بنسبة 5.26 % على التوالي، في حين كانت متوسطة الحساسية اتجاه المضاد الحيوي Ampicillin بنسبة %5.26 وللمضاد Cefuroxim بنسبة %15.79, وللمضاد Cefuroxim Axetilبنسبة 52.63% وللمضاد Nitrofurontion بنسبة %15.79 . تم التحري عن بعض جينات الضراوة لبكترياC.sakazakii وتضمنت هذه الجينات كلا من ompA( الذي يشفر عن بروتين A للـ Outer membrane ) وzpx (الذي يشفر عن انزيم Proteases) وfliD ( الذي يشفر عن (Flagella (D)واظهرت النتائج وجود هذه الجينات بنسبة 100% في جميع العزلات. | This study was conducted to isolate and identification of Cronobacter sakazakii from children milk powder and clinical cases of children under two years . It collected (230) samples , included (30) sample children's milk for various ages under two years from the local markets in Baghdad, and (200) from clinical cases , which included (50) samples from each of the (Cerebrospinal Fluid and blood and stool and urine) of the Medical City Hospital ( the protection of children) from Central Children Hospital and Children's Protection Educational Hospital during the period between 1/9/2015 to 1/1/2016. Specimens planted among agricultural private, as planted specimens (milk) to the center of Violet red bile glucose Agar and planted specimens (clinical) at the center of MacConkey agar and planted all samples (milk and clinical) on the central Tryptone soy agar, then planted on the central Biriiltent Enterobacter sakazakii agar. Diagnosed isolates tests microscopic farm and biochemical, as well as diagnostics using Vitek - 2 device as possible to get 19 in isolation, they were all returned to the Cronobacter sakazakii, included (6 (9.09%) isolates included isolation of one isolate from Novolac Allernova and two isolate from Novolac AD and three isolates from Dialak1 ) and 13 isolated (6.5%) included ( 6 (12%) isolates from CSF and 7 (14%) isolates from blood) don't found in stool and urine samples. The results of the investigation of some virulence factors shoewd that all bacteria isolates were able to Swimming motility with a diameter ranging (9 - 1 mm) and Swariming motility with a diameter ranging (40 - 1 mm) and so their ability form biofilm by using three methods. The results show the ability of isolates to form biofilm by using Congo red media methods where it 16 out of 19 isolated bacteria belonging to C.sakazakii increased by (84.21%) able to form biofilm on the central Congo red steel which is 4 (21.05%) were strong production biofilm , 10 (52.63%) were intermediate production biofilm and 2 (10.52% ) were weak biofilm formation , while the 3 (15.79%) unable to form biofilm, The tubes method were all isolates were able to form biofilm, it were found that 4 (21.05%) isolates strong, and 13 (68.42%) intermediate and 2( 10.53%) weak biofilm formation , Microtiter plate method gave 9 (47.37%) isolates strong and 8 (42.11%) intermediate and 2 (10.53%)weak biofilm formation. The susceptibility measured by Vitek - 2 was its more efficient than the traditional methods towards the direction of 18 antibiotic to determine the Minimum Inhibitory Concentrations (MICs) Minimum. The results showed that all bacterial isolates were sensitive 100% for a number of antibiotics used in the study, a Ampicillin - Sulbactam and Cefotaxim and Cefpodoxime and Ceftazidime and Ciprofloxacim and Gentamicin and Imipenum and Levofloxacin and Meropenem and Tazobactam - Piperacillin and Trimethoprim - Sulfamethoxaole and Tigecyclin. While different bacterial isolates were resistant Resistance or medium resistance, as the proportion of the resistance counter direction vital Cefuroxim and Cefuroxim Axetil was (5.26%) respectively. Whereas , the isolates show intermidate sensitivity towards the Ampicillin with ratio ( 5.26%) Cefuroxim (15.79%), Cefuroxim Axetil (52.63%) and Nitrofurontion (15.79%). Has been investigating some of the genes of pathogenic bacterium C.sakazakii These included genes both ompA (which encodes for Outer membrane protein A) and zpx (which encodes for an enzyme Proteases) and fliD which encodes for (Flagella (D) and the results showed the presence of these genes by 100% in all isolates.
