دراسة مقارنة بين العزلات المحلية لبكترياStaphylococcus epidermidis المقاومة والحساسة للمثيسلين == Comparative Study between Local Isolates of Methicillin Sensitive and Resistance of Staphylococcus epidermidis
Author name:
استبرق نبيل عبد اللطيف
Supervisor name:
مي طالب فليح
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology - Bacteria
Degree:
Master
University:
University of Baghdad
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3129 - p.pdf
Abstract:
تم الحصول على 60 عزلة من المكورات العنقودية من 140 عينة سريريه (ادرار، مسحات اذن، مسحات انفية، جروح، عينات الدم). اثنان وثلاثون عزلة (53.3%) من العدد الكلي للمكورات العنقودية شخصت على انها عنقوديات غير مخثرة لذيفان مخثر بلازما الدمCONS)). تسعة عشر عزلة (59.38%) من CONS شملتStaphylococcus .epidermidis تم فحص الحساسية للعزلات المحلية من S. epidermid لمضاد المثيسلين, النتائج اظهرت 3عزلات من S. epidermidis حساسة للمثيسلين و16عزلة من S. epidermidis كانت مقاومة للمثيسلين، طبقا لهذه النتائج صنفت العزلات الى مجموعتين : - S. epidermidis مقاومة للمثيسلين MRSE)) وS. epidermidisحساسة للمثيسلين .(MSSE) اجري اختبار الحساسية لهاتين المجموعتين من S. epidermidis لاحد عشر مضادا حيويا، اظهرت النتائج مقاومة عالية ومتعددة ل MRSE لهذه المضادات بينما MSSE كانت عالية الحساسية، حيث اظهرت الMRSE حساسية 100% لمضاد vancomycinفقط. وتراوحت نسبة مقاومتها للمضادات penicillin G100% وclindamycin75% وamoxicillin 68.7% وamoxicillin clavulinic acid 68.7% وtetracyclin56.2% وrifampin 56.2% وcephalexin56.2% وerythromycin50% وciprofloxacin50% وgentamicin 43.7%. بينما اظهرتMSSE حساسية 100% لمضاد gentimicinو rifampin وclindamycin وciprofloxacin وvancomycinونسب مختلفة من المقاومة للمضادات الاخرى، اذ كانت نسبة مقاومة MSSE لمضاد amoxicillin وamoxicillin clavulinic acid وcephalexinو erythromycinو penicillin G و.%33 tetracyclin تم التحري عن انتاجية MSSEو MRSE لبعض عوامل الفوعة شملت الهيمولايسين والبروتييزواللايبيزواليورييزوالجيلاتينييزوانزيم المحلل للحامض النوويDNA اظهرت النتائج انMRSE تمتلك نسبة انتاجية لهذه عوامل الفوعة اعلى منMSSE . حيث ان نسبة انتاجية هيمولايسين، البروتييز، اللايبيز، اليورييز، الجيلاتينييز وانزيم المحلل للحامض النووي DNA فيMRSE كانت80%، 100%، 80%، 100%، 60%، و30% على التوالي، بينما كانت نسبة الانتاجية لهذه العوامل في MSSE 67%، 100%، 67%، 100%، 33% و33% على التوالي. تم تحديد التراكيز المثبطة الدنيا للمضادات penicillinو .tetracyclin اذ كانت قيم التراكيز المثبطة الدنيا للعزلة 32S هي 60 وحدة للبنسلين و25مايكروغرام/مل للتتراسايكلين، 40 وحدة للبنسيلين للعزلة .40S تم دراسة امراضية MRSE وMSSE باختبار سميتها باستخدام ذكور الفئران البيض السويسرية، وكانت الاعداد البكتيرية المستخدمة هي (108،109، 1010 ،1011 ،1012) cfu/ml والتي تم حقنها داخل بريتون الفئران. لم تسجل اي نسبة قتل بكل التراكيز المستخدمة ل MSSE بينما بلغت نسبة القتل 33% بالتراكيز1010 و11 10 cfu/ml لMRSE. درست التغيرات النسيجية في انسجة الكبد، الطحال، الكلى، الرئة والقلب لذكور الفئران المحقونة ب MSSE و.MRSE لوحظ ان التاثيرات النسيجية التي سببتها MRSE كانت اعلى من تلك التي سببتهاMSSE . اكثر الاعضاء تاثرا نتيجة حقنMSSE وMRSE هما الرئة والكلى واللتان سبتتا نسبة عالية من النخر بهذين العضوين وكان التاثير اقل في الطحال والكبد من الرئة والكلى، ولم يظهر اي تاثير في قلب الفار المحقون بMSSE لكن هناك بعض التاثيرات في قلب الفار المحقون بMRSE. اظهرت نتائج الترحيل الكهربائي لعزلتيMSSE ( 51S و(5Sبانها لا تمتلك اي بلازميد بينما عزلتانMRSE تمتلك بلازميدات، كما لوحظ وجود بلازميدان في عزلة 40S احداهما بلازميد كبير والاخر صغير في حين ان العزلة الاخرى من MRSE 32S تمتلك 3 بلازميدات واحد منها كبير واثنان صغيران. اظهرت نتائج تحييد البلازميد باستخدام SDSو Rifampin ان بلازميدات العزلتين 32S)، (40S قد حييدت عند المعاملة ب100مايكروغرام/مل، 230مايكروغرام/مل من SDSعلى التوالي، 150مايكروغرام/مل، 200مايكروغرام/مل من Rifampinعلى التوالي. اظهرت الخلايا المحييدة للعزلة 40S حساسية للبنسيلين وبقاء المقاومة للمثيسلين كما اظهرت الخلايا المحييدة للعزلة 32S حساسبة للبنسلين وتتراسايكلين واحتفاظ البكتريا بمقاومتها للمثيسلين. | Sixty isolates of Staphylococcus were obtained from one hundred forty clinical specimens (urine, ear swabs, nasal swab, wound, and blood). Thirty two isolates (53.3%) of total number of Staphylococcus were identified as coagulase - negative staphylococci (CONS), nineteen isolates(59.38%) of CONS were included Staphylococcus epidermidis. Sensitivity of local isolates of S. epidermidis was examined against methicillin, the results showed 3 isolates from S. epidermidis were sensitive to methicillin and 16 isolates from S. epidermidis were resistance to methicillin, according to these results the isolates were splits to two groups : - methicillin resistance S. epidermidis (MRSE) and methicillin sensitive S. epiderimidis (MSSE). The sensitivity test of these two groups against 11 different antibiotics was done, the results showed MRSE were highly resistance and multi resistance patterns to these antibiotics, while MSSE showed highly sensitive. In MSSE showed 100% sensitivity to gentimicin, rifampin, clindamycin, ciprofloxacin and vancomycin, and different percentage of resistance to other antibiotics. The resistance percentage of MRSE to pencillin G 100%, clindamycin 75%, amoxicillin 68.7%, amoxicillin clavulinic acid 68.7%, cephalexin 56.2%, rifampin 56.2%, tetracyclin 56.2%, erythromycin 50%, ciprofloxacin 50%, gentamicin 43.7%. the resistance percentage of MSSE to amoxicillin, amoxicillin clavulinic acid, cephalexin, erythromycin, penicillin G and tetracyclin were 33%. While in MRSE showed 100% sensitivity to vancomycin only. Some virulence factors of MRSE and MSSE were detected including the hemolysin, protease, lipase, urease, gelatinase and DNase the results showed MRSE have higher percentage to produce these virulence factors than MSSE. The production percentage of hemolysin, protases, lipase, urease, gelatinase and DNase in MRSE was 80%, 100%, 80%, 100%, 60% and 60% respectively, while in MSSE 67%, 100%, 67%, 100%, 33% and 33% respectively. The minimum inhibitory concentration of antibiotics (penicillin and tetracyclin) to S. epidermidis isolate had been determined. they were 60U and 25µg/ml respectively for the isolate 32S, they were 40U of penicillin for the isolate 40S. The pathogenicity of MRSE and MSSE was studied by testing its lethality by using white Swiss male mice, the bacterial numbers was used that is (108,109,1010,1011,1012) cfu/ml and was injected in mice. Died of injected mice was not recorded with any used concentration in MSSE but in MRSE 33.3% of injected mice was killed in concentration 1010 and 1011 CFU/ml. Histological changes in liver, spleen, kidney, lung and heart tissues of male mice which were injected with MRSE and MSSE were studied. The histological effect were produced by MRSE was higher than those produced by MSSE. The most effective of MRSE and MSSE in lung, kidney because appeared of high necrosis in these organs but in spleen, liver of mouse were less effected from lung and kidney, in heart of mouse injected with MSSE no effect was recorded while in MRSE some effect have been seen. Results from agarose gel electrophoresis showed two isolates of MSSE 5S and 51S don't have any plasmid while other two isolates of MRSE have plasmids, two plasmids found in S. epidermidis isolate (40S), one of them was large plasmid and the other was small plasmid and in S. epidermidis isolate (32S) contained three plasmids, one from these was large plasmid and the other two plasmids were small plasmids. The results of plasmid curing by using sodium dodecyl sulphate (SDS) and rifampin showed that the plasmids of the local isolates 32S and 40S was curred by treatment with 100μg/ml, 230μg/ml respectively from SDS and 150μg/ml, 200μg/ml respectively from rifampin. Cured cells from 40S isolate (MRSE) were sensitive to penicillin and still resistance to methicillin and the cured cells from 32S isolate were sensitive to penicillin, tetracycline and still resistance to methicillin
