تاثـيــر فعالية الانتيروسين المنتج من بكتريا faecium Enterococcus على بعض البكتريا المرضية المعزولة من مصادر مختلفة == Activity effect of enterocin produced from Enterococcus faecium on some pathogenic bacteria isolated from different sources
Author name:
حسام سامي عويد الشمري
Supervisor name:
خليل مصطفى خماس
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3230 - p.pdf
Abstract:
تـتـناول هــذه الـــدراســة تاثـيـر الانتيـروســـين المنتــج بــواســطــة بكــتــريا E.faecium ضـــد بــعــض البكتــريا الــمـمـرضــة المـتـواجـــدة بكثرة في الحـليب ومشتقاته. فقد تم لهذا الغـرض جمع 382عينة من اطفال يعانون حالات اسهال والتهاب السبيل البولي والحليب الخام لعـزل بكتريا E.faecium وتم تشخيص العزلات بالفحوصات الكيموحيوية وتاكيد تشخيصها باستعمال منظومة فايتك 2 . فضلا عن ذلك فقـد تم جمع 50 عينة لعـزل بكتريا Listeria monocytogenes و66 عينة لعزل بكتريا Salmonella typhimurium من الحليب الخام ومشتقاته وتم تشخيصهما باتباع الفحوصات الكيموحيوية وتاكيد التشخيص باستعمال Api Listeria وApi - 20Eاضافة الى التنميط المصلي لبكتريا Salmonella typhimurium . تم تقصي انتاج الانتيروسين المنتج بواسطةE. faecium باستعمال طريقتي اقراص الاكار والانتشار في الحفر , ونقي الانتيروسين باستعمال الترسيب بسلفات الامونيوم والفصل بكحول البيوتانول , كما تم الكشف عن حساسية البكتريوسين المنتج لمجموعة واسعة من الانزيمات الحالة للبروتين والدهون وبعض الانزيمات الاخرى .فضلا عن ذلك فقد تمت دراسة تاثير الحرارة والرقم الهيدروجيني على البكتريوسين المنتج , وتم اختبار تراكيز مختلفة من المايتومايسين - سي لحث الانتيروسين .اختبرت الحساسية للمضادات الحيوية لعزلات بكتريا اللستيريا والسالمونيلا والمكورات المعوية باستخدام طريقة كيربي - باور .يمكن تلخيص النتائج التي تم الحصول عليها بالاتي : كانت نسبة عـزل E. faecium 7.59)%) من مجموع 382 عينة , اما نسبـة عـزل Listeria monocytogenes 10)%) من مجموع 50 عينة , اما نـسبـة عـزل Salmonella typhimurium فقد كانت .06)6%) من مجموع 66 عينة . اظهـر الانتيروســين المنتـج بواســطة E. faecium طـيفا واسعا من التاثير ضـد البكتريا الاختبار المـوجبة والسالبة لصبغـة غــرام التي عددها 8 وبضمـنها Listeria monocytogenes وSalmonella typhimurium . اظهر الحث بالمايتومايسين - سي )بتركيزي 1.5 و2 مكغم/ مل( انتاجا عاليا للانتيروسين . ادت تنقية الانتيروسين جزئيا باستعمال الترسيب بنسبة 80 % الى اعطاء اعلى نتيجة عندما بلغت 2.225 وحدة / مكغم بروتين , اما الفصل بكحـول البيوتانول فقد اعطى محصولا وصــل الى 0.57 وحدة / مكغم بروتين . ادت معاملة الانتيروسين بالانزيمات وتلك الحالة للبروتين حساسية الانتيروسين تجاه هذه الانزيمات باستثناء انزيمات Lipase وCatalase وα - amylaseو Lysozyme . اظهـرت تجارب المعاملة بالحرارة مقاومة الانتيروسين للحرارة وحتى عند121ºC لمدة 20 دقيقة , في حين كان مدى الاس الهيدروجيني له 4 - 9 .اظهرت تجارب الحساسية للمضادات الحيوية ان Enterococcus faecium كانت حساسة الى 7 مضادات حيوية . وكانت بكتريا Listeria monocytogenes مقاومة الى 9 مضادات حيوية وبكتريا Salmonella typhimurium مقاومة الى 4 مضادات حيوية .امكن الحصول على النتائج وكما يلي : انتجت عزلات Enterococcus faecium الانتيروسين بكميات واطئه فيما امكن حثه باستعمال المادة الحاثة المايتومايسين - سي , وامكن تنقيتها جزئيا باستعمال مرسبات البروتين . اتصف الانتيروسين المنتج من هذه البكتريا بطيف واسع النطاق من التاثير ضد البكتريا الموجبة والسالبة لصبغة غرام ولاسيما تلك التي تلوث الحليب ومشتقاته . | This study investigate the effect of bacteriocin by Enterococcus faecium against some pathogenic bacteria frequently found in milk and dairy product. Three hundred eighty two sample collected from patients and raw milk were used for isolation of E.faecium the isolates were diagnostic by biochemical tests and confirmed using Vitek 2 system . In addition Listeria monocytogenes , Salmonella typhimurium were isolated from milk and dairy products these were diagnostic by biochemical tests and confirmed using Api Listeria and Api - 20E system in addition to serotyping to bacteria Salmonella typhimurium . Enterocin produced by E.faecium detected using tow methods Cup agar and Well diffusion and partially - purified using ammonium sulfate precipitation and n - butanol partition , the sensitivity of the material was tested against diverse group of proteolytic , lipolytic and some other enzymes. In addition the effect of temperature as well as pH an the bacteriocin were tested . and used different concentration of Mitomycin - C to induce enterocin . Antibiotic sensitivity of Listeria and Salmonella and Enterococcus isolates were tested using Kirby - Bauer method. The results showed the followings : The isolation rate of E . faecium was (7.59%) from 382 sample , L. monocytogenes isolation rate approach (10%) from 50 sample , S.typhimurium isolation rate reached (6.06%) from 66 sample .Enterocin produce by E . faecium demonstrated a broad - spectrum effect against both gram positive and gram negative bacteria including Listeria monocytogenes and Salmonella typhimurium . Mitomycin - C induction was used to induce a high level production of Enterocin the concentration of optimum inducing agent was 1.5 - 2 mg /ml. The enterocin was partially purified eighty percent of Ammonium sulfate give the highest yield reaching 2.225 Unit /mg protein , n - butanol partition yield 0.57 Unit/mg protein. Enzymatic effect on enterocin demonstrated that proteolytic enzymes completely inactivated the bacteriocin , other enzymes including Lipases Catalase demonstrated no effect. α - amylase , Lysozyme ,The Enterocin was heat - resistance at even 121º C for 20 minute , the optimum pH was shown to be 4 - 9 .Enterococcus faecium was highly sensitive to 7 antibiotic used .and Listeria monocytogenes was highly resistance to 9 antibiotic and Salmonella typhimurium was resistance to 4 antibiotic . In results E . faecium produce enterocin at low level which was induced to high level yield using Mitomycin - C , the enterocin could be partially purified using precipitators protein, That enterocin product of this bacteria characterized a broad spectrum against positive and negative gram bacteria including contaminate milk and its products
