دراسة جزيئية لبكتريا Enterococcus spp. المقاومة لمضاد الفانكومايسين == Molecular Study of the Vancomycin - Resistant Enterococcus spp
Author name:
مها مخلف كاظم الشمري
Supervisor name:
محمد فرج شذر المرجاني | كفاح احمد جاسم الكرخي
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3428 - p.pdf
Abstract:
جمعت (325) عينة شملت (268) عينة سريرية ، توزعت بين (151) عينة ادرار و(101) عينة دم و(16) عينة سائل النخاع الشوكي CSF)) ، من مستشفيات مختلفة من مدينة بغداد ،من جانب اخر جمعت (57)عينة براز من اصحاء وذلك للفترة من بداية تشرين الاول وحتى نهاية كانون الاول لعام 2010. تم الحصول على (33) عزلة تعود لجنس Enterococcus بواقع (30) عزلة من عينات الادرار و(3) عزلات من عينات الدم ، فيما لم يتم الحصول على اية عزلة من عينات سائل النخاع الشوكي، وبلغت عزلات براز الاصحاء (46) عزلة. اما على مستوى النوع فقد تم تشخيص (20) عزلة تعود للنوع E.faecalis ، شملت (17) عزلة من عينات الادرار بنسبة عزل (6.3)% و(3) عزلات من عينات الدم بنسبة عزل (1.11)% ، في حين شخصت (10) عزلات تعود للنوع E.faecium بنسبة عزل (3.73)% وقد عزلت جميعها من عينات الادرار. وفيما يخص عينات براز الاصحاء فقد كانت السيادة تعود للنوع E.faecium اذ شخصت (40) عزلة تعود لهذا النوع وبنسبة عزل (70.1)% في حين شخصت (3) عزلات فقط تعود للنوع E.faecalis بنسبة عزل (5.2)%. اختبرت حساسية العزلات تجاه (11) مضادا حيويا مختلفا باستعمال طريقة الاقراص وقد اظهرت النتائج فعالية كل من Imipeneme وAmpicillin تجاه عزلات بكتريا E.faecalis السريرية ، اما Ofloxacin فقد اظهر فعالية تجاه عزلات الاصحاء بالمقارنة مع العزلات السريرية ، في حين كانت عزلات هذه البكتريا مقاومة بنسبة (100)% Oxacillin وCefepime ، بينما اظهرت العزلات السريرية مقاومة بنسبة (55)% Azlocillin وبلغت نسبة مقاومة عزلات الاصحاء لهذا المضاد (66.7)% ، وكانت نسبة مقاومة عزلاتها من الاصحاء (100)% Erythromycin وRifampicin وTetracycline ، اما بالنسبة لبكتريا E.faecium فقد اظهرت عزلاتها حساسية عالية تجاه Imipeneme وكانت العزلات السريرية اكثر حساسية تجاه Ampicillin مقارنة بعزلات الاصحاء . فضلا عن ان العزلات جميعا كانت مقاومة Oxacillin ، بينما كانت العزلات السريرية مقاومة بنسبة (100)% Azlocillin ، في حين كانت عزلات الاصحاء مقاومة بنسبة (100)% Cefepime ، كما اظهرت عزلات الاصحاء مقاومة اعلى من العزلات السريرية تجاه Erythromycin ، كما كانت جميع العزلات السريرية مقاومة Rifampicin وStreptomycin. اوضحت نتائج الدراسة الحالية ان (25)% من العزلات السريرية و(66.7)% من عزلات الاصحاء لبكتريا E.faecalis كانت مقاومة Vancomycin ، بينما بلغت نسبة العزلات السريرية لبكتريا E.faecium المقاومة لهذا المضاد (40)% ، في حين كانت نسبتها بين عزلات الاصحاء (47.5)% . حددت التراكيز المثبطة الدنيا Vancomycin للعزلات المقاومة لهذا المضاد بطريقة التخفيف بالوسط السائل ، تراوحت قيم MIC للعزلات السريرية لبكتريا E.faecalis بين (4 - 512) مايكروغرام\مل ، بينما كانت عزلتا الاصحاء التابعة لهذه البكتريا ذات MIC (128و64) مايكروغرام\مل ،اما بالنسبة لبكتريا E.faecium فتراوحت قيم MIC لعزلاتها السريريــــة بين (4 - 64) مايكروغــرام\مـــل ولــــعزلاتها من الاصحاء) ≤4) مايكروغرام\مل . بينت نتائج التحري عن الدنا البلازميدي بالترحيل الكهربائي في هلام الاكاروز لعدد من عزلات بكتريا المكورات المعوية المقاومة Vancomycin Vancomycin - Resistant Enterococcus) (VRE) ) احتواء بعض هذه العزلات على حزم بلازميدية مختلفة الاحجام. اجريت عمليات الاقتران البكتيري خارج الجسم الحي In vitro)) وداخل الجسم الحيvivo) In) ، اظهرت النتائج نجاح عمليات الاقتران اذ لوحظ انتقال صفة مقاومة Vancomycin بين الخلايا مما يدل على احتمال كون جينات هذه الصفة محمولة على بلازميدات اقترانية تسهل انتقالها عبر الانتقال الافقي من خلية لاخرى ضمن النوع نفسه او الانواع الاخرى . كما اظهرت نتائج التشخيص باستعمال تقنيةPCR لعزلات بكتريا المكورات المعوية نجاح ارتباط البوادئ بالتسلسلات المكملة لها ضمن جيناتsod A الموجودة بالدنا القالب لكلا النوعين الذي ادى الى الحصول على نواتج التضاعف وبالتالي التاكد من صحة الفحوصات التشخيصية التي اجريت على العزلات والتي اعتمدت الفحوصات البايوكيميائية ماعدا (4) عزلات لبكتريا E.faecalis و(6) عزلات لبكتريا E.faecium لم تعط اي ناتج . بينت نتائج التحري عن جينات مقاومة Vancomycin في بكترياVRE سواء كانت VRE.faecalis (VREF) او VRE.faecium (VREFm) ان جينات المقاومة vanA هي الاكثر انتشارا بين العزلات المحلية بالمقارنة مع جينات vanB اذ احتوت العزلات جميعها - سواء كانت السريرية او المعزولة من الاصحاء التابعة لكلا النوعين وذات (64)≤ MIC مايكروغرام\مل - على جين vanA عدا عزلتين كانت احداهما عزلة سريرية تعود لبكترياE. faecalis والاخرى عزلة اصحاء تعود لبكتريا E.faecium اللتان لهما MIC (32) مايكروغرام \مل اذ احتوت كل منهما على جين vanB . | This study involved collecting (325) samples distributed as two groups : The first group was including (268) clinical samples distributed as (151) urine, (101) blood and (16) CSF, the second group involved (57) stool specimens from healthy people, from different hospital in Baghdad, since October till December 2010. All (73) isolates had been identified by morphological, cultural and biochemical tests such API - 20 strep and API Rapid ID - 32 strep, as a result of these tests (6.3)% of urin isolates, (1.11)% of blood isolates and (5.2)% of stool isolates were identified as E.faecalis, at the same time (3.73)% of urine isolates and (70.1)% of stool isolates were identified as E.faecium. Blood agar medium used to detect bacterial ability to produce β - hemolysin, (58.82)% and (66.67)% of E.faecalis clinical and stool isolates were able to produce β - hemolysin, (20)% of clinical and (27.5)% of stool E.faecium isolates were able to produce β - hemolysin. The antibiotic susceptibility test to (11) types of antibiotics showed the high susceptibility of E.faecalis isolates to Imipeneme and Ampicillin and the high resistance (100)% to Oxacillin, and Cefepim, all isolates showed resistance to Azlocillin , stool isolates showed high resistance to Tetracyclin and Refampicin, all E.faecium isolates showed high sensitivity to Imipeneme, high sensitivity to Ampicillin (among clinical isolates more than stool isolates), high resistance among stool isolates to Erythromycin, all clinical isolates were resistant to Streptomycin and Rifampicin. The vancomycin susceptibility test for E.faecalis was done results showed that (25)% of clinical isolates and (66.7)% of stool isolates were resistant to this antibiotic. While (40,47.5)% of clinical and stool E.faecium isolates were resistant to vancomycin respectively. Minimum Inhibitory concentrations for vancomycin were determined, VRE.faecalis isolates that had concentrations between (4 - 512) μg/ml, and VRE.faecium clinical isolates had MICS (4 - 64) μg/ml and the MICS for stool isolates were ≥ 4 μg/ml. The detection of plasmid DNA in VRE isolates by gel electrophoresis showed that some of these isolates had plasmid bands with different sizes. The bacterial conjugation expriments between Enterococcus isolates had gained success in transfer of vancomycin resistance between the local isolates by in vitro and in vivo conjugation. Identifiicaion of Enterococcus isolates to the species level by using the sodA gene as a target in the PCR in this method (19) of E.faecalis isolates gave suspected products while (24) of E.faecium isolates gave suspected products. The detection of van genes by PCR showed the high dissemination of vanA gene which encoded to high resistance level to vancomycin between the local VRE isolates especially VREFm in comparison to vanB gene
