تاثير الاجسام المضادة لل انفلياكسيمب وعلاقتها مع مستضدات الكريات البيض البشرية - النوع الثاني - DRB1 في المرضى العراقيين المصابين بالتهاب المفاصل الرثوي == Influence of Anti - infliximab Antibodies and its Association with HLA - class II - DRB1 alleles in Iraqi patients with Rheumatoid arthritis
Author name:
محمد احمد الكرخي
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology - Immunology
Degree:
Doctorate
University:
University of Baghdad - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
19T1305 - p.pdf
Abstract:
التهاب المفاصل الرثوي هو مرض مزمن ذاتي المناعة يصيب عدة اعضاء من الجسم ومن ضمنها المفاصل ويمكن ان يؤدي الى تدمير المفاصل والعجز الشديد اذا لم يعالج في وقت مبكر. المضادات لعامل نخر الورم عامل الفا (TNFα) مثل اينفلياكسيمب (INF) وهو من الاجسام المضادة وحيدة النسيلة خيالية ادخلت في عام 2010 من قبل وزارة الصحة كعوامل فعالة للغاية لعلاج المرضى العراقيين المصابين بالتهاب المفاصل الرثوي الحاد متوسط الشدة او الشديد الذي لا يستجيب للعلاج التقليدي.اينفلياكسيمب يمكن ان يحفز على تكوين الاجسام المضادة لعقار اينفلياكسيمب (ATIS)، ولكن هذه الاجسام المضادة من الممكن ان تؤدي الى نقص فعالية الاينفلياكسيمب او تاثيرات جانبية سلبية.وفقا لمعلوماتنا المتاحة انه لا توجد اية معلومات عن هذه الاجسام المضادة لل انفلياكسيمب وارتباطها مع النتائج السريرية، العلامات المصلية ومستضدات HLA - classІІ - DRB1 في المرضى العراقيين المصابين بالتهاب المفاصل الرثوي.وقد اجريت هذه الدراسة لاعطاء فكرة واضحة عن تكون ودور هذه الاجسام المضادة في الاستجابة السريرية للمرضى لعقار الاينفلياكسيمب وكذلك توضيح تاثير مستضداتHLA - classІІ - DRB1 على القابلية المناعية لعقار الانفلياكسيمب في تكوين هذه المضادات.المرضى والطرق : شملت الدراسة 100 شخص. حيث تضمنت ما مجموعه 50 مريضا الذين توافقوا مع المعايير المنقحة لمرض التهاب المفاصل الرثوي (الكلية الامريكية لامراض الروماتيزم 1987 و2010) في المواءمة مع 50 مجموعة السيطرة (25 اشخاص اصحاء و25 مرضى مصابين بالتهاب المفاصل الرثوي لم يعالجوا بعقار اينفلياكسيمب). وقد اجريت هذه الدراسة خلال الفترة من بداية شهراذار 2014 حتى نهاية شهر ايلول 2014 في وحدة العلاج البيولوجي لقسم امراض الروماتيزم / مستشفى بغداد التعليمي، مختبر الدراسات العليا / فرع الاحياء المجهرية / كلية الطب - جامعة بغداد، المختبرات التعليمية / مدينة الطب، وحدة زرع الكلى / مستشفى الكرامة التعليمي ومركز التطابق النسيجي البحثي / كلية طب الكندي / جامعة بغداد. تم جمع عينات الدم من مجموعة السيطرة والمرضى الذين يعانون من التهاب المفاصل الرثوي في والذين تمت معالجتهم بعقار الانفلياكسيمب لاكثر من ثلاثة اشهر لغرض تقييم الاجسام المضادة لعقار الاينفلياكسيمب،مضادات - CCP، بروتين سي التفاعلي والتنميط الجيني HLA - DRB1.المرضى الذين لم تتكون لديهم الاجسام المضادة لل انفلياكسيمب فتمت متابعتهم لمدة 6 اشهر واعادة فحصهم للتحقق من وجود الاجسام المضادة لل انفلياكسيمب,anti - CCP وبروتين سي التفاعلي.تم الكشف عن الاجسام المضادة لل انفلياكسيمب والاجسام المضادة لل CCP بواسطة جهاز فحص الانزيم الرابط المناعي (ELISA) ,اما بروتين سي التفاعلي(CRP) فتمت قياسته بواسطة جهازNephelometer في حين تم اجراء تحليل التنميط الجيني النوع الثاني DRB1 بواسطة بادئات محددة تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR - SSO) لكل من المرضى ومجموعة السيطرة الاصحاء.النتائج : من اصل 50 مريض في الدراسة الحالية، كان متوسط العمر (45.24 ± 9.15سنة) وكانت الاناث اكثر من الذكور (اناث : ذكور 3 : 1).تم اكتشاف الاجسام المضادة لل انفلياكسيمب في خمسة وثلاثون مريض(70٪) من مرضى التهاب المفاصل الرثوي بعد فترة ثلاثة اشهر من العلاج بهذا الدواء, بينما لم تتكون هذه المضادات للعقار في 15 (30٪) منهم.في حين لم يتم الكشف عن اية اجسام مضادة في مجموعة السيطرة (الاصحاء ووالسيطرة المرضية)، كان الفرق على درجة عالية وذات دلالة احصائية (قيمةp = 0.000001)، ومع حساسية وخصوصية (70٪، 100٪) على التوالي. في نفس المدة من العلاج تم الكشف عن الاجسام المضادة لل - CCP في 47 (94٪) من المرضى بينما لم يتم اكتشاف هذه الاجسام المضادة في في 3 (6.0٪)منهم، في حين تم الكشف عن هذه الاجسام المضادة في 22 (88٪) من مجموعة السيطرة ولم يتم اكتشافها في 3 (12٪) منهم.بينما لم يتم اكتشاف اية اجسام مضادة لل - CCPفي مجموعة الاصحاء ,وكان الفرق معتد للغاية وذات دلالة احصائية (قيمة p=0.0005) مع حساسية وخصوصية (94٪، 100٪) على التوالي.تم توثيق علاقة قوية بين نشوء الاجسام المضادة للانفلياكسيمب والاجسام المضادة لل - CCP (قيمة p = 0.006).وفيما يتعلق بفحص بروتين سي التفاعلي، تم الكشف عنه في 26 (52٪) من مجموعةالمرضى بينما لم يتم الكشف عنه في 24 (48٪) منهم، كما انه كان ايجابيا في كل مجموعة السيطرة المرضية, بينما في مجموعة السيطرة للاصحاء، كان ايجابيا في 10 (40٪) وسلبيا في 15 (60٪) وكان الفرق ذات دلالة احصائية عالية (قيمة p= 0.000014) مع تدني في الحساسية والخصوصية (52٪، 60٪) على التوالي.ولم تسجل الدراسة الحالية اي ارتباط ذو قيمة بين نتيجة بروتين سي التفاعلي وتكون اضداد اينفلياكسيمب (قيمةp = 0.084).بالنسبة لمجموع المرضى الذين لم يتم اكتشاف اضداد ال انفلياكسيمب لديهم والبالغ عددهم 15 مريض فتمت متابعتهم بعد 6 اشهر من فترة العلاج بال انفلياكسيمب لغرض التحقق من احتمالية تكون الاجسام المضادة لل انفلياكسيمب ,اضافة الى اعادة فحص اضداد - CCPو بروتين سي التفاعلي ,اظهرت النتائج عن عدم وجود فرق احصائي بين نتائج الفحص بعد 3 اشهر وونتائج الفحص بعد 6 اشهر وكانت قيمة - p((0.067، 0.067 و1.0) على التوالي.وعلاوة على ذلك، كشفت الدراسة وجود علاقة ايجابية بين HLA - DRB1 * 04 (DR4) اليل مع 35 مريض مصاب بالتهاب المفاصل الرثوي تمت علاجهم بال اينفلياكسيمب حيث تمت مقارنتهم مع 25شخص من مجموعة السيطرة للاصحاء وكان الفرق ذات دلالة احصائية (قيمة p = 0.001).واخيرا كشفت الدراسة الحالية عن عدم وجود اي ارتباط بين HLA - DRB1 وتكون الاجسام المضادة لل اينفلياكسيمب في المرضى الذين يعانون من التهاب المفاصل الرثوي (قيمة p = 0.0914).الاستنتاجات : اظهرت الدراسة الحالية على ان ما يقرب من ثلاثة ارباع المرضى العراقيين المصابين بمرض التهاب المفاصل الرثوي تتكون لديهم الاجسام المضادة لل ااينفلياكسيمب بعد ثلاثة اشهر من العلاج مع هذا العامل البيولوجي مع عدم وجود اي ارتباط للعامل الوراثي (اليل DRB1 - HLAالنوع الثاني) مع تكونها، كما اثبتت الدراسة وجود ارتباط وثيق بين العامل الجيني الاليل( HLA - DRB1 * 04 (DR4مع نشوء مرض التهاب المفاصل الرثوي في المرضى العراقيين. | Rheumatoid arthritis is a systemic chronic autoimmune inflammatory polyarthritis leads to joints destruction and severe disability if not treated early. Tumor necrosis factor alpha antagonists such as infliximabwhich is a chimeric monoclonal antibody have been introduced and approved in 2010 by Ministry of Health as highly effective agents for the treatment of Iraqi patients with moderate to severe Rheumatoid arthritis that not responds to conventional treatment.Infliximab can induce formation of anti - infliximab antibodies, however, these antibodies may lead to lack of efficacy to Infliximab or adverse reactions.According to our knowlege no information is available about these antibodies to infliximab and their association with clinical findings , serological markers and HLA - class ІІ - DRB1 antigens in iraqi patients with Rheumatoid arthritis.The present study was conducted to give a clear idea about the development and the role of these antibodies in clinical response of patients to infliximab and demonstration the effect of HLA - class ІІ - DRB1 antigens on the immungenicity of infliximab. Patients and Methods : The study covered 100 subjects. It included a total of 50 patients who met the revised criteria for RA (the American College of Rheumatology 1987 and 2010) in aligment with the 50 control group(25 healthy individuals and 25 RA patients not treated by infliximab). This study was carried out during the beginning of March 2014 till the end of September 2014 in the Biological Therapy Unit of the Deparment of Rheumatology/Baghdad Teaching Hospital, the laboratory for Higher Studies/Microbiology Deparment/Baghdad College of Medicine, the Teaching Laboratories/Medical City, the Kidney Transplant Unit/ Al - Karama Teaching Hospital and HLA Research Center /Al - kindy College of Medicine/Baghdad University. Blood samples were collected from control group and patients with RA on infliximab therapy for more than three months duration for assesment of antibodies to infliximab , anti - Cyclic Citrullinated Peptide(anti - CCP) ,C - reactive Protein(CRP) and for Human Leukocyte Antigen - DRB1(HLA - DRB1) genotyping.The patients with negative anti - infliximab antibodies were follow up and reinvestigated after 6 month of infliximab therapy for anti - infliximab antibodies, anti - cyclic citrullinated peptide and C - reactive Protein.Anti - bodies to infliximab and anti - Cyclic Citrullinated Peptide antibodies were detected by Enzyme Link Immunosorbent Assay (ELISA), the C - reactive protien (CRP) was measured by Nephlometer . whereas the genotyping analysis for HLA - class ІІ - DRB1 had been done by polymerase chain reaction - sequence specific primers (PCR - SSO) for both patients and healthy control group.Results : Out of 50 case study group included in the current study, their mean age was (45.24± 9.15) the females were predminance than males in a ratio (F : M 3 : 1).Thirty five (70%) of RA patients developed antibodies against infliximab after three months of treatment with this drug ,15 (30%) of them were negative for these antibodies, while no anti - inflixmab antibodies were detected in control groups( (healthy and case control) ,the difference was a highly statistically significant(P - value=0.000001), and with sensitivity and specificity (70 %,100%) respectively.At the same duration of treatment the anti - CCP was detected in 47 (94%) patients and negative in 3 (6.0%), while in case control was postive in 22 ( 88%) and negative in 3(12%), and was not detected in all healthy control group,the difference was highly satistically siginficant ( p - value =0.0005) with sensitivity and specificity (94%,100%) repectively.A strong correlation was reported between the development of anti - infliximab and anti - CCP antibodies (p - value=0.006).Regarding the CRP test ,it was positive in 26 (52%) patients and negative in 24 (48%), also it was positive in all case control group while in healthy control group ,it was reported positive in 10(40%) and negative in 15(60%) with highly statistically significance(p - value=0.000014) with low sensitivity and specificity (52%, 60%) respectively.No significant correlation was reported between CRP and development of anti - infliximab antibodies (p - value=.084).Fifteen patients group with negative anti - infliximab antibodies were follow up and re - investigated after six months of treatment with infliximab for anti - infliximab ,anti - CCP antibodies and CRP, the results showed no statistical difference of these test after three and six month of infliximab treatment with p - value (0.067, 0.067 and 1.0) respectively.The study revealed a positive association of HLA - DRB1*04(DR4) allele with 35 patients with RA on infliximab therapy whom compared with 25 healthy control and the difference was statistically significant (p - value=0.001).There was no association found between the HLA - DRB1 and development of antibodies to infliximab in patients with RA (p - value=0.0914).Conclusions : The current thesis showed that approximately three quarter of Iraqi patients with RA developed antibodies against infliximab after three months of treatment with this biological agent and without association of genetic factor( HLA - class ІІ - DRB1 alleles) with their development ,also the study suggested an association of susceptibility of RA in Iraqi patients with HLA - DRB1*04(DR4).
