دراسة فيروس نظير الانفلونزا وبكتريا المسبحيات القيحية مع التهاب الاذن الوسطى القيحي في الاطفال == Study of Parainfluenza virus and Streptococcus pyogenes with suppurative otitis media in children
Author name:
ايام محمد صالح علي العامود
Supervisor name:
جواد كاظم طراد الخفاجي | غانم عبود المولى
General topic:
Medicine
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Doctorate
University:
University of Babylon - Faculty Of Medicine
Language:
English
University location:
Babylon
First pages:
19T1254 - p.pdf
Abstract:
هدفت هذه الدراسة الى التحري عن دور فيروس نظير الانفلونزا وبكتريا المسبحيات القيحية Streptococcus pyogenes في الاطفال الذين يعانون من التهاب الاذن الوسطى القيحي . جمعت 200 عينة (ثلاث مسحات لكل مريض تضمنت مسحة من افرازات الاذن ومسحة من افرازات الانف لدراسة الفيروس ومسحة من افرازات الاذن لدراسة البكتريا و50 عينة دم) من 50 مريض يعانون من التهاب الاذن الوسطى القيحي احيلوا الى مستشفى الحلة التعليمي في محافظة بابل للفترة من شباط (2016) لغاية ايار (2016). والذين يعانون من التهاب الاذن الوسطى. وتضمنت الدراسة 32 عينة ماخوذه من اشخاص اصحاء كمجموعة سيطرة وتم تقسيمهم الى ست مجاميع عمرية بنفس طريقة تقسيم مجاميع المرضى. شملت الدراسة اربعة اجزاء رئيسية : اولا التشخيص الفيروسي اعتمد على التقنيات المتقدمة (العزل الاولي باستخدام فحص التالق المناعي المباشر لتحديد وتمييز الانواع الثلاثة لفيروس نظير الانفلونزا 1,2, and 3 والتشخيص الجزيئي بواسطة استخدام فحص تفاعل سلسلة انزيم البلمرة بالوقت الحقيقي لتحديد وتمييز الانواع الاربعة للفيروس1,2,3, and 4 وتم استخدام المجهر الالكتروني النفاذ لمشاهدة جزيئة الفيروس . والجزء الثاني فحص البكتريا باستخدام فحوصات الكيموحيوية وفحص Vitek 2 system وتم التحري ايضا عن انزيم الهيمولايسين حيث كانت جميع العزلات منتجه لهذا الانزيم . التشخيص الجزيئي للكشف عن وجود الجين mga بواسطة تقنية سلسلة تفاعل انزيم البلمرة .الجزء الثالث شمل وجود الفيروس والبكتريا في عينات الاذن للمرضى المصابين بالتهاب الاذن الوسطى . الجزء الرابع تضمن دراسة مناعية لمعرفة دور الحركيات الخلوية IL - 6, TNF - α, IFN - α, CD8, and CD56))عند الاصابة بفيروس نظير الانفلونزا بواسطة فحص الامتصاصية المناعي المرتبط بالانزيم وباستخدام تقنية التالق المناعي المباشر لفيروس نظير الانفلونزا بانواعه الثلاثة (hPIV 1,2,3) كانت نسبة الاصابة 64% (اي 32 طفلا من اصل من اصل50) وعند استخدام فحص تفاعل سلسلة انزيم البلمرة بالوقت الحقيقي ( (RT - PCR وجد ان نسبة الاصابة بفيروس نظير الانفلونزا بانواعه الاربعة (hPIV_1,2,3 and 4) 44% ( اي 22 من 50) تضمنت الدراسة استخدام المجهر الالكتروني النفاذ لرؤية جزيئة فيروس نظير الانفلونزا في افرازات الاذن . اظهرت نتائج التشخيص البكتيري ان نسبة الاصابة بالمسبحيات القيحية هي 14%(7 من 50) بعد زرعها على وسط اكار الدم وحضنت لمدة 24 ساعة بدرجة 37 وتم فحصها بواسط المجهر الضوئي بعد تصبيغها بصبغة كرام , تم التشخيص بواسطة استخدام فحص Bacitracin sensitivity وفحص انتاج انزيم الهيمولايسين على وسط الدم بواسطة فحوصات الكيموحيوية وفحص Vitek 2 systemاظهر التشخيص الجزيئي للكشف عن وجود mga جين ان جميع العزلات تحتوي على هذا الجين اي نسبة 100% .كما اظهرت الدراسة ان نسبة وجود الفيروس مع البكتريا في في سوائل الاذن بنسبة (16%)( . 4 وكانت نسبة وجود الفيروس (72%) 18وشملت الدراسة ايضا فحص الحركيات الخلوية بواسطة فحص الامتصاصية المناعي المرتبط بالانزيم واظهرت النتائج ارتفاع مستوى السايتوكينات في مصل مرضى التهاب الاذن الوسطى مقارنة مع الاشخاص الاصحاء وكان اعلى مستوى لانترليوكين 6 في امصال مجموعة المرضى المصابين بفيروس نظير الانفلونزا للذكور والاناث هو) 88.24 )و (100.95) 1Pg/ml على التوالي . في حين كان اعلى مستوى لعامل النخر الورمي نوع الفا في امصال مجموعة المرضى المصابين بفيروس نظير الانفلونزا للذكور والاناث هو (99.35 ) و(109.81 ) Pg/ml على التوالي. وكان اعلى تركيز لانترفيرون الفا في امصال مجموعة المرضى المصابين بفيروس نظير الانفلونزا للذكور والاناث هو( 217.16) و(( 197.84 Pg/ml على التوالي . واظهرت النتائج ان تركيز الواسمين المناعيين CD8 وCD56 ان تركيزهما اعلى في مصل مرضى التهاب الاذن الوسطى مقارنة مع الاشخاص الاصحاء , اظهرت النتائج ان تركيز CD8 في امصال مجموعة المرضى المصابين بفيروس نظير الانفلونزا للذكور والاناث هو ((11.46±1.49 و(14.76±1.73) ng/ml على التوالي . في حين كان تركيز CD65 في امصال مجموعة المرضى المصابين بفيروس نظير الانفلونزا للذكور والاناث هو (12.82±1.62 )و (10.59±1.19) ng/ml على التوالي | This study aimed to detect the role of of parainfluenza virus and Streptococcus pyogenes in children suffering from suppurative otitis media. A total of two hundred sample (three swab for each patients include ear swabs , nasopharyngeal secretion for viral study and ear swab for bacterial study and 50blood sample) , were collected from 50 patients suffering from suppurative otitis media attending to AL - Hilla Teaching Hospital in Babylon - Iraq during the period from February 2016 to May 2016. The study includes 35 samples obtained from healthy subject as control group that classified to six group according to age in similar way of patient's with parainfluenza virus infection group years old The study includes four main parts .First one is the viral diagnosis based on relied diagnostic procedure ( Primary detection of parainfluenza virus in ear discharge by direct Immunofluorescence for parainfluenza virus 1, 2 and 3 types, molecular diagnosis by Real - Time PCR technique for the qualitative detection and differentiation of Parainfluenza Virus 1, 2, 3, 4 and diagnosis of parainfluenza virus by transmission electron microscope. The second part includes the bacterial diagnostic based on relied diagnosis procedure (using conventional biochemical reaction and commercial kit (Vitek 2 system). The heamolysis on blood agar was also observed in all isolates. Molecular detection of mga virulence gene for Streptococcus pyogenes was detected using conventional PCR technique. The third part is Co - infection between GAS and HPIV in OM specimens of children with suppurative OM. The fourth part is an immunological study to investigate the role of cytokines (IL - 6, TNF - α, IFN - α, CD8 and CD56) in HPIV infection by ELISA assay . Direct immunofluorescence for parainfluenza virus 1, 2 and 3 types antigen was positive in 64% (32 out of 50) , when we use Real - time reverse transcription PCR(RT - PCR) the percent of children infection with HPIV1, 2, 3, and 4 was 44% (22 out of 50). The study also include the use of transmission electron microscope for visualized the parainfluenza virus particle in ear swab. Streptococcus pyogenes isolates was detected in 14%(7 from 50) the isolate were confirmed after culturing on the blood agar and incubated for 24 hour at 37ºC, then microscopically by Grams̕̕ staining. Identification was done using commercially prepared bacitracin and the type of hemolysis on blood agar by primary biochemical test and confirmatory identification by vitek2 system compact. Molecular Identification of mga gene for Streptococcus pyogene showed that all Streptococcus pyogenes positive result 100%. The occurrence of Bacterial and viral co - infection in middle ear fluids which have been observed in 16% (4 out of 50 cases). HPIV was identified as a single agent in ear swab in 72%(18 out of 50). The study include estimation of some immunological parameter include (IL - 6, TNF - α, IFN - α , CD8 and CD56 ) using ELISA and revealed elevation the concentration of cytokines in sera of otitis media patients in comparison with healthy control groups. The concentration of IL - 6 is higher in sera of otitis media patients with parainfluenza virus than healthy control group. The high level of IL - 6 Pg/ml in otitis media patients for male and female was (88.24) and (100.91) Pg/ml respectively. Also level of TNF - α Pg/ml in otitis media patients for male and female was (99.3) and (109.8) Pg/ml respectively . The level of IFN - α Pg/ml in otitis media patients for male and female was (217.16 )and (197.84 )Pg/ml respectively. The results also show elevation concentration of CD8 and CD56 in sera of otitis media patients with parainfluenza virus than healthy control group. For CD8 ng/ml in otitis media patients for male and female was(11.46) and (14.76)ng/ml respectively. The level of CD56 ng/ml in otitis media patients for male and female was (12.82) and (10.59)ng/ml. respectively.
