تاثير مستخلصات قشور البرتقال على نشاط بكتريا Pseudomonas aeruginosa المقاومة للمضادات الحيوية والمعزولة من التهابات جروح الحروق وجروح ما بعد العمليات في مدينة بغداد == Effect of Citrus sinensis peels extracts on the viability of antibiotics resistant Pseudomonas aeruginosa isolated from burn and post - operative wound infections in Baghdad City
Author name:
بتول عبد الامير باقر الصفار
Supervisor name:
محمد فخري احمد | صفاء عبد الكريم عبد الرزاق
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
English
University location:
Baghdad
First pages:
24T3218 - p.pdf
Abstract:
• تم جمع 175 مسحة من المرضى الذين يعانون من خمجات الحروق والجروح مابعد العمليات الجراحية ,الراقدين في مستشفيات بغداد المختلفة ,والمتضمنة مستشفى الكندي التعليمي, مستشفى الكرخ العام ومستشفى بغداد التعليمي اثناء الفترة من ايلول 2008 الى كانون الثاني 2009. • زرعت المسحات على وسطي غراء الدم والماكونكي وحضنت هوائيا بحرارة 37 م لمدة 24 ساعة وشخصت العزلات منPseudomonas aeruginosa باستخدام التشخيص الكيموحيوي والفسلجي والصفات ﺍ ﻠﻤﻈهرية واكد باستخدام نظام عدة api 20E .• تشير النتائج الى 114عزلة اعطت زرع بكتيرولوجي موجب بمعدل65.14% هذه تضمنت 51 (%60 ) عزلة من 85 مسحة من اصابات جروح مابعد العمليات و63 (%70 ) عزلة من 90 مسحة من اصابات الحروق.• اجري فحص الحساسية على هذه العزلات باستعمال 10 مضادات حيوية شائعة الاستعمال من مجاميع مختلفة ,اظهرت النتائج مقاومة عالية الىCephalothin, Carbenicillin, Tetracycline, Ceftriaxone, Chloramphenicol, Cefotaxime and Ceftazidime وبنسبة مقاومة (100, 92.98, 88.59, 78.94, 69.29, 67.54, 65.78)% على التوالي. بينما اظهرت العزلات حساسية عالية الى المضادات Amikacin, Ciprofloxacin and Meropenem وبنسبة مقاومة ( 28.94, 23.68, 15.78 )% على التوالي. • اربع مستخلصات المائي الحار٬ المائي البارد ٬ الكحولي الحار والكحولي البارد طبقت لاستخلاص قشـــورالبـــرتقال. ووجدت من خلال الكشف النوعي للمستخلصات بان المستخلصات المائية الحارة والباردة لقشور البرتقال احتوت على المركبات التالية : كلايكوسيدات٬ فينولات٬ قلويدات٬ صابونيات وتانينات، بينما احتوت المستخلصات الكحولية الحارة والباردة (اضافة الى ما ذكر) على مركبات : راتنجات٬ تربينات٬ فلافونات٬ كومارينات وزيوت طيارة. • استخدمت المستخلصات لدراســـة تاثيرها على نمــو العــزلات المقاومة فقــط والمعزولة من اصابات الجروح مابعد العمليات الجراحية والحروق بطريقة الانتشار بالحفر. مستخلصات قشورالبرتقال في التراكيز) 25 ,50, 75 ,100, 200 ,300 ,400 و500 )ملغم/مل اظهرت فعالية ضد العزلات البكتيرية. • كشف التحليل الاحصائي وجود اقل فروق معنوية عند مستوى احتمالية P<0.05)) لاربع مستخلصات.• المستخلص الكحولي الحار من قشور البرتقال كان اكثر كفاءة من المستخلصات الاخرى ضد عزلات الجروح مابعد العمليات وجروح الحروق. المستخلص المائي البارد ياتي بالمرتبة الثانية بعد المستخلص الكحولي الحار. معدلات اقطار مناطق التثبيط لهذه المستخلصات ضد P. aeruginosa عند التركيز العالي 500 ملغم/مل كانت 22.78ملم لمستخلص الكحولي الحار، بينما كانت 71.15ملم لمستخلص المائي البارد. اما النتائج كانت متغايرة بالنسبة لتاثير مستخلصي الكحولي البارد والماء الحار وبشكل عام اظهرت تاثيرات منخفضة على العزلات البكتيرية. بينما عند التركيز 25 ملغم/مل لمستخلص الكحولي الحار معدلات اقطار التثبيط تناقص الى 64.1 ملم. • اختبر تاثير التراكيز المختلفة لمستخلص الكحولي الحار على نشاط انتاج الانزيمات : اليوريز ، جيلاتينيز ، اوكسيديز والكاتاليز، اظهرت النتائج ان المستخلصات الكحولية الحارة في التراكيز (75, 100, 200) ملغم/ مل تاثيرا جدير بالملاحظة على نشاط انتاج اليوريز، يعزى ذلك الى ظهور اللون الاصفر(كنتيجة سالبة) بعد ساعتين من الاختبار. بينما عند تراكيز(25 ,50) ملغم/مل من المستخلص حصول نتيجة سالبة لانتاج اليوريز بعد الساعة الرابعة من الحضن. • المستخلص الكحولي الحار اثبط انتاج الجيلاتينيزعند التراكيز( 50 ,75 ,100 ,200) ملغم/ مل بعد الساعة الثانية من فترة الحضن. بينما عند التركيز 25 ملغم/مل اظهرت النتيجة سالبة للجيلاتينيز بعد الساعة الرابعة حضانة. المستخلص الكحولي الحار اثبط انتاج الاوكسيديز والكاتاليز بالتراكيز(25 ,50 ,75, 100 ) ملغم/مل واظهرت نتيجة سالبة بعد الساعة الثانية من الحضن. • اظهرت نتيجة دراسات ميكانيكيات النمو بتركيز 500 ملغم \مل من المستخلص الكحولي الحار قتل كامل لعزلات اصابات الحروق والجروح مابعد العمليات الجراحية التي يتطلب وقت حضانة بين الساعة 6 - 8 ساعة. علاوة على ذلك المستخلص بتركيز 400 ملغم/ مل تطلب القتل الكامل للعزلات 8 ساعات حضانة لكل العزلات. بينما عند التركيز( 200 ,300 ) ملغم/ مل اظهر قتل كامل على جميع الخلايا بعد مرور 24 ساعة حضانة. اما التركيز 100 ملغم/ مل اظهر معدل قتل جزئي للعزلات (حتى بعد 24 ساعة حضانة). ﺗﻡ اﯿﻀﺎ ﻤﻨﺎﻗﺷﺔ ﻮﺘﺤﻠﻴﻞ ﻤﻧﺤﺪﺮﺍﺖ اﻠﻴﺔ ﺍﻠﻧﻤﻮ ﻠﻠﺒﻜﺘﺮﻴﺎ. | Hundred and seventy five swab samples were collected from patients suffering from burns and post - operative infections who admitted to different hospitals in Baghdad for medical care, these included : Al - Kindy Teaching Hospital, Al - Karkh General Hospital and Baghdad Teaching Hospital, during the periods from October 2008 to January 2009. The swabs were cultured on blood agar base and macConky's agar then incubated at 37˚C for 24hrs . Isolates of P. aeruginosa were isolated and identified using morphological, physiological and biochemical diagnosis and confirmed by api 20 E kit . The results indicated that 114 (65.14%) have given positive bacteriological cultures, this included 51(60%) isolates out of 85 swabs of post - operative wound infections, while 63(70%) isolates out of 90 swabs of burns infections. Sensitivity test was performed for these isolates using 10 commonly used antibiotics. The result indicated that a higher resistance to Cephalothin, Carbenicillin, Tetracycline, Ceftriaxone, Chloramphenicol, Cefotaxime and Ceftazidime whith the percentages of 100, 92.98, 88.59, 78.94, 69.29, 67.54, 65.78 % respectively , while the isolates showed a higher sensitivity to Amikacin, Ciprofloxacin and Meropenem with the percentages of resistance of 28.94, 23.68, 15.78 % respectively. Four extraction methods, i.e. hot water, cold water, hot alcoholic and cold alcoholic, were applied for the extraction of Citrus sinensis peels . Hot and cold watery extracts of Citrus sinensis peels contained the following compounds : Glycosides, phenols, alkaloids, saponins, and tannins. While hot and cold alcoholic extracts contained, in addition to above, resins, terpins, flavones, coumarins, and volatile oils. The extracts were used to study their effects on growth of P. aeruginosa resistant isolates of post operative wound and burn isolates by using agar diffusion method. Extracts of Citrus sinensis peels at concentrations of 500, 400, 300, 200, 100, 75, 50, 25mg/ml showed activity against bacterial isolates. The statistical analysis revealed the presence of significant differences (P<0.05) for four extracts. The hot alcoholic extract of Citrus sinensis peels were more efficient than the other extracts against post - operative wounds and burn wounds isolates. Cold water extract came next to hot alcoholic extract. The inhibition zone diameters for these extracts were 22.78mm (for hot alcoholic extract) and 15.71mm (for cold water extract). Variable results were obtained with respect to the effects of cold alcoholic extract and hot watery extract, and generally, of low effects on bacterial isolates. At a concentration of 25mg/ml of hot alcoholic extract, the rate of inhibition zone diameters decreased to 1.64mm. The effect of different concentrations of hot alcoholic extract on the activity of enzymes production of urease, gelatinase, oxidase and catalase have been tested. The results showed that hot alcoholic extracts at concentrations of 75, 100, and 200mg/ml, demonstrated an observable effect on the activity of urease production due to observation of yellow - orange color (i.e. negative result), after 2hrs . While at extract concentrations of 25 and 50mg/ml, negative urease test was obtained after 4hrs incubation. Hot alcoholic extract has inhibited gelatinase production at a concentration of 50, 75, 100, and 200mg/ml after 2hrs incubation. While at a concentration of 25mg/ml, negative gelatinase result is obtained after 4hrs incubation. Hot alcoholic extract affects the inhibition of oxidase and catalase production at concentration of 25, 50, 75, and 100mg/ml, which showed negative results after 2hrs incubation. The result of Kinetics of growth studies demonstrated that the concentration of 500mg/ml of hot alcoholic extract was enough for complete killing the isolates from burn and post - operative wound infections. Moreover, this killing required incubation time between 6 - 8 hrs . At extract concentration of 400 mg/ml a complete killing required 8hrs incubation. While for complete killing upon application of 200 and 300mg/ml of the extract required 24hrs incubation. Partial kill occurs after 24hrs when 100 mg/ml of extract was used. Analysis of the slopes of growth kinetics was also discussed.
