دراسة انتاجية البكتريوسين من بكتريا Enterococcus faecium المعزولة من مصادر سريرية == Study of the Bacteriocin production from Enterococcus faecium isolated From clinical sources
Author name:
هاله عباس جاسم
Supervisor name:
خليل مصطفى خماس | شروق ريس كاظم
General topic:
Biology
Specific topic:
Microbiology
Degree:
Master
University:
Mustansiriyah University - College Of Science
Language:
Arabic
University location:
Baghdad
First pages:
24T3453 - p.pdf
Abstract:
تضمنت الدراسة جمع 290 عينة سريرية من المرضى الراقدين والمراجعين لمستشفيات بغداد وتوزعت هذه العينات الى 177عينة ادرارو113 عينة خروج ، اظهرت نتائج الزرع البكتريولوجي على وسط المكورات المعوية الانتخابي Ej media ووسط المكورات المعوية التاكيدي Bile esculin azide agar والتشخيص المظهري والكيميوحيوي وتاكيد التشخيص باستخدام نظام API 20 strep تشخيص 27عزلة(%9.31) من بكتريا Enterococcus faecium من عدد العينات الكلي ،وكانت 11 عزلة ( 6.21%) منهامن الادرارو16 %14.15)) عزلة من الخروج . اختبرت حساسية عزلات E.faeciumل11 نوع من المضادات الحيوية واظهرت النتائج مقاومة عالية لل Naldixic acid(81%)و (63%) TetracyclineوAmpicilin (52%)بينما كانت المقاومة لل Ciprofloxacin(48%)و(41%) Erythromycin .ومن الناحية الاخرى اظهرت العزلات مقاومة واطئة لل Penicillin (26%) وNitrofurantion (22%)و وVancomycin (18%)وكانت (19%)لل Trimethprim و(15%)Chloramphenicol. كانت (7%)فقط من العزلات مقاومةللGentamycin.اجريت تجارب التحري عن البكتريوسين من بكتريا E.faecium وكانت جميع العزلات منتجة (100%)ولمدى واسع من التاثير على البكتريا الموجبة والسالبة مع اقطار تثبيط (8 - 15 )مليمتر و(9 - 27)مليمتر على العزلات العائدة لنفس النوع . اختيرت العزلة EH(1) كعزلة كفوءة الانتاج مع فعالية نوعية 1.28 وحدة/مايكروكرام بروتين بتركيز بروتين 250 مايكروكرام /مليمتر بعد ان قيست الفعالية في العزلات(EH1,EH6,EH13) التي كانت افضل العزلات انتاجية للبكتريوسين بطريقة الاقراص. ووجد ان وسط Mann Regusa Sharp السائل والصلب هو افضل وسط لانتاج البكتريوسين من بكتريا E.faecium وان هذه البكتريا تنتج البكتريوسين في درجات حرارية بين 16 - 45 م ، واختيرت العزلة E3 والبكتريا Staphylococcus aureus, Staphylococcs epidermidis,Escherichia coli, Sallmonella كعزلات دالة ، استخلص البكتريوسين من العزلةE1 بصورته الخام بعد تنمية هذه العزلة على وسط Mann Regusa sharp السائل وتم الحصول على بكتريوسين ذي فعالية نوعية )1,28 وحدة / مايكرو كرام) بروتين وبتركيز بروتين 250 (مايكروكرام /مليلتر) وهذا البكتريوسين مقاوم للدرجات الحرارية (80,100، 121)م لمدة (15 و30 )دقيقة ، كذلك مقاوم لمدى من الرقم الهيدروجيني (8 - 2) ،ومقاوم للخزن في درجات حرارة (0،4 ،37) م لمدة (يوم ,اسبوع) . اجريت التنقية الجزئية للبكتريوسين الخام المستخلص من العزلة E1 بالترسيب بكبريتات الامونيوم وبنسب اشباع ( 40% و75% )واظهرت النتائج ان الترسيب بـ40%كان الافضل الذي بلغت الفعالية النوعيةفيه 44.137 وحدة/مايكروكرام بروتين وبتركيز بروتين 290 مايكروكرام/مليمتر . وكانت فعالية البكتريوسين المنقى جزئيا ثابتةعند 80م لمدة 30 دقيقة و100 م لمدة (15,5)دقيقة لكن انخفضت فعاليته لتصل الى 0.8 )وحدة /مايكروكرام بروتين( في 30 دقيقة , وفقدت الفعاليةعند121م لمدة 15 دقيقة ، كانت الفاعلية ثابتة عند مدى من الرقم الهيدروجيني (8.5 - 5.5) والخزن عند صفردرجة مئوية لمدة اسبوع. | The study has involved collecting (290) clinical samples collected from admitted and refeard patients of Baghdad hospitals .The samples distributed into (177) urine sample and (113) faeces samples . Results from bacteriological culture on selective Enterococcus medium EJ medium , Enterococcus medium (bile esculin azide agar) in addition to morphological and biochemical identification and confirmation of the identification by using of API 20 strep system showed that only27 isolates (9.31%) were identified as Enterococcus faecium ,11 (6.21% ) isolate from urine samples and 16isolate (14.15% ) from faeces samples . The Antimicrobial susceptibility of Enterococcus faecium isolates was tested towards 11 types of antimicrobial agents .The isolate showed a high resistance to Naldixic acid (81%) ,Tetracycline (63%) and ampicilin (52%) ,while (48%) of the isolate were resistant to Ciprofloxocin and (41%)resistant to Erythromycin . From the other hand Enterococcus faecium isolates showed low resistance to otherantimicrobial agent : Pencilin(26%),Nitrofurantion (22%) , Vancomycin (18%) and Trimethprim (19%) and Chloramphenicol (15%). Only(7%) of the isolates were resistant to gentamycin . Bacteriocin detection experments were carried on Enterococcus faecium and the results that all isolates were produce bacteriocin (100%) with wide range effect on gram positive and negative bacteria bacterial growth , with diameter (8 - 15)millimeter and (9 - 27)millimeter on the same isolates species ,EH1 isolate chosen as the best producer isolate bacteriocin with specific activity (1.28)unit/microgram of protein with protein concentration(250) microgram/ millimeter after the activity detected in isolates EH1,EH6,EH13 were the best bacteriocin production isolates by using disk method on the Mann Regusa Sharp agar . And founded the solid and broth Man Ragusa sharp medium was the best medium for bacteriocin production from E.faecium and this bacteria produce bacteriocin in tempreture degree between )16 - 45(C, E3isolate and the bacteria Salmonella ,Escherichia coli ,Staphylococcus aureus ,staphylococcus epidermidis chosen as indicating isolates, the bacteriocin extracted from E1in the crude form after growth this isolate on Mann Regusa Sharp broth and obtained on bacteriocin with specific activity (1.28)unit/microgram of protein with protein concentration (250) microgram /millimeter and this bacteriocin resistant for tempreture degrees 80,100,121 C for (15 ,30) minute also resistant to PH range (2 - 8) and resistant the storage in tempreture degree 0C,4 Cfor (day ,week). Then partial purification applied for this crude bacteriocin by precipitation with Ammonium sulphate of (40%,75%) saturation percentage .Results showed the precipitation in percentage 40% was the best with a specific activity reached in it to 44,137unit /migrogram protein and protein concentration 290 microgram/millimeter . The partial purified bacteriocin activity was stable at 80C for 30 minutes ,100C for( 5 ,15) minute ,but its activity decrease to reach to 0.8 unit/mg protein in 30 minute and lost activity in 121 C for 15 minute. Its activity was stable in PH (5.5 - 8.5) and storage at 0C for week
