دراسة تاثير استهلاك منتوج علاجي متخمر مصنع من عزلة محلية من بكتيريا Lactobacillus salivarius في بعض المعايير الفسلجية في الجرذان المختبرية == Studying The Consuming Effect of Therapeutic Fermented Product Manufactured by Local Isolate Lactobacillus salivarius on Some Physiological Parameters in Experimental Rats
Author name:
وسن جعفر ابراهيم
Supervisor name:
غياث حميد مجيد | احمد عبود خليفة
General topic:
Agricultural sciences
Specific topic:
Plant Biotechnology
Degree:
Doctorate
University:
University Of Basrah - Faculty Of Agriculture
Language:
Arabic
University location:
Basrah
First pages:
31T1732 - p.pdf
Abstract:
عزلت ثمان عزلات محلية من بكتيريا L.salivarius من براز الاطفال الرضع بعمر (3 - 2) اشهر اعتمادا على الصفات المجهرية والفسلجية والكيموحيوية ، ثلاثة منها (LsP1 ، LsP2 ، LsP5) اظهرت فروقات معنوية (P < 0.01) في قابليتها على انتاج الحامض في الحليب مقارنة مع بقية العزلات والسلالة القياسية من بكتيريا L.acidophilus . اجريت غربلة للعزلات المحلية الثلاث (LsP1 ، LsP2 ، LsP5) لاختيار قابليتها على تحمل الظروف المشابهة لظروف القناة المعدية المعوية من حموضة وتركيز املاح الصفراء وتركيز الانزيمات الهاضمة ، حساسيتها تجاه تاثير بعض المضادات الحيوية واسعة الاستخدام في العلاج الطبيعي ، وقدرتها على تثبيط نمو بكتيريا E.coli O3 : H4 . اظهرت العزلة المحلية L.salivarius (LsP5) فروقات معنوية (P < 0.01) في تحملها لظروف القناة المعدية المعوية حيث كانت اعداد الخلايا الحية11×106 وبعد ثلاث ساعات من التعرض للعصير المشابه للعصارة المعدية انخفضت الى (105 x 35 cfu \ مل) عند رقم هيدروجيني 2 و(104 x 39 cfu \ مل) عند رقم هيدروجيني 1.5 . وفي العصير المشابه للعصارة المعوية كانت اعداد خلاياها الحية (109 x 39 cfu \ مل) عند تركيز املاح صفراء %1 و(108 x 18 cfu \ مل) عند تركيز املاح صفراء %2 ؛ واظهرت مقاومة عالية للتاثير المثبط لبعض مضادات الحياة حيث كان قطر الهالة الخالية من النمو عند المعاملة مع المضاد الحياتي (E) Erythromycin (1.91 سم) و(CTX) Cephotaxime (0.95 سم) و(CTP)Ciprofloxacin (1.23 سم) بينما لم يظهر اي تاثير مثبط لنموها عند المعاملة مع الـ (Am) Ampicilline وTrimethoprime + Sulfamethoxazol (SXT) . كما انها اظهرت تاثيرا مثبطا لنمو البكتيريا E.coli O3 : H4 حيث كان قطر الهالة الخالية من نمو البكتيريا المرضية (25 ملم) . درست قابلية هذه العزلات على مقاومة ظروف التصنيع والخزن المبرد لمدة اربعة اسابيع على درجة حرارة 4 م ، واظهرت العزلة LsP5 قدرة عالية على البقاء حية بعد انتهاء فترة الخزن حيث كانت اعداد الخلايا الحية (107 x 25.9 cfu \ مل) . اختيرت العزلة LsP5 لتصنيع منتوج لبني متخمر مشابه للحليب الاسيدوفيلي وذلك لدراسة تاثير استهلاك هذا المنتوج على اوزان ، وبعض المعايير الدموية (اعداد كريات الدم الحمراء RBC ، الهيموكلوبين Hb ، حجم الدم المضغوط PCV ، اعداد كريات الدم البيضاء WBC) والبيوكيمياوية (الكوليستيرول الكلي Tchol. ، البروتينات الدهنية واطئة الكثافة LDL ، البروتينات الدهنية عالية الكثافة HDL ، الكليسيريدات الثلاثية TG ، والبروتين الكلي TP) لذكور الجرذان المختبرية في تجربة اشتملت على 24 حيوانا ، قسمت الى ثلاث مجاميع (8 حيوانات لكل مجموعة) المجموعة الاولى (مجموعة السيطرة) تم تغذيتها بالعليقة الاعتيادية لمدة 30 يوم ، المجموعة الثانية (S) تم تغذيتها بالعليقة الاعتيادية بالاضافة الى 2 مل من الحليب الفرز المسترجع بنسبة %12 ، اما المجموعة الثالثة (P) تم تغذيتها بالعليقة الاعتيادية بالاضافة الى 2 مل من المنتوج المتخمر حيث اظهرت النتائج ما ياتي : - 1 - حصول زيادة معنوية (P < 0.01) في النسبة المئوية للزيادة الوزنية لحيوانات المجموعة (P) مقارنة مع حيوانات المجموعة (C) و(S) .2 - ارتفاع معنوي (P < 0.01) في معدلات كل من RBC ، Hb ، PCV ، وانخفاض معنوي (P < 0.01) في اعداد WBC في دم حيوانات مجموعة المعاملة (p) مقارنة مع حيوانات المجموعة (C) و(S) .3 - ظهر من دراسة العد التفريقي لكريات الدم البيضاء ان التجريع بالمنتوج المتخمر ادى الى ارتفاع معنوي (P < 0.01) في اعداد الخلايا اللمفاوية lymphcyctes ، وانخفاض معنوي (P < 0.01) في اعداد الخلايا العدلة Neutrophil بينما لم تظهر اي اختلافات معنوية في اعداد الـ Eosinophil والـ Basophil . 4 - انخفاض معنوي (P < 0.01) في قيم كل من Tchol. ، LDL ، TG وارتفاع معنوي (P < 0.01) في قيم الـ HDL وTP في مصل دم حيوانات المجموعة (P) مقارنة مع حيوانات المجموعة (C) و(S) . درست امكانية استخدام الحليب المتخمر في علاج ذكور الجرذان المختبرية المصابة ببكتيريا E.coli O3 : H4 في تجربة استندت على 24 حيوانا ، قسمت الى ست مجاميع (4 حيوانات لكل مجموعة) حيث تم تغذية جميع المجاميع بالعليقة الاعتيادية طيلة فترة التجربة البالغة ستة اسابيع بالاضافة الى المعاملات الاتية : - مجموعة السيطرة (C) بدون معاملة ، المجموعة الثانية (P) عوملت بجرعة 2 مل من الحليب المتخمر ، المجموعة الثالثة (E) جرعة بـ 2 مل من معلق الخلايا الحية لبكتيريا E.coli O3 : H4 ، المجموعة الرابعة (EP) جرعت بالبكتيريا المرضية لمدة ثلاثة اسابيع متتالية ثم جرعت بـ 2 مل من الحليب المتخمر لثلاثة اسابيع تالية ، المجموعة الخامسة (EM) جرعت بالبكتيريا المرضية لمدة ثلاثة اسابيع ثم جرعت بـ 2 مل من الميترونيدازول ، اما المجموعة السادسة (P + E) فجرعت بالمنتوج المتخمر لمدة ثلاثة اسابيع ثم بالمنتوج المتخمر و2 مل من معلق البكتيريا المرضية في وقت واحد لثلاثة اسابيع اخرى ؛ واظهرت النتائج ما ياتي : - 1 - ان اصابة الحيوانات بالبكتيريا المرضية E.coli O3 : H4 ادى الى انخفاض معنوي (P < 0.01) في اوزان الحيوانات كما نفقت بعض الحيوانات ، وكانت النسبة المئوية للحيوانات النافقة (% 55.5) .2 - ادى علاج الحيوانات بالحليب المتخمر الى زيادة معنوية في اوزان الحيوانات المعاملة (EP) مقارنة مع الحيوانات التي تم علاجها كيمياويا بالميترويندازول . كما ان التجريع المسبق بالمنتوج المتخمر ادى الى عدم ظهور فروقات معنوية في الزيادة الوزنية مقارنة مع حيوانات مجموعة السيطرة (C) ، كما لم تظهر اعراض الاصابة على الحيوانات بعد تعاطيها البكتيريا المرضية .3 - حصل انخفاض معنوي (P < 0.05) في قيمة كل من الهيموكلوبين وحجم الخلايا المضغوط وارتفاع معنوي (P < 0.05) في اعداد كريات الدم البيضاء في دم الحيوانات التي تم اصابتها بالبكتيريا المرضية وادى استخدام العلاج الحيوي بالحليب المتخمر الى اعادة قيم هذه المتغيرات الى حدودها الطبيعية مع وجود فروقات معنوية مقارنة مع استخدام الميترويندازول في علاج الحيوانات ، كما ان التجريع المسبق بالبكتيريا العلاجية ادى الى المحافظة على هذه القيم ضمن الحدود الطبيعية حتى بعد اصابتها بالبكتيريا المرضية .4 - انخفاض قيم البروتين الكلي (TP) بشكل معنوي (P < 0.05) في مصل الحيوانات المصابة خلال فترة المعاملة وادى العلاج الحيوي بالحليب المتخمر الى ارتفاع قيم البروتين الكلي بشكل معنوي (P < 0.05) مقارنة مع استخدام العلاج بالميترونيدازول ، كما لم يحصل انخفاض في قيم البروتين الكلي في مجموعة الحيوانات التي تم تجريعها مسبقا بالحليب المتخمر (E+P) .5 - لم تظهر النتائج اي تغيير (عدم وجود فروقات معنوية) في قيم البيليروبين الكلي (TB) لجميع المجاميع الحيوانية طيلة فترة التجربة . | To investigation the effect of Lactobacillus local isolate the present study was conducted . Eight local isolates have been isolated and identificated as Lactobacillus salivarius from infant stool samples aged 2 - 3 months depending on their microscopical , physiological and biochemical aspects . Three of these isolates (LsP1 , LsP2 , LsP5) revealed a significant differences in their ability of milky acid production . these isolates screened according to their ability to tolerance the environments like those in the Gastro - intestinal tract which include (high acidity , bile salts concentration , digestive enzyme concentration) , sensitivity to the effect of some widespread antibiotics and their ability to inhibit growth of E.coli O3 : H4 . The local isolate (LsP5) showed a significant differences in his tolerance to gastro - intestinal tract environments and the number of living cell after 3 hours of exposure to the juice like gastric juice is (35 x 105 cfu / ml) in pH 2 and (15 x 104 cfu / ml) in pH 1.5 and in the juice like intestinal juice the number of living cells is (39 x 109 cfu / ml) in % 1 bile salt concentration and in the concentration % 2 (18 x 108 cfu / ml) , and this isolate showed also higher resistance to the lethal effect of some antibiotics than the other isolates and the inhibition zone diameter in erythromycine (1.91 cm) , cephotaxime (0.95 cm) , ciproflexacine (1.23 cm) , whereas not appear any lethal effect when its treated with ampicilline and trimethoprime + sulfamethoxazol . It’s indicated higher inhibition effect on E.coli O3 : H4 and the inhibition growth zone is (25 mm) . In conclusion , the results revealed that LsP5 isolate has higher resistance to the fermented milk production and cold storage under 4˚C for four weeks than the other isolates . In view of the above results we chosed the Lactobacillus salivarius (LsP5) to production a fermented milk like acidophilus milk and the effect of oral administration to experimental mal rats on weight , some hematological and biochemical parameters were studied in an experiment include 24 animals divided into three groups (8 animals / group) first group (C) control had adopt fed , second group (S) had adopt fed plus 2 ml of reprepared skim milk (12 %) and the third group (P) had adopt fed plus 2 ml of fermented milk contain 109 cfu / ml of living cell of LsP5 isolate and the results showed that : - 1 - Significant increase (P < 0.01) in body weight in treated group (P) compare with group (C) and (S) .2 - Significant increase (P < 0.01) in the rates of red Blood Cell (RBC) , Hemoglobine (Hb) , Packed Cell Volume (PCV) and significant decrease (P < 0.01) in the number of White Blood Cell (WBC) in animals group (P) in comparison whit group (C) and (S) . 3 - The differential count of WBC showed that the oral administration of fermented milk (group P) caused Significant (P < 0.01) increase in the number of lymphocytes and decrease (P < 0.01) in nutrophil , while not indicate changes in eiosinophil and basophil number compare with group (C) and (S) .4 - Significant decrease (P < 0.01) in the rates of total cholesterol (Tchol.) , low density lipoproteins (LDL) , triglycerides (TG) and Significant increase (P < 0.01) in the rates of high density lipoproteins (HDL) and total protein (TP) in the serum of treated animals (group P) in comparison whit group (C) and (S) . The therapeutic effects of fermented product contains 109 cfu / ml of Lactobacillus salivarius (LsP5) living cell was conducted in an experiment include 24 male experimental rats divided into 6 group (4 animals / group) , all these animals had adopt fed during experimental time (6 weeks) in addition to the following daily treatments : - a. Group (C) with out any treatment .b. group (P) has been oral administration with 2 ml of fermented milk .c. group (E) has been infected by oral administration with 2 ml of suspension of E.coli O3 : H4 . d. group (EP) has been infected by disease bacteria for three weeks and then treated by oral administration with 2 ml of fermented milk .e. group (EM) has been infected by disease bacteria for three weeks and then treated by oral administration with chemical therapeutic metronidazol .f. The final group (P + E) has been oral administration with 2 ml of fermented milk for three weeks and then with fermented milk plus disease bacteria in the same time . The results may be summarized as follow : - 1 - Infection bacteria caused Significant (P < 0.01) decrease in animals body weight , Hb , PCV & TP and Significant (P < 0.01) increase in WBC in addition to some of animals die during the experimental time .2 - Animals treated with the fermented milk showed Significant increase (P < 0.01) in animals body weight in the otherwise the value of Hb ,PCV and WBC returned to the normal value in comparison whit animals treated with metronidazol .3 - Anon - Significant effects in the total bilirubine has been seen in all treated rats during the experimental time .
